色谱柱冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书;色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督;总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料；另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好;对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考;min缓慢升高到min不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相的比例如80%、50%、10%甲醇或乙腈各冲洗至少30分钟;若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂将缓冲盐溶液换成水冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析;样品分析完后,色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,min的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80%甲醇或乙腈里具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相;如柱子长时间未用,则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里;对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统水：90-10；乙腈：10-90冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈;需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间1小时以上冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱;大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~8,有的pH稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件的pH值偏小或偏大时,可选择pH稳定范围宽的柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱;在每次进行样品分析时,要保证流动相包括盐、缓冲盐、酸等与色谱系统及柱内的保存液要互溶,如不能互溶,则需要用一定比例的有机溶剂不低于10%或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡,否则,流动相中的盐会在系统与柱内析出,影响样品分析或损坏柱子;硅胶柱、正相手性色谱柱包括AS-H、AD-H、OD-H系列,5DMB、5TBB系列,OA 系列如OA-3100、OA-3300对于未启用的新的色谱柱,在保证系统是正相的情况下,可先用异丙醇小流速流速为~min冲洗色谱柱约15分钟,然后换上正相流动相平衡进行色谱分析;硅胶柱及正相手性柱不能过水相对于sepax系列的硅胶柱,可以过低比例的水相有机相不低于50%,接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相如是不含盐的反相溶液如水/乙腈；水/甲醇,先用异丙醇冲洗所有管路,然后用正相流动相冲洗所有管路,最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐如缓冲盐/乙腈；缓冲盐/甲醇,先用纯水冲洗HPLC系统,然后用异丙醇冲洗所有管路,最后用正相流动相冲洗,再接上色谱柱;使用结束后,先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱,再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱,或者直接用正己烷－异丙醇90：10冲洗,并保存在正己烷－异丙醇90：10中;如长时间未用,则保存在正己烷中;需要特别强调的是,冲洗硅胶柱时,不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱,只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱对于sepax系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱,最后保存在纯的有机溶剂中;在进行样品分析前,一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶,如不互溶,则需要用异丙醇过度,否则,会影响色谱系统与损坏柱子;反相手性色谱柱如：CHIRALCEL OZ-3R：同C18柱阴离子柱和阳离子柱：目前常见的阴子柱有waters IC-Pak TM anion,阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters阳离子交换柱钙型;对于waters IC-Pak TM anion 和waters阳离子交换柱钙型,新柱子使用前用高纯水小流速min缓慢升高到min冲洗约30分钟,然后再换成流动相平衡色谱柱;在冲洗色谱柱之前,要保证整个色谱系统为纯水相;对于磺酸基阳离子柱含有硅胶基柱的,使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟,然后高纯水替换系统冲洗,然后接上色谱柱;分析完样品后,对于waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型用高纯水冲洗色谱柱,色谱柱最后保存在纯化水中;对于磺酸基阳离子柱,用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟,最后保存在甲醇或乙腈中参照柱子说明书;冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整;需要特别强调的是waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型是不能过有机相纯有机溶剂或有机溶液,否则会损坏色谱柱;氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统,其操作方法与维护保养与C18相同;对于新碰到的别的型号的色谱柱,如本规程没有说明时,要参照色谱柱说明书具体问题具体分析;液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统具体情况具体分析,可针对缓冲盐浓度较高的流动相一般做完试验冲洗完色谱柱后,换上两通,将各通道放于10%乙腈中冲洗至少30分钟若原色谱系统中流动相含盐,则用高纯水有时候用温水效果更好冲洗至少30分钟后再用10%乙腈冲洗;若仪器长时间不用,则将仪器保存于80%乙腈中; 2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂如该样品在70%甲醇中溶解,则洗针液应选择70%甲醇或更高比例的甲醇；清洗柱塞杆的溶剂为了清洗流动相中析出的盐,一般选择低比例的有机相,如10%甲醇或乙腈;3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路包括进样器和检测池若被污染,系统应做清洗和钝化处理;一般采用30%磷酸水溶液作为清洗剂,用6mol/L硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化;清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢;钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜;30%磷酸水溶液制备：取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀;6mol/L硝酸的制备：取浓硝酸40ml与60ml水混匀;方法：将色谱柱取下,用两通连接进样器和检测器,将所有吸滤头放入高纯水中,以min流速过渡至少30分钟,待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用30%磷酸清洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7用pH试纸测试,清洗完成；然后换用6mol/L硝酸冲洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7,钝化完成;用纯甲醇过渡,浸润泵头及管路,备用;。
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗
液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意:每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书、色谱柱维护保养就是很重要得,关系到色谱柱得使用寿命与检测结果得准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员与使用者互相监督。
总得原则就是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料;另外没有使用得情况下,一定要保证两端得堵头封好、对于具体得色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养得具体方法与注意事项,以便使用者参考。
(0.2mｌ/min缓慢升高到0.5ml/miｎ)不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为1。
0ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相得比例(如80%、5０％、1０%甲醇或乙腈)各冲洗至少３0分钟。
若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中(如８0%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议得溶剂中);色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例得有机溶剂(将缓冲盐溶液换成水)冲洗色谱柱１5分钟,然后再换成流动相进行样品分析。
样品分析完后,色谱柱维护与保养方法:流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,1、０ｍl/ｍin得流速冲洗至少30min,再用8０％甲醇或乙腈冲洗至少30ｍin,柱子保存在80％甲醇或乙腈里(具体问题具体分析,洗脱程序可以就是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存得就是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相)。
如柱子长时间未用,则柱子保存在1０0％得甲醇或乙腈里。
对于含有离子对试剂得流动相如庚烷磺酸钠与十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统(水:９0-１0;乙腈:10－90)冲洗时间要稍长些,然后保存于90％乙腈。
需要特别强调得就是,目前所有得C18柱均不能用纯水进行长时间(1小时以上)冲洗,除非有专门耐水得专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱得固定相流失与相塌陷,损坏色谱柱。
大多数反相色谱柱得pH稳定范围就是２～8,有得ｐＨ稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件得pH值偏小或偏大时,可选择pH稳定范围宽得柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱。
C18色谱柱保存、清洗、再生
C18色谱柱保存、清洗、再生方法
一、色谱柱的保存方法
1. 纯乙腈或甲醇保存色谱柱（当使用流动相中含有盐时，注意首先用20倍柱体积的
5 %-10%的乙腈-水或5 %-10%甲醇-水流动相过渡）。
二、色谱柱的清洗方法
1. 以乙腈:水（1 : 9,v/v）→乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）依次冲洗，然后进行使用。
2.多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上，引起柱压升高伴随峰形展宽的现
象。
此时，可将色谱柱与检测器断开，将色谱柱反接后进行冲洗。
三、色谱柱的再生方法：
1. 一般污染再生：乙腈:水（1 : 9,v/v）→ 乙腈→ 氯仿（或异丙醇）→ 乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）→流动相，分别冲洗10～20倍柱体积。
2. 蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:异丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈：异丙醇（1 : 2,v/v,
内含0. 1% 三氟乙酸）→水：异丙醇( 1 : 4, V/V) ，分别冲洗10～20倍柱体积。
（注意每项过渡时，压力的控制，压力最好控制在1500 psi以下，根据柱子的具体情况请自己优化流速）。
色谱柱清洗及保存方法
色谱柱清洗及保存方法1、尺寸排阻色谱柱：（1）树脂基质分子尺寸排阻色谱柱①离子性吸附：对于阳离子性吸附物质，通过提高盐浓度进行过柱清洗（1mol/L的醋酸缓冲液）②疏水性吸附：对于疏水性吸附物质，可通过提高有机溶剂的浓度（PW·PW XL：50%、α及SuperAW：100%可）进行过柱清洗。
③复合吸附：对于阳离子性·疏水性物质的去除，可提高盐浓度进行过柱，水洗后，提高有机溶剂浓度进行过柱。
（2）硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱①碱性物质的去除（离子性吸附）：通过提高淋洗液的盐浓度（通常0.5mol/L）进行过柱清洗。
②疏水性吸附的去除（疏水性吸附）：在淋洗液中添加甲醇、乙腈（10-20%）等水溶性有机溶剂进行过柱清洗。
本法请注意缓冲液中盐的析出。
③在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂：在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性剂（Triton、Tween、Brij等）后进行过柱清洗。
但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。
一般来说，清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。
2、离子交换色谱柱、（1）如果预柱滤片或保护柱在分离之前曾经使用过，需要首先将预柱滤片或保护柱反接用清洗溶液冲洗15-30min。
如果经过冲洗效果没有得到明显改善，则需要更换预柱滤片或保护柱。
对于Proteomix阴离子交换色谱柱，清洗溶液为含150mM硝酸钾的75%乙腈溶液（用HCl调节pH至2）。
对于Proteomix阳离子交换色谱柱，清洗溶液为含1.0M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液（pH10）。
（2）在使用过程中，样品经常会被吸附在柱入口端的筛板或者填料上。
当样品吸附累积到一定程度时，柱压将会升高，色谱峰形也会出现展宽。
这时就需要清洗色谱柱了。
下面是色谱柱清洗的基本步骤：①将色谱柱与检测器断开；②将色谱柱反接后进行冲洗；③将流速设置到所推荐的最大流速的50%进行冲洗。
注意柱压的变化。
色谱柱冲洗方法
色谱柱冲洗方法（最新版4篇）篇1 目录1.色谱柱冲洗的必要性2.色谱柱冲洗的方法2.1 水冲洗法2.2 有机溶剂冲洗法2.3 缓冲盐冲洗法2.4 反冲法3.色谱柱冲洗的注意事项篇1正文色谱柱是液相色谱系统中的核心部件，它在样品分离过程中起着至关重要的作用。
然而，在色谱柱使用过程中，柱内可能会积累一些脏物或盐析物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
下面我们将介绍几种常见的色谱柱冲洗方法。
首先，水冲洗法是最常用的色谱柱冲洗方法。
此方法操作简便，只需将色谱柱连接到水流系统上，使用纯水进行冲洗。
篇2 目录一、色谱柱冲洗的必要性二、色谱柱冲洗的方法1.水冲洗法2.纯有机相冲洗法3.缓冲盐冲洗法4.反冲法5.专用清洗剂冲洗法三、不同类型色谱柱的冲洗方法1.反相色谱柱2.正相色谱柱3.离子交换色谱柱4.凝胶渗透色谱柱四、色谱柱冲洗的注意事项篇2正文色谱柱是高效液相色谱系统中的核心部件，其在样品分离过程中起到关键作用。
然而，在长时间的使用过程中，色谱柱内部可能会积累一些脏物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
色谱柱冲洗的方法有很多种，下面我们分别进行介绍：1.水冲洗法：这是一种最常用的色谱柱冲洗方法。
使用纯水或含有少量缓冲盐的水进行冲洗，可以有效去除色谱柱内部的脏物。
对于反相色谱柱，可以使用纯水或甲醇/水混合溶液进行冲洗。
2.纯有机相冲洗法：在冲洗色谱柱时，可以使用纯有机溶剂（如乙腈、甲醇等）来代替水相。
这种方法适用于具有疏水性的色谱柱，如 C18、C8 等。
3.缓冲盐冲洗法：在冲洗过程中，可以加入一定浓度的缓冲盐，以保持色谱柱内部的离子强度。
这种方法适用于离子交换色谱柱和凝胶渗透色谱柱。
4.反冲法：这是一种比较彻底的冲洗方法，可以有效去除色谱柱内部的沉淀物。
在反冲过程中，需要将色谱柱的流动相改为反向，并提高流速。
然而，反冲过程可能会对色谱柱造成一定程度的损伤，因此需要谨慎操作。
如何清洗和保存反相色谱柱
如何清洗和保存反相色谱柱？如何清洗和保存反相色谱柱？怎样处理新买来的色谱柱？用水来冲洗色谱柱有什么后果？分析结束后如何冲洗？这些问题是HPLC分析人员常常面对的。
本文就这些问题介绍一些色谱柱的维护和保养经验。
新色谱柱的处理对于新购买的色谱柱，首先应该做些什么呢？几乎所有的色谱柱在出厂时都保存在它们测试时的溶剂中，通常是60-80%的甲醇/水，这与在反相色谱中使用的流动相是兼容的，所以可以直接转换到所要使用的流动相。
另外，也可以先用20-30ml流动相中的强溶剂甲醇、乙腈或者四氢呋喃冲洗色谱柱，然后再转换到所需流动相。
需注意的是，在冲洗或平衡色谱柱时，重要的是溶剂的体积而不是冲洗时间。
提高流速可以缩短冲洗平衡时间。
如果使用有机溶剂和水或缓冲溶液，10倍柱体积的流动相可以使色谱柱达到冲洗平衡。
如果流动相使用离子对试剂，则需20-50倍柱体积的流动相。
对于直径4.6mm的色谱柱，其柱体积可以按下式估算：Vm=0.1L其中，Vm为柱体积（ml），L为色谱柱的长度（cm）。
故一个15cm x 4.6mm色谱柱大概的柱体积为1.5ml。
直径2.1mm的色谱柱的柱体积大约为4.6mm的20%，所以5cm x 2.1mm 的色谱柱含溶剂为100uL。
对于B型高纯硅胶基质填料的色谱柱，色谱柱的再现性很规范，这与15年前普遍使用的、不是很纯的A型硅胶基质填料的色谱柱形成鲜明对比，但很多用来分析产品和原料的“流传”下来的HPLC方法仍沿用这种色谱柱。
有的时候，新的色谱柱需要运行几针分析样品才能使保留时间和峰面积保持稳定。
这种情况对于新型的色谱柱比较好一些，但仍需一段时间的磨合。
有时可以通过运行高浓度的样品或对照品来加速最初的色谱柱平衡。
例如，如果你看到运行了几针50ng的对照品，其保留时间和峰面积有所飘移，试一试运行1ug的对照品。
这种方法常常可以加速柱平衡的时间。
用水冲洗色谱柱我们常常会被问到这样一些问题：“我的样品是水溶性的，流动相中含有缓冲盐和甲醇，我不能用水来冲洗所有水溶性的污染物吗？”回答是：“不可以”。
液相色谱柱的清洗
新柱使用前的冲洗
新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告, 了解柱子的性能指标。分析用的流动相往往与柱子 的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的 试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。要注意清洗用 的流动相与保存溶剂的相溶性。
1、反相柱如岛津C18、C8等柱保存在70%甲醇中,可
用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。流 速应缓慢提高,如开始0.3mL/min,10～15min后可慢 慢加快。
色谱柱常见问题的成因
3、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲 盐溶液，而且分析结束后,如果没有先用水进 行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子 中的微环境是高有机相、低水相。这时流动 相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞 ,使柱压升高,柱效下降。 4、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当,使 色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干, 造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。
对色谱柱进行适当清洗的意义
以上提到的部分故障可以通过适时、适当的 清洗得到解决，恢复色谱柱的功能，延长色 谱柱的使用寿命。 下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗 方法进行讨论，具体的冲洗方法要根据实际 情况作适当的选择和调整。当然，不同的用 户和色谱产品厂商对自己的色谱柱会有不尽 相同的处理方法。
色谱柱常见问题的成因
1、硅羟基的死吸附 ：硅胶粒子表面存在硅 羟基，这些硅羟基会吸附样品和流动相中的 很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效 下降、峰形劣化的现象。有些吸附是可逆的， 可以通过清洗解决。 2、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式 残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容 易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造 成峰形劣化。
反相柱日常清洗
关于纯水的问题：纯水极性很强,ODS等填料的硅烷 键是非极性的,在纯水中各键合基团会因疏水作用而 改变空间构型, 使柱效很快降低。很多公司推出可 以使用100%纯水进行冲洗的柱子,原理是键合基团互 相之间有排斥力,这类柱子一般键合相比较丰富，游 离硅羟基比较少，从而阻止了键合基团性能的改变。 能否用纯水冲洗要参考该色谱柱的说明书。
液相色谱柱的清洗(活动za)
液相色谱柱的清洗一、液相色谱柱按基体成分的分类、硅胶基体：不键合任何化学基团的为硅胶柱，键合的化学基团有、、、氨基、氰基、苯基等。
、聚合物基体：常见的聚合物基体为聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇。
聚合物上再键合化学基团。
根据填料基体的成分不同可以分为：二、色谱柱常见问题的成因、硅羟基的死吸附：硅胶粒子表面存在硅羟基，这些硅羟基会吸附样品和流动相中的很多物质，当吸附达到饱和时就会出现柱效下降、峰形劣化的现象。
有些吸附是可逆的，可以通过清洗解决。
、重金属离子：重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,造成峰形劣化。
、缓冲液中盐的析出：当流动相中含有缓冲盐溶液，而且分析结束后,如果没有先用水进行冲洗,而是直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐份,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
、色谱柱变干：如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,会影响分离效果。
三、对色谱柱进行适当清洗的意义以上提到的部分故障可以通过适时、适当的清洗得到解决，恢复色谱柱的功能，延长色谱柱的使用寿命。
下面对比较常见的几种型号的色谱柱的清洗方法进行讨论，具体的冲洗方法要根据实际情况作适当的选择和调整。
当然，不同的用户和色谱产品厂商对自己的色谱柱会有不尽相同的处理方法。
四、新柱使用前的冲洗新柱在使用前应先认真阅读说明书及性能测试报告,了解柱子的性能指标。
分析用的流动相往往与柱子的保存试剂不同,故在分析样品之前,应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来。
要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。
、反相柱如岛津、等柱保存在甲醇中,可用～倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。
流速应缓慢提高,如开始～后可慢慢加快。
、正相柱或称极性色谱柱一般保存在正庚烷或正己烷中。
如果分析时的流动相含有极性溶剂,应使用乙醇或异丙醇冲洗,流速～ ,将保存液冲洗干净后,再用流动相平衡。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
目前，看到园子谈到色谱柱冲洗的问题。
我来谈谈我自己的一点意见，主要针对的反向色谱柱而讲的。
1.色谱柱简介
最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性添充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。
孔径在15nm（1 nm=10埃）以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2~8的流动相。
当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用PH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。
2.色谱柱的冲洗体积确定
一般情况都是冲洗色谱柱10-20倍柱体积，具体可以这样计算，根据柱内径和柱长算出色谱柱内体积。
短柱一般时间就是30分钟、长柱一般冲洗60分钟就可以了。
举例：内经为4. 6mm、长250mm，其柱内体积=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分钟，折中取15被柱内体积，则冲洗时间就出来了。
3.色谱柱冲洗
冲洗色谱柱最好在分析结束后，用流动相冲洗到基线平稳，然后用10%左右的有机溶剂冲洗色谱柱，主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。
然后用100有机溶剂冲洗。
最好是梯度变化冲洗。
分析物可能为一些能溶解在水中，有些需要用纯溶剂才能完全去除。
如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净，一般情况不要用纯水冲洗色谱柱，特别是反向柱的填料的键合集团容易折断，对色谱柱造成损伤。
色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了，所以色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。
虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。
4.色谱柱维护冲洗
常见故障筛板阻塞，解决办法是：a、过滤流动相；b、过滤样品；c、运用在线过滤或保护柱。
柱头塌陷解决方法是：：a、避免使用PH>8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）；b、使用保护柱；c、使用预柱（饱和色谱柱）。
前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂，主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。
当我们的色谱柱在压力和柱效下降时，我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板，清洗筛板以及观察里面的填料，如填料污染严重，就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补，用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。
然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。
5.特殊冲洗强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。
由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。
清洗方法：
1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。
3.补救方法：
水——乙腈——氯仿（或异丙醇）——乙腈——水
每一步以1.0ml/min 流速反向冲洗色谱柱60min。