C18色谱柱保存、清洗、再生
C18色谱柱的冲洗方法
C18色谱柱的冲洗方法1.初次使用前的冲洗：在初次使用C18色谱柱之前，需要对其进行特定的冲洗步骤。
首先，将纯水通过柱底部注入柱中，使得柱内充满水。
然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
接下来，使用有机溶剂（如甲醇或乙腈）进行冲洗。
首先，缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
然后，重复此步骤两次以确保彻底冲洗。
2.样品前的冲洗：在每次分析之前，都需要对C18色谱柱进行样品前的冲洗。
首先，使用纯水进行冲洗。
将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。
然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
接下来，使用有机溶剂进行冲洗。
缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
最后，使用移液枪或注射器将样品注入柱中进行分析。
3.淋洗液的冲洗：在一些情况下，可能需要对C18色谱柱进行淋洗液的冲洗。
淋洗液是指用于去除吸附在色谱柱上的杂质或其他有机溶剂的溶液。
常用的淋洗液包括醋酸、甲醇、乙腈等。
将淋洗液通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱，然后缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
根据需要，可以进行多次淋洗液冲洗，以确保柱的性能。
4.结束使用后的冲洗：在每次使用C18色谱柱之后，都需要进行结束使用后的冲洗。
首先，使用纯水进行冲洗。
将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。
然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
接下来，使用有机溶剂进行冲洗。
缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
最后，将柱封口或存放在适当的溶剂中，以保护柱的性能。
总之，C18色谱柱的冲洗方法包括初次使用前的冲洗、样品前的冲洗、淋洗液的冲洗以及结束使用后的冲洗。
通过正确的冲洗方法，可以保证C18色谱柱的性能，提高分析的准确性和可靠性。
液相色谱柱清洗活化再生
1.色谱柱的活化30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。
=9：1冲洗30倍柱体积，再流动相平衡30个柱体积。
100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积，然后转换到流动相平衡。
用于反相色谱时，先用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。
50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡30柱体积。
2.色谱柱的清洗保存和再生清洗：如使用缓冲盐，先用高比例水相冲洗30个柱体积，然后再转换到80%有机相冲洗30个柱体积。
再生：用95%水，甲醇，异丙醇，甲醇，95%水分别冲洗30个柱体积，在第一次用95%水时，进样10次100 μL DMSO。
清洗：100%乙醇0.3ml/min 3h，再用正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积并保存。
再生：根据不同类型正相柱选择。
[常规正己烷/异丙醇的柱子，乙醇（0.1%三氟乙酸）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，乙醇（0.1%二乙胺）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积]清洗：用100%水冲洗30个柱体积去除盐，然后用100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生：先用高浓度盐的缓冲液清洗（浓度可以是5-10倍，不超过1M），然后再用100%水洗，50%乙腈或甲醇保存。
清洗：反相使用时同反相C18色谱柱，如短期不用，可用95%甲醇或乙腈保存;长期不用时需用异丙醇置换，最后用正己烷保存。
再生: NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，先用含1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗30个柱体积，乙腈-水(50:50)冲洗30个柱体积，95%水/5%乙腈冲洗30个柱体积，异丙醇冲洗30个柱体积，95%乙腈/5%水冲洗30个柱体积并保存。
色谱柱的保存
针对经常会有客户来电咨询色谱柱试用问题，特将C18柱日常所需注意问题总结如下，如有遗漏之处或对某项内容有不同看法欢迎讨论。
1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，Diamonsi（2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效。
C18色谱柱通用使用方法
C18色谱柱通用使用方法1.柱的准备：a.检查柱的完整性和封闭性。
确保柱的端口和连接器没有损坏，没有杂质进入柱内。
b.检查柱的包装是否完好。
确保柱没有受到损坏或污染。
2.柱的预处理：a.将新的C18色谱柱进行预处理。
通常情况下，柱需要进行反相条件下的"洗涤"，以去除柱内的杂质和残留物。
b.使用适当的洗涤溶液，如乙腈/水或甲醇/水混合溶液，进行柱的洗涤。
通常需要使用高浓度有机溶剂，如100%乙腈或甲醇，进行洗涤。
c. 洗涤柱时，使用较高的流速，通常为1-2 mL/min，以加快杂质的去除。
3.样品的准备：a.样品前处理。
根据需要，对样品进行适当的前处理，如过滤、离心、稀释等。
b.样品溶剂的选择。
根据样品的性质选择合适的溶剂，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
c.样品的溶解。
将样品溶解于适当的溶剂中，并通过过滤器进行过滤，以去除悬浮物和固体杂质。
4.色谱条件的设置：a.流动相的选择。
根据需要选择合适的流动相组成，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
b.pH值的调节。
根据需要调节流动相的pH值，以适应目标化合物的分离。
c. 流速的设置。
根据样品的复杂性和分离的要求，设置合适的流速。
通常情况下，流速为0.5-2 mL/min。
d.分析温度的控制。
根据样品的性质和分析要求，设置合适的温度。
通常为室温或稍高温度。
5.色谱分离：a.样品注射。
将样品通过自动进样器或手动注射器注入到色谱柱中。
b.等待分离。
在流动相的作用下，样品组分将按照其亲水性和疏水性被分离。
根据需要，调节流动相的组成和温度，以实现最佳的分离效果。
c.收集分离的组分。
根据需要，收集分离出的目标组分，可以通过分级洗脱或梯度洗脱的方式进行。
6.柱的保养：a.柱的再生。
根据需要，可以使用适当的再生溶液（如有机溶剂）对柱进行再生，以去除残留的样品和杂质。
b.柱的保存。
在不使用柱时，将其存放在干燥、避光和低温的环境中，以保持柱的稳定性和使用寿命。
c18反相色谱柱再生
c18反相色谱柱再生C18反相色谱柱在现代分析化学中具有广泛的应用，在许多分析实验中都起着重要的作用。
然而，在某些情况下，柱的使用寿命会很短，需要及时进行再生。
这篇文章将介绍C18反相色谱柱再生的步骤以及柱再生后的评估和性能测试。
1.柱再生前的准备在进行柱再生之前需要注意以下几点：1.1 色谱柱的选购选择质优的C18反相色谱柱更容易进行有效的再生，同时也有利于柱的使用寿命的延长。
1.2 柱的使用条件为了保证柱的使用寿命，需要注意以下两点：1.2.1 避免使用高盐浓度的缓冲液。
1.2.2 避免使用高脂肪样品。
这些注意事项可以延长柱的使用寿命，有利于进行柱再生的工作。
2.柱再生的方法C18反相色谱柱的再生方法主要有以下几个步骤：2.1 理化清洗理化清洗包括溶剂清洗、反吹吸毛细管和再生试剂处理三个步骤。
其中，溶剂清洗是为了去除来自样本的污染物和应力累积，精确用于色谱分析。
2.2 饱和清洗饱和清洗是为了去除残余污染物和杂质，并且在再生前提供充分的柱平衡。
2.3 再生步骤通过使用专门的再生试剂，可以更彻底地去除残留的污染物和杂质。
在剂量和时间的控制下进行柱再生，可以获得保持原色谱柱性能的“全新”反相柱。
3.评估柱的性能重要的是再生后评估柱的性能。
这些测试通常包括：3.1 有效期有效期是将反相柱用于特定色谱分析试验的期限。
它可以通过反相柱再生前和再生后的色谱图进行比较来确定。
3.2 分离效率和解析度分离效率和解析度是反相柱性能的重要参数。
在再生之前和之后进行分离的对比试验可以确定其对分离效率和分辨率的影响。
4.总结C18反相色谱柱的再生使得柱的寿命可以延长，是一项十分重要的部分。
通过采用有效的柱再生步骤和测试方法，可以有效确保柱再生后的性能和柱再生之前类似，使其更好地应用于分析实验。
C18柱日常所需注意问题
C18柱日常所需注意问题总结如下，如有遗漏之处或对某项内容有不同看法来电讨论。
1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高比例的有机试剂溶液（如90%甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，Diamonsil（2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%；
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；
7、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。
色谱柱再生程序：
按照下列次序冲洗色谱柱，冲洗体积均为20倍柱体积：
10%甲醇水→甲醇→异丙醇（或氯仿）→甲醇→10%甲醇水
（步骤3选用异丙醇时，由于异丙醇粘度较大，需适当降低流速，建议流速设为0.2-0.3ml/min）。
C18色谱柱的冲洗方法
C18色谱柱的冲洗方法
C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，广泛应用于分离和纯化生物大分子、有机化合物等物质。
为了保证色谱柱的稳定性和使用寿命，有必要进行适当的冲洗。
以下是C18色谱柱的冲洗方法：
1. 使用纯水预洗：首先使用高纯度的水（如去离子水）预洗色谱柱，既可清除杂质，也可减少游离硅胶的溶解。
预洗时间一般为30分钟至1小时。
2. 醇洗法：使用有机溶剂如甲醇、乙醇等进行洗脱，可清除游离硅胶表面的疏水杂质与氧化物。
洗涤方法是按照以下顺序，首先使用甲醇洗脱5-10柱体积，随后使用水甲醇（95:5）混合液洗脱5柱体积。
最后用纯水洗脱2-3柱体积，以消除杂质和有机残留。
3. 酸洗法：使用pH值为2-3的酸溶液进行洗脱，可清除碱金属离子、氧化物等硅胶上的杂质和污染。
一般使用的酸为1%三氟乙酸（TFA）或1%醋酸溶液。
洗脱顺序为先使用甲醇洗脱5柱体积，然后使用酸溶液洗脱5柱体积，最后用酸性水洗脱2-3柱体积。
请根据具体情况选择合适的冲洗方法，尽量避免出现对色谱柱产生伤害的情况。
c18色谱柱冲洗方法
c18色谱柱冲洗方法C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，用于分离和分析各种有机物。
在使用过程中，由于样品的复杂性和柱子的不同寿命，需要进行定期的冲洗和维护，以保持色谱柱的性能和延长使用寿命。
C18色谱柱的冲洗方法主要包括前冲洗和后冲洗。
1.前冲洗：在使用新的C18色谱柱之前，首先需要进行前冲洗以清除潜在的杂质和柱子中的空隙。
前冲洗一般使用有机溶剂和水的混合物。
以下是一种常用的前冲洗方法：a.使用无机盐和有机溶剂制备一个50%的有机溶剂溶液。
常用的有机溶剂包括乙腈和甲醇等。
b.使用前述有机溶剂溶液和水制备50%的有机溶剂和50%的水的混合物。
c. 运行液相色谱系统，将50%有机溶液和50%的水的混合物以1mL/min的流速通过C18色谱柱进行前冲洗。
冲洗时间通常为15-30分钟。
2.后冲洗：后冲洗是指在使用C18色谱柱一段时间后，柱子表面可能会附着样品残留物，需要进行清洗以恢复柱子表面的性能。
以下是一种常用的后冲洗方法：a.使用90%甲醇和10%水的有机溶剂制备后冲洗溶液。
b. 运行液相色谱系统，将后冲洗溶液以1mL/min的流速通过C18色谱柱进行后冲洗。
后冲洗时间通常为30-60分钟。
3.再生：如果C18色谱柱因样品残留物和其他污染物而导致性能下降，可以考虑进行柱子的再生。
以下是一种常用的再生方法：a.使用90%甲醇和10%水的有机溶剂制备再生溶液。
b. 运行液相色谱系统，将再生溶液以1mL/min的流速通过C18色谱柱进行再生。
再生时间可以根据实际情况进行调整，通常为30-60分钟。
c.再生后，使用前述的前冲洗方法进行前冲洗，以确保柱子完全清洁。
值得注意的是，柱子的冲洗方法应该根据具体实验条件和样品的特性来确定。
在冲洗过程中，也要注意保持流速稳定，避免超过柱子的最大压力，以免对柱子造成损害。
总之，C18色谱柱的冲洗方法是保持色谱柱性能和延长使用寿命的重要步骤。
通过定期的前冲洗、后冲洗和再生，可以有效地清除样品残留物和污染物，使色谱柱保持良好的分离效果和稳定性能。
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C18色谱柱保存、清洗、再生方法
一、色谱柱的保存方法
1. 纯乙腈或甲醇保存色谱柱（当使用流动相中含有盐时，注意首先用20倍柱体积的
5 %-10%的乙腈-水或5 %-10%甲醇-水流动相过渡）。
二、色谱柱的清洗方法
1. 以乙腈:水（1 : 9,v/v）→乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）依次冲洗，然后进行使用。
2.多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上，引起柱压升高伴随峰形展宽的现
象。
此时，可将色谱柱与检测器断开，将色谱柱反接后进行冲洗。
三、色谱柱的再生方法：
1. 一般污染再生：乙腈:水（1 : 9,v/v）→ 乙腈→ 氯仿（或异丙醇）→ 乙腈→乙腈:水（1 : 9,v/v）→流动相，分别冲洗10～20倍柱体积。
2. 蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:异丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈：异丙醇（1 : 2,v/v,
内含0. 1% 三氟乙酸）→水：异丙醇( 1 : 4, V/V) ，分别冲洗10～20倍柱体积。
（注意每项过渡时，压力的控制，压力最好控制在1500 psi以下，根据柱子的具体情况请自己优化流速）。