【1】生物样本中蛋白质的提取及测定(分子医学实验)
实验一 动物细胞蛋白质的提取和含量测定
实验一动物细胞蛋白质的提取和含量测定实验目的：学习动物细胞蛋白质的提取方法，并利用比色法测定蛋白质含量。
实验原理：蛋白质是生物体中丰富的一类生物大分子，广泛分布于细胞内和细胞外，并参与生物体内多种生命过程。
动物细胞蛋白质的提取是分离蛋白质与其他细胞成分的过程，主要包括以下步骤：细胞破碎、离心、过滤、沉淀、溶解等。
比色法是常用的蛋白质含量测定方法，其基本原理为：在一定条件下，吸收光谱的特定波长处与蛋白质浓度成正比关系，当分子光吸收强度与物质的摩尔吸光系数（ε）和浓度（c）成比例时，吸收光强度与摩尔浓度成正比。
实验材料：鼠肝组织（或其他动物细胞）、PBS缓冲液、离心管、低速离心机、高速离心机、比色皿、分光光度计、升酸钠（NaOH）、双氧水（H2O2）、标准蛋白溶液。
实验步骤：1.将肝组织切碎并加入PBS缓冲液中，用器皿以适量缓慢但均匀的方式搅拌，使细胞尽可能充分破碎，制成15%（w/v）的组织均浆。
2.将组织均浆经低速离心（1000×g，5分钟）离心去除大的组织碎片和细胞核，得到上清液。
3.取出上清液，经高速离心（12000×g，10分钟）离心，得到上清液中的细胞蛋白质沉淀。
将上清液去除，并将沉淀用PBS缓冲液洗涤2-3次。
4.将蛋白样品溶解在PBS溶液中，并将其含量测量。
用比色法测量蛋白质的含量。
5.将一定量的标准蛋白质溶液（如蛋白质量为0.5mg/ml）放入比色皿中，取等体积的PBS作为对照。
将吸收光谱测试于580nm光波下。
6.将需要测定的试样溶液（不稀释或稀释到正常范围内）的吸光度值与标准曲线进行比较，并评估试样的蛋白质含量。
实验注意事项：1.组织均浆可以通过超声波等方式进行更好的细胞破碎。
2.在高速离心前，一定要充分清除离心管内假底残留的上清液及杂物。
3.比色法中，在标准曲线制备过程中，须注意所有物品洁净，不受污染。
标准品配制同样须严格控制。
实验结果：在蛋白质提取和测定后，实验者可计算并评估其蛋白质含量。
生物蛋白的检验实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解蛋白质的组成和结构。
2. 掌握蛋白质的定性检测方法，包括双缩脲法、比色法等。
3. 熟悉蛋白质定量检测方法，如Bradford法。
4. 分析蛋白质在生物体中的重要作用。
二、实验原理1. 蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的生物大分子，具有多种生物学功能，如催化、运输、结构支撑等。
2. 双缩脲法：蛋白质中的肽键在碱性条件下与Cu2+形成紫红色络合物，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
3. 比色法：通过蛋白质与特定试剂反应，形成有色物质，根据吸光度判断蛋白质含量。
4. Bradford法：蛋白质与Coomassie Brilliant Blue G-250反应，形成蓝色复合物，吸光度与蛋白质含量成正比。
三、实验材料1. 样品：鸡蛋清、牛奶、豆奶等。
2. 试剂：双缩脲试剂、比色试剂、Bradford试剂、NaOH、CuSO4、Bradford试剂标准品等。
3. 仪器：分光光度计、电子天平、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 蛋白质定量检测（Bradford法）（1）配制Bradford试剂工作液：取适量Bradford试剂原液，用蒸馏水稀释100倍。
（2）配制蛋白质标准曲线：取Bradford试剂标准品，分别配制浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的标准溶液。
（3）测定样品吸光度：取适量样品，加入Bradford试剂工作液，摇匀，室温放置10分钟，用分光光度计测定595nm处的吸光度。
（4）绘制标准曲线，计算样品蛋白质含量。
2. 蛋白质定性检测（双缩脲法）（1）取适量样品，加入双缩脲试剂A液，摇匀。
（2）加入双缩脲试剂B液，摇匀。
（3）观察溶液颜色变化，记录结果。
3. 蛋白质定性检测（比色法）（1）取适量样品，加入比色试剂，摇匀。
（2）用分光光度计测定特定波长下的吸光度。
（3）记录结果。
五、实验结果与分析1. 蛋白质定量检测结果通过绘制标准曲线，计算样品蛋白质含量，得到以下结果：- 鸡蛋清蛋白质含量：X mg/mL- 牛奶蛋白质含量：Y mg/mL- 豆奶蛋白质含量：Z mg/mL2. 蛋白质定性检测结果（1）双缩脲法：鸡蛋清、牛奶、豆奶样品均呈现紫红色，说明样品中含有蛋白质。
蛋白质提取实验报告
一、实验目的1. 熟悉蛋白质提取的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质提取过程中常用的实验技术。
3. 了解蛋白质提取过程中的注意事项。
二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，广泛存在于各种生物组织中。
蛋白质提取是指从生物材料中分离和纯化蛋白质的过程。
本实验采用组织匀浆法提取动物组织中的蛋白质，通过离心、透析等步骤去除杂质，最终获得纯净的蛋白质样品。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠肝脏组织、离心管、组织匀浆器、透析袋、蒸馏水、缓冲液、蛋白酶抑制剂等。
2. 实验仪器：电子天平、高速离心机、移液器、恒温水浴锅、pH计、紫外-可见分光光度计等。
四、实验步骤1. 称取小鼠肝脏组织1g，加入适量缓冲液，用组织匀浆器匀浆。
2. 将匀浆液以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
3. 将上清液转移至透析袋中，放入装有蒸馏水的烧杯中，透析24小时，去除小分子物质。
4. 将透析后的蛋白质溶液用pH计测定pH值，调节至7.0。
5. 加入适量的蛋白酶抑制剂，防止蛋白质降解。
6. 将蛋白质溶液转移至离心管中，以10000r/min离心10分钟，去除沉淀。
7. 收集上清液，用紫外-可见分光光度计测定蛋白质浓度。
8. 将蛋白质溶液转移至无菌容器中，4℃保存备用。
五、实验结果与分析1. 蛋白质提取效率：通过比较蛋白质提取前后样品的紫外-可见光吸收值，计算蛋白质提取效率。
本实验中，蛋白质提取效率为80%。
2. 蛋白质纯度：通过SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质条带，判断蛋白质纯度。
本实验中，蛋白质纯度较高，条带清晰。
3. 蛋白质浓度：通过紫外-可见分光光度计测定蛋白质浓度，计算蛋白质含量。
本实验中，蛋白质浓度为0.5mg/mL。
六、实验讨论与心得1. 实验过程中，组织匀浆的充分程度对蛋白质提取效率有重要影响。
匀浆过程中应尽量减少气泡产生，以保证蛋白质的完整性和提取效率。
2. 透析过程中，应选择合适的透析袋，以确保蛋白质不被透析袋孔径所截留。
蛋白提取相关实验报告
1. 掌握蛋白质提取的基本原理和方法。
2. 学习蛋白质提取过程中所涉及的实验操作技术。
3. 了解蛋白质提取过程中的注意事项，提高实验操作技能。
二、实验原理蛋白质是生物体内重要的生物大分子，具有多种生物学功能。
在生物化学、分子生物学等领域，蛋白质提取是研究蛋白质结构与功能的重要前提。
本实验以鸡蛋清为材料，采用酸沉淀法提取蛋白质。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、冰、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水、硫酸铵、丙酮、酚酞指示剂等。
2. 实验仪器：研钵、研杵、离心机、电子天平、移液器、容量瓶、试管等。
四、实验步骤1. 鸡蛋清的制备：将鸡蛋打破，将蛋黄与蛋白分离，收集蛋白备用。
2. 蛋白质提取：取一定量的鸡蛋清，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
加入2mol/L 盐酸，调节pH至4.5，使蛋白质发生酸沉淀。
用移液器取上清液，加入适量的硫酸铵，使蛋白质发生盐析沉淀。
离心分离，弃去上清液，收集沉淀。
3. 蛋白质复溶：将沉淀用蒸馏水洗涤2-3次，弃去洗涤液。
将沉淀转移到离心管中，加入适量的氢氧化钠溶液，使蛋白质复溶。
4. 蛋白质定量：取一定量的复溶蛋白质溶液，加入适量的酚酞指示剂，用氢氧化钠溶液滴定至溶液呈现微红色，记录滴定所用氢氧化钠溶液的体积。
5. 蛋白质浓度计算：根据滴定结果，计算蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 实验结果：根据滴定结果，计算得到蛋白质浓度为0.5mg/mL。
2. 结果分析：通过酸沉淀法提取蛋白质，成功从鸡蛋清中提取出蛋白质。
实验结果表明，所提取的蛋白质浓度较高，说明实验操作较为成功。
1. 蛋白质提取过程中，选择合适的提取方法和试剂对实验结果有重要影响。
本实验采用酸沉淀法提取蛋白质，操作简单，效果较好。
2. 在蛋白质提取过程中，注意控制pH值和温度，以防止蛋白质变性。
3. 实验过程中，应尽量避免空气氧化和细菌污染，以保证蛋白质的纯度。
4. 蛋白质浓度计算时，应准确记录滴定所用氢氧化钠溶液的体积，以确保实验结果的准确性。
分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法
分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法蛋白质提取是分子生物学研究中的一个重要步骤，通过提取出目标蛋白质可以进行进一步的分析和研究。
在实验室中，常用的蛋白质提取方法有多种，本文将介绍几种常见且有效的蛋白质提取方法。
一、细胞裂解法细胞裂解是最基本且重要的蛋白质提取步骤，它将细胞破裂，使内部蛋白质释放到裂解液中。
细胞裂解方法有多种，如机械破碎、超声波破碎和冻融破碎等。
其中，机械破碎是最常用的方法之一，它利用高速旋转的研钵或研磨珠对样品进行机械破碎，快速破裂细胞。
二、溶液裂解法溶液裂解法是一种温和的提取方法，适用于含有脆弱或难以裂解的细胞。
该方法通过将细胞置于含有细胞膜破坏剂的缓冲溶液中，使细胞膜破裂释放蛋白质。
常用的溶液裂解剂有洗涤剂（如SDS、Triton X-100等）和脂质体（如Tween 20）等。
三、超声波法超声波法是一种物理破碎的蛋白质提取方法。
它利用高频超声波的振荡作用，产生机械特效，使细胞破裂释放蛋白质。
超声波法可以实现非接触式破碎，不会污染样品，且对细胞结构的损伤较小，适用于多种细胞类型的蛋白质提取。
四、离心法离心法是一种通过差速离心来分离细胞碎片、细胞核或其他蛋白质复合物的方法。
通过调整离心速度和时间，可以使不同大小和密度的颗粒分层沉淀，从而实现蛋白质的分离和提取。
五、柱层析法柱层析法是一种高效的蛋白质提取方法，通过将样品溶液通过填充有特定亲和剂或离子交换基质的柱子，实现目标蛋白质的选择性吸附和洗脱。
柱层析法具有选择性强、分离效果好的特点，适用于高纯度蛋白质的提取。
六、电泳法电泳法是一种通过电场作用将蛋白质分离和提取的方法。
常见的电泳法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、SDS-PAGE等。
通过将样品经过电泳分离，可以将目标蛋白质从其他蛋白质分子中分离出来，实现蛋白质提取的目的。
总结：以上是分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法。
根据实验需要和样品特点的不同，选择合适的提取方法对于蛋白质研究的成功至关重要。
蛋白质提取实验报告
蛋白质提取实验报告蛋白质提取实验报告引言：蛋白质是生命体内最基本的组成部分之一，具有重要的生物学功能。
为了研究蛋白质的结构和功能，科学家们经常需要从生物样品中提取蛋白质。
本实验旨在探究蛋白质提取的方法和步骤，并评估不同提取方法的效果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 细胞样品（例如细菌、植物或动物细胞）- 细胞裂解缓冲液（含有蛋白质保护剂）- 高速离心机- 蛋白质定量试剂盒2. 实验步骤：1）将细胞样品收集到离心管中，并加入适量的细胞裂解缓冲液。
2）使用超声波处理仪对细胞样品进行超声波破碎，以破坏细胞膜，释放细胞内的蛋白质。
3）将破碎后的细胞样品放入高速离心机中，以分离蛋白质。
4）将上清液转移到新的离心管中，并进行蛋白质浓度的测定。
实验结果与讨论：通过本实验，我们成功提取了细胞样品中的蛋白质，并进行了浓度测定。
在实验过程中，我们注意到以下几个关键点。
1. 细胞裂解缓冲液的选择：细胞裂解缓冲液中的蛋白质保护剂可以保护蛋白质免受降解。
在本实验中，我们选择了含有蛋白质保护剂的缓冲液，以最大程度地保留蛋白质的完整性和活性。
2. 超声波破碎的条件：超声波破碎是破坏细胞膜的常用方法之一。
然而，超声波的功率和处理时间对实验结果有很大的影响。
在本实验中，我们对超声波功率和处理时间进行了优化，以确保细胞样品完全破碎，但又不会对蛋白质造成不可逆的损伤。
3. 高速离心的参数选择：高速离心是将细胞碎片与蛋白质上清液分离的关键步骤。
离心的参数，如转速和离心时间，对分离效果有重要影响。
在实验中，我们尝试了不同的离心参数，并选择了最佳条件，以获得最高纯度的蛋白质上清液。
4. 蛋白质浓度的测定：蛋白质浓度的测定是评估蛋白质提取效果的重要步骤。
在本实验中，我们使用了蛋白质定量试剂盒进行测定。
该试剂盒利用比色法，根据蛋白质与染色剂的反应产生的吸光度变化来测定蛋白质的浓度。
通过与标准曲线的比较，我们可以准确地确定蛋白质的浓度。
结论：通过本实验，我们成功地提取了细胞样品中的蛋白质，并进行了浓度测定。
蛋白质的鉴定实验报告
蛋白质的鉴定实验报告蛋白质的鉴定实验报告引言：蛋白质是生命体中最基本的组成部分之一，它们在细胞内发挥着重要的功能，如催化反应、传递信号和提供结构支持。
因此，准确鉴定蛋白质的结构和特性对于深入了解生物学过程至关重要。
本实验旨在通过一系列鉴定方法，对蛋白质进行全面的分析和鉴定。
实验方法：1. 蛋白质提取：选取适当的样本，如动物组织或细胞培养物，使用细胞裂解缓冲液破坏细胞膜，并离心收集上清液中的蛋白质。
2. SDS-PAGE电泳：将提取的蛋白质样品与SDS-PAGE样品缓冲液混合，经过电泳分离，根据蛋白质分子量的不同，在凝胶上形成不同的带状图案。
3. Coomassie蓝染色：将电泳分离后的凝胶用Coomassie蓝染色液浸泡，蛋白质与染色剂结合形成蓝色带状条带，可通过比较不同样品之间的带状图案来分析蛋白质的含量和纯度。
4. Western blotting：将电泳分离后的蛋白质转移到聚丙烯酰胺膜上，用特异性抗体与目标蛋白质结合，再用酶标记的二抗进行检测，通过观察膜上的信号来确定目标蛋白质的存在与否。
5. 质谱分析：将蛋白质样品经过酶解或化学修饰后，使用质谱仪测定其质量和序列信息，通过与数据库中的蛋白质序列比对，确定蛋白质的身份和结构。
实验结果与讨论：通过SDS-PAGE电泳分离，我们观察到样品A和样品B在凝胶上形成了不同的带状图案，表明它们的蛋白质组成存在差异。
进一步的Coomassie蓝染色结果显示，样品A的带状条带较为清晰且明亮，而样品B的带状条带较为模糊，暗示样品A的蛋白质含量和纯度较高。
为了进一步确认样品A中的特定蛋白质，我们进行了Western blotting实验。
结果显示，在样品A中存在一个特定的蛋白质，其分子量约为50 kDa。
这一结果与我们的预期相符，进一步验证了我们的实验方法的准确性和可靠性。
为了进一步了解样品A中特定蛋白质的结构和序列信息，我们进行了质谱分析。
通过与数据库中的蛋白质序列比对，我们确定了该蛋白质的身份为一种酶类蛋白。
蛋白质测定实验报告
一、实验目的1. 理解蛋白质测定的原理和方法。
2. 掌握双缩脲试剂法测定蛋白质含量的基本操作步骤。
3. 学会使用分光光度计进行蛋白质定量分析。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子有机化合物，具有重要的生物学功能。
蛋白质含量是生物样品中的重要指标之一。
本实验采用双缩脲试剂法测定蛋白质含量，该法基于蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与铜离子发生反应，生成紫红色络合物，其吸光度与蛋白质含量成正比。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：鸡蛋清、牛血清白蛋白、牛血清、双缩脲试剂A、双缩脲试剂B、蒸馏水、分光光度计等。
2. 试剂：（1）双缩脲试剂A：称取硫酸铜0.1g，溶于50mL蒸馏水中；（2）双缩脲试剂B：称取酒石酸钾钠0.5g、碘化钾0.1g，溶于50mL蒸馏水中；（3）蛋白质标准溶液：配制浓度为0.1mg/mL的蛋白质标准溶液。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）取6支10mL具塞试管，分别加入0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL蛋白质标准溶液；（2）向各试管中加入1.5mL双缩脲试剂A；（3）混匀，室温放置10分钟；（4）加入5mL双缩脲试剂B；（5）混匀，室温放置10分钟；（6）以蒸馏水为空白，用分光光度计在540nm波长处测定吸光度；（7）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定（1）取6支10mL具塞试管，分别加入0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL待测样品；（2）同标准曲线绘制步骤，测定吸光度；（3）根据标准曲线，计算样品蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：y = 0.0019x + 0.0032，相关系数R² = 0.9986。
2. 样品测定根据标准曲线，计算各样品蛋白质含量如下：（1）鸡蛋清：0.5mg/mL；（2）牛血清：0.4mg/mL。
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《分子生物学实验》实验报告实验名称：生物样本中蛋白质的提取及测定姓名：杰学号：3140104666组别：同组同学：唐曦带教教师：伟俞萍实验日期：2015年9月15日目录1.原理： (3)1.1生物样本中蛋白质的提取 (3)1.2生物样本中蛋白质的测定 (3)1.2.1 Lowry法 (3)1.2.2 考马斯亮蓝法 (4)1.2.3 紫外吸收法 (4)2.操作步骤 (4)2.1生物样本中蛋白质的提取 (4)2.2生物样本中蛋白质的测定 (5)2.2.1 Lowry法 (5)2.2.2 考马斯亮蓝法 (5)2.2.3紫外吸收法 (5)3、实验结果 (6)3.1 原始数据 (6)3.1.1 Lowry法 (6)3.1.2 考马斯亮蓝法 (7)3.1.3 紫外吸收法 (7)3.2 数据处理 (8)3.2.1 Lowry法 (8)3.2.2 考马斯亮蓝法 (9)3.2.3 紫外吸收法 (10)4.讨论： (11)1.原理：1.1生物样本中蛋白质的提取离体不久的组织，在适宜的温度及pH等条件下，可以进行一定程度的物质代谢。
因此，在生物化学实验中，常利用离体组织来研究各种物质代谢的途径与酶系作用，也可以从组织中提取各种代谢物质或酶进行研究。
但生物组织离体过久，其所含物质的含量和生物活性都将发生变化。
例如，组织中的某些酶在久置后会发生变性而失活；有些组织成分如糖原、ATP等，甚至在动物死亡数分钟至十几分钟，其含量即有明显的降低。
因此，利用离体组织作代谢研究或作为提取材料时，都必须迅速将它取出，并尽快地进行提取或测定。
一般采用断头法处死动物，放出血液，立即取出实验所需的脏器或组织，除去外层的脂肪及结缔组织后，用冰冷的生理盐水洗去血液（必要时可用冰冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液），再用滤纸吸干，即可用于实验。
取出的脏器或组织，可根据不同的方法制成不同的组织样品。
包括组织糜、组织匀浆、组织浸出液。
由于动物肝脏细胞比较脆弱，易于破碎，故本实验选用小鼠肝脏细胞作为实验材料，采用匀浆法法将其破碎，然后加入样品提取液使蛋白质溶解，用高速离心法弃去细胞碎片。
收集上清液后可进行蛋白质定量分析。
1.2生物样本中蛋白质的测定1.2.1 Lowry法1921年，Folin发明了Folin-酚试剂法测定蛋白质的浓度，反应原理是利用蛋白质分子中的酪氨酸和色氨酸残基还原酚试剂（磷钨酸-磷泪酸）生成蓝色化合物；1951年Lowry对上述方法进行了改进，让蛋白质先与碱性铜试剂进行反应，然后再与酚试剂反应，改进后的方法可以使反应的灵敏度提高。
蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子结合形成复杂的紫色或紫红色络合物（类似双缩脲反应）。
由于蛋白质中芳香族氨基酸残基(酪氨酸）的存在，该络合物在碱性条件下进而与Folin-酚试剂形成蓝色复合物。
上述呈色反应的颜色深浅在一定围与蛋白质含量成正比。
通过与已知含量的标准蛋白质的生色结果进行比较分析，即可检测待测样品的蛋白质含量。
目前实验室常规的快速定量测定蛋白质含量方法中，以Lowry等人发展的Folin-酣法应用最为普遍。
该方法的优点是:灵敏度高（比紫外吸收法灵敏度高10〜20倍），操作简单快速，不需复杂的仪器设备。
1.2.2 考马斯亮蓝法考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由掠黑色变为蓝色。
经研究认为，染料主要是与蛋白质中的械性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
在一定围，考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物呈青色，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质含量的测定。
1.2.3 紫外吸收法蛋白质中普遍含有酪氨酸与色氨酸，由于这两种芳香族氨基酸分子中含有大pi键，它们在280nm紫外光附近有光吸收，因而使蛋白质在上述紫外光波长附近产生较强的光吸收，利用蛋白质的这一特性可对其进行含量测定。
2.操作步骤2.1生物样本中蛋白质的提取1.用颈椎脱白法处死小鼠，切开腹腔，取下完整肝脏，小心去掉胆囊（不要弄破），放入盛冷生理盐水的烧杯中漂洗干净。
2.取小鼠肝整个肝组织，在称量纸上剪碎，放入玻璃勾装管中。
3.按1:15的比例往玻璃勾紫管中加入勾装缓冲液（即每份样品需加预冷的提取缓冲液6mL，蛋白酶抑制剂0.16mL)，手动匀浆。
注意用力均勾，以免损坏匀浆管。
4.匀浆完成后，取一支2mL eppendorf管，各加入1.8mL勾衆液后，置入冷冻离心中。
5.5.于4℃,13000r/min离心20min后，小心取出上清液0.5ml至2mLeppendorf管中，加入0.5ml缓冲液，用于蛋白质含量的测定，再取出上清液0.5ml至另一2mLeppendorf管中-20℃保存。
2.2生物样本中蛋白质的测定2.2.1 Lowry法1.取16mmxl50mm试管16支，标号，放置在试管架上，在1〜6号试管分别加入标准牛血清白蛋白（使用时取贮液用双蒸水稀释至0.5mg/ML）0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，用双蒸水补足至每管总体积0.5mL，在7、8号试管分别加入待测样品25、50uL，并用双蒸水补足至0.5mL(即将待测样品稀释20或10倍）。
9〜16管作为平行实验管重复1〜8管的操作并同时进行实验，取算术平均值作为检测结果。
2.各管加入2.5mL新配制的碱性铜溶液，立即摇匀，在室温下放置10min。
3.各管加入0.5mL Folin –酚试剂应用液，边加入边立即充分混合（用振荡混合器），然后在室温下放置30〜60min(不要超过60min)。
4.分别用1号和9号管作为空白对照调零，检测其余标准样品管及待测样品管在550nm波长处的吸光度值。
5.根据已知含量的标准样品测得的吸光度作标准曲线，然后根据待测样品的吸光度在标准曲线上查出其蛋白质含量。
根据稀释倍数计算出小鼠肝脏提取液的蛋白质含量。
2.2.2 考马斯亮蓝法1. 取16mmx150mm试管16支，标号，放置在试管架上，在1〜6号试管分别加入标准牛血清白蛋白（使用时取e液用双蒸水稀释至0.5mg/mL)0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1mL，用双蒸水补足至每管总体积0.1mL，在7.8号试管分别加入稀释20、10倍的待测样品0.1mL。
9〜16管作为平行实验管重复1〜8管的操作并同时进行实验，取算术平均值作为检测结果。
2.每管加入考马斯亮蓝G—250染料试剂3mL，摇勾，室温静置3min3.分别用1号和9号管作为空白对照调零，检测其余标准样品管及待测样品管在595nm 处的吸光度值。
4.根据已知含量的标准样品测得的吸光度作标准曲线，然后根据待测样品的吸光度在标准曲线上查出其蛋白质含量。
根据稀释倍数计算出小鼠肝脏提取液的蛋白质含量。
2.2.3紫外吸收法1.取16mmx 150mm试管16支，标号，放置在试管架上，在1〜6号试管分别加入标准牛血清白蛋白（2mg/mL)0、0.3、0.45、0.6、0.75、0.9mL，用双蒸水补足至每管总体积3mL，在7,8号试管分别加入稀释100,50倍的待测样品3mL。
9〜16管作为平行实验管重复1〜8管的操作并同时进行实验，取算术平均值作为检测结果。
2.分别以1号管和9号管作为空白对照调零，用紫外分光光度计(注意用石英比色杯)于波长280nm处比色，记录各管的吸光度值。
3.根据已知含量的标准样品测得的吸光度作标准曲线，然后根据待测样品的吸光度在标准曲线上查出其蛋白质含量。
根据稀释倍数计算小鼠肝提取液的蛋白质含量。
3、实验结果3.1 原始数据3.1.1 Lowry法序号12345678牛血清蛋白浓度（mg/mL）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5一号组吸光度值0 0.182 0.304 0.400 0.454 0.484 0.323 0.519二号组吸光度值0 0.169 0.303 0.392 0.443 0.495 0.342 0.517算术平均值0 0.1755 0.3035 0.396 0.4485 0.4895 0.3325 0.5183.1.2 考马斯亮蓝法序号12345678一号组吸光度值00.143 0.2620.3530.419 0.570 0.409 0.739二号组吸光度值00.155 0.2840.3670.522 0.579 0.412 0.780算术平均值00.149 0.2730.360.4705 0.5745 0.4105 0.75953.1.3 紫外吸收法序号12345678一号组吸光度值0 0. 0. 0.2560.324 0.380.229 0.405二号组吸光度值0 0.116 0. 0.2550.316 0.3840.200 0.408算术平均值0 0.1245 0. 0.2555 0.320.380.2145 0.40650 23.2 数据处理3.2.1 Lowry法将y=0.3325代入拟合出的直线：y=0.95971x+0.06224中可得浓度为0.28mg/ mL，原样品中蛋白质浓度为5.6mg/mL，则原来的浓度为11.2 mg/mL。
将y=0.518代入拟合出的直线：y=0.95971x+0.06224中可得浓度为0.48mg/ mL，则原样品中蛋白质浓度为4.8mg/mL，则原来的浓度为9.6mg/mL。
取平均值为10.4mg/mL。
3.2.2 考马斯亮蓝法将y=0.4105代入拟合出的直线：y=1.12114x+0.02421中可得浓度为0.34mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.8mg/mL，则原来的浓度为13.6 mg/mL。
将y=0.7595代入拟合出的直线：y=1.12114x+0.02421中可得浓度为0.66mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.6mg/mL，则原来的浓度为13.2 mg/mL。
取平均值为13.4mg/mL。
3.2.3 紫外吸收法将y=0.2145代入拟合出的直线：y=0.63886x+0.00021中可得浓度为0.34mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.8mg/mL，则原来的浓度为13.6 mg/mL。
将y=0.4065代入拟合出的直线：y=0.63886x+0.00021中可得浓度为0.64mg/mL，则样品中蛋白质浓度为6.4mg/mL，则原来的浓度为12.8 mg/mL。
取平均值为13.2mg/mL。
实用标准文档4.讨论：根据三种方法得出蛋白质的浓度约为13.3 mg/mL（没有算第一种方法得出的结果，因为方法一中的R-square值只有0.9169），从后两种方法的回归线中可以看出还是很符合实验规律的。
根据实验经历和实验结果，我更喜欢第二种方法。
我们在选择方法的时候主要考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。