氟喹诺酮类药物检测(高效液相色谱法).
高效液相色谱法快速测定多种临床常用酌喹诺酮类药物
・ 药 品检验 ・
高效 爽 李 晓华 张 永玲 游 广辉
４ ５ ０ ０ ０ ３
徐 国防
郑 州人 民医 院 ， 河南 郑 州
【 摘 要１目的 建 立一 种可 快 速测 定 多种 临床 常 用喹 诺 酮类 药物 浓 度 的 Ｐ Ｒ— ＨＰ Ｌ Ｃ法 。方 法 以 Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｈ ｏ ｍｅ ， Ｃ１ ８ 不 锈 钢柱（ ２ ５ ０ ｍｍｘ ４ ． ６ ｍｍ， ５ Ｉ ｘ ｍ 色谱 柱 ） ， ０ ． ０ １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ磷 酸 二氢 钾 一 甲醇一 ０ ． ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ四丁基 溴化 氨 （ ７ ８ ： ２ ２ ： ４， ） 为 流 动相 ． 流 速 ：１ ． ０ ｍＬ ／ ｍ ｉ ｎ 。 柱温 ： ４ ０ ｃ Ｉ ： ， 波 长 依受 检药 物 为定 ， 灵敏 度 ： ０ ． ０ ０ １ Ａ Ｆ Ｕ。 外 标 法定 量 。以二 氯 甲烷 （ 含２ ％ 异丙 醇 ） 萃取 样 品 ， 氮气 吹干后 以流 动 相复 溶 ， 进样 ２ ０ Ｌ 。 结果 按 上述 色 谱 条件 和 样 品处 理 ， 左 氧氟 沙 星 、 莫 西 沙 星 等 ５种 喹诺 酮类 药 物 可得 到 可 靠分 离 和 准确 检 测 。 结论 所建 立 的 Ｐ Ｒ — Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 简 便 易行 ，准 确 可靠 。
ｗａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｄ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｑ ｕ ｉ ｎ ｏ ｌ ｏ ｎ ｅ ｎｔ ａ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｓ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ｔ ｅ ｍｐ ｅ ｒ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ｗａ ｓ ４ ０ ℃ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｉ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ
高效液相色谱法测定诺氟沙星胶囊含量结果的比较
图 ２ 对照 品溶液谱 图
图 ３ 供试 品溶液谱 图
作者单位 ： １ ２ １ ０ ０ ０ 锦州市食 品药 品检 验所
・
２ ３ ４・
中国现代药 物应用２ ０ １ ４ 年３ 月第８ 卷第６ 期
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｍ ｏ ｄ Ｄ ｒ ｕ ｇ Ａ ｐ ｐ ｌ ， Ｍ ａ ｒ ２ ０ １ ４ ， Ｖ ｏ １ ． ８ ， Ｎ ｏ ． ６
５ 讨 论
符合规定 ， 对诺 氟沙 星的生产提供 强有力 的实验依 据 ， 并对
以上试验均按 照 ２ ０ １ ０ 年版药典二部标准检验 ， 经过 对 １ ２ 个 厂家 １ ５个批次 的靠 ， 诺 氟沙星含量在 （ ９ １ ． ５ ％～ １ ０ ５ ． ８ ％） 均
置５ ０ ｍ ｌ 量瓶 中 ， 用 流动相稀释至刻度 ， 摇匀 。
４ 结 果
似作 用是调节 ｐ Ｈ ， 其实 际最大作用是 调整峰 型 ， 因为诺氟 沙 星有 含氮极性基 团 ， 在 酸性环境 中容易与色谱柱 中的硅羟 基
表 １ 高效液相色谱法测定各 厂家诺氟沙星胶囊含量结果 的 比 较 ［ ｎ （ ％ ） ］
谱抗 菌药效 ， 特别是对需 氧革兰 阴性 杆菌具有非 常高 的抗 菌
产生静 电作用而拖尾 ， 而三乙胺可 以代替物质与硅羟基作 用 ， 保 证了物质 的峰型 。检测 波长 ： ２ ７ ８ｎ ｍ， 柱温 ： ２ ５ ℃， 流速 １ ． ０
活性 ， 如绿脓 杆菌 、大肠杆 菌有较 强杀菌作 用 ， 对体 外多重 ｍｌ ／ ｍ ｉ ｎ ， 进样量 ２ ０儿 ｌ ， 按外 标法以峰面积计算 。 耐药 菌也具有非 常好 的抗 菌活性 ， 而且 细菌对本 品也不易产 ３ 溶 液 制备
生耐药性 。在 临床 上 具有很好的应用价值 ， 常用剂型 主要 为 系统适用性溶液 的制备 ： 精密称取诺 氟沙星 、环丙沙星 、 胶囊剂 ， 是治疗 泌尿系统 、胃肠道 系统 细菌感染 等疾病的首 依诺 沙星对 照品加 ０ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ盐 酸溶液溶解 ， 用流动相稀释制 选药物 。截至 目前 ， 对 其含量 的测量方 法有很 多种 ， 包括非 成 含诺 氟沙星 ２ ５￣ ｇ ／ ｍ Ｊ 、环 丙沙星 ５ ｌ ｌ ｌ 、依诺沙 星 ５￣ ｇ ／ ｍｌ 水滴定法 、高效液相 色谱法 、 紫外分光 光度法 、荷移 分光光 的混合溶 液。诺氟 沙星 峰的保 留时间约 为 ９ ｍｉ ｎ 。诺 氟沙 星 度法 ， 本 文主要介绍 的是高效液相色谱 法测量诺 氟沙星胶囊 峰 与环 丙沙星峰和诺 氟沙星峰与依诺沙 星峰的分离度均应大 ． ０ （ 均符合规定 １ 。 含量 ， 并将不 同厂家及 批次 的含 量测定 结果相 比较 ， 为临床 于 ２
超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中氟喹诺酮类药物
超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中氟喹诺酮类药物引言随着社会的发展和人们对美的追求，化妆品行业逐渐成为了一个庞大的产业。
随着化妆品行业的发展，一些不法商家为了谋取暴利，往往会在产品中添加一些违禁物质，给消费者带来安全隐患。
氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于抗菌和抗炎的药物，但是其在化妆品中的使用是被禁止的。
对氟喹诺酮类药物在化妆品中的检测显得尤为重要。
本文主要介绍了超高效液相色谱-串联质谱法在测定化妆品中氟喹诺酮类药物方面的应用。
氟喹诺酮类药物的特性及危害氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于医学领域的抗菌和抗炎药物，主要用于治疗细菌感染和炎症。
由于其具有一定的毒副作用，多国已经规定氟喹诺酮类药物不能用于化妆品中。
氟喹诺酮类药物在化妆品中的使用可能会导致以下危害：1. 皮肤敏感：氟喹诺酮类药物可能引起皮肤过敏反应，导致肌肤瘙痒、红肿等症状。
2. 毒副作用：长期接触氟喹诺酮类药物可能会引发毒副作用，对人体健康造成危害。
3. 法律责任：根据相关法律法规，化妆品中添加氟喹诺酮类药物是违法行为，生产商将承担相应的法律责任。
超高效液相色谱-串联质谱法的原理超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）是当今分析领域中应用十分广泛的一种方法，它通过将超高效液相色谱和串联质谱技术相结合，能够提供更快、更准确的分析结果。
其基本原理如下：1. 色谱分离：样品中的化合物首先通过超高效液相色谱柱进行分离，根据化合物的亲和性和极性来进行分离。
2. 质谱检测：分离后的化合物通过质谱进行检测，同时进行定量和定性分析。
3. 数据处理：利用专业的数据处理软件对获取的数据进行处理和分析，得出最终的结果。
UHPLC-MS/MS在氟喹诺酮类药物检测中的应用UHPLC-MS/MS在氟喹诺酮类药物检测中的应用主要分为样品前处理、色谱分离和质谱检测三个方面。
1. 样品前处理在化妆品中检测氟喹诺酮类药物时，首先需要进行样品前处理。
通常采用溶剂提取或固相萃取的方法来提取样品中的氟喹诺酮类药物。
高效液相色谱-荧光法检测禽肉中七种氟喹诺酮类药物残留的研究
氟沙星 、双氟沙星、沙拉沙星标准 品，纯度 ≥９ ％，日本 ８ 关东株式会社生产 。
１ 色 谱 条 件 ． ３ 色 谱 柱 ：ＷＡ Ｅ Ｓ Ｓ ｍｍｅ ｙ ｈｅ Ｔ Ｐ ８ ４６ ｎｘ Ｔ Ｒ ｙ ｔ Ｓ ｉｌＭ Ｒ Ｉ ． ｒ ｄ ｍｉ
的肉鸭的肉品和营养价值显著高于高网平养 。
４ 结论 通 过 对 不 同 的 饲 养 方 式 下 生 长 的 肉 鸭 的产 肉 性 能 及 体 成 分 的 比 较 研 究 ， 说 明 高 网 饲 养 与 地 网饲 养 的 肉鸭 的 产 肉性 能 差 异 不 显 著 ，但 地 网 饲 养 肉 鸭 的 体 成 分 指 标 显
氟 喹 诺 酮 类 药物 （ｌｏｏ ｕｎ ｏｏ ｅ，Ｆ ） 近 年 来 发 Ｆｕ ｒｑ ｉ ｌ ｓ Ｑｓ ｎ ｎ 是
展迅速 并被广泛 应用 的新一代全 合成抗生 素。它抗 菌谱 广 、高效、低毒 、组织 穿透力强 ，抗菌作用 是磺胺类 药 的近千倍 ，与第３ 代头孢类抗 生素相媲美 。 由于Ｆ ｓ Ｑ 是化
目前 ，用 于Ｆ ｓ 留检测 的方法有微生物法 、气相色 Ｑ残 谱法 、气相色谱． 质谱 、 免 疫 分 析 法 等 。 但 在 现 行 国 内标 准 和 报 道 文 献 中
常用 的高效液 相色谱法只 能检测２ 种 药物残 留，本研 、３ 究采用 液液萃 取进 行样 品前处理 ，用带荧光 检测器 的液 相色谱仪梯 度洗脱检测 ，可同时测 定氧 氟沙星（ Ｆ Ｘ 、 Ｏ Ｌ ）
山东畜牧兽医
２１ ０ ０年第 ３ ｌ卷
高 效液 相 色 谱． 光 法检 测 禽 肉 中七种 氟 喹 诺酮 类 荧 药 物残 留 的研 究
优化超高效液相色谱法对鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测
诺 酮 类 药 物 的 常 规 方法 主要 有 固相 萃 取一 高 效 液 相 色谱 法 、 酶联 免 疫 法 、 薄 层 色 谱 法 和 荧 光 法
等ｒ ２ 一 。该 文借 鉴农 业 部现 行有 效标 准高 效液 相 色
氟 喹诺 酮 类药 物主 要用来 预 防和 治疗 动物 疾
供 试试 剂 有环 丙沙 星 、 恩 诺沙 星 、 达 氟 沙星及
病， 作 为一 种 临床上 比较 常用 的抗 菌类 药 物 ， 少 量
使 用可 以对 动 物具 有 一 定 的生 长 促 进 作 用 ， 但 因
沙 拉沙 星标 准 品 ， 乙腈 （ 色谱纯 ） ， 购 自美 国 Ｆ ｉ ｓ ｈ ｅ ｒ
李 宁。 林 小莉 。 董 艳峰
（ 哈 尔滨 市兽 药饲料 监 察所 ， 黑龙 江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ １ ０ ）
摘要 ： 为 制 定 畜产 品 中沙 星 类 药 物 残 留 高效 实用 的检 测 标 准 ， 建 立 一 种 测定 鸡 蛋 中 ４种 氟喹 诺 酮 类 药 物 （ 环丙 沙星、 恩诺 沙星、 沙拉沙星 、 达氟沙星） 残 留 的超 高 效 液 相 色谱 检 测 方 法 。结 果 表 明 ： ４种 氟喹 诺 酮 类 药 物峰 面 积 与 质 量 浓 度 呈 良好 的 线 性 关 系 ， Ｒ 均 大于 ０ ． ９ ９ ９ ８ 。环 丙 沙星 、 恩诺 沙墨 、 沙拉 沙 星的 线性 范 围为 ０ ～ ５ ０ ０ ｇ ・ Ｌ ～， 达氟 沙 星的 线性 范 围为 ０ ～１ ０ ０ ｇ ・ Ｌ 。鸡 蛋样 品 中氟喹 诺 酮 类 药物 的 回收 率 为 ７ ８ ． ９ ～
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于人类和动物医疗领域的抗生素药物。
由于其广泛使用以及潜在的药物残留问题，对氟喹诺酮类药物残留进行检测和监管变得尤为重要。
为此，国家标准对氟喹诺酮类药物残留的检测方法和限量要求进行了规定。
国家标准对氟喹诺酮类药物残留的检测方法主要包括色谱法和质谱法。
色谱法是一种常用的分析方法，通过分离样品中的药物成分，再进行定量分析。
常用的色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
质谱法则是一种能够识别和定量药物成分的高灵敏度分析方法，包括气相质谱法（GC-MS）和液相质谱法（LC-MS）。
这些分析方法能够快速准确地检测氟喹诺酮类药物残留。
国家标准还规定了氟喹诺酮类药物残留的限量要求。
限量是指在食品、饲料和水产品中，允许的最高残留量。
这些限量值是根据对药物的毒理学评估和风险评估结果确定的。
国家标准对不同食品和饲料中氟喹诺酮类药物的限量值进行了详细的规定，以确保人类和动物食品的安全。
氟喹诺酮类药物残留检测国标的解读对于药物残留监管机构、食品和饲料生产企业、检验检测机构以及消费者都具有重要意义。
对于药物残留监管机构来说，国家标准的解读能够帮助他们制定监管政策和规范，确保食品和饲料中的氟喹诺酮类药物残留不超过限量要求。
对于食品和饲料生产企业来说，国家标准的解读可以帮助他们确保产品符合法规要求，提高产品质量和竞争力。
对于检验检测机构来说，国家标准的解读则是他们进行检测和评估的基础，确保检测结果准确可靠。
对于消费者来说，国家标准的解读能够提供关于食品和饲料安全的信息，保护消费者权益。
总之，氟喹诺酮类药物残留检测国标的解读对于保障食品和饲料安全、规范药物残留监管具有重要意义。
各相关方应根据国家标准的要求，加强对氟喹诺酮类药物残留的监管和控制，以确保公众的健康和安全。
超高效液相色谱法检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留
超高效液相色谱法检测鸡蛋中4种氟喹诺酮类药物残留孙思;王安波;杨梅;汪俭;刘文峰【摘要】为寻求快速、高效和低成本的样品分析方法,在高效液相色谱法基础上通过前处理条件及色谱条件的优化,建立快速检测鸡蛋中恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星和沙拉沙星残留的超高效液相色谱法(UPLC),即选用1％磷酸-乙腈作为提取溶液、水饱和正己烷作为除脂溶液、Waters Oasis HLB柱为固相萃取柱及1/4提取液过柱、89％(0.05 mol/L磷酸/三乙胺)∶11％(乙腈)的流动相比例,并对建立的方法进行验证.结果表明:利用新建立的UPLC检测,4种氟喹诺酮类药物在0.2～50 μg/kg线性范围良好(R2＞0.999 7),经添加低中高3种不同浓度的混和标准液进行回收率和变异系数分析,其回收率在85.7％～94.3％,变异系数为1.50％～3.77％,最低检测限为0.17～0.59 μg/kg,定量限为0.81～2.01 μg/kg.该方法易于操作,准确度和精密度高,能满足大批量鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留检测需要.%The UPLC method to rapidly detect Enrofloxacin,Ciprofloxacin,Danofloxacin and Sarafloxacin residues in eggs was built by simplified pre-treatment and optimized chromatographic condition based on HPLC to explore a rapid,efficient and low cost method of detecting fluoroquinolone residues in eggs.The UPLC method includes 1％ phosphoric acid-acetonitrile for extraction,water saturation n-hexane for degreasing,Waters Oasis H LB column for solid-phase extraction,1/4 extract for purification and mobile phase ratio of 89％ L-phosphoric acid/triethylamine:11％acetonitrile.Results:The linear range of four fluoroquinolones is good between 0.2～50 ug/kg (R2＞ 0.999 7) under the UPLC method.The recovery rate,variation coefficient,minimum detection limit andquantification limit of four fluroquinolones respectively added with three different concentrations are 85.7％～ 94.3％,1.50％～ 3.77％,0.17 ～0.59 μg/kg and 0.81 ～2.01 μg/kg separately.The established UPLC method with advantages of easy operation,high accuracy and high precision can be used in detection of fluoroquinolone residues in mass eggs.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2018(046)001【总页数】5页(P104-108)【关键词】鸡蛋;氟喹诺酮;超高效液相色谱法;药物残留【作者】孙思;王安波;杨梅;汪俭;刘文峰【作者单位】黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000;黔东南州农产品质量安全检测中心,贵州凯里556000【正文语种】中文【中图分类】S481+.8氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones, FQNs)是一类人工合成抗菌药，抗菌效果极强，其中，恩诺沙星(Enrofloxacin, ENR)、环丙沙星(Ciprofloxacin, CIP)、达氟沙星(Danofloxacin, DAO)和沙拉沙星(Sarafloxacin, SAR)在畜禽生产中被广泛应用[1]。
高效液相色谱法测定猪肉中氟喹诺酮类药物
猪 肉为 各 地 方送 检 样 品 。 乙腈 、 正 己烷 、磷 酸 二 氢钠 、磷 酸 天 津 市光 复 精 细 化 工研 究所 ； 三 乙胺 上 海 晶 纯 实 业 有 限 公 司 ； 无 水硫 酸 钠 烟 台三 和 化 学试 剂有 限 公司 。 ｌ 仪 器 与设 备 － ２
童中枢神经系统 的副作用也有报道 ，另氟喹 诺酮类药物 还有潜在的致癌性和遗传毒性 ，同时还容 易使病菌产生
耐药 性 ，所 以欧盟 和 北 美等 国家 只 批准 恩 诺 沙星 为动 物 专 用 的 抗 菌 药 ， 环 丙 沙 星 已禁 止 在 水 产 养 殖 业 中 使用 。 动物 源 性 食 品 的安 全 性 ，对 其 残 留最 的检 测 越 来越 受 到 关注 【 ｌ ＿ 。氟 喹 诺酮 类 药物 在动 物 组织 中的残 留分析 方 法 主 要 有 酶联 免疫 吸 附测 定法 （ Ｌ Ｓ 、高 效 液相 色 谱法 Ｅ Ｉ Ａ） （ Ｐ Ｃ ｔ 和液 相色谱 一 Ｈ Ｌ） 】 质谱法（ ＣＭＳ。本方 法研 究建 立 Ｌ — ） 的 Ｈ Ｌ ．Ｌ Ｐ Ｃ Ｆ Ｄ检测方法 ＿］ ９】 ＿ ，用 １ 醋酸 一 腈 溶液 ［ １作 Ｉ ％ １５ ４】 － 为提 取 液 ， 町同 时检 测 猪 肉 中环 丙 沙星 、恩 诺沙 星 两 种 氟 喹 诺 酮 类 药 物 ， 该 方 法 分 析 时 间 短 、 操 作 简 单 、 节
文献标识码 ：Ａ
文章编号 ：１０ ．１ ３２ ）００ ２ —３ ０ １８ ２ （０ １１．０ ９０
氟 喹诺 酮（ ｕ ｒｑ ｉｏｏ ｅ ，Ｆ ｓ类 药 物 ，具 抗菌 ｎ ｏｏ ｕｎ ｌｎ ｓ Ｑ ） 谱 广 、 高 效 、 低 毒 、 组 织 穿 透 力 强 等 特 点 ， 目前 氟 喹诺 酮 类 药 物在 医学 和 兽 医学 中应 用广 泛 ，但 其 残 留可 导致 人 体 病 原体 的耐 药 性 ，而 Ｈ有 关 氟喹 诺 酬 类 药物 儿 ．
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试剂和材料
16．达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准储备液：分别去达氟沙 星对照品约 10mg，恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各约 50mg，精密称定， 用 0.03mol/L 氢 氧 化 钠 溶 液 溶 解 并 稀 释 成 浓 度 为 0.2mg/mL （ 达 氟 沙 星 ） 和 1mg/mL（恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星）的标准储备液。置2℃-8℃冰箱中保 存，有效期为3个月。
测定步骤
5．测定 （1）色谱条件 a)色谱柱：C18 250mm×4.6mm，粒径5μ m，或相当者。 b) 流动相： 0.05mol/L 磷酸溶液 / 三乙胺 - 乙腈（ 82+18 ， V/V ） , 使用前经微孔滤 膜过滤。 c)流速：0.8mL/min。 d)检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm。 e）柱温：室温。 f）进样量：20μ L。
测定步骤
（2）测定法 取试样溶液和相应的对照溶液，作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算。对照 溶液及试样溶液由达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星响应值均应在仪器检
测的线性范围内。在上述色谱条件下，对照溶液和试样溶液的高效液相色谱图。
（六）空白试验 除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
仪器和设备
6．离心机。 7．匀浆杯：30mL。
8．离心管：50mL。
9．固相萃取柱：C18柱。 10．微孔滤膜（0.45um）。
测定步骤
1. 试样的制备
（1）取绞碎后的供试样品，做为供试试料。 （2）取绞碎后的空白样品，做为空白试料。 （3）取绞碎后的空白样品，添加适宜浓度的对照溶液，作为空白添加 试料。
2．恩诺沙星：含恩诺沙星不得少于99.0%。
3．环丙沙星：含环丙沙星不得少于99.0。
试剂和材料
6．氢氧化钠。 7．乙腈：色谱纯。 8．甲醇。 9．三乙胺。 10．磷酸二氢钾。 11．5.0mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液 28mL，加水稀释至100mL。
3．净化
固相萃取柱依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2mL预洗。取上清液5.0mL过
柱，用水1mL淋洗，挤干。用流动相1.0mL洗脱，挤干，收集洗脱液。经
滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定。
测定步骤
4．标准曲线的制备 准确量取适量达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液， 用流动相稀释成浓度分别为 0.005μ g/mL 、 0.01μ g/mL 、 0.05μ g/mL 、 0.1μ g/mL 、 0.3μ g/mL 、 0.5μ g/mL 的对照溶液，供高效液相色谱分析。
氟喹诺酮类药物检测方法
高效液相色谱法
兽药残留检测
原理
用磷酸缓冲溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。以磷 酸-乙腈为流动相，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。
试剂和材料
以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水符合
GB/T6682规定的二级水。
1．达氟沙星：含达氟沙星不得少于99.0%。
（七）结果计算和表述
按下式计算试料中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星或沙拉沙星的残留量。
测定步骤
式中： X——试料中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星或沙拉沙星的残留量，单位为 （ng/g）； A——试样溶液中相应药物的峰面积； AS——对照溶液中相应药物的峰面积； CS——对照溶液中相应药物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V1——提取用磷酸盐缓冲液的总体积，单位为毫升（mL）； V2——过C18固相萃取柱所用备用液体积，单位为毫升（mL）； V3——洗脱用流动相体积，单位为毫升； M——供试试料的质量，单位为（g）。
试剂和材料
12．0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5.0mol/L氢氧化钠溶液0.6mL，加水稀释至 100mL。 13 ． 0.05mol/L 磷酸 / 三乙胺溶液：取浓磷酸 3.4mL ，用水稀释至 1000mL 。用三 乙胺调pH至2.4。 14 ． 磷 酸 缓 冲 溶 液 ： 取 磷 酸 二 氢 钾 6.8g ， 加 水 使 溶 解 并 稀 释 至 500mL ， 用 5.0mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.0。 15．磷酸盐溶液：取磷酸二氢钾 6.8g，加水溶解并稀释至500mL，pH为4.0-5.0。
17．达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液：准确量取适量标
准储备液用乙腈稀释成适宜浓度的达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星 标准工作液。置2℃-8℃冰箱中保存，有效期为1周。
仪器和设备
1．高效液相色谱仪。
2．天平：感量0.01g。 3．分析天平：感量0.00001g。 4．振荡器。 5．组织匀浆机。
测定步骤
2．提取 取 （ 2±0.05g ） 试 料 ， 置 30mL 匀 浆 杯 中 ， 加 磷 酸 缓 冲 溶 液 10.0mL ，
10000r/min匀浆1min。匀浆液转入离心管中，中速振荡5min，离心（肌
肉 、 脂 肪 10000r/min 5min ； 肝 、 肾 15000r/min ， 5min ； 肝 、 肾 15000r/min 10min）。合并两次上清液，混匀，备用。