六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)
最新GMS-六胺银-真菌
G M S-六胺银-真菌GMS –六胺银- GROCOTT'S改良法目的：鉴别真菌。
原理：真菌细胞壁的粘多糖成分被氧化形成醛基。
醛基与硝酸银反应，再将银还原成可见的金属形式。
对照：含有真菌的组织。
由曲霉病和肺结核病的组织块是首选的。
固定：10%甲醛技术：4-5m石蜡切片。
设备：酸清洗玻璃器皿，染色缸，微波炉。
试剂：2% 铬酸：三氧化铬Chromium trioxide 10.0 gm蒸馏水Distilled water 500.0 ml混合溶解，保存期6个月。
警告：腐蚀性酸，可能致癌，避免接触和吸入。
1% 偏重亚硫酸钠Sodium Metabisulfite:偏重亚硫酸钠Sodium metabisulfite 5.0 gm蒸馏水Distilled water 500.0 ml混合溶解，保存期6个月。
5% 硼砂：四硼酸钠Sodium borate 5.0 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml混合溶解，保存期6个月。
六胺银备用液：3% 六亚甲基四胺Methenamine(四氮六甲圜hexamethylenetetramine)100.0 ml5% 硝酸银Silver nitrate 5.0 ml混合，盛于酸清洗过的棕色瓶中，冷藏，保存期3个月。
警告：腐蚀性，可能致癌。
工作液：六胺银备用液Stock Silver Methen. 25.0 ml蒸馏水Distilled water 25.0 ml5% 硼砂Borax 2.5 ml使用前新鲜配制，用后丢弃。
0.5%氯化金：氯化金Gold chloride 0.5 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml混合溶解，盛于酸清洗过的瓶中，冷藏，保存期1年。
警告：避免接触和吸入。
0.2%亮绿：亮绿Light green SF yellow. 0.2 gm蒸馏水Distilled water 100.0 ml冰醋酸Glacial acetic acid 0.2 ml混合溶解。
微波改良肾穿刺活检六胺银染色
光抗体检测外 ， 高质 量 的六胺 银染 色 （ Ａ Ｍ） 法显示 肾基底 色； ￣结构显示不够清晰， ＰＳ 方 Ｂ＿ ｆ ｔ 背景着色严重， 出现银镜现象。 膜的改变 ， 在光镜下 观察基底 膜增厚 、钉 突” “ “ 、 双轨 ” Ｈ 等 Ｅ染 色难 以观察到 的改变 ， 对诊 断具有 重要 的价值 － 。我 科在 肾活 ｌ ｊ
・
６ ・ ６
中国中西医结合肾病杂志 ２ １ 年 １ ００ 月第 １ 卷第 １ １ 期
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ｍａａ，０ ２２ （０ ：２ —６ ７ ｔｌ ０ ，９ １ ）６ １ ２ ． ２
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３． ｒＭＲ ， ｈ ｅ Ｃｌ ｉ ｌ ｈ ｒｃｅｉｔ ｓｏ ｒｍｉ ｐｕ ｔｓｉ Ｄａ Ａｋ ｔｒＡ． ｉ ｃ ａａｔｒ ｉ ｆｕｅ ｃ ｒ ｒ ｕ ｎ ａｃ ｓｃ ｉ ｎ
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讨 论
检标本制作过程结合六 胺银染 色 中组织 容易 出现过染 ， 间 、 时 六胺银染色对温度的要求是较 高的 ， 一般 在 ６ ０℃ ～６ ５℃ 温度较难控制等 问题 ， 采用微 波快 速处 理 的方 法进行 了改 进 ， 之间 ， ６ 在 ０℃以下组 织反应 的缓慢 ， 浸染 时 间长易脱 片 ， 液 染 介绍如下 。 易氧化变混浊 ； 温度过 高染液 容易 变混浊并 出现银镜 反应 ， 影
朱 国 良① 张 晓岚① 石麒麟 ①
肾穿刺活检光镜 观察 肾组 织病变 在进行 肾小 球疾病 诊断 维及 网状纤维均呈黑色 ， Ａ组结 构清 晰， 但 病变组 织基底 膜双 钉突现象显示清 晰 ， 背景无银 颗粒 沉积 ， 核蓝色 ， 胞 胞质 红 和分类 的工作 中起到很 重要 的作用 ， 实际应 用 中， 在 除免 疫荧 轨 、
改良六胺银染色在肾活检病理诊断中的应用
改良六胺银染色在肾活检病理诊断中的应用
郑洁;叶田;杜园园;陈银凤;汤绚丽
【期刊名称】《浙江临床医学》
【年(卷),期】2024(26)4
【摘要】目的探讨改良六胺银染色方法在肾组织活检病理中的应用价值。
方法随机选取2020年9月至2022年3月80例确诊的肾活检病理穿刺标本(IgA肾病20例,膜性肾病20例,糖尿病肾病20例,微小病变20例)。
采用硫代氨基脲改良六胺银染色法,并与常规六胺银染色法进行比较。
结果采用改良六胺银染色法,肾小球基底膜及肾小管基底膜的染色强度均提升;且不同疾病、不同部位染色强度差异有统计学意义(P<0.05)。
结论采用改良六胺银染色法,能提升染色的敏感性和特异性,具有方便、快捷、可靠等特点,适合临床应用。
【总页数】3页(P569-571)
【作者】郑洁;叶田;杜园园;陈银凤;汤绚丽
【作者单位】浙江中医药大学附属杭州市中医院
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.六胺银加马松三色双重染色在肾穿刺活检组织中的应用
2.改良六胺银套马松三色染色在肾穿刺活检组织染色中的应用
3.自控微波技术在肾穿刺活检六胺银染色中
的应用4.六次甲基四胺银染色法在肾穿活检中应用5.肾穿刺活检组织病理诊断中六胺银染色的改进
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病理技术卫生考试常考固定液与特殊染色总结
单纯固定液甲醛：能固定类脂和脂类，但必须冷冻切。
也可固定高尔基体、线粒。
是糖的保护剂。
体除去甲醛色素的方法：Verocay法，乙醇配氨水；Schride法。
重铬酸钾Zenker，Helly，Maximov，Regaud。
苦味酸：易燃易爆，强酸，糖类；可以软化皮肤，易于切片。
不宜用火棉胶包埋。
70%乙醇中加浓氨水去除固定产生的黄色。
三氯醋酸：SUSa液的主要成分，使蛋白沉淀，良好的脱钙剂。
升汞：针状结晶，组织收缩明显。
不能固定类脂和糖类。
可固定蛋白，固定后需用碘液脱汞乙醇：固定兼有脱水作用，糖原的固定，纤维蛋白和弹性纤维固定。
浓度80-95%。
醋酸：固定染色体，清楚的显示细胞核，但组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白。
铬酸避光保存。
不能固定脂肪。
固定后流水冲洗大于24h。
饿酸延长固定时间，脆性增加，对染色不力。
1%高锰酸钾脱碘，固定后流水冲洗12-24h。
丙酮：酶组织化学。
丙酮对组织块的收缩作用强于乙醇，对糖原无固定作用。
异丙醇：是乙醇良好的替代品，组织收缩小，硬化作用较弱；不能再用于火棉胶的包埋。
叔丁醇：脱水后可不经透明，直接浸蜡。
电镜标本中常用作中间脱水剂。
环氧己烷：不引起组织收缩和硬化，常用于植物标本制作，价格贵。
四氢呋喃：既是脱水剂，又可以作为封片溶媒。
环己酮：代替乙醇作脱水剂和随后的浸蜡和包埋。
混合固定液B-5固定液：固定淋巴组织，配方无水醋酸钠-升汞-甲醛，染色前脱汞处理；Muller液：媒染和硬化神经组织，需常更换液体，固定作用缓慢。
Bouin液：结缔组织比较差。
不适宜长期固定（12-24h）。
固定后组织被染成黄色需用70%-80%乙醇洗涤。
Orth：胚胎，神经，脂肪均可。
需在暗处固定24h。
Carnoy液：胞质和胞核，染色体，糖原保存，尼氏体；不能保存脂类。
Helly固定液：含有氧化剂和还原剂，临时配制，久置失效。
PFG：肽类抗原固定，用于免疫电镜研究。
PLP和PLPD（含有过碘酸钠）Rossman：Zenker固定液：形态学研究常用固定液。
病理制片技1
病理制片技术——常用特殊染色一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
提高Grocott六胺银染色质量的几点细节
・232•临床与实验病理学杂志J CCc Exp Pathnl2261Feb；37(6)网络出版时间：2061-6-2217/0网络出版地址：httyi：//dus.vski.ueW9cms/deWiU34.1073.R.40610222.1667.025.html提高Grocott六胺银染色质量的几点细节陈世梁，吴文川，胡莎莎，卢志承关键词:六胺银染色;改良;真菌中图分类号:R446；R379文献标志码：B文章编号2001-7302(2241)06-0632-06dol:10.18314/ju cud/cjcep.4061•06•026真菌感染是临床上较常见的感染性疾病,部分真菌感染病灶和炎症、结核、肿瘤病灶难以鉴别，常用G/ch t六胺银染色检测组织中的真菌来确诊。
近年来由于环境恶化和广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂的广泛使用，以及临床上侵入性操作的普遍开展，使人体抵抗力下降，导致真菌感染性疾病日益增多。
因此,G/ch t六胺银染色检测真菌的应用越来越广泛，这就需要更高质量的染色效果。
为提高染色质量，本文对传统方法进行了改良,在实践工作中取得了比较满意的效果,现介绍如下。
1材料与方法H材料选取海南省人民医院送检真菌感染的活检标本29例,其中肺4例，鼻部4例,扁桃体3例,淋巴结3例，足6例，肝-例，角膜-例。
所有标本均经4%中性福尔马林固定，常规取材、脱水、透明、浸蜡、包埋。
1.4主要仪器GZX-GF-MBS电热恒温鼓风干燥箱，购自上海跃进医疗器械公司;LEICA CM2225切片机，购自德国徕卡公司;樱花VIPA脱水机，购自日本。
1.3试剂及配制(1)六胺银原液:将5%硝酸银5mL加接受日期:2020-09-22作者单位:海南省人民医院病理科，海口577311作者简介：陈世梁，男，副主任技师。
E-mail：cyebshikagl68@ 迈新二□技术交流入到3%六次甲基四胺40mL内，即形成白色沉淀,慢慢摇动至沉淀溶解变清，用棕色瓶装3t保存5]。
真菌 染色
、概述真菌是指具有真正细胞核、产生孢子、不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸取养料，能进行有性和(或)无性繁殖，具有纤维素(或其他葡聚糖)或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。
真菌侵犯人体常继发于其他疾患，如恶性肿瘤、TB、糖尿病等慢性消耗性疾病；大剤量X线照射；免疫抑制剂等导致免疫功能和抵抗力低下；大量应用肾上腺皮质激素的病人，其炎症反应多受抑制，也容易感染真菌；另外器官移植、导管插管、放疗等应用引起局部组织损伤，为真菌的入侵提供了条件．近年来由于免疫缺陷病毒感染者的不断出现，使原来不致病的真菌转为致病真菌。
因此，真菌感染已经成为一个日益严峻的问题。
真菌分为浅部真菌和深部真菌。
浅部真菌：主要侵犯机体皮肤，寄生和腐生于表皮，毛发和甲板的角质组织中，引起浅部真菌病，简称癣病。
临床最多见的浅部真菌病有：体癣、股癣、手癣和足癣。
深部真菌：指侵犯表皮以外组织和器官的病原菌和条件致病真菌.；按生物学性状的不同又分为：酵母型、酵母样型、丝状菌型、双相型。
深部真菌常见的有：念珠菌，隐球菌，组织胞浆菌,马尔尼菲青霉菌，曲霉，毛霉菌,孢子菌丝等。
二、常见真菌的形态特征真菌的大小差异悬殊，大者如碗口，不属微生物范畴，例如灵芝；小者肉眼看不到，只能用显微镜观察。
真菌的形态分单细胞和多细胞两种类型，单细胞真菌呈圆形或卵圆性，常见于酵母菌和酵母样菌；多细胞真菌多呈丝状，分枝交织成团，也称为丝状菌，即一般通称为霉菌。
三、真菌的基本结构真菌由菌丝和孢子构成。
孢子是真菌的生殖结构，分为有性孢子和无性孢子。
在适宜条件下，菌丝是由孢子生出芽管，逐渐延长呈丝状，生物学上把真菌的每一根细丝叫做菌丝。
四.真菌的染色方法真菌用H-E染色一般着色不良，因此需用特殊的染色方法来显色，六胺银法（GMS）用铬酸氧化真菌壁的多糖而暴露出醛基，醛基还原六胺银内的银离子为黑色的金属银而显色。
PAS法用高碘酸氧化真菌菌壁的多糖游离出醛基，后者与无色品红结合生成新的品红色复合物而被显色。
肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良
号为鲜红色。
本组实验对两种不同显色方法进行对比，结果示DAB显色操作比较简单，室温下即可显色，显色时间较快；显色后切片可用二甲苯透明，切片较干净，组织透明度较好；透明后用中性树胶封固，可较长时间保留切片，一般不会掉色；AEC显色颜色比较鲜艳，背景比较淡，敏感性和表达部位显色效果较好。
相比之下，DAB显示的颜色比较暗，背景颜色比较重，敏感性和表达的部位不如AEC显色效果好；DAB有致癌性，使用时务必有防毒意识和防毒措施。
而AEC显色需在37ħ烤箱中进行，不利于对显色结果进行判断；显色后不能用二甲苯进行透明处理，影响切片的透明度和清晰度；使用水溶性封片剂或甘油等封片不利于切片的长期保存，需及时观察、采集图像并进行统计学分析。
两种显色剂和显色方法各有优缺点。
文献［1］报道DAB和AEC两种显色剂易受以下因素影响，如组织固定（固定液的温度、pH值和不同组织）、制片过程（浸蜡温度、包埋温度、烤片温度）、IHC染色过程（如抗原修复的方法、时间、温度、pH值，封闭内源性过氧化物酶的方法、步骤等）和ISH染色过程（如酶蛋白消化的时间、探针的敏感度）等，这些因素对染色结果影响很大。
Graham等［2］研究发现使用氧化物酶组织化学的显色剂，可以使显色时间持续更久。
上述两种显色方法对IHC和ISH显色结果进行有效区别，若实验中仅采用其中一种方法时，DAB显色是首选，如果同时选用两种技术进行科学研究时，建议一种技术选用DAB显色，另一种技术选用AEC显色，因为DAB显色结果为棕黄色，EAC显色结果为红色，两种不同的显色颜色有利于操作人员进行视觉鉴别，避免混淆。
在今后的工作中，我们建议实验操作人员要从习惯采用DAB显色逐步实践或过度到采用AEC显色，将更有利于环保和健康。
参考文献：［1］熊正文，李春光，丁华野，等．影响免疫组化敏感性反应的因素分析及对策［J］．中国组织化学与细胞化学杂志，1999，8（2）：236－9．［2］Graham R C，Jr Karnowsky M J．The early stage of absorption of injected horseradish peroxidase in the proximal tubules of mouse kidney：ultrastructural cytochemistry by a new technique［J］．J Histochem Cytochem，1966，14（4）：291－302．肾穿刺活检六胺银染色套染Masson染色方法的改良吕增华，张杨杨，朱玉红关键词：肾穿刺活检；六胺银染色套染Masson染色法中图分类号：R446文献标志码：B文章编号：1001－7399（2012）11－1289－02肾穿刺活检是目前诊断肾小球肾炎最可靠的手段，在肾脏穿刺活检病理诊断中，六胺银染色套染Masson染色［1］能精确显示病变肾小球内各种免疫复合物的形态与定位，对诊断肾小球疾病起着至关重要的作用。
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仅供科研版本号：180524 六胺银染色液(改良Grocott-橙黄G法)
【产品组成】
【保存条件】
4℃，避光,6个月
【产品概述】
六胺银染色液是一种经典显示基底膜的方法。
经过Grocott改良之后,组织经铬酸氧化，使真菌内的黏多糖暴露出醛基，醛基把六胺银还原为黑色的金属银。
氯化金可使金属银转变为更稳定的金属金，同时使背景更清晰。
海波可以固定并洗去未还原的银离子。
本法采用橙黄G复染对各种真菌的显示效果都很好，特别是马尔尼菲青霉菌的显示特别好，但必须淡染橙黄G。
如需显示曲霉和白色念珠菌，可选用苏木素或者伊红复染，可看到真菌与周围组织的关系。
【使用方法】
1、组织固定于甲醛固定液中，常规脱水包埋。
切片4um，脱蜡至水洗。
2、切片入氧化剂氧化20min。
流水稍洗。
3、入漂白液处理1min，以除去氧化剂。
4、流水冲洗5min，蒸馏水浸洗2次，每次30s-60s。
5、切片放入配制好的预热至60℃的六胺银工作液中，加盖60℃恒温染色大约20～60min，切片呈淡黄色即取出经水洗后显微镜观察有否有菌体出现。
如有淡棕色菌体出现，应每隔5-10min观察一次以控制菌体着色深浅，直至显色理想。
6、入蒸馏水中清洗。
7、用氯化金溶液调色1～2min。
蒸馏水洗1～2min。
8、置于海波溶液2min。
流水冲洗5min。
9、滴加橙黄G一小滴复染1s即用水冲洗。
染色时间不能过长，否则将影响最终效果。
10、流水冲洗20s-60s。
11、常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
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【染色结果】
【注意事项】
1、实验中所用玻璃器皿，应预先用硫酸洗液浸泡并用蒸馏水冲洗干净，烤干。
2、六胺银工作液配制后应先放入温箱中预热，温度要达到60℃时，再放人切片进行染色。
如用水浴锅代替恒温箱，需将温度设定在48-50摄氏度，否则切片会很快变黑而难以掌握。
一般建议在恒温箱中孵育染色。
3、在低倍镜检时，菌体不宜着色太黑，否则在高倍镜下观察则不够清晰透亮，特别需注意菌体成堆的地方的显色。
4、配制好的六胺银工作液是一次性的，不能久放。
5、氯化金调色时，一定要在显微镜下观察。
6、橙黄G一定要淡染，时间不能过长。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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