ABO血型正反定型不一致资料讲解
ABO血型正 反定型
ABO血型正、反定型操作规程[目的]保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。
[适用范围]XXX医院输血科[职责]具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。
[相关文件]试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序[相关记录]仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录紧急用血记录[实验原理]ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。
[仪器器械]玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
[试剂]抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。
以上试剂均为有合格证件的正品。
[标本收集与处理]1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。
2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。
3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。
[实验方法与步骤]血型的正定型（试管法）：⑴、取2支试管，分别标上抗A 和抗B ；⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml 生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）；⑶、在抗A 管中加入2滴抗A 标准血清，在抗B 管中加入2滴抗B 标准血清；⑷、在抗A 和抗B 管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液； ⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
ABO疑难血型鉴定
ABO正、反定型不合疑难血型三步分析法”ABO正反定型不符定义：①ABO正反定型不符，即正定型与反定型提示的血型结果不一致②ABO正反定型相符，但为弱反应，正定型反应强度＜3+，或反定型反应强度＜2+③正定型为O型，反定型与A细胞、B细胞凝集强度差别≥2+凡是遇到ABO正、反定型不合的病人第一步: 排除人为因素／操作失误１，重新采集血样⑴分抗凝，不抗凝两管⑵排除采错人，输血/输液处采样……２，核对试剂，器材仔细阅读试剂效期，说明书，操作方法，注意事项３，规范化操作复检复检ABO 血型仍然正、反定型不合，就确定为疑难血型进入三步法第二步第二步：凡是ABO正、反定型不合的病例按下面方法，分析病人的抗原、抗体是“变多？还是变少？”正、反定型结果判断1，正定型AB, (两种抗原) 抗原变多正定型O, (无抗原) 抗原变少2，反定型O, (两种抗体) 抗体变多反定型AB, (无抗体) 抗体变少3，正定型A, 或B (一种抗原) ①抗原变多;②抗原变少反定型A, 或B (一种抗体) ①抗体变多;②抗体变少★不要过问“真滴变多变少没有”，你依样画葫芦就是了规律很好记，不管是抗原/抗体：两种→肯定是变多没有→肯定是变少；一种→可能是变多，也可能是变少归纳ABO正,反定型不合的“五大类30种原因”知道有个“五大类30种原因”就可以了不要记，书上有这些表，现用现翻书★用排除法（1）红细胞抗原变少7种（2）红细胞抗原变多7种①＜6月,老年（临床）□①自身凝集素（临床诊断）□②白血病（临床诊断）□②红细胞粘附大量蛋白（RBC未洗）□③输异型血（输血史）□③样本含试剂反应物（RBC未洗）□④造血干细胞移植（病史）□④造血干细胞移植（病史）□⑤血型物质↑□⑤获得性B抗原（类B）（临床感染）□⑥急性大失血（临床病史）□⑥B(A)表型□⑦ABO亚型□⑦输异型血（输血史）□注意：每条的临床提示（3）血清抗体变少6种（4）血清抗体变多7种①<6个月/老年（临床）□①自身抗体（临床诊断AIHA）□②ABO亚型□②同种抗体（抗筛）□③低丙种球蛋白血症（化验）□③对试剂反应的物质□④造血干细胞移植（病史）□④血清蛋白异常（化验）□⑤先天性ABO抗体缺失□⑤输异型血浆（输血史）□⑥大量输液（输血史）□⑥造血干细胞移植（病史）□⑦输含血型抗体Ig（输血史）□注意：每条的临床提示5）混合凝集（mf）3种①3个月内输异型血（输血史）□②造血干细胞移植（病史）□③双精子受精/嵌合体（问家系）□注意：每条的临床提示归纳剩下不能排除的原因：第三步: 实验验证针对剩下几种不能排除的原因, 选择针对性实验验证，如何选择针对性实验呢?翻看书本:《输血免疫血液学实验技术》人民卫生出版社,2011 .1; P131。
34例ABO血型正反定型不符的原因分析
34例ABO血型正反定型不符的原因分析摘要】目的分析ABO血型正反定型不符的原因，寻找解决问题的方法，并初步建立起血型正反定型不符时的操作规程。
方法对34例ABO血型正反定型不符的标本分别选用洗涤、改变反应温度、吸收放散试验、直接、间接抗人球蛋白实验，以及检测血型物质等实验方法。
结果经确认实验，分别判定为18例抗体减弱，12例冷凝集，2例红细胞抗原减弱，1例白蛋白、球蛋白比例失调，1例由于血液中可溶性血型物质过少引起的正反定型不符。
结论 ABO血型鉴定出现正反定型不符时，应根据表现型的具体情况和患者的临床资料设计血清学实验，正确鉴定ABO血型。
【关键词】ABO血型正反定型鉴定正反定型是安全输血最基本的保证，在工作中若发现正反定型不符的情况要高度重视。
笔者就日常工作中发现的34例正反定型不符的标本，对其原因进行总结，现报告如下：1 资料与方法1.1标本来源本院检验科2009年1月至2011年12月的住院患者，共计13567人次，受检者年龄5天—88岁。
1.2仪器与试剂康华医药公司提供的ABO血型试剂及反定型红细胞、专用离心机、专用保温箱、水浴箱和冰箱。
1.3方法1.3.1ABO血型鉴定，利用ABO血型试剂进行正定型；同时以每分钟2000转速度离心5分钟分离血清，将患者的血清加入标准A型红细胞，B型红细胞，O型红细胞离心进行血清学鉴定。
1.3.2吸收放散试验患者红细胞洗涤后制备压积红细胞，与等量相应抗血清混合放置4摄氏度冰箱1小时，取出后用4摄氏度生理盐水洗涤5次，取末次洗涤液作阴性对照，取压积红细胞加等量生理盐水置56摄氏度水浴箱放散10分钟，离心取上清液即放散液，加入相应的标准A型、B型红细胞立即离心看结果。
1.3.3 唾液中血型物质鉴定将患者的唾液离心，煮沸再离心处理，取5毫升唾液与5毫升生理盐水倍比稀释三排（1：1—1：512），分别加入等量抗-A、抗-B、抗-H血清的标准液，37摄氏度水浴箱中和15分钟，加入相应标准A型、B型、O型红细胞，离心看结果。
52例ABO血型正反定型不符原因及分析
52例ABO血型正反定型不符原因及分析摘要：目的 ABO血型系统在临床应用中至关重要，如何准确的发出血型结果考验着每一个输血人，方法利用血型正反定型（微柱法、试管法）、ABO 亚型鉴别试验、吸收放散试验、抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查及鉴定等试验，现就我院2014-2017年52例ABO血型正反定型不符的案例进行分析，结果抗体减弱患者25 例占59%，人为因素4例占8%，试剂因素3例占6%，血浆蛋白凝集干扰3例占6%，不规则抗体干扰4例占8%，冷自身抗体干扰6例占11%，亚型1例占2%，结论利用纠正试验来鉴别、推理，得出正确的血型结果。
关键词：ABO血型；不规则抗体；冷自身抗体；亚型52 cases of ABO blood group positive and negative stereotypes and analysis of the reasonsZhang Shi-peng，Li Xiao-bin，Feng Xin-guoDepartment of blood transfusion，the 331 Hospital of Zhuzhou，Zhuzhou，Hunan，412002，ChinaAbstract：Objective ABO blood group system is very important in clinical application，how to accurately test the results of blood type. Methods By using the method of blood group type（micro column method and test tube method）and ABO subtype identification test，absorption elution test，antiglobulin test，irregular antibody screening and identification tests，we analyzed 2014-2017 in our hospital 52 cases of ABO blood group typing discrepancies of the case. Results 25 cases of patients with weakened antibody accounted for 59%，4 cases of human factors accounted for 8%，3 cases of reagent factors accounted for 6%，3 cases of plasma protein agglutination interference accounted for 6%，irregular antibody interference in 4 cases accounted for 8%，cold autoantibodies interference 6 cases accounted for 11%，subtype 1 cases accounted for 2%. Conclusions the correct blood group result can be obtained by the correct test.Key words：ABO blood group；irregular antibody；cold autoantibody；subtype血型是指一个人红细胞上带有或缺乏一些特异性的物质。
ABO疑难定型
ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等) A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。
（三）吸收放散吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四）O型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37℃温盐水洗涤红细胞45℃热放散3分钟巯基试剂处理: 破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1. 获得性B及多凝集现象获得性B:肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2. 获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析（一）ABO定型问题经常发生的情况为：1. 明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体(6) 亚型，反应是混合视野2. 由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3. 明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析1. 技术因素：(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2. 存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因及措施
血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因及措施目的对血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因和处理措施进行探讨。
方法抽取2014年1月～2016年12月间，拟输血患者中ABO血型正反定型不符者18例作为研究对象，对其进一步展开吸收放散试验、抗体筛查、唾液血型物质测定、亚型检测，经ABO疑难血型3步分析法对不符的原因进行分析及鉴定。
结果本次18例ABO血型正反定型不符者中，有2例为人为因素造成，另外16例的原因包括有生理因素、自身抗体因素、血浆蛋白异常、不规则抗体以及血液疾病等因素，其中不规则抗体因素所占比例最高（P＜0.05）。
结论造成ABO血型正反定型不符的原因较多，在临床血型鉴定中应引起重视，积极采取有针对性的确诊试验，展开鉴定分析，ABO血型鉴定时选择正确辅助手段，进而提高血型鉴定准确性，以保证输血的安全性、有效性。
[Abstract] Objective To explore reasons and measures of ABO typing discrepancy in blood grouping. Methods 18 patient with ABO typing discrepancy who were planning to receive blood transfusion from January 2014 to December 2016 were selected as research objects and they were further given absorption-elution test，antibody screening，saliva blood-group substance and subtype blood grouping.Reasons for discrepancy were analyzed and detected by 3-step analytical method of suspicious ABO blood group. Results In 18 patient with ABO typing discrepancy，2 cases were caused by human factors and 16 cases were caused by physiological factors，autoantibodies factors，plasma protein abnormality，irregular antibodies，hematologic diseases and other factors.Of which，proportion of irregular antibodies factors is the highest（P＜0.05）. Conclusion There were many reasons for ABO typing discrepancy which should be paid attention in clinical blood grouping and take targeted confirmatory tests and carry out identification and analysis.Proper supplementary means of ABO blood grouping can further improve accuracy of blood grouping to guarantee safety and effectiveness of blood transfusion.[Key words] Blood grouping；ABO typing discrepancy；Safety of blood transfusion；Suspicious blood group；Influencing factors在實际临床工作中，ABO血型属于输血、器官移植过程中所应用到的一种非常重要的血型系统，确定受血者与供血者之间的ABO血型正确，是有效保证临床输血安全的一个非常重要的前提，也是基本原则。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法
一、试剂和材料：
（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）
（二）显微镜、载玻片
（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）
（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血
（五）竹签
二、方法（玻片法）：
（一）正定型：
1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；
2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；
3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。
（二）反定型：
1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。
分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；
2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；
3.混匀（同正定型）；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。
6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1
表1 ABO血型正反定型试验结果判定
三、附注：
（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；
（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；
（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；
（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；
（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。
ABO血型鉴定中正反定型不一致时的分析与探讨
ABO血型鉴定中正反定型不一致时的分析与探讨目的：利用ABO疑难血型3步分析法对正反定型不一致时导致的疑难血型进行鉴定和分析，探讨其原因与解决办法。
方法：用试管法和微柱凝胶卡法常规检测ABO血型，正反定型不符者进一步做吸收放散试验、唾液血型物质测定、抗体筛选、亚型检测等，并应用ABO疑难血型3步分析法进行分析、鉴定。
结果：共检测正反定型不符20例。
其中2例属于人为原因操作不规范导致正反定型结果不符，另外18例疑难血型鉴定分析原因主要为：生理因素、自身抗体、不规则抗体、血浆蛋白异常、血液病等影响因素。
结论：按照不同的确诊试验分别进行鉴定分析判断，选择正确的辅助方法检测ABO血型，提高血型鉴定的准确性与输血的安全有效性。
关键词ABO疑难血型3步分析法疑难血型鉴定输血安全ABO血型是人类最早发现也是对输血安全影响最大的血型系统。
ABO定型错误会导致溶血性输血反应，轻者可能导致无效输血，重者危及受血者的生命[1]。
当发现ABO正反定型不一致时如何查找原因并快速正确地鉴定患者血型就显得尤为重要。
我们在输血前试验中应用ABO疑难血型3步分析法[2]，对20例疑难血型进行鉴定分析及总结，报告如下。
1 材料与方法1.1 标本来源上海市中医药大学附属曙光医院2011年1月至2012年6月拟输血患者中ABO血型正反定型不符20例，年龄3个月～80岁。
1.2 试剂和仪器抗A、抗B和抗AB血型定型试剂（单克隆抗体），抗H、抗A1和RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体），人ABO血型反定型用红细胞试剂盒（其中包括：A1细胞、B细胞、O细胞）、直接抗人球蛋白试剂（抗IgG，C3d多特异性）、抗体筛检红细胞试剂盒等由上海血液生物医药公司生产；抗人球蛋白检测卡、ABO 血型微柱凝胶卡、37 ℃专用孵育器、卡式离心机由强生医疗器材有限公司生产；2002-2型血清学专用离心机由台湾贝索公司生产。
1.3 方法根据ABO疑难血型3步分析法。
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2、血清抗体变化 （1）血清抗体下降：年龄小于6个月或老年、
双胞胎嵌合体（家族史）、低丙种球蛋白血症、 造血干细胞移植、先天性ABO抗体缺失、大 量输液等。
（2）血清抗体额外反应：自身抗体、同种抗 体、对试剂反应的物质、血清蛋白异常（肝病 等）、输异性血浆、造血干细胞移植、输含血 型抗体的免疫、红细胞抗原变化 （1）红细胞抗原下降：年龄小于6个月或老年
人、白血病、异型血输注（临床提示有输血 史）、造血干细胞移植、血型物质升高（冷凝 集素等）、急性大失血、ABO亚型等。
（2）红细胞抗原额外反应：自身凝集素（临 床提示有自身免疫性疾病）、红细胞粘附大量 蛋白（红细胞未洗涤）、造血干细胞移植、获 得性B抗原、异型血输注等。
ABO血型正反定型 不一致
ABO血型正反定型
▲正定型（细胞定型），即用标准的特异性抗体 试剂血清检查红细胞上的抗原； ▲反定型（血清定型），即用已知血型的试剂标 准的红细胞检查血清中的抗体。
2
常导致正反定型不一致的原因
▲人为误差 ▲患者原因
♦红细胞抗原变化 ♦血清抗体变化 ♦混合凝集
3
人为误差
10
谢谢！
11
7
3、混合凝集 近期怀孕或输血、双胞胎嵌合体、骨髓干
细胞移植、白血病等。
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处理方法
对于这些标本，红细胞要用37 ℃的温盐水洗涤3遍， 再进行鉴定。 另外，有些老人及肿瘤患者，由于血型抗原减弱， 导致正反定型不符。 处理方法：可适当增加血细胞的浓度。对于抗体较 弱的标本，可适当增加血清的比例。
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当我们遇到正、反定型不符合时，首先要重复 试验，排除人为误差。如果重复试验仍然正反定 型不符，则要进行一系列严谨的方法来找原因。
检验技术人员及管理失误。 主要表现为：离心机操作不规范、试剂过期 或不纯净、检验工具被污染、数个标本或者 试剂混搭、试验中的重要反应未能准确判断、 结果判断失误等。
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处理方法
检验者要严格按照操作规程进行操作： ♦在实验前应将血型卡离心，以使微柱内壁上端 沾有的凝胶离心下来，以免撕膜时各微柱内容 物交叉污染。 ♦撕开卡上部的锡纸膜时，注意避免各微柱间特 异性单克隆抗体的交叉污染。 ♦在使用加样枪或移液器时，应将红细胞悬液或 血清悬空加入各微柱上端，避免一切交叉污染。 ♦工作中养成良好的习惯，查看试剂批号、患者 标本采集日期等。