香菇多糖提取工艺
香菇多糖提取工艺的研究1引言多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分，广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中,是生物体内除核酸和蛋白质以外的又一类重要的生物分子,尤其是一类重要的信息分子[1]。
到目前为止，已有近300种的多糖化合物从天然产物中分离出来，其中植物提取水溶性多糖最为重要。
从植物中提取多糖主要根据不同溶解度来选择溶剂进行。
香菇多糖的提取一般有热水提取法、酸提取法、碱提取法、酶提取法和微波助提法等方法[2]，本文进行了浸提香菇多糖的工艺条件研究，以期获得香菇多糖的最佳提取条件，为其产业化生产提供有效的方法和技术参数。
本实验采用各种溶剂和酶的处理,提取香菇多糖,保持多糖的生物活性，效果是明显的。
1.1香菇多糖的组成与药理价值香菇多糖(LentinanLNT) 是一种β—1,3—葡聚糖，系从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。
多糖以甘露糖为主，含少量的葡萄糖、微量的岩藻糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等；肽链由天冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酸等18种氨基酸组成。
LNT的化学结构是一种以β—D—[1~3]葡萄糖残基为主链，侧链为(1—6)葡萄糖残基的葡聚糖，平均分子量约为50万道尔顿[3]。
香菇多糖1969年在日本首先发现，自此，国内外学者对LNT作了许多深人的研究。
近年来，LNT广泛药理作用研究取得了很大进展。
主要的药理价值有：免疫调节作用；抗肿瘤作用[4]；抗病毒作用；对寄生虫、霉菌、细菌等感染均有治疗作用；有抗衰老、抗辐射作用，还具有预防实验性高脂血症和高血糖作用。
在临床上LNT还用于治疗小儿反复呼吸道感染，糖尿病，寻常型银屑病，硬皮病，面部扁平，尖锐湿疹等。
此外，硫酸化香菇多糖具有显著抗HIV作用，香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面有良好疗效[5]。
作为免疫辅助药物，香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展和转移，提高肿瘤对化疗药物的敏感性，改善患者的身体状况，延长其寿命。
香菇多糖有如此神奇的生物活性，科学家们已经开始在基因水平探讨香菇多糖生物活性的机制。
总之，香菇多糖具有广泛的药理作用，而且其疗效好，毒副作用小，是一种应用前景广阔的天然药物。
1.2 香菇多糖提取的现状分析目前国内对香菇多糖的提取分离有了很大发展，主要采用的方法有传统热水提取法、酸提取法、碱提取法，这些方法都有其优点，也有其难以克服的不足之处。
传统热水浸提方法存在能耗高，提取时间长的缺点，其工业化应用和发展受到限制。
酸碱处理香菇，反应条件剧烈，提取液又需经过中和反应，很可能破坏多糖的结构，会使香菇多糖的分子量降低，致使药用价值下降。
微波辅助提取法具有设备简单、快速、高效、安全等特点，可供选择的溶剂较多。
利用微波强化固液浸取过程是颇具发展潜力的一种新型辅助提取技术[6]。
微波(Microwave) 是频率介于300MHz 和300GHz 之间的电磁波，频率很高，能够透入物体的深处。
微波射线辐射于溶剂并透入细胞内部，可使溶剂及细胞液吸收微波能而温度升高，压力增大。
当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，细胞内容物释放出来，转移并溶解于溶剂中，提高了多糖提取率。
近年来生物酶广泛应用于各个领域，在国内也开始将其应用于中草药提取中。
多糖通常被包裹在植物细胞壁内，并且多糖往往和蛋白质结合在一起，以蛋白多糖的形式存在。
试验发现木瓜蛋白酶能有效酶解与多糖结合在一起的蛋白质，从而将多糖释放出来而提高多糖的得率，同时降低了多糖中蛋白质的含量，提高了多糖的纯度。
1.3 香菇多糖提取的研究意义多糖是近年来研究最为活跃的高分子化合物，真菌糖由于具有多种生物活性，其研究进展则尤为迅速。
目前，从各类生物材料中提取的具有生物活性的多糖已经成为天然药物的一个新来源。
香菇是一种食用和药用真菌，自古以来就被当作健脾益气、调和阴阳、补虚扶正、行气活血的上品。
其主要有效成分香菇多糖，经二十多年的研究和应用，证实其具有显著提高免疫力、抗癌、抗病毒、降血脂、防止动脉硬化、抗衰老等多种功能[7]。
此外，香菇多糖还具有诱发干扰素和保肝等作用。
因此，近年来在国内外形成了一股研发香菇多糖的热潮。
目前，国内的香菇多糖产品有两种，即“口服香菇多糖”和“肌肉注射香菇多糖”，国外的香菇多糖产品有“粉针静脉注射香菇多糖”，由日本独家生产。
由于香菇多糖是高分子化合物，分子量大，不易透过血管壁而被吸收，致使口服和肌肉注射的疗效远不如静脉注射。
为此，我国和世界其他国家均向日本进口该产品。
国内目前有数家单位在致力于静脉注射香菇多糖的开发，虽然现已取得较大进展，但是由于静脉注射香菇多糖要求的纯度高，一般实验室水平达不到要求，因此,研发高效、经济的香菇多糖的提取方法具有重要的现实意义。
1.4 香菇多糖的应用前景我国是食用菌生产大国, 其中香菇的产量在世界居首位[8]。
20 世纪70 年代以来, 食用菌多糖的研究开发进入了一个崭新的发展时期, 香菇多糖的研究已成为一个热点, 但目前主要集中在香菇中β-( 1→3) - D- 葡聚糖的研究上, 而其它多糖组分与生物活性之间的关系还有待进一步的明确。
香菇多糖不仅是一种比较理想的药物, 也是一类重要的保健食品功能因子, 具有广阔的应用前景, 是当今医药和食品工业共同关注的焦点。
但目前多糖的提取率普遍不高, 因此, 提高香菇多糖的提取率已成为进行多糖产品开发需要解决的关键问题, 不仅可以考虑将多种提取手段结合起来优化提取工艺, 还可以通过遗传育种、基因重组、物种诱变等手段选育出高产多糖的香菇菌株, 提高香菇中的多糖含量, 以提高香菇多糖的提取率, 降低生产成本。
2 实验仪器、材料及试剂2.1 主要实验仪器电热恒温水浴锅北京市长风仪器仪表公司低速自动平衡离心机上海安亭科学仪器厂电子天平（精确度为0.0001g）北京赛多利斯仪器系统有限公司SHD—Ⅲ型循环水式多用真空泵保定高新区阳光科教仪器厂电热恒温鼓风干燥箱上海博讯实业有限公司医疗设备厂SP-2100型分光光度计上海光谱仪器有限公司分析用研磨机德国IKAGalanz WD800B型微波炉佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司2.2 主要实验材料与试剂干香菇超市95%乙醇溶液分析纯氢氧化钠（NaOH）分析纯浓硫酸（H2SO4）分析纯葡萄糖（C6H12O6）分析纯盐酸（HCl）分析纯氯仿(CHCl3) 分析纯苯酚分析纯正丁醇分析纯活性炭分析纯木瓜蛋白酶酶活力》50万单位3 工艺流程及测定方法3.1 工艺流程3.1.1微波辅助工艺方法原料烘干粉碎称重热水抽提微波辐射香菇多糖干燥sevag法脱蛋白醇析、复溶滤液脱色抽滤3.1.2 采用酶解工艺的改进方法原料烘干粉碎称重酶水解活性炭脱色灭酶香菇多糖干燥浓缩复溶滤液醇析抽滤3.2 多糖的提取方法将干香菇后粉碎，准确称取2克香菇粉加入一定比例的蒸馏水，在一定温度下浸提数小时，用真空泵减压抽滤，将滤液加入乙醇进行沉淀，离心得沉淀物，将沉淀物溶解后脱蛋白，定容，测吸光度值，然后将溶液浓缩，加入一定体积乙醇进行沉淀，离心，烘干，得到香菇多糖粗品。
3.2.1 除蛋白的方法的选择香菇中除含大量的多糖外，还含有一定量的蛋白质和其他杂质。
目前用于多糖除蛋白的方法有Sevag法、三氟三氯乙烷法及三氯乙酸法（TCA），其中前两种方法用于微生物多糖，后一种方法用于植物多糖。
另外TCA法与Sevag法比较具有蛋白质去除效果高、多糖损失率低、可同时除去大量色素等优点，所以本研究采用Sevag法除蛋白，即将离心分离得到的粗多糖沉淀溶于适量蒸馏水中，加入20%体积的氯仿和7%体积的正丁醇生成絮状凝聚物，3500r/min离心15min除去沉淀。
重复上述操作，直至无凝聚物生成。
3.2.2 香菇多糖的脱色及测定方法活性炭为黑色颗粒, 无臭、无味，具有无毒和脱色、脱臭效果良好的特点, 可以反复使用, 成本低, 适合工业化生产的需要。
颗粒活性炭具有惊人的比表面积(800～2000m2/g)[9], 当被脱除的有色物质的分子直径小于或等于活性炭孔的入口直径时, 可被活性炭吸附而起到脱色的效果[10]。
活性炭的脱色效率高、速度快、成本较低, 但也存在一些问题, 如再生困难、多肽和氨基酸损失率较高。
吸附剂是酶解液脱色的主要影响因素，从液体中脱除颗粒活性炭较容易，所以选择颗粒活性炭并优化其脱色工艺。
用SP-2100分光光度计在色素的最大吸收波长处测其吸光度值[11]。
分析表明: 香菇多糖酶解液的吸收峰在350-380nm之间, 最大吸收峰360nm, 故选360nm为测定波长。
酶解液原色为棕黄色或褐色, 测其在360nm处的吸光度值1.987[12], 记脱色前OD360nm=1.987。
脱色率(%)=(1.987- OD360nm)/1.987×1003.3 香菇多糖测定方法3.3.1 香菇多糖提取率的测定方法本实验采用苯酚硫酸法测定香菇多糖提取率[13]，并在需要的部分做恒重实验，具体做法如下：称取烘干的香菇粉2克，加水于一定温度下提取若干时间，冷却后减压抽滤，取滤液，加无水乙醇沉降，脱蛋白，然后再次离心分离即为粗多糖，在水中溶解一定倍数后测吸光度查标准葡萄糖曲线即得得率。
恒重法是指[14]，经过提取、醇沉、脱蛋白和离心得粗多糖后，将其洗入蒸发皿中，放入电热恒温鼓风干燥箱中，60℃烘干至恒重，并粗算得率。
3.3.2 标准葡萄糖曲线的绘制采用苯酚-硫酸比色法，以葡萄糖为标准品。
准确移取0.6000 mg/ml 的葡萄糖标准溶液1.5ml、2.5 ml、3.5 ml、4.5 ml、5.5 ml，分别转移到50 ml容量瓶中定容、摇匀得系列对照品溶液。
准确移取上述葡萄糖标准溶液2.0 ml置于25ml具塞试管中，加入4.0%苯酚溶液1.0 ml，浓硫酸4.0 ml 摇匀，沸水浴保温15 min 后放入冷水中冷却。
以试剂空白为参比，选用1cm 比色皿在最大吸收波长490 nm 处测定其吸光度[15]，得标准曲线。
图 1 苯酚-硫酸法的葡萄糖标准曲线用最小二乘法进行回归，得标准曲线方程为：A=0.0076x+0.0105，线性相关系数R=0.9972。
3.3.3 提取率的测定量取纯化后的定量样品，加无水乙醇离心分离，取沉淀，加蒸馏水溶解后转移至50 ml 容量瓶中定容,再称取1 ml 转移至另一个50 ml 容量瓶中定容。
准确移取2.0 ml 于25ml 具塞试管中后按上述方法操作，并根据标准曲线计算多糖提取率。
3.3.4 多糖提取率的计算多糖提取率(%)＝待测物克数多糖克数×100% ＝6102500⨯⨯待测物克数曲线中所查多糖微克数×0.9×100%4 实验方法4.1 微波辅助热水浸提法的单因素实验称取香菇干粉移入锥形瓶中按一定料液比加水搅匀，在设定温度的水浴锅中恒温浸提设定时间，转入微波专用杯在额定功率一定的微波炉中处理一定时间，将处理液抽滤，滤液浓缩至一定体积，加3倍体积的95%乙醇醇析[16]，待产生的沉淀物沉淀30min后再离心，将沉淀进行溶解测定，测定完后将其粗多糖干燥至恒重。
香菇多糖的提取工艺
复合酶解、 酸处理结合热水浸提法提取香菇多糖的改进工艺 原料 → 复合酶解→酶解液→ 水浸提→ 酸浸提→ 浸提物→ 真空浓缩→ 浓缩 液→ 酒精沉淀→ 沉淀物→ sevage法脱蛋白→ 水相→ 丙酮洗涤→ 多 糖粗制品
操作要点
1、原料预处理 选取质量合格的干香菇若干,经植物高速磨碎机 磨成粉末, 称取相应香菇粉末 , 加入适量酒精使香菇粉末成糊状。
香菇多糖(1entinan，LNT) 香菇多糖是从优质香菇子 实体中提取的有效活性成分，是香菇的主要有效成分， 是一种宿主免疫增强剂(host defense potentiator， HDP)，临床与药理研究表明，香菇多糖具有抗病毒、抗 肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用。
香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成 分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的β— (1—3)— D—葡聚糖，主链由β—(1—3)连接的葡萄糖基组成，沿 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ链随机分布着由β—(1—6)连接的葡萄糖基，呈梳状 结构。
8 、 sevage法脱蛋白 将上述沉淀溶于适量的蒸馏水中,分别加 入 20 %体积的氯仿和 7 %体积的异戊醇生成絮状凝聚物, 用高速离 心机在 5000r pm离心 15min得沉淀。重复上述操作, 直至无凝聚物 生成。
9、丙酮洗涤脱水 将酒精沉淀物用丙酮洗涤脱水两次, 倒入放 有干燥滤纸的培养皿中 (滤纸重0.98g) ,然后将培养皿放在 50℃ 的 烘干箱中进行干燥 3h ,得到香菇多糖粗制品。
香菇多糖的提取方法及应用
香菇多糖的提取方法及应用香菇多糖是从香菇中提取的一种多糖类化合物，具有抗肿瘤、抗病毒、降血脂、降血糖等多种药理活性。
提取香菇多糖的方法主要包括水提法、酸提法、碱提法、酶解法等多种方法。
下面将对香菇多糖的提取方法及应用做详细介绍。
1. 水提法水提法是将香菇切碎后用水浸泡，通过水提取的方法获得香菇多糖的一种提取方法。
其优点是提取过程简单，设备要求低，且操作方便。
但缺点是提取率较低，且容易受到微生物污染。
2. 酸提法酸提法是将香菇切碎后用酸性溶液浸泡，通过酸的作用来提取多糖。
酸提取的优点是提取率高，但也会产生废液排放问题，同时酸性溶液容易对蛋白质产生影响。
3. 碱提法碱提法是将香菇切碎后用碱性溶液浸泡，通过碱的作用来提取多糖。
碱提取的优点是提取率高，同时对蛋白质影响较小。
但碱性溶液的使用需要注意对环境的影响，且碱性条件下易使多糖发生降解。
4. 酶解法酶解法是通过加入酶类来促进多糖的提取，能够有效地增加提取率。
但酶类的成本较高，同时酶解条件的控制较为严格。
提取得到的香菇多糖可以通过浓缩、絮凝、沉淀及净化等方法得到纯净的多糖产品。
香菇多糖的应用广泛，主要包括以下几个方面：1. 药品领域香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒的作用，被广泛应用于肿瘤治疗、免疫调节、抗病毒等方面。
临床研究表明，长期服用香菇多糖可以增强人体免疫力，减少感染病毒的风险。
2. 食品工业香菇多糖可作为功能性食品添加剂，提高食品的营养价值，增加食品的功能性。
例如可以将香菇多糖添加到饼干、饮料、果冻等食品中，以增强食品的健康功能。
3. 化妆品领域香菇多糖具有较好的保湿性，被应用于化妆品中具有很好的效果，如护肤乳液、面膜等产品中。
4. 其他领域香菇多糖还可以用于环保领域，例如用于废水处理，其能够起到絮凝剂的作用，帮助去除水中的杂质，达到净化水质的效果。
总而言之，香菇多糖的提取方法多样化，可以根据需要选择适合的提取方法，提取得到的多糖产品应用广泛，涉及药品、食品、化妆品等多个领域，具有很好的开发和利用前景。
香菇多糖提取工艺的研究进展
香菇多糖提取工艺的研究进展香菇多糖提取工艺的研究进展香菇Lentinusedodes 为担子菌纲伞形科真菌，是世界上第二大食用菌。
香菇多糖是香菇中最重要的一种生物活性物质，具有抑制肿瘤、调节免疫、抗病毒和抗氧化等多方面的药理活性，且毒副作用小。
香菇多糖的提取常用水提醇沉法、酸碱提取法，但存在提取工艺复杂、溶剂使用量大、时间长等缺点，而且容易造成多糖降解，生物活性降低。
本文主要对近年来香菇多糖提取工艺优化研究方面的进展进行阐述。
1.超声波提取超声波提取法是利用超声波特殊的物理性质，加速介质质点运动、空化作用、振动匀化等以增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而使药效物质加速融人溶剂提高有效成分的得率。
王恒等用超声波辅助法从香菇中提取香菇多糖，通过实验优化确定出香菇多糖最佳提取工艺为超声功率200W ，料液比35：1，超声时间40min ，香菇多糖提取率为6.72 ％。
王俊颖等采用超声法浸提香菇多糖通过正交试验设计确定的最佳工艺为料水比1 : 25，超声温度60° C超声时间30min , 超声功率300W ，多糖得率为8.72 ％。
李宏睿等采用正交试验设计，对香菇多糖的提取条件进行优化，并与单纯的热水浸提进行比较。
结果表明，在料水比l：25 ，超声时间35min ，超声功率105W ，热水浸提温度90 ％，浸提时间20min 的条件下，提取效果最好，多糖提取率为13.75 ％，比单纯热水浸提法提高6.22％。
2.微波提取微波辅助提取技术主要是通过调节微波加热的参数，有效地加热物料中的目标成分，对目标成分进行选择性提取。
刘小丽等研究微波辅助法提取香菇多糖采用单因素试验对固液比、微波辐射功率、辐射时间、乙醇用量以及杂蛋白的去除条件分别进行了考察。
试验结果表明最佳提取工艺条件为固液比1：20mL ，微波辐射功率为280W ，辐射时间5min，乙醇与多糖提取液体积比为4：1，香菇多糖提取率可达到9.46 ％。
香菇多糖的提取制备
三、操作要点 1.预处理：取干香菇，捣碎。 2.提取：将捣碎的干香菇置于不锈钢反应锅中，在搅拌 的条件下加6—7倍量水混匀，加热至90℃，搅拌保温60 min， 降温至40℃时转移到40℃水浴保温；并加入适量蛋白水解酶 液，pH值为自然(Ph6．4)，搅拌反应60 min，然后迅速升温 到90-100℃，灭活1min降温后纱布过滤，收集滤液。 3.浓缩：将以上滤液置于解压浓缩罐中，然后解压浓缩 至l/5体积时，停止浓缩。 4.沉淀：将浓缩液置于搪瓷缸中．在搅拌的条件下，加1 倍量乙醇，然后静置过夜。过滤得沉淀物，滤液再加3倍量 乙醇，得沉淀物。
5.二次沉淀：将沉淀物置于搪瓷缸中，加约70倍量 的水，搅拌均匀，在猛烈搅拌下，滴加0.2mol/l几氢氧 化十六烷基三甲基胺水溶液，逐步调PH至12．8时产生 大量沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，收集沉淀。 6.除蛋白：沉淀用氯仿、正丁醇洗涤去蛋白，水层 加3倍量乙醇沉淀，收集沉淀。 7.洗涤：沉淀依次用甲醇、乙醚洗涤，收集沉淀。 8.干燥：将沉淀置真空干燥器干燥，即为香菇多糖。
香菇多糖的提取制备
一、实验目的 掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和 方法。
二、实验原理 在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在 生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质 部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖 在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水 解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶 处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉 淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当 调pH和加热等。
四、思考题 1.有蛋白之前，加入酶液的目的是什么?
提取香菇多糖的方案
提取香菇多糖的工艺原料处理：原料：香菇。
NaHCO固体，浓硫酸，95%乙醇稀盐酸，PH试纸，复试剂：蒸馏水，葡萄糖，苯酚，铝片，3合酶（木瓜蛋白酶：纤维素酶=2：1），设备和仪器：100ml容量瓶，6个50ml容量瓶，玻璃棒，蒸馏装置（温度计、沸石、三口烧瓶、冷凝管），烧杯若干，锥形瓶若干，棕色瓶一个，抽滤瓶，1、2、5、10ml吸液管，电子天平，真空干燥箱，恒温水浴锅，紫外分光光度计，粉碎机，40、60、80、100目的筛子，DL700-0.55×1.5超高压等静压机（上海大隆高压设备厂），真空泵，THZ-82A台式恒温振荡器，台式离心机。
1、标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.0mg，加蒸馏水溶解并定容于100ml容量瓶中，摇匀，配成浓度为1mg/ml标准葡萄糖溶液备用。
2、5%苯酚试剂的配制。
苯酚水浴加热溶解后称取100g，加铝片0.1g(先用1：6的盐酸除去铝片表面氧化铝后，再称量使用)，加入碳酸氢钠30g，蒸馏，收集178-182℃的馏分，取馏出液7.5g，加入蒸馏水150mL，得5.0％的苯酚溶液，置于棕色瓶中备用。
3、标准曲线绘制以葡萄糖作为标准品，采用苯酚—硫酸比色法，用紫外分光光度计测定多糖含量。
精密吸取已配制的葡萄糖标准品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml置于6个50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀。
精密吸取2ml，分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，以溶剂蒸馏水为空白作对照，在400～600nm内扫描，最大吸收波长为490nm。
在490nm处，测吸光值，以浓度为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线，得出葡萄糖标准品浓度Y（ug/ml）与吸光值X的回归方程：Y=15.336X-0.0298，R2=0.9997。
在2.5～15.0 ug/ml 范围内呈线性关系。
香菇多糖的提取方法
香菇多糖的提取方法
香菇多糖的提取方法如下：
1. 采购新鲜的香菇，清洗干净并切成小块。
2. 将香菇块放入大型锅中，加入足够的水，与香菇比例大约为10：1。
3. 将锅中的香菇块煮沸，然后改用中小火慢慢煮煮2-3小时。
这个过程中，可以不断搅拌，确保香菇均匀受热。
4. 使用细网过滤器或纱布等细密过滤器，将煮煮后得到的香菇汁滤掉固体部分。
滤液便是香菇多糖的提取物。
5. 将香菇多糖的提取物进行进一步处理，可以采用醇沉淀法。
将提取液中加入等体积的酒精，搅拌均匀，并置于低温环境下静置一段时间，使得多糖在酒精中沉淀。
6. 将酒精沉淀物通过离心机进行离心分离，得到固体沉淀。
7. 将固体沉淀经过冷冻干燥或真空干燥等方法使其干燥，得到香菇多糖粉末。
注：以上方法仅供参考，具体的提取方法可以根据实际情况和需要进行调整。
实验三香菇多糖的分离提取
实验三香菇多糖的分离提取实验三香菇多糖的分离提取一、实验目的让学生了解香菇多糖的理化性质及提取工艺流程，掌握真空浓缩技术。
二、实验原理香菇是一种药食两用真菌，具有提高免疫力、抗癌、降糖等多种生理功能。
水溶性多糖作为香菇主要活性成分之一，主要以β-1,3-葡聚糖的形式，分子量从几万到几十万不等。
通过有机溶剂提取，真空浓缩技术进行分离提取。
三、实验材料与试剂原料：干香菇500g试剂：氯仿、正丁醇、医用纱布、浓硫酸、苯酚、工业酒精四、实验仪器组织捣碎机、水浴锅、旋转蒸发器、1cm比色皿、751分光光度计、电子天平、台式离心机、试管、量筒、烧杯、玻璃棒五、提取工艺流程1. 1kg干香菇切成小块，以1：10（重量比）加入水，用组织捣碎机进行均质；2. 取200mL均质液放入1L烧杯中，再加入300mL蒸馏水，加热至沸后，温火煮沸1小时，（注意：煮沸过程中用玻璃棒不断搅拌，以免烧杯底部发生糊结；并间歇加入少量水，使杯内液体体积保持在500mL左右；3. 加热完毕后，将杯内液体用8层纱布过滤，除去残渣，上清液转入另一烧杯中；4. 将上清液倒入圆底烧瓶中，在旋转浓缩仪上进行浓缩，浓缩条件为-0.1MPa 、60℃，浓缩液体积至100mL左右停止；5. 将浓缩液在1×10000g离心10min，将上清液转入另一烧杯，除去残渣；6. 上清液中加入等体积的氯仿正丁醇浓液（体积比为4：1），搅拌5min，静置30分钟；7. 将混合液体在1×5000g下离心20min,分离水相；8. 在水相中加入终浓度为80%的酒精，搅拌均匀，静置20min，1×5000g下离心10min；9. 取出沉淀物，放入已称重的干燥表面皿中，在真空干燥箱中80℃下真空干燥；10. 干燥后，称重，计算多糖的产率；11. 准确称取干燥后多糖20mg于500ml容量瓶中，加水定容；12. 取定容液2ml加入6%苯酚1ml，混匀，再加入浓硫酸5ml，混匀，放置20min后，于490nm测吸光度；13. 葡萄糖标准曲线的制定：准确称取葡萄糖20mg定容于500ml 容量瓶中，分别取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，补水至2ml，依12步骤反应液，并分别测吸光度，根据葡萄糖浓度和吸光度绘制标准曲线；14. 根据香菇多糖吸光度和葡萄糖标准曲线，计算多糖纯度。
香菇多糖的提取
干燥
香菇多糖
热水浸提法提取香菇多糖
工艺流程
香菇粉 加蒸馏水 90摄氏度氺浴提取
过 滤 静 置 离心，得上清液
滤 液 浓 缩
加入甲醇，充分混匀，静置
加甲醇 ，乙醚洗涤后自然风干得粗的香菇多糖
微波法提取香菇多糖
在微波法提取多糖的实验中，影响多糖提取率的主要
因素有：微波功率、提取时间以及提取次数等。随着 微波功率的提高，加热速度增大，分子运动速度加快，
香菇 多糖
HDP)，临床与药理研究表明，香菇多糖具有抗病毒、 抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用
香菇多糖的提取方法
A B C D E
热水浸提法
酸碱浸提法
超声波浸提法
微波法
复合酶解
提取工艺流程
预处理 过滤
干燥
三种方法
浸提（多糖与细胞分离）
取滤液
Байду номын сангаас
醇析
无水乙醇70%
粗多糖
BECM法
去除杂蛋白
复溶(无离子水) 甲醇 分级沉淀
香菇多糖配合其他药物治疗慢性乙型肝炎，可提高乙肝病毒标
志物的转阴作用，减少抗病毒药物的副作用。
香菇多糖在食品中
香菇多糖是一种特殊的生物活性物质，是一种生物反应增强剂 和调节剂，它能增强体液免疫和细胞免疫功能。 香菇多糖主要成份为葡聚糖、甘露糖肽等多糖以及多种氨基酸， 具有抗肿瘤、治肝保肝、增强机体免疫力等作用。
香菇多糖的提取
生药1513 第二组
第一部分 香菇多糖的概念 第二部分 提取方法与工艺
目录
第三部分 热水浸提法提取
第四部分 微波法提取流程 第五部分 香菇多糖的检测 第六部分 生活中香菇多糖
复合酶法提取香菇多糖
司 ） Ｓｐａｅ Ｇ １０（ ｈｒ ａｉ）； ２紫外分光光度计 （ ； ｅｈｄｘ 一 ０ Ｐ ａ ｃ ｍ ａ ７２ 北京赛多利斯仪器系统有限公司 ） ．实验使用试
剂均 为分析纯 ．
１３ 实验方 法与步骤 ． 称取 ８ ０目的香菇粉 ２ｇ 放 人到 ２０ｍ ， ５ Ｌ的三角瓶 中，加 蒸馏 水 ３ ５ ｍＬ混合均匀后 置于 ４ ￣水 浴锅 中 ， ０Ｃ
1实验原料将新鲜香菇清洗干净除去其根部将剩下的菌伞挤压切小块放入真空干燥箱干燥待香菇恒质量放人粉碎机中粉碎将粉碎后的香菇粉依次通过406080looet的筛子过筛之后把各级香菇粉分别装到清洁干燥的烧杯中置于真空干燥箱中待用
第 ２ 卷 第 ６期 ８ ２０ ０ ８年
ｌ １月
高 师 理 科 学 刊
到清洁 干燥 的烧杯 中 ，置于真 空干燥箱 中待用 ．
１２ 主要 实验试剂 与仪器 ．
真空 干燥 箱 （ 海益恒试验 仪器有 限公司 ） 上 ；离心机 （ 上海跃 进 医疗 器械 厂 ） Ｈ 一 ２ ；Ｔ Ｚ ８Ａ台式恒 温振荡 器 （ 上海跃进 医疗器械 厂 ） ａ ｄ一 ５ ；Ｌｍｂａ３紫外 可见分光 光度计 （ 国ＰＥ 司 ） ｐｃｕ ｎ傅里 叶变换红外 美 公 ；Ｓｅｔｍｏｅ 光谱 仪 （ 国ＰＥ 司 ） 美 公 ；纤维 素酶 （ 国药集 团化学试 剂有 限公 司 ） ；木瓜 蛋 白酶 （ 北京世 纪时 尚科 贸有限公
１ ． 多糖结 构红外 光谱分析 ８
７ ３
１４ 多糖 总量 的测定 ． 采 用苯酚 一 酸 比色 法 ，硫 酸一 酚法是 以硫 酸 、苯酚作 为显 色剂 ，与香菇 多糖 发生显 色反应 ，在４ ０ 硫 苯 ９
ｎ 波长 处测 定吸光 度 ，再通 过 已经测定 的葡萄糖 标准 曲线计 算 ，求得香 菇 中的多糖含量 ． ｍ
香菇多糖提取工艺(课堂PPT)
热水浸提法 向香菇处理物中加入 20倍体积的蒸馏水,并在 40℃ 水浴恒温下浸泡 4h。
放置冰箱冷冻柜中冷冻过夜。将香菇浸泡液从冰箱中取出, 解冻后在恒温水浴箱内分别抽 提 30min、 60min、90min ,用4层纱布过滤后收集滤液。向滤渣中加入20倍体积的蒸馏 水再抽提一次, 沸煮时间同上用 4层纱布过滤后收集滤液,合并两次滤液。
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(2) 各种生产方法比较
主要的多糖提取方法有如下几种: 热水浸提法、 酸（碱）浸提法、 微 波提取法、超声波提取法、复合酶处理→水(或酸)浸提→浸提物→真空浓缩→浓缩液→酒
精沉淀→沉淀物→sevage法脱蛋白→水相→丙酮洗涤→多糖粗制品
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酸浸提法 向香菇处理物中加盐酸溶液使其最终浓度分别为 0.3mol/L、0.4mol/L、
0.5mol/L , 置于60℃恒温水浴中浸提 8h , 加适量的NaOH中和至中性,过滤,浓缩。
微波提取法 向香菇处理物中按1:25加入去离子水浸泡过夜,粉碎,在一定微波条
件下提取,冷却后离心,从上清液中取样测定其中多糖含量。
香菇多糖提取
张志挺 14生科一班 29号
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1、香菇多糖
(1) 香菇多糖结构式
分子式：〔 C42H72O36 〕n 分子量：〔1152.9995〕n
(2) 香菇多糖性质
香菇多糖（lentinan;LNT）是从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，是以增强 T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。