细胞培养实验技术大全
细胞培养实验步骤大全(精华版)
细胞培养实验步骤大全(精华版)细胞培养是生物学研究中常用的技术，在许多实验室中都扮演着重要角色。
下面是细胞培养的一般步骤，供参考。
材料准备1. 细胞培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如DMEM、RPMI 1640等。
2. 细胞培养器具：培养皿、离心管、移液器等。
3. 细胞培养室：确保环境清洁、无菌。
细胞准备1. 细胞来源：选择要培养的细胞系或原代细胞。
2. 细胞传代：如果使用的是细胞系，根据需要进行传代，确保细胞状态良好。
细胞培养1. 细胞计数：使用显微镜和细胞计数仪等工具，准确计算细胞数目。
2. 细胞接种：按照实验要求，在含有培养基的培养皿中接种适量的细胞。
根据细胞类型的不同，可能需要预先涂覆培养皿。
3. 细胞培养条件：根据细胞类型的要求，提供适宜的培养条件，如温度、湿度和CO2浓度等。
4. 培养培养：定期更换培养基，保持细胞处于良好的生长状态。
5. 细胞观察：使用显微镜观察细胞形态和生长情况，检测是否存在异常。
细胞处理1. 细胞传代：根据细胞数量和状态，决定是否进行细胞传代。
传代可以延续细胞的寿命和维持细胞应答。
2. 细胞刺激：根据实验设计，给予细胞适当的刺激，如添加药物、因子或介质等。
3. 细胞采集：当需要获取细胞样本时，使用细胞剥离剂或胰蛋白酶等方法将细胞从培养皿中采集。
4. 细胞冻存：如果需要长期保存细胞，可以使用液氮冷冻保存的方法。
先加入冻存液，然后将细胞在适当条件下冷冻保存。
以上是细胞培养的一般步骤，根据具体实验和细胞类型，步骤可能会有所调整和细化。
在进行细胞培养实验时，请始终注意无菌操作和合理使用实验工具，以确保实验结果的准确性和可靠性。
细胞培养技术总结
细胞培养技术总结（，，，）1·培养环境的要求（切记无菌操作）工作环境的处理1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
吸管口切勿碰到容器瓶口4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒。
感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
2·仪器设备的要求定期检测下列项目：CO2 钢瓶之CO2 压力。
CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
3·无菌处理1）器具的无菌操作试验用玻璃塑料用品清洗及其消毒灭菌清洗：…a玻璃器皿的清洗（酸液由重铬酸钾，浓硫酸，蒸馏水配置）浸泡—刷洗—浸酸—冲洗b胶塞的清洗刚买回的常含滑石粉等杂质，先用自来水冲洗后再按常规方法处理。
细胞培养的基本技术
3.部分贴壁细胞：直接吹打或消化传代
细胞系
原代培养物经首次传代成功后即为细胞系， 由原先存在于原代培养物中的细胞世系组 成。如果不能继续传代或传代数有限，称 为有限细胞系（finite cell line）；如果具有 无限生存能力，则称为连续细胞系 （continuous cell line）。
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无菌操作
4.无菌培养操作
火焰消毒
在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首 先要点燃酒精灯。以后一切操作，如按装吸管帽、 打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼 进行。
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无菌培养操作
操作时，动作要准确敏捷，但又不必太快，
以防空气流动，增加污染机会。不能用手触 及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消 毒或取备品更换。
取材的基本器材和用品
1. 2.
3.
4.
眼科组织弯剪、弯镊、手术刀 小瓶装无血清培养基、Hanks液 小烧杯 培养皿
各部位组织的取材 皮肤和黏膜 内脏和实体瘤 血细胞 骨髓、羊水、胸水、腹水内细胞 鼠胚组织 鸡胚组织
组织材料的分离
细胞悬液的分离方法：
血液、羊水、胸水、腹水等细胞悬液
剪切分离法
组织块移植培养时，将组织剪成或切成小 块（1cm3）用眼科剪反复剪切组织至糊状，
吸取培养液反复吹打，低速离心去上清，
再分离培养。
消化分离法——胰蛋白酶消化法
用于消化细胞间质较少的软组织，如胚胎、上皮、 肝、肾等，同时也用于培养的细胞。 pH 、温度、浓度、组织块大小和硬度。 0.1~0.5%，常用0.25% pH= 8 5mm3胚胎类软组织， 0.25%胰蛋白酶，37℃， 20-30min即可。 钙、镁离子及血清对胰蛋白酶有抑制作用。 分次消化
细胞培养方法与步骤
细胞培养方法与步骤细胞培养是指将细胞从一个生物体中取出并在实验室中培养繁殖的过程。
细胞培养可用于各种实验研究，如细胞生物学、分子生物学、药物筛选等。
细胞培养的方法多种多样，下面将介绍常见的细胞培养方法及其步骤。
一、原代细胞培养方法原代细胞培养是指将从组织或器官中分离的细胞直接进行培养。
原代细胞培养是建立细胞株的重要步骤，一般需要一定的技术和设备。
步骤：1.组织分离：从动物或人体中取得组织，如肝脏、心脏等，并用生理盐水或细胞培养基洗刷组织的表面。
2.细胞分离：将组织切割成小块，并用胰蛋白酶或胰酶进行消化，使细胞分散。
3.细胞收集：用细胞培养基冲洗消化后的组织碎片，将细胞收集到离心管中。
4.离心：将离心管放入离心机中进行离心，分离出细胞沉淀。
5.细胞培养：将细胞沉淀重新悬浮在细胞培养基中，然后转移到培养皿中进行培养。
二、细胞株培养方法细胞株培养是指将原代细胞培养到一定数目并进行传代培养的过程。
步骤：1.细胞传代：细胞达到一定密度后，用胰蛋白酶或胰酶等对细胞进行消化，将细胞分离。
2.细胞计数：用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数，得到细胞浓度。
3.细胞培养：将分散的细胞与新鲜的培养基混合，然后转移到培养皿中进行培养。
4.细胞增殖：培养皿中的细胞经过一段时间的培养，可以看到细胞开始增殖，形成细胞集落。
5.细胞传代：当细胞集落接近充满培养皿时，需进行细胞传代，即将细胞分散到新的培养皿中。
6.细胞冻存：当细胞达到所需数量后，可以进行细胞冻存，以备之后的使用。
三、细胞培养技术要点1.无菌操作：细胞培养需要在无菌条件下进行，避免细菌或真菌的污染。
操作前需做好洗手消毒，使用无菌操作台，并加入适量的抗生素或抗菌剂到培养基中。
2.培养液选择：根据不同细胞的需要，选择适合的培养基和生长因子，以提供细胞的生长所需的营养物质。
3.培养条件控制：温度、湿度、CO2浓度等因素对细胞生长有重要影响，需根据具体要求进行调节。
4.细胞检测：在细胞培养过程中，需要定期观察和检测细胞的形态、生长情况、细胞浓度等指标，以确保细胞的正常生长和状态。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学实验技术是现代生命科学研究中的关键环节，它为研究人员提供了深入了解细胞结构、功能和相互作用的途径。
本文将重点介绍一些常见的细胞生物学实验技术，包括细胞培养、染色技术、分离技术和显微镜观察等。
一、细胞培养技术细胞培养是一项基础性技术，它可以将细胞从体内取出并在适当的培养基中进行增殖和维持。
细胞培养的首要任务是提供适当的培养基，其中含有必需的营养物质、生长因子和适当的温度、湿度和气体条件。
细胞培养技术广泛应用于细胞生物学实验、组织工程、药物研发等领域。
二、染色技术染色技术是细胞生物学实验中常用的方法之一，它使研究者能够对细胞内各种结构和分子进行可视化观察。
常用的染色方法包括荧光染色、酶标染色和核酸染色等。
荧光染色利用荧光标记的抗体或染料，可使特定的细胞结构或分子在显微镜下发出荧光信号，从而观察其位置和表达水平。
酶标染色则通过酶与底物的反应，使细胞或组织显示出颜色等信号。
核酸染色则利用特定染料与细胞核酸结合，以观察DNA或RNA的分布情况。
三、分离技术分离技术在细胞生物学实验中具有重要作用，它可以将不同类型的细胞或细胞组分进行分离和纯化。
常用的分离技术包括细胞离心、流式细胞术和免疫磁珠分离等。
细胞离心是通过离心机将混合细胞悬液分离成上清液和沉淀，从而获得纯化的特定类型细胞。
流式细胞术则通过流式细胞仪测量细胞的大小、形态和表面标记物，从而实现对细胞的高通量分离和分析。
免疫磁珠分离则利用特定抗体结合在磁珠表面，以实现对需要纯化的细胞或细胞组分的选择性捕获。
四、显微镜观察显微镜观察是细胞生物学实验的重要手段，它使研究者能够观察到细胞内不同的结构和过程。
传统光学显微镜可实现对细胞形态和部分细胞器的观察，但其分辨率有限。
近年来，随着超分辨显微镜技术的发展，研究者们能够突破传统光学显微镜的分辨率极限，实现对亚细胞结构和分子过程的观察。
总结细胞生物学实验技术在现代生命科学研究中发挥着至关重要的作用。
细胞培养技术
辐射灭菌：
利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上的微生物的一种 有效方法。
用于灭菌的电磁波有：
① 微波：可以通过热产生杀死微生物的作用。 ② 紫外线：破坏微生物细胞中的DNA或RNA，抑制DNA的复制
原代培养一般有一段潜伏期(数小时到数十天不等)， 在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。 过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。
细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化 悬浮后分至2-3瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。
二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株 则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也 可能仅有不死性(Immortality)而无恶性。
实验室的金属器械(镊、剪、接种环等)、玻璃试管口和瓶口等的灭菌；
③ 干烤：在干烤箱(hot air sterilizer)内进行，加热至160℃～170℃维持2小时，可杀灭包 括芽胞在内的所有微生物。适用于耐高温的玻璃器皿、瓷器、 玻质注射器等；
④ 红外线(infrared)：是波长为770nm～1000μm的电磁波，以1μm～10μm波长的热效应 最强。红外线的热效应只能在照射到的表面产生，不能使物体 均匀加热，常用于碗、筷等食具的灭菌；
进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必 太快，以防空气流动，增加污染机会。
不能用手触及已消毒器皿(如EP管,镊子, 剪刀)，可用无菌镊子夹取。
如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。
细胞培养的基本过程
（一）取材：
在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而 定)，经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后置于 培养器皿中，这一过程称为取材。 如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。 机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
细胞生物学实验技术
细胞生物学实验技术细胞生物学作为生物学的一个重要分支，研究的是生命最基本的单元——细胞。
在现代科研和医学领域中，细胞生物学实验技术扮演着至关重要的角色。
本文将介绍几种常见的细胞生物学实验技术，以及它们在科学研究和实践中的应用。
一、细胞培养技术细胞培养技术是细胞生物学研究的基础，也是许多实验的起点。
通过细胞培养技术，科研人员可以将细胞在体外进行培养，以便进行各种实验。
细胞培养技术的关键是培养基的配制和培养条件的控制，包括温度、湿度、CO2浓度等。
现代细胞培养技术已经非常成熟，可以培养多种细胞系，广泛应用于细胞生物学研究、药物筛选和临床诊断等领域。
二、细胞转染技术细胞转染技术是将外源DNA、RNA或蛋白等物质导入到细胞内的技术。
通过细胞转染技术，科研人员可以研究基因的功能、蛋白的表达以及疾病的发生机制。
常见的细胞转染方法包括化学法、电穿孔法、基因枪法等。
细胞转染技术在基因工程、基因治疗和干细胞研究等领域有着广泛的应用。
三、细胞分选技术细胞分选技术是将不同类型的细胞或不同状态的细胞进行分离和分选的技术。
通过细胞分选技术，科研人员可以获得纯化的细胞群，用于后续的实验和分析。
常见的细胞分选方法包括流式细胞术、磁性珠法、荧光显微镜法等。
细胞分选技术在免疫学、干细胞研究和癌症诊断等领域有着重要的应用。
四、细胞成像技术细胞成像技术是利用显微镜等设备对细胞进行观察和成像的技术。
通过细胞成像技术，科研人员可以了解细胞的结构、功能以及动态变化。
现代的细胞成像技术包括荧光显微镜、共聚焦显微镜、原子力显微镜等。
细胞成像技术在细胞生物学、神经科学和药物研究等领域有着广泛的应用。
五、细胞分子生物学技术细胞分子生物学技术是研究细胞内分子基因组的技术。
通过细胞分子生物学技术，科研人员可以研究细胞的DNA、RNA、蛋白等分子水平的信息。
常见的细胞分子生物学技术包括PCR扩增、基因克隆、蛋白质组学等。
细胞分子生物学技术在基因表达调控、基因组编辑和疾病诊断等方面有着重要的应用。
常用实验基本技术细胞培养
中国医科院细胞中心
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培养方式
• 原代培养：
直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养。 只能原代培养：神经元、心肌细胞等。
• 传代培养：
当培养细胞增殖到一定密度后，生长受到抑制， 需要分散稀释后重新培养。 常见：肿瘤细胞系
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培养细胞的处理
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细胞特性检测
• 活力：MTT实验 • 凋亡：TUNEL染色、流式细胞术等 • 增殖：BrdU掺入法、克隆形成实验 • 分化：形态学观察、分化标志物检测 • 致瘤性：体内成瘤实验 •…
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靶基因表达水平检测
• RT-PCR • Western blot • 免疫组化 • 其他：基因芯片、流式细胞术等
• 常用： Invitrogen公司Lipofectamine 2000 可用来转染质粒和siRNA.
• 其他专用试剂：如Invitrogen公司RNAiMAX Transfection Reagent 专门用来转染siRNA.
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瞬时转染与稳定转染
• 瞬时转染：将DNA导入活细胞内，但DNA不 会嵌入细胞的染色体中，可在2-3天内收集 被转染的细胞进行基因表达分析。
加。
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谢谢！
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• 稳定转染：将目的基因导入活细胞，根据 选择标记经过一段时间的筛选，使目的基 因整合入细胞染色体中，从而得到稳定表 达目的基因的细胞系。
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真核筛选标记
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设立对照组
• 空载体对照：如PCDNA3、PEGFP-N1等。 • Scrambled siRNA：将选中的siRNA序列打乱。
作为阴性对照的scrambled siRNA应该与选中 的siRNA序列有相同的核苷酸组成，并且与目 的基因的mRNA没有明显的同源性。
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细胞培养实验技术大全第一章细胞培养的根本原理与技术现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的开展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的开展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比方基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。
基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速开展的基因工程抗体也离不开细胞培养。
正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的开展中起到了很关键的核心作用。
第一节体外培养的概念一、根本概念体外培养〔in vitro culture〕，就是将活体构造成分或活的个体从体或其寄生体取出，放在类似于体生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。
组织培养：是指从生物体取出活的组织〔多指组织块〕在体外进展培养的方法。
细胞培养：是指将活细胞〔尤其是分散的细胞〕在体外进展培养的方法。
器官培养：是指从生物体取出的器官〔一般是胚胎器官〕、器官的一局部或器官原基在体外进展培养的方法。
二、体、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。
因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体细胞一样的根本构造和功能，也有一些不同于体细胞的性状。
实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开场发生了。
2、分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体不同。
细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend 细胞〔小鼠红白血病细胞〕在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状构造，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。
第二节细胞培养的一般过程一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中*一环节的疏忽可导致实验失败或无法进展。
准备工作的容包括器皿的清洗、枯燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。
二、取材在无菌环境下从机体取出*种组织细胞〔视实验目的而定〕，经过一定的处理〔如消化分散细胞、别离等〕后接入培养器血中，这一过程称为取材。
如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。
机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
理论上讲各种动物和人体的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织〔尤其是胚胎组织〕比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。
取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。
取组织时应严格保持无菌，同时也要防止接触其他的有害物质。
取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。
三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。
如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再参加培养基。
如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进展细胞计数，按要求以一定的量〔以每毫升细胞数表示〕接入培养器皿并直接参加培养基。
细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱〔由酚红指示剂指示〕，此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。
原代培养一般有一段潜伏期〔数小时到数十天不等〕，在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。
过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。
细胞长满瓶底后要进展传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。
每传代一次称为"一代〞。
二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。
转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性〔Immortality〕而无恶性。
四、冻存及复〔可参阅后面有关章节〕为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。
冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中参加含保护剂〔一般为二甲亚砜或甘油〕的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。
在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。
复一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟迅速融解。
然后将细胞转入培养器皿中进展培养。
冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。
五、常用仪器设备无菌室,超净工作台,三重纯水蒸馏器,抽气泵,压力蒸气消毒器,电热恒温培养箱,培养器具，CO2培养箱,恒温水浴锅,倒置显微镜,离心机,无菌过滤器,洗刷装置,细胞计数板和电子细胞技术仪等等。
第三节细胞培养的无菌环境一、无菌室无菌室的构造：一般由更衣间、缓冲间、操作间三局部组成。
无菌室的消毒和防污染：为保持无菌状态，经常消毒是必要的，通常采用每日〔使用前〕紫外照射〔1－2小时〕，每周甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸〔2小时〕和每月新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进展消毒。
实际工作中，要根据无菌室建筑材料的差异来选择适宜的消毒方法。
此外，还应注意防止无菌室的污染。
造成无菌室污染的可能包括：送入无菌室的风没有被过滤除菌；进出无菌室时，能使外界空气直接对流进无菌室的操作间；等。
二、超净工作台工作原理：鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。
根据气流在超净工作台的流动方向不同，可将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。
超净台的使用与保养：超净台的平均风速保持在米/秒为宜，过大、过小均不利于保持净化度；使用前最好开启超净台紫外灯照射10－30分钟，然后让超净台预工作10－15分钟，以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态；使用完毕后，要用70%酒精将台面和台四周擦拭干净，以保证超净台无菌。
还要定期用福尔马林熏蒸超净台。
第四节常用培养器皿及清洗消毒细胞培养需要大量消耗性物品，如玻璃器皿、金属器皿、塑料、橡胶制品、布类、纸类等，因此掌握清洗、消毒知识，学会清洗、消毒方法是从事细胞培养工作必须的。
一、清洗离体条件下，有害物质直接同细胞接触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。
因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，到达不含任何残留物的要求。
〔一〕玻璃器皿的清洗一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤。
1、浸泡:新的或用过的玻璃器皿要先用清水浸泡，软化和溶解附着物。
新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，然后用5％盐酸浸泡过夜；用过的玻璃器皿往往附有大量蛋白质和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后应立即浸入清水中备刷洗。
2、刷洗:将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中，用软毛刷反复刷洗。
不要留死角，并防止破坏器皿外表的光洁度。
将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干，备浸酸。
3、浸酸:浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中，又称酸液，通过酸液的强氧化作用去除器皿外表的可能残留物质。
浸酸不应少于六小时，一般过夜或更长。
放取器皿要小心。
4、冲洗:刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗的干净，直接影响到细胞培养的成败。
手工洗涤浸酸后的器皿，每件器皿至少要反复"注水－倒空〞15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包装备用。
〔二〕橡胶制品清洗新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，50℃烤干备用。
〔三〕塑料制品的清洗塑料制品特点：质软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。
清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃清洗液刷洗，流水冲洗，晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗〔15－20遍〕,蒸馏水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备用。
〔四〕包装:对细胞培养用品进展消毒前，要进展严密包装，以便于消毒和贮存。
常用的包装材料：牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿等，近几年用铝箔包装，非常方便，适用。
培养皿、注射器、金属器械等用牛皮纸包装后再装入饭盒，较大的器皿可以进展局部包扎。
二、消毒和灭菌微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因〔一〕物理消毒法1、紫外线消毒:紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。
革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。
紫外线的直接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。
直接照射培养室消毒，用法简单，效果好。
紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关，辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。
因此紫外灯同被照射物的距离和照射时间要适合。
离地面2米的30W灯可照射9平方米房间，每天照射2－3小时，期间可间隔30分钟。
灯管离地面2米以外要延长照射时间，2.5米照射效果较差。
紫外灯照射工作台的距离不应超过1.5米，照射时间30分钟为宜。
紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害，且对培养细胞与试剂等也产生不良影响，因此，不要开着紫外等操作。
2、高温湿热灭菌:压力蒸汽灭菌是最常用的高温湿热灭菌方法。
对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡。
布类、物、璃器皿、属器皿、胶和*些培养液都可以用这方法灭菌。
不同压力蒸汽所到达的温度不同，不同消毒物品所需的有效消毒压力和时间不同。
从压力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品〔不包括液体〕，应立即放到60-70℃烤箱烘干，再贮存备用，否则，潮湿的包装物品外表容易为微生物污染。
煮沸消毒也是常用的湿热消毒方法，它具有条件简单、使用方便等特点。
3、高温干热消毒：干热灭菌主要是将电热烤箱物品加热到160℃以上，并保持90－120分钟，杀死细菌和芽孢，到达灭菌目的。
主要用于灭菌玻璃器皿〔如体积较大的烧杯、培养瓶〕、金属器皿以及不能与蒸汽接触的物品〔如粉剂、油剂〕。
干热灭菌后要关掉开关并使物品逐渐冷却后在翻开，切忌立即翻开，以免温度骤变而使箱的玻璃器皿破裂。
干烤箱物品间要有空隙，物品不要靠近加热装置。
烧灼也是灭菌方法之一，常利用台面上的酒精灯的火焰对金属器皿及玻璃器皿口缘进展烧灼消毒。