呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
线粒体呼吸链复合物 氧化应激
线粒体呼吸链复合物氧化应激线粒体是细胞内的细胞器，主要作用是产生细胞的能量。
线粒体内的呼吸链复合物是能量产生的重要组成部分。
然而，在生物体内，线粒体上的氧化应激现象是不可避免的，即线粒体呼吸链复合物的功能遭受到破坏，这种现象在某些情况下可导致疾病的产生。
下面就线粒体呼吸链复合物及氧化应激进行较为详细的介绍。
线粒体呼吸链是细胞能量产生的主要途径，其过程中存在5个复合物，即复合物Ⅰ至复合物Ⅴ，它们负责氧化葡萄糖、脂肪酸等能量基质，释放电子并产生ATP，供给细胞进行各种生物活动。
其中，复合物Ⅰ和Ⅲ是负责将电子传递到复合物Ⅳ的两个电子传递系统，复合物Ⅱ和Ⅳ各自也是独立的电子传递系统，复合物Ⅴ是ATP合成酶，它根据下落的质子梯度，在质膜上合成ATP并释放能量。
电子传递过程中产生的质子梯度是细胞内能量产生的重要来源，这种梯度驱动复合物Ⅴ上ATP合成酶通过化学步骤合成ATP，供给细胞使用。
复合物内膜上存在多种呼吸链底物，其中氧分子是最终接受电子的分子。
复合物在电子传递中形成的电位差会使质子在复合物内膜间移动，从而形成质子梯度。
梯度的形成和维持，以及ATP产生，是细胞内高能化合物的合成和各种生物活动的推动力。
二、氧化应激由于细胞内合成许多尤其是有毒的代谢产物，例如氢氧离子等，加上环境压力等原因，会导致线粒体呼吸链复合物功能的降低和甚至破坏。
这种情况被称为氧化应激。
氧化应激现象是细胞生理性过程中的一部分。
氧化应激对细胞的影响很大，如寿命缩短、神经退行性疾病的发生等都可能和氧化应激有关。
产生过多的氧化应激会导致细胞内脂质自由基和有毒物质与有效物质之间的平衡失调，这样就会产生一连串的自由基反应，导致线粒体内呼吸链的复合物受到严重损伤，并最终形成INA，导致细胞毁灭。
氧化应激会导致线粒体内呼吸链复合物受到破坏。
具体来讲，氧化应激可以导致线粒体外膜通透性的改变；导致线粒体内膜通透性的改变，从而影响电位差的分布和电子传递链反应的进行；氧化应激会破坏线粒体呼吸链复合物间的相互调节和配合作用，影响其有效率和系统稳定性；氧化应激还会影响复合物Ⅰ和IV的构象变化，从而使其在受到刺激时容易就失去其功能。
线粒体氧化应激机制 解释说明
线粒体氧化应激机制解释说明1. 引言1.1 概述线粒体是细胞中的重要器官，负责产生能量和维持生命活动的平衡。
然而，线粒体在能量生成的过程中会不可避免地产生氧化应激现象，即产生大量活性氧自由基与氮自由基。
这些自由基在高浓度时会对细胞结构和功能造成损伤，从而导致多种疾病的发生。
1.2 文章结构本文将首先介绍线粒体的结构和功能特点，并详细阐述氧化应激的定义及其机制。
接着，我们将探讨线粒体氧化应激机制在各种疾病中的作用和关联，包括心血管疾病、癌症和神经系统疾病。
随后，我们将介绍调控线粒体氧化应激的方法和策略，包括抗氧化剂、运动以及药物干预和营养方面的策略。
最后，通过总结重要性并展望未来的研究方向来结束全文。
1.3 目的本文旨在系统地介绍线粒体氧化应激机制的基本原理，探讨其与不同疾病之间的关系，并总结目前调控线粒体氧化应激的方法和策略。
通过深入探讨这一主题，我们希望能够加深对线粒体氧化应激机制的理解，并为研究人员提供有价值的参考，以便进一步阐明其在疾病发展中的作用，并探索新的治疗策略和预防手段。
2. 线粒体氧化应激机制的基本原理:2.1 线粒体结构和功能:线粒体是细胞中重要的细胞器之一，类似于细胞内的能量工厂，承担着生物化学过程中ATP合成的关键角色。
它具有独特的结构和功能，由内膜、外膜和基质组成。
内膜形成许多褶皱，称为线粒体内襞，增加了表面积以便更多的能量产生。
此外，内外膜间存在间隙空间。
2.2 氧化应激的定义和机制:氧化应激是指在细胞内产生过多活性氧种（ROS）时发生的一种失衡状态。
而ROS是由氧化还原反应生成的高度活性分子，如超氧阴离子（O2-）、羟基自由基（•OH）和过氧化氢（H2O2）。
正常情况下，细胞通过抗氧化系统来清除产生的ROS并维持红ox平衡。
然而，在某些情况下，身体无法有效地抵御ROS 积累而导致氧化应激。
在线粒体中也会发生氧化应激，主要是由于其作为ATP合成的主要地点而产生大量ROS。
细菌氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒产品说明书(中文版)
细菌氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细菌氧化应激活性氧高质荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在细菌氧化条件下，产生荧光，来定量检测细菌活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种实验用细菌菌株氧化应激活性氧的分析。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，滞留持久，荧光清晰。
技术背景细菌作为模式生物，是环境化学毒性研究的常用工具。
活性氧的检测可以用于诸如多环芳烃化合物或重金属的毒性作用以及修复（remediation）的评价指标。
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。
氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。
PH0630 活性氧检测试剂盒实验操作手册 Phygene
PH0630|活性氧检测试剂盒Reactive Oxygen Species Assay KitCatalog No：PH0603Size：☐100~500Tests Store at-20℃活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）是一种基于荧光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate）的荧光强度变化，定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。
进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。
而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞内。
细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。
绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。
在最大激发波长480nm，最大发射波长525nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。
Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。
根据检测体系和检测方法的不同，本试剂盒可测定100~500次。
试剂存储冰袋运输。
-20℃干燥避光保存，有效期一年。
试剂组分编号组分规格保存方法PH0630-A DCFH-DA（10mM）0.1mL-20℃，避光保存PH0630-B活性氧阳性对照（Rosup,100mM） 1.0mL-20℃，避光保存使用说明检测步骤1.装载探针1.1原位装载探针（仅适用于贴壁细胞）①细胞准备：检测前一天进行细胞铺板，确保检测时细胞汇合度达到50~70%。
【注】：必须保证细胞状态健康，且检测时不会过度生长。
②药物诱导：去除细胞培养液，加入适量经合适的缓冲液或无血清培养基稀释到工作浓度的药物，于37℃细胞培养箱内避光孵育，具体诱导时间根据药物本身特性，以及细胞类型来决定。
（可选）阳性对照：先用无血清培养基等稀释阳性对照（Rosup,100mM）到常用工作浓度100μM，加入细胞，一般37℃避光孵育30min-4h 可显著看到活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异。
MPT比色法检测试剂盒说明书
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 GMS10095.3 GMS10095.3A GMS10095.3B GMS10095.3C GMS10095.1 GMS10095.2 GMS10095.2 GMS12226
规格 10/50 次 10/50 次
10 次 50 次 50 次 10 次 100 次 20 次 20 次 10 次
3
GMS10014.1 GMS10014.2 GMS10014.3 GMS10014.4 GMS10014.5 GMS10014.6
GMS10015 GMS10016.1 GMS10016.2 GMS10016.3
吸光值比值降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强
9． 构建膜通道孔诱导开放曲线：纵座标（Y）为吸光值比值（A540/Initial A540），横座标（X）为时间（秒）
注意事项
1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 使用时，避免污染母液，尤其是 GENMED 缓冲液（Reagent A） 4． 线粒体样品中忌用磷酸盐、EDTA、钙镁离子等处理 5． 建议使用未经诱导或抑制处理的样品作为阴性对照 6． 建议孵育完成后，即刻进行检测分析 7． 可以使用 540nm 波长的滤波器或者 440nm 波长的滤波器 8． 可以使用分光光度仪检测，0.2 毫升比色皿替代酶标板 9． 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.8 为理想状态；而 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.2 为理想状态 10．样本测定 1 分钟或其它检测时间读数低于 0 分钟读数表明膜通道孔开放 11．如果膜通道孔为瞬时开放（transient），则吸光读数缓慢降低 12．GENMED 诱导液（Reagent B）含有氯化钙，用户可以使用其它诱导剂替代，例如磷酸盐，二氧化钾
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。
复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。
索莱宝 BC0515 线粒体呼吸链复合体Ⅰ NADH-CoQ 还原酶活性检测试剂盒说明书
微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0515规格：100T/96S溶液的配制：1、 试剂二：临用前取一支加入1 mL 丙酮，充分溶解，2-8℃可保存1个月（1瓶粉剂即可做100T ，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；2、 试剂三：临用前加入0.1mL 丙酮，丙酮易挥发，使用完毕后注意封口，-20℃可保存2个月；3、 试剂三工作液：临用前根据用量将试剂三：丙酮=5μL ：0.5mL （约50T ）混合备用，现用现配；4、 试剂四：临用前取一支加入1.6mL 蒸馏水（约100T ），充分溶解，-20℃可保存1个月，避免反复冻融（1瓶粉剂即可做100T ，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；5、 工作液的配制：根据用量将丙酮：试剂二：试剂三工作液=250μL ：250μL ：500μL （约50T ）混合备用，现配现用。
产品说明：复合体Ⅰ（EC 1.6.5.3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。
该酶催化一对电子从NADH 传递给CoQ ，同时可使O 2还原生成O 2-，是呼吸电子传递链上产生O 2-的主要部位。
测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC ）状态，而且可以反映活性氧（ROS ）生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH 脱氢生成NAD +，在340nm 下测定NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV 板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、丙酮、冰和蒸馏水。
NAD + + CoQH 2 NADH （340nm ） + H + + CoQ Mitochondrial Complex I操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液一，用匀浆器或研钵于冰上快速匀浆（约30次）。
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1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 孵育时，须避免光照 4． 建议染色完成后，即刻进行荧光分析 5． 本公司提供膜电位依赖性活性氧检测试剂产品 6． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定荧光清晰
产品内容
缓冲液（Reagent A） 选择液（Reagent B） 补充液（Reagent C） 染色液（ Reagent D） 产品说明书
毫升 微升 毫升 微升 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，染色液（Reagent D），严格避免光照； 有：用于染色孵育 （共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷 氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等 细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二 氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是 取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全 自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧 化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。三氟甲氧基苯腙羧基氰化物（carbonyl cyanide 4-trifluoromethoxy henylhydrazone；FCCP）使线粒体膜化学离子梯度消失。
呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒产品说明书 （中文版）
主要用途
呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染 色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在线粒体氧化条件下，选择性阻止膜电位，所产生的荧光，来定量检 测线粒体内膜电位依赖性活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研 制、成功实验证明的。可以被用于线粒体功能、氧化激发和抑制机理等的研究。产品严格无菌，即到即用， 操作简易，活体检测，性能稳定。
a) 使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）： 1）移取 10 微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片 2）激发波长 490nm，散发波长 530nm―― 绿色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高
b) 或使用荧光分光光度或荧光酶标仪检测（定量检测）： 1）直接放进荧光酶标仪：激发波长 490nm，散发波长 530nm―― 样品RFU－对照RFU＝实际线粒体RFU：增高，表明活性氧族（ROS）含量高
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实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂放进冰槽里融化，避免光照；同时从－80℃冰箱里取出待测的线粒体， 放进冰槽里融化。然后进行下列操作。
1． 准备 1 个 96 孔板，标记好背景对照孔和待测样品孔 2． 分别加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A） 3． 分别加入 xx 微升 选择液（Reagent B） 4． 移取 xx 微升线粒体悬液（总量为 50 微克线粒体蛋白）到 96 孔板的相应待测样品孔里 5． 加入 xx 微升 补充液（Reagent C）到 96 孔板的相应背景对照孔里 6． 分别加入 xx 微升 染色液（Reagent D）到上述孔里 7． 放进 37℃恒温水槽孵育 15 分钟，避免光照 8． 选择下列方式之一进行操作：