ABO血型鉴定正反定型试验方法
实验一ABO正反定型及Rh定型、唾液血型物质检测
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唾液中HAB血型物质测定
【目的】
了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法。
【原理】
HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中 HAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结 合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利
用凝集抑制试验，可测定唾液中HAB血型物质，它 有助于ABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定
(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充
分混匀连续约2min，肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片
试验时可用低倍镜观察结果。
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表l ABO血型正反定型结果
试剂血清+受检红细胞 （正定型）
-A -B 受检血型
受检血清+试剂红细胞 （反定型）
Ac Bc Oc
＋－
A
－＋
B
－－
O
＋＋
AB
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【器材】 小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机
【试剂】 1. ５％A、B和O型红细胞盐水悬液。 2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清）
【标本】受检者唾液
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1.被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取 的唾液1000g离心，取上清液置于大试管中，煮 沸10min，再离心10min，留取上清液备用。
－＋ － ＋－ － ＋＋ － －－－
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注意事项 1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染
作业 简述ABO血型鉴定正反不一致的原因
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红细胞凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 ± 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离
abo血型系统定型原则和实验方法
abo血型系统定型原则和实验方法
ABO血型系统定型原则是利用凝集试验技术，通过正定型（红细胞定型）和反定型（血清定型）两组试验来准确鉴定ABO血型。
具体步骤如下：
1. 正定型：取75×12mm干净小试管2支，分别标记抗A、抗B。
按标记滴加抗A、抗B试剂血清1滴。
再各滴加3-5%待检者红细胞悬液1滴，混匀。
2. 反定型：取75×12mm干净小试管3支，分别标记A细胞、B细胞、O 细胞。
3管各滴加待检者血清1滴。
按标记分别滴加混匀的A型、B型、O 型试剂红细胞1滴，混匀。
5管同时2档（3400转/分-15秒）离心。
3. 轻轻摇动试管，观察反应结果。
对于结果解释，如果被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原，或者被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体，则为阳性，即凝集为阳性。
如果不凝集，则为阴性。
以上是ABO血型系统定型原则和实验方法，仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士获取更准确的信息。
ABO血型鉴定标准操作规程
ABO血型鉴定标准操作规程1.检验原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或／和抗—B。
2.试剂和材料：1、抗—A（B型血）、抗—B（A型血）及抗—A十B（O型血）分型血清，2、5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。
3、受检者血清；4、受检者5％红细胞盐水悬液。
3.方法3.1.试管法（1）取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。
分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混合。
（2）另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混合。
（3）立即以1000r／min离心lmin。
（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。
（6）凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞土镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞MF 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。
一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
3.2.玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔画成方格，标明抗-A、抗-B 和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混合。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验是通过将被测血清与已知的A和B抗原的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在两个离心管中加入等量的稀释液，使血液与稀释液比例为1：2，充分混合。
3.在一个离心管中加入已知含有A抗原的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B抗原的红细胞悬液。
充分混合。
4.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
5.如果被试者的血清与含有A抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A 血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
反定型试验是通过将被测血清与已知的A和B型抗体的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在一个离心管中加入已知含有A型抗体的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B 型抗体的红细胞悬液。
充分混合。
3.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
4.如果被试者的血清与含有A型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
在正定型试验和反定型试验中，如果在任意一次实验中发生了沉淀反应，就能确定被试者的血型。
如果在正定型试验和反定型试验中都未发生沉淀反应，则需要重新进行试验或者采用其他额外的手段来鉴定个体的血型。
需要注意的是，血型鉴定是一种简单、安全、快速且可靠的方法，但在特殊情况下，如婴儿出生后的一段时间内，由于母婴免疫传递可以导致血型存在变化。
ABO疑难定型
ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B 型。
（三）吸收放散吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四）O型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37℃温盐水洗涤红细胞45℃热放散3分钟巯基试剂处理: 破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1. 获得性B及多凝集现象获得性B:肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2. 获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析（一）ABO定型问题经常发生的情况为：1. 明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体(6) 亚型，反应是混合视野2. 由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3. 明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析1. 技术因素：(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2. 存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
ABO血型鉴定操作规程(试管法)
宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型）二．方法试管法三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
四．试剂上海血液生物医药有限公司抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体）五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成2-5%红细胞悬液六．操作1 取试管2支并分别标注抗A和抗B。
2 抗A试管中加入抗A试剂一滴，在抗B试管中加入抗B试剂一滴。
3 在抗A、抗B试管中分别加入受检者2-5%的红细胞悬液一滴，混匀。
4 用离心机3400离心15秒。
5 检验是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮。
6 观察凝集情况，并记录结果。
必要时借助显微镜。
7 许多红细胞亚型（如Ax）能在抗AB试剂的盐水中凝集，但与抗A不凝，在室温（23±3℃）中放置几分钟，可以增强反应，但放置时间不宜超过30分钟。
8 检验结果的解释ABO血型反应格局表正定型血型抗A试剂抗B试剂+ - A- + B- - O+ + AB七．检验方法的局限性与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。
八．注意事项1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。
2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。
同时可能含有母亲血液中的抗A或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。
3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法
一、试剂和材料：
（一）单克隆抗A、抗B试剂由试剂厂家提供
（二）显微镜、载玻片
（三）A型、B型红细胞本实验室制备的5%混悬液
（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血
（五）竹签
二、方法玻片法：
（一）正定型：
1.在一块干净的玻片上,间隔一定距离做好标记,分别滴一滴抗A和抗B试剂；
2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；
3.用竹签混匀试剂和红细胞,并使混合物直径＞15mm；
4.轻摇玻片,两分钟内观察结果,必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果;
（二）反定型：
1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样;分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；
2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；
3.混匀同正定型；
4.轻摇玻片,两分钟内观察结果,必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果;
6.结合正反定型反应结果、判定血型,见表1
表1 ABO血型正反定型试验结果判定
三、附注：
（一）表中“O”表示无凝集,“+”表示凝集,一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；
（三）若得到弱的或可凝集反应结果,该标本应用试管法重新试验；
（四）由于新生儿在出生4~6个月内,血浆中的ABO抗体活动太弱,并且含有来自母亲的抗体,故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；
（五）做正定型时,还可加一抗A、B血清O型人血清,以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞,借以证实是否有不规则抗体的存在;。
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A B O血型鉴定正反定型
试验方法
This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
ABO血型鉴定正反定型试验方法
一、试剂和材料：
（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）
（二）显微镜、载玻片
（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）
（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血
（五）竹签
二、方法（玻片法）：
（一）正定型：
1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；
2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；
3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。
（二）反定型：
1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。
分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；
2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；
3.混匀（同正定型）；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。
6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1
表1 ABO血型正反定型试验结果判定
三、附注：
（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；
（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；
（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；
（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。