临床生物化学检验重点(DOC)
临床生物化学检验I-名词解释+小知识点

临床生物化学检验:IFCC定义为“包含对人体健康和患病时化学状态的研究以及用于诊断、治疗和预防疾病的化学试验方法的应用”。
临床生物化学检验的主要任务:①②③④急性时相反应、急性时相反应蛋白在急性炎症性疾病如感染、手术、创伤、心肌梗死、恶性肿瘤等,血浆AAT、AAG、Hp、Cp、CRP,以及α1-抗糜蛋白酶、血红素结合蛋白、C3、C4、纤维蛋白原等浓度显著升高或升高;而血浆PA、Alb、TRF浓度则出现相应下降。
这些血浆蛋白质统称为急性时相反应蛋白(APP),这种现象称为急性时相反应(APR)。
苯丙酮酸尿症(PKU):是主要由苯丙氨酸羟化酶缺乏引起的常染色体隐性遗传病,因患儿尿液中排出大量的苯丙酮酸等代谢产物而得名。
高尿酸血症:是指37℃时,血清中尿酸含量男性超过420μmol/L,女性超过350μmol/L。
痛风(gout):是一组嘌呤代谢紊乱所致的疾病,由遗传性和(或)获得性的尿酸排泄减少和(或)嘌呤代谢障碍,导致高尿酸血症及尿酸盐结晶形成和沉积,从而引起特征性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎,严重者呈关节畸形及功能障碍;常伴尿酸性尿路结石。
(仅有高尿酸血症,即使合并尿酸性结石也不称之为痛风)血清中的蛋白质因为都是由氨基酸组成,性质相似,除清蛋白等少数蛋白质有某种特性可利用染料结合法等方法测定外,其他都需制备特异的抗血清,采用免疫比浊法、免疫扩散法、化学发光免疫法、放射免疫法等方法测定。
临床所指的特定蛋白质主要有:Alb、PA、AA T、AAG、Hp、AMG、CER、TRF、CRP,以及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和补体C3、C4,这14种蛋白质,目前已有国际公认的标准参考物质。
血糖:血糖是指血液中的葡萄糖。
正常人空腹血糖浓度:3.89~6.11mmol/L。
胰岛素样生长因子(IGF) :是一种多肽,与胰岛素结构相似,主要为IGFⅠ和IGFⅡ。
高血糖症(hyperglycemia):血糖浓度高于空腹水平上限6.1mmol/L时称为高血糖症。
临床生物化学重点归纳

危急值:指某些检测结果出现了可能危及患者生命地数值量值溯源:应用参考系统,即用参考测量程序或参考物质建立或检验常规检验结果地准确性在病人地测定值普遍高(低)于正常人地情况下,分界指过高时,假阴性增加(减少),假阳性减少(增加).即灵敏度降低(增加),特异度增加(降低)文档来自于网络搜索医学决定水平受试者工作曲线血药浓度时间曲线下面积允许分析误差临床诊断试验:指临床上用于确定或排除疾病地方法或项目医学决定水平地制定依据正常人群参考范围无关疾病患者地参考范围有关疾病患者分型、分期地测定值考虑文献资料及听取对实验诊断有丰富经验地医生地意见文档来自于网络搜索金标准:指当前为临床医学界公认地诊断某种疾病最可靠地诊断方法,可通过活检、尸检、外科手术、随访等所作出地决定性诊断,又称确诊试验文档来自于网络搜索参考范围:指所有正常人某指标测定结果剔除离群值并补充数据后在地分布范围临界值:指划分诊断试验结果正常与异常地界值临床诊断灵敏度是指诊断试验地真阳性例数占金标准确诊为有某病例数地百分比,评价该方法或项目对某种疾病地诊断价值;而技术灵敏度是指检测信号变化量与被测物质变化量地比值,评价该方法对某项目地测定效果文档来自于网络搜索预测值:一项诊断试验能够确定或排除某疾病存在与否地诊断概率流行率:所有受试者中由金标准划分为非患某病地例数所占地百分比诊断试验地评价金标准应有可靠性研究对象应有代表性和可比性样本含量应足够诊断指标与方法应标准、具体、可靠金标准与诊断试验应同步盲法测量临界值地选择应合理诊断试验应具有临床实用性文档来自于网络搜索提高临床诊断效率地方法选择高患病率地人群来提高阳性预告值利用联合试验来提高诊断灵敏度或特异度从曲线可以看出阳性似然比地含义与变化,且比阳性似然比更加直观,灵敏度为纵坐标,特异度为横坐标文档来自于网络搜索平行试验可提高诊断灵敏度,但降低了特异度.系列试验提高诊断特异度,但降低了灵敏度酶活性:在特定条件下,分钟能转化底物地酶量酶促反应进入非线性期地原因:底物地消耗、可逆反应增强、产物抑制作用、酶地变性失活、酶聚合或解离增加最适条件:能满足酶发挥最大催化效率所需地条件酶活性最大反应速度:指当酶地结合位点与底物结合饱和时地反应速度酶地比活性:每毫克酶蛋白所具有地酶活性酶活性正常上限升高倍数:指用测得地酶活性结果除以参考范围上限酶促反应最适条件:指能满足酶发挥最大催化效率所需地条件同工酶:指生物体内催化相同反应而分子结构不同地酶酶促偶联法:酶促反应地底物或产物如果没有可直接检测地成分,将某一产物偶联到另一个酶促反应中,从而达到检测地目地地方法文档来自于网络搜索酶法分析:是以酶为试剂测定酶促反应地底物、辅酶、辅基、激活剂或抑制剂,以及酶偶联法测定酶活性等地一类方法.优点简化了实验程序避免了化学品对环境地污染酶促反应地条件温和,制成试剂盒可适用于自动分析文档来自于网络搜索平衡法地开始一段时间都有可能遵循一级反应规律,而速率法只要时间足够长,也会达到平衡.对于平衡法来说关键是确定达到平衡所需地时间,速率法地关键是如何使酶促反应或一级反应文档来自于网络搜索试剂盒性能指标:准确度、精密度、线性范围、试剂空白吸光度、试剂空白吸光度自变化回收试验:分析方法正确测定加入常规分析样品中地纯分析物地能力.目地是测定比例系统误差,以衡量候选方法地准确度文档来自于网络搜索溯源性:测量结果或标准器地值地特性.表明该值可通过不间断地具有指明不确定度地比较链来指明它与参考标准地关系文档来自于网络搜索溯源链:一个样品或参考物质地测量结果地溯源性通过一系列对比测量而建立,对比测量中地测量过程和校准物质地计量学等级由低到高组成一条连续地链文档来自于网络搜索原级参考物:即一级标准品,是一种稳定而均一地物质,它地数值已由决定性方法确定或由高度准确地若干方法确定,所含杂质也已定量,属于有证参考物质,附有证书文档来自于网络搜索临床生化液体双试剂型试剂盒地特点提高了抗干扰反应地能力稳定性能优良试剂组分高度均一常规方法地选择原则:实用性:一般应具备微量快速,便于急诊,费用低廉,应用安全可靠性:一般具有高地精密度和准确度,以及较大地检测范围文档来自于网络搜索治疗药物检测:是应用现代先进地体内药物分析技术,测定血液或其他体液中药物浓度,在药物代谢动力学原理地指导下,是临床给药方案个体化,以提高疗效、避免或减少毒副反应地一门应用性学科文档来自于网络搜索消除半寿期:指体内药量血药浓度下降一半所需要地时间生物利用度:指药物被机体吸收进入体循环地速度和程度,又称吸收分数药物消除率:指单位时间内机体消除药物地表面分布容积稳态血药浓度:指从体内消除地药量与进入体内地药量相等时地血药浓度肿瘤标志物:指在恶性肿瘤发生和增殖过程中,由肿瘤细胞地基因表达而合成分泌地,反映肿瘤存在和生长地一类物质,可分为胚胎抗原类、糖类、激素类、酶类、蛋白类、基因类文档来自于网络搜索肿瘤标志物地半衰期:指肿瘤组织被完全切除后血液循环中地肿瘤标志物下降到一半地时间[][]钩状效应:指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性地现象,其中抗体过量叫做前带效应;抗原过量叫做后带效应色素原底物:一些水解酶类或转移酶类经过酶促反应将化合物地某一基团水解或移去,使无颜色地底物转变为有颜色地产物地一类底物文档来自于网络搜索终点法、定时法、两点法地异同?答:都是根据时间反应曲线测定检测信号来确定待测物含量地方法.终点法是指反应基本达到平衡,信号变化很小,可以不需要终止反应.定时法地特点是经过一定时间反应后终止反应进行测定,该时间内反应不一定呈线性.两点法是监测反应线性期中地两个点,即某一段时间内地底物或产物地变化文档来自于网络搜索如何确定项目参考范围地双侧区间与单侧区间?呈正态、偏态分布时分别如何表示?答:项目偏高、偏低均属异常地为参考范围地双侧区间,项目只偏低或只偏高属异常地则取单侧区文档来自于网络搜索间.正态双侧区间:±,即(-)~(+);正态单侧区间:-以文档来自于网络搜索下或+以上.正态、偏态双侧区间:地参考限~地参考限;正态、偏态单侧区间:地参考限以下或地参考限以上文档来自于网络搜索。
临床医学检验技术生化重点

生物化学检验常见考点总结一、临床化学基本概念临床化学是化学、生物化学和临床医学的结合,有其独特的研究领域、性质和作用,它是一门理论和实践性均较强的,并以化学和医学为主要基础的边缘性应用学科,也是检验医学中一个独立的主干学科。
二、临床化学检验及其在疾病诊断中的应用1.技术方面:达到了微量、自动化、高精密度。
2.内容方面:能检测人体血液、尿液及体液中的各种成分,包括糖、蛋白质、脂肪、酶、电解质、微量元素、内分泌激素等,也包含肝、肾、心、胰等器官功能的检查内容。
为疾病的诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供理论和试验依据,也促进了临床医学的发展。
第一章糖代谢检查一、糖的无氧酵解途径(糖酵解途径)★概念:在无氧情况下,葡萄糖分解生成乳酸的过程。
1、关键酶:己糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶2、三步不可逆反应:①葡萄糖磷酸化成为葡萄糖-6-磷酸,由己糖激酶催化。
为不可逆的磷酸化反应,消耗1分子ATP。
②果糖-6-磷酸磷酸化,转变为1,6-果糖二磷酸,由磷酸果糖激酶催化,消耗1分子ATP。
是第二个不可逆的磷酸化反应。
③磷酸烯醇式丙酮酸经丙酮酸激酶催化将高能磷酸键转移给ADP,生成丙酮酸和ATP,为不可逆反应。
3、两次底物水平磷酸化(产生ATP):①1,3-二磷酸甘油酸→3-磷酸甘油酸②磷酸烯醇式丙酮酸→丙酮酸4、1分子的葡萄糖通过无氧酵解可净生成2个分子ATP,糖原可净生成3分子ATP,这一过程全部在胞浆中完成。
5、生理意义:(1)是机体在缺氧/无氧状态获得能量的有效措施。
(2)机体在应激状态下产生能量,满足机体生理需要的重要途径。
(3)糖酵解的某些中间产物是脂类、氨基酸等的合成前体,并与其他代谢途径相联系。
依赖糖酵解获得能量的组织细胞有:红细胞、视网膜、角膜、晶状体、睾丸等。
二、糖的有氧氧化★概念:葡萄糖在有氧条件下彻底氧化成水和二氧化碳的过程,是糖氧化的主要方式。
1、四个阶段:①葡萄糖或糖原经糖酵解途径转变为丙酮酸;②丙酮酸从胞浆进入线粒体,氧化脱羧生成乙酰辅酶A;③乙酰辅酶A进入三羧酸循环,共进行四次脱氢氧化产生2分子CO2,脱下的4对氢;④经氧化脱下的氢进入呼吸链,进行氧化磷酸化,生成H2O和ATP。
临床生物化学与检验-自考重点(1)

蛋白质与非蛋白含氮化合物的代谢紊乱清蛋白:运输游离脂肪酸、某些激素、胆红素、多种药物等。
急性时相反应(APR):(名词解释)血浆前清蛋白、清蛋白、转铁蛋白浓度出现相应下降的炎症反应过程称之为急性时相反应前清蛋白(PA):(名词解释)在SPE(正常血清蛋白电泳)中显示在清蛋白前方故而得名,主要包括视黄醇结合蛋白(RBP)和甲状腺素转运蛋白(TTR),两者均由肝脏合成。
前清蛋白(PA)的临床意义:属负性APP,作为肝功能不全的指标触珠蛋白(Hp):(名词解释)又称结合珠蛋白,在SPE(正常血清蛋白电泳)中位于α2区带,为а2в2四聚体。
触珠蛋白(Hp)临床意义中溶血性疾病,连续观察可用于监测溶血是否处于进行状态。
所有的缩写:急性时相反应(APR)、正常血清蛋白电泳(SPE)、前清蛋白(PA)黄醇结合蛋白(RBP)、甲状腺素转运蛋白(TTR)、清蛋白(Alb)、а1-抗胰蛋白酶(а1-AT或AAT)、蛋白酶抑制物(Pi)、а1-酸性糖蛋白(AAG)、触珠蛋白(Hp)、α2-巨球蛋白(α2-M或AMG)、铜蓝蛋白(Cp)、转铁蛋白(Tf)、C-反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)转铁蛋白(Tf)用于贫血的鉴别诊断,缺铁性低血素贫血,转铁蛋白(Tf)代偿性合成增加CRP是第一个被认识的APPCRP主要用于结合临床监测疾病:①筛查微生物感染;②评估炎性疾病的活动度;③监测系统性红斑狼疮、白血病和外科手术后并发的感染;④新生儿败血症和脑膜炎的监测;⑤监测肾移植后的排斥反应蛋白质特有的结构或性质:①重复的肽链结构;②酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收;③与色素结合的能力;④沉淀后借浊度或光折射测定。
凯氏定氮法:是公认的参考方法,目前用于标准蛋白质的定值和校正其他方法等,并适用于一切形态(固体和液体)的样品。
双缩脲法是体液总蛋白测定的常规方法。
直接紫外吸收法常用于较纯的酶、免疫球蛋白等蛋白质测定。
临床生物化学检验考试必备名解问答【超重点知识归纳】

胰岛素原被分解为胰岛素与31个氨基酸的C肽,二者以等摩尔数分泌入血,C肽虽然没有生物学活性但对于保证胰岛素的正常结构是必需的。C肽的半寿期约35min,比胰岛素更长,且其降解不在肝脏而在肾脏,肝脏的代谢可以忽略,所以与外周血胰岛素浓度相比,可更好地反映胰岛β细胞功能。而且C肽不受外源性胰岛素干扰,也不与胰岛素抗体反应
3.低血糖,,指血糖浓度低于空腹参考水平下限。低血糖由多种原因引起,其症状主要是由交感神经兴奋和脑缺血所致,临床分为空腹性低血糖和反应性低血糖。其诊断主要依据多次连续测定等其他相关指标。
4.反应性低血糖,一种临床疾病,病人在日常生活中有餐后症状,毛细血管血或动脉血浆葡萄糖浓度低于2.5~2.8mmol/L。
1.糖尿病,是一组由于胰岛素分泌不足或(和)胰岛素作用低下而引起的代谢性疾病,高血糖是其特征。长期高血糖将导致多种器官的损害、功能紊乱和衰竭,尤其是眼、肾、神经、心脏和血管系统。两种病理过程参与糖尿病的发病机制:胰腺ß细胞的自身免疫性损伤及机体对胰岛素的作用产生抵抗。
2.妊娠期糖尿病,指在妊娠期间任何程度的糖耐量减退或糖尿病发作。
2.C反应蛋白,在急性炎症病人血清中出现的可以结合肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质,是急性时相反应时极灵敏的指标,升高早且程度高。
3.急性时相反应蛋白,在炎症性疾病如手术、创伤、心肌梗死、感染、肿瘤等情况下,血浆中一系列浓度发生变化的蛋白质的总称,其中大部分蛋白质如AAT、AAG、Hp、Cp、CRP、C3和C4等浓度升高,PA、ALB和TRF等浓度下降。这些血浆蛋白质统称为急性时相反应蛋白
4.血浆运载蛋白,在血浆中能结合其他物质并对之起运输载体作用的蛋白质,如ALB、PA、HDL、LDL、TRF等。
临床生物化学检验技术笔记

临床生物化学检验技术笔记
临床生物化学检验技术是一种用于诊断和治疗疾病的重要技术。
它通过测量和分析体液中的生化指标,如血清中的蛋白质、酶、电解质等,来评估机体的生理状态,发现异常情况,并提供相关的诊断和治疗建议。
以下是一些临床生物化学检验技术的基本原理和常见应用:
1. 光度法:利用物质对特定波长的光的吸收特性进行分析。
常用于测量血清中的蛋白质、酶、代谢产物等。
2. 电化学法:利用电化学原理测量电流、电压等电学参数,用于测量电解质、血气、肾功能等。
3. 酶法:利用酶对底物的特异性催化作用,测量酶的活性或底物、产物的浓度。
常用于检测肝功能、心脏损伤等。
4. 免疫测定法:利用抗原与抗体的特异性结合关系进行分析,常用于检测激素、肿瘤标志物等。
5. 质谱法:通过测量样品中分子的质量-荷电比,分析样品的组成和结构。
常用于药物测定、代谢产物分析等。
6. 核酸分析技术:通过测量DNA或RNA的含量、序列和结构,用于疾病的遗传性检测、基因表达分析等。
临床生物化学检验技术在临床诊断和治疗中起到了重要的作用。
它不仅可以用于早期发现疾病、评估疾病的严重程度,还可以用于监测治疗效果、指导治疗方案的选择。
然而,需要注意的是,临床生物化学检验技术的结果需要结合临床病史和其他检查结果进行综合分
析和解释,以确保最终的诊断和治疗方案的准确性和有效性。
(整理)检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分

自动生化分析仪实际K值测定实际K值:理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度,尤其是ε的影响。
ε在波长和温度等不同时有所不同,故有必要获得用户所用分析仪的实际ε,再计算K值,此为~。
一、340nm波长实际K值测定【实验原理】:通过有NAD+(NADP+)参与的反应途径,用NADH或NADPH标准液来校正仪器。
用己糖激酶(HK)方法测定葡萄糖时,葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。
葡萄糖有标准纯品,当反应达到终点时,NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。
在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数,计算出实际K值。
【注意事项】1.减少偶然误差重复测定10次,当CV>5%时,则重新测定10次。
2.减少系统误差使用实际K值计算酶活性。
3.如果实际ε值与理论ε值偏差过大,需对仪器检修和校正。
二、405nm波长实际K值测定【实验原理】:许多酶活性测定时,以人工“色素原”为底物,经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物,如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。
他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。
可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε,计算出实际K值。
以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。
【注意事项】1.4-NP标准品纯度要求较高,必要时需纯化。
2.其他注意事项参见340nm K值校正。
三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下,测定某标准品的含量,若测得的结果偏低,则需要把测得的结果调整至原标准品的含量,此时调整的数值称为校正因子,则校正K值=理论(实际)K值×校正因子=理论(实际)K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为:L-乳酸+ NAD+(LD)→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中,乳酸被氧化生成丙酮酸,同时NAD+还原为NADH。
临床医学检验临床化学:临床生物化学检验考点巩固

临床医学检验临床化学:临床生物化学检验考点巩固1、单选尿液蛋白质定性的确证试验是()A.双缩脲法B.磺柳酸法C.加热醋酸法D.考马斯亮蓝法E.试带法正确答案:B参考解析:定性试验是用以筛选和粗略估计尿蛋白含量(江南博哥)的方法。
试验的方法有三种:试纸法、磺柳酸法和加热醋酸法。
相对来说磺柳酸法比加热醋酸法用的多些。
2、单选患者,男性在手腕部的剧烈运动后感觉踝关节疼痛,1个月后又发生阵发性左下腹绞痛而就医。
实验室检查:血常规正常,肝功能和血清淀粉酶正常,血清尿素和肌酐正常。
泌尿系统影像学检查发现有肾结石。
关于该患者踝关节疼痛,以下哪项不对()A.其踝关节疼痛与运动无关B.急性关节炎常是痛风的首发症状C.可能由尿酸钠结晶沉积于关节腔内引起D.最易受累部位是躅跖关节E.踝关节、跟关节等其次受累正确答案:A3、单选磷主要的排泄途径为()A.肝脏B.肾脏C.呼吸道D.皮肤E.消化道正确答案:B4、单选有关2型糖尿病的叙述错误的是()A.胰岛β细胞的功能减退B.胰岛素相对不足C.常见于肥胖的中老年人D.常检出自身抗体E.胰岛素抵抗正确答案:D5、单选正常代谢中肾小管对HCO3重吸收的主要部位是在()A.远曲小管B.近曲小管C.集合管D.肾盂E.髓襻正确答案:B6、多选下列关于电化学分析技术叙述正确的是()A.利用电极电位和浓度之间的关系来确定物质含量B.利用吸光度和浓度之间的关系来确定物质含量C.其根据的是Nernst(能斯特)方程式D.其根据的是朗伯化耳定律E.离子选择电极法属于是电化学分析技术正确答案:A, C7、单选急性肾小球肾炎一般不会有如下几项表现,但例外的是哪一项()A.血尿B.蛋白尿C.不同程度高血压D.糖尿E.水肿正确答案:D8、单选下列有关胰岛素功能的叙述,错误的是()A.促进血糖合成糖原B.使血糖浓度升高C.加速血糖分解D.调节糖代谢E.促进糖吸收正确答案:B9、单选钙在血液内有很多种存在形式,临床上由于血清钙异常引起症状时,多由于哪种形式的变化所致()A.白蛋白结合钙B.磷酸钙C.柠檬酸钙D.离子钙E.以上任何一种形式变化都可以引起临床症状正确答案:D10、单选钙作为重要的调节物质,其功能为()A.作用于细胞膜,影响膜的通透性及转运B.细胞内钙离子作为第二信使起着重要的代谢调节作用C.是脂肪酶、ATP酶等的激活剂D.是维生素D3–1α–羟化酶的抑制剂E.以上都是正确答案:E11、单选免疫比浊法不能测定以下哪种蛋白质()A.铜蓝蛋白B.清蛋白C.IgGD.结合珠蛋白E.黏蛋白正确答案:E12、单选细胞间液与血浆组成成分的主要差别是()A.阴离子种类B.阴离子含量C.阳离子种类D.阳离子含量E.蛋白质含量正确答案:E13、单选下列何者最具血管收缩作用()A.肾素B.血管紧张素原C.血管紧张素ⅠD.血管紧张素ⅡE.血管紧张素转化酶正确答案:D14、单选患者,18岁,男,为SARS患者,发病早期因病情比较严重,使用了人工呼吸器。
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第十章血浆蛋白质与含氮化合物的代谢紊乱教学目标与要求掌握:血浆中几种重要蛋白质的性质及其临床应用;血清蛋白质电泳组分的临床分析;高尿酸血症和痛风的发生机制;血清总蛋白、清蛋白、蛋白电泳的检测方法。
熟悉:血浆蛋白质的种类及生理功能;原发性和继发性氨基酸代谢紊乱的概念;含硫氨基酸检测的临床意义。
了解:苯丙酮酸尿症、酪氨酸血症、嘌呤核苷酸代谢紊乱。
第一节血浆蛋白质及其代谢紊乱蛋白质是人体中含量和种类最多的物质,蛋白质占人体干重的45%,种类约有10万之多。
几乎在所有的生理过程中蛋白质都起着关键作用。
血浆蛋白质是血浆固体成分中含量最多的一类化合物,目前已有所了解的血浆蛋白质约有500种。
血浆蛋白的IEF/SDS-PAGE电泳图谱取一滴血浆在电泳板的左下角点样。
先在水平方向进行等电聚焦电泳(IEF),接着在垂直方向进行SDS-PAGE。
一、血浆蛋白质的种类盐析法:将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类。
通过醋酸纤维膜电泳或琼脂糖凝胶电泳将血浆蛋白质分成清蛋白和α1、α2、β、γ-球蛋白等五个主要区带。
二、血清蛋白质电泳组分的临床分析(一)血清蛋白电泳的正常图谱血清蛋白电泳(serum protein electrophoresis,SPE)正常图谱,由正极到负极可依次分为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白五个区带。
血清蛋白电泳的正常组分各条区带中多个蛋白质组分可有重叠、覆盖;两区带之间也有少量蛋白质;某些蛋白质组份染色很浅。
用醋酸纤维素薄膜电泳测得血清各区带蛋白质的参考值:清蛋白(Alb):57%~68%、35~52 g/Lα1球蛋白: 1.0%~5.7%、 1.0~4.0 g/Lα2球蛋白: 4.9%~11.2%、4.0~8.0 g/Lβ球蛋白:7%~13%、 5.0~10.0 g/Lr 球蛋白:9.8%~18.2%、6.0~13.0g/L 。
琼脂糖凝胶电泳琼脂糖(agarose):从琼脂(agar)中去掉杂质和能沉淀脂蛋白的琼脂果胶(agaropectin)后所得,是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质。
评价:电渗作用小,对蛋白质的吸附极微,分辩率和重现性均较好,电泳图谱清晰。
常用的浓度:0.5~1.0%。
商品化的琼脂糖凝胶板透明度好,散热均匀而且快,电泳重现性好,适当的条件可以保存半年。
加之结合半干胶技术,电泳时可以不需要缓冲液,是目前自动化电泳系统最佳的介质。
(二)血清蛋白电泳的异常图谱血清蛋白电泳异常图谱分型血清蛋白电泳典型异常图谱浆细胞病与M蛋白1.血清蛋白电泳异常图谱分型2.血清蛋白电泳典型异常图谱3.浆细胞病与M蛋白4.正常血清蛋白电泳上显示的宽γ区带主要成分:免疫球蛋白。
5.发生浆细胞病(plasma cell dyscrasia)时,异常浆细胞克隆增殖,产生大量单克隆免疫球蛋白或其轻链或重链片段,病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白,在蛋白电泳时呈现一个色泽深染的窄区带,此区带较多出现在γ或β区,偶见于α区。
三、血浆蛋白质及其异常分析(一)前清蛋白(prealbumin,PA)理化性质:分子量5.4万,由肝细胞合成,其半衰期很短,仅约12小时。
生理功能:作为组织修补的材料和一种运载蛋白。
结合T4与T3,而对T3亲和力更大;PA与视黄醇结合蛋白形成复合物,具有运载维生素A的作用。
前清蛋白的临床评价①作为营养不良的指标,其评价标准是:PA 200mg/L~400mg/L为正常,100mg/L~150mg/L轻度缺乏,50mg/L~100mg/L中度缺乏,<50mg/L严重缺乏。
②②作为肝功能不全的指标,在反映肝功能的损害与恢复方面的敏感性优于清蛋白。
③③在急性炎症、恶性肿瘤、创伤等任何急需合成蛋白质的情况下,血清PA均迅速下降,PA是负性急性时相反应蛋白。
(二)清蛋白(albumin,Alb)585个氨基酸残基组成分子量66.2kD含17个二硫键,是唯一不含糖的血浆蛋白质?!肝实质细胞合成半寿期19d!血浆中含量最多的蛋白质清蛋白的功能(1)血浆中主要的载体蛋白:许多水溶性差的物质与清蛋白的结合而被运输,包括胆红素、长链脂肪酸、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子(如Cu2+、Ni2+、Ca2+)、药物(如阿司匹林、青霉素等)。
(2)维持血浆胶体渗透压:血浆清蛋白丢失或浓度过低时,可引起水肿、腹水等症状。
(3)具有缓冲酸碱的能力(4)重要的营养蛋白:清蛋白可以在不同组织中被细胞内吞而摄取,其氨基酸用于组织修补。
因疾病等食物摄入不足或手术后病人常给予静脉清蛋白注射液。
血浆Alb作为营养指标的评价标准>35g/L 正常28g/L~34g/L 轻度缺乏21g/L~27g/L 中度缺乏<21g/L 严重缺乏清蛋白的临床评价低清蛋白血症:Alb合成不足、Alb的分布异常、Alb过度丢失、Alb分解代谢增加、无清蛋白血症(analbuminaemia) 。
血浆Alb增高:少见Alb的遗传性变异由Alb含量估计其配体的存在形式和作用(三)α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT或AAT)394个氨基酸残基组成;分子量51kD;pI为4.8。
含糖10%~12%。
在醋纤膜电泳中位于α1区带。
主要由肝细胞合成,单核细胞、肺泡巨噬细胞和上皮细胞也能合成。
α1-抗胰蛋白酶的生理功能作为蛋白酶的抑制物,作用于胰蛋白酶、糜蛋白酶、尿激酶、肾素、胶原酶、弹性蛋白酶、纤溶酶和凝血酶等,占血清中抑制蛋白酶活力的90%左右。
AA T抑制作用具明显的pH依赖性,最大活力处于中性或弱碱性,当pH≤4.5时活性基本丧失。
α1-抗胰蛋白酶临床意义:①AAT缺陷:ZZ型、SS型甚至MS表型常伴有早年(20~30岁)出现的肺气肿。
ZZ表型可引起肝细胞损害。
ZZ表型的新生儿中10%~20%在出生数周后易患肝炎,最后因活动性肝硬化致死。
低血浆AA T还可发现于胎儿呼吸窘迫综合征。
②急性时相反应时AA T增加。
(四)α1-酸性糖蛋白(α1- acid glycoprotein,AAG)181个氨基酸残基组成分子量约40kD ;pI为2.7~3.5血浆中含糖量最高(达45%)、酸性最强的糖蛋白典型的急性时相反应蛋白主要在肝脏产生, 某些肿瘤组织也可产生α1-酸性糖蛋白(AAG)的的生理功能(1)AAG是主要的急性时相反应蛋白,在急性炎症时增高,与免疫防御功能有关。
(2)AAG可以结合利多卡因和心得安,在急性心肌梗塞时AAG升高,而干扰药物剂量的有效浓度。
α1-酸性糖蛋白(AAG)的临床评价①主要作为急性时相反应的指标——风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死等一般增加3~4倍,3~5天时出现浓度高峰,AAG增高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的指标之一。
②糖皮质激素增加,包括内源性的库欣综合征和外源性强的松、地塞米松等药物治疗时,可引起AAG升高。
③在营养不良、严重肝损害、肾病综合征以及胃肠道疾病致蛋白严重丢失等情况下,AAG 降低。
④雌激素使AAG降低。
(五)结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)一种急性时相蛋白和转运蛋白。
在电泳中位于α2区带。
由α与β链形成α2β2四聚体,α链有α1及α2两种,而α1又有α1F及α1S两种遗传变异体,两种变异体仅为一个氨基酸残基不同。
结合珠蛋白的遗传表型结合珠蛋白的功能与红细胞中释出的自由形式存在的血红蛋白结合,运输血管内游离的血红蛋白(Hb)到网状内皮细胞降解,防止Hb从肾脏丢失而为机体有效地保留铁,并能避免Hb对肾脏的损伤。
每分子Hp可以结合两分子的Hb,结合后复合物在几分钟之内转运到肝细胞而被降解。
结合珠蛋白的临床评价Hp下降:①溶血性疾病,如溶血性贫血、输血反应、疟疾。
血管外溶血不会使Hp发生变化。
②严重肝病患者,其Hp合成减少。
Hp升高:属急性时相反应蛋白,当烧伤和肾病综合征情况下,血Hp常明显升高。
(六)α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin,α2-MG或AMG)血浆中分子量最大的糖蛋白,约为725kD,含糖量约8%。
由肝细胞、单核细胞和星形细胞合成。
半寿期约5d。
α2-巨球蛋白的功能:能与多种离子和分子结合,特别是能与蛋白水解酶结合而影响这些酶的活性。
当酶处于复合物状态时,酶的活性部位没有失活,但不容易作用于大分子底物,分子量小的蛋白质则能被α2-MG-蛋白酶复合物所催化水解。
——α2-MG可选择性地保护某些蛋白酶的活性α2-巨球蛋白的临床评价不属于急性时相反应蛋白!!α2-MG增高:低清蛋白血症,尤其是肾病综合征时,显著增高——可能是一种代偿机制以保持血浆胶体渗透压。
妊娠期及口服避孕药时血浓度亦增高。
α2-MG降低:严重的急性胰腺炎和进展型前列腺癌治疗前。
(七)铜蓝蛋白(ceruloplasmin , Cp )含铜的α2球蛋白,每分子结合6个~8个铜原子,由于含铜而呈蓝色由1046个氨基酸残基组成含糖约8%~9.5%95%的血清铜存在于Cp中,其余5%呈可扩散状态血循环中的Cp可认为是铜的无毒性代谢库铜蓝蛋白的功能特征:①能调节铁的吸收和运输,对多酚及多胺类底物有催化其氧化的能力,具有亚铁氧化酶(可催化Fe2+氧化为Fe3+)及胺氧化酶的活性。
②抗氧化作用,可防止组织中脂质过氧化物和自由基的生成,特别在炎症时具有重要意义。
铜蓝蛋白的临床评价:Cp浓度减少:包括Wilson病、营养性铜缺乏和Menkes病(遗传性铜吸收不良)。
在营养不良、严重肝病及肾病综合征时往往下降。
属于急性时相反应蛋白:在妊娠、感染、创伤和肿瘤时血浆浓度增加。
在妇女妊娠期、口服避孕药时其含量有明显增加。
Wilson病的诊断标准定义:Wilson病是一种常染色体隐性遗传病,即患者血浆Cp含量明显减少,血浆游离铜增加,铜沉积在肝可引起肝硬化,沉积在脑基底节的豆状核则导致豆状核变性,因而该病又称为肝豆状核变性。
Wilson病诊断标准:Cp下降,血清总铜浓度降低、游离铜增加和尿铜排泄增加,肝中铜的含量升高。
(八)转铁蛋白(transferrin,TRF )分子量约79.5kD;pI 5.5~5.9;半寿期为7d为单链糖蛋白,含糖量约6%电泳位置在β区带主要由肝细胞合成!!能可逆地结合多价阳离子,每分子TRF可结合2个Fe3+转铁蛋白的生理功能:负责运载消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。
以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中,供成熟红细胞的生成。
转铁蛋白的临床评价:用于贫血的鉴别诊断——在缺铁性的低色素贫血时TRF水平增高,但铁的饱和度很低。
TRF在急性时相反应中含量往往降低。
因此在炎症、恶性病变时常随着清蛋白、前清蛋白同时下降。
作为营养状态的一项指标,在营养不良及慢性肝脏疾病时下降。
(九)C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)CRP是由肝细胞所合成的急性时相反应蛋白,含5个相同的亚单位,非共价地结合为盘形多聚体。