实验琼脂糖凝胶电泳一原理二目的掌握核酸电泳的方法
琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳原理简介琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和检测生物大分子的方法。
它基于琼脂糖凝胶作为分离介质，通过电场作用使分子在凝胶中按照大小和形态的差异进行迁移，达到分离的目的。
该原理广泛应用于核酸和蛋白质的分离与分析领域。
原理琼脂糖凝胶电泳原理如下： 1. 凝胶制备：首先将琼脂糖与缓冲液混合并加热溶解，随后冷却形成凝胶。
凝胶的浓度可以根据需要调整，一般较低浓度的琼脂糖凝胶用于分离大分子，较高浓度的琼脂糖凝胶用于分离小分子。
2. 样品加载：将待分离的样品加入凝胶孔中。
琼脂糖凝胶是一种多孔的基质，具有类似于过滤器的功能。
样品中的分子会被凝胶网状结构所限制，在电场作用下沿凝胶中的微小通道向电极处迁移。
3. 电泳过程：连接正负极电源，通过电场使得带电分子根据大小和形态的差异在凝胶中迁移。
电泳时间的长短与迁移距离成正比，某些情况下可以通过控制电场强度或者时间来调节分离效果。
4. 可视化检测：根据需要，可以利用染色剂或标记物对凝胶中的分子进行可视化检测。
例如，核酸可以通过乙溴化氢染色可视化，蛋白质可以通过银染法或共价标记物进行检测。
琼脂糖凝胶电泳的原理主要涉及到两个方面：凝胶基质和电场迁移。
凝胶基质琼脂糖凝胶是一种由聚糖构成的多孔基质，其主要成分是琼脂糖和缓冲液。
琼脂糖是一种天然的含羟基多糖，具有较好的凝胶性质。
琼脂糖的浓度和凝胶构建方式可以根据需要来设计，以实现对待分离分子大小和分辨率的调控。
电场迁移琼脂糖凝胶电泳是利用电场作用使带电分子在凝胶中迁移。
电泳过程中，凝胶中的聚糖构成了一套通道网络，负载着电场的分布，变为一种微电泳介质。
带电分子受到电场力的影响，在凝胶中的通道中迁移。
根据分子的大小和形态的差异，迁移速率不同，从而实现分离效果。
较小的分子会迁移得更远，而较大的分子会受到较大的凝胶阻力，迁移距离较短。
应用琼脂糖凝胶电泳在生物学领域的应用非常广泛。
主要包括以下几个方面： - 核酸分离与分析：琼脂糖凝胶电泳可以用于核酸的分离与分析。
实验琼脂糖凝胶电泳一原理二目的掌握核酸电泳的方法
10×Loading Buffer (RNA电泳用) 组份浓度
配制量10 ml 配制方法 1. 称量下列试剂，置于10 ml离心管中。
2. 2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。 3. 加入5 ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。 4. 用DEPC处理水1011121314151617181920212223M
Total RNA from Arabidopsis plants
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 1819 20 21 M
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
2011.5.23
14 15 16 17
Total RNA from Arabidopsis Plants
(DNA用)
本制品是核酸电泳用Loading Buffer。制品中含有SDS， 可即刻停止各 种酶促反应。使用时向酶促反应液中加入1/10量的本制品，即可上样 电泳。 本制品中含有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)，可以观察电泳的进行 情况。溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状 DNA的迁移速度相同（在0.5×TBE中)。 本缓冲液配制组成合理，缓冲液中不含核酸酶（DNase或RNase)，特别 适用于各种酶促反应的停止以及各种酶促反应后的琼脂糖凝胶电泳。 一般来说，各种限制酶、修饰酶的酶促反应后电泳时，常使用本制品。
4、电泳缓冲液(10*) TAE TBE TPE
50×TAE Buffer(pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸, 100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
实验琼脂糖凝胶电泳及DNA纯化
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常用的电泳缓冲液
4℃ 保存备用.
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么么么么方面
• Sds绝对是假的
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么么么么方面
• Sds绝对是假的
常用的6X载样缓冲液
Ⅰ 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，40%蔗糖 水溶液 Ⅱ 0.25%溴酚蓝 ，0.25%二甲苯青 ，30%甘油 水溶液
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⑵ 用胶带将制胶板两端封好，插入适当梳子，将溶解 的琼脂糖（约50℃）倒入，室温冷却凝固。
⑶ 将凝胶置入电泳槽中，加1×TAE电泳缓冲液至液面 覆盖凝胶1-2mm，小心垂直向上拔出梳子。
⑷ 用移液器吸取PCR产物样品4μl于封口膜上，再加入 2μl 的6X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
⑸ 打开电源开关，调节电压至3-5V/cm，可见到溴酚 蓝条带由负极向正极移动，电泳约30min-60min。
电泳：
实验一的PCR产物样品。 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波 炉，紫外凝胶成像系统等。
琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，溴化乙锭（EB），6X载 样缓冲液
纯化：
回收试剂盒
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四、实验步骤 ⑴ 1g 琼脂糖加入100ml 1×TAE电泳缓冲液中，摇匀。 在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解。
9. 加入和硅胶树脂等量（体积比）30μL的灭菌蒸馏水后搅匀，55 ℃水 浴中放置10分钟。
10. 离心（10，000 rpm、1分钟）后吸取上清液，尽量注意不要吸取硅 胶树脂。此回收上清液即可为DNA回收溶液。
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DNA琼脂糖凝胶电泳
思考题： 五、思考题：
影响电泳的主要因素? 影响电泳的主要因素?
荧光染料EB染色的原理和优点是什么？ EB染色的原理和优点是什么 * 荧光染料EB染色的原理和优点是什么？ 1、原理： 原理：
EB： EB：即3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐 二氨基- 乙基Bromide)。 EB是一种扁平分子 是一种扁平分子， (Ethidium Bromide)。 EB是一种扁平分子，它可以嵌 入核酸相邻的碱基之间， 在紫外线激发下 ， 发出红橙 入核酸相邻的碱基之间 ， 在紫外线激发下， 色荧光。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。 色荧光。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。 DNA的结合几乎没有碱基序列特异性
实 验 二
DNA琼脂糖凝胶电泳 DNA琼脂糖凝胶电泳
学时： 学时：3
实验目的： 一、实验目的：
1、掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的 原理和方法。 原理和方法。 2、学习核酸染色的方法。 学习核酸染色的方法。
二、实验原理: 实验原理
电泳技术： （一）电泳技术： 电泳定义： 1 、 电泳定义 ： 是指带电粒子在电场中向与其自身
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理： （二）琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介 电泳是用琼脂糖凝胶 泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法， 泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已 成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。 琼脂糖英文名 琼脂中提取出来的 琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半 英文名 ，是从琼脂中提取出来的， 乳糖和3.6-脱水- 半乳糖相互结合的链状多糖。 相互结合的链状多糖 乳糖和3.6-脱水- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖和 琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶， 琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电泳 都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶 中具有分子筛效应。 中具有分子筛效应。 分子筛效应
实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法
实验琼脂糖凝胶电泳的原理和方法实验琼脂糖凝胶电泳（Agarose gel electrophoresis）是一种常用的分离DNA和RNA分子的技术。
它基于琼脂糖凝胶电泳原理，利用琼脂糖凝胶的孔隙大小和电泳电场的力对DNA和RNA分子进行分离。
琼脂糖是一种高分子多糖，当加热溶解后冷却凝固时，形成一个多孔的凝胶网络。
这个凝胶网络中的孔隙大小是可以调控的，通过改变琼脂糖的浓度可以得到不同孔隙大小的凝胶。
1.制备琼脂糖凝胶：按照实验需要，称取适量琼脂糖加入缓冲液中，搅拌使其溶解，然后加热至溶解。
等溶液冷却至约50℃时，在一个电泳板间夹两块玻璃片或塑料片，将琼脂糖凝胶溶液倒入电泳板中，并将梳子插入凝胶中，让凝胶固化。
2.样品制备：将要检测的DNA或RNA分子提取和纯化，并用缓冲液稀释合适浓度。
添加适量的DNA荧光染料或核酸染色剂，使其在紫外光下可见。
3.样品加载：将样品加入琼脂糖凝胶的凝胶孔口中，注意不要将样品推到凝胶中。
4.电泳分离：将凝胶板放入电泳槽中，加入适量缓冲液，注意保证电泳液中缓冲液位置高于凝胶。
然后将负极电极和正极电极分别连接到电泳槽的两端，开启电源，施加适当电压使DNA或RNA分子在电场力的作用下进行电泳分离。
5.染色和可视化：电泳结束后，取出凝胶板，并用染色剂对DNA或RNA分子进行染色。
染色剂与DNA或RNA结合后，用紫外光照射凝胶，通过相应设备观察凝胶上的条带形成。
实验琼脂糖凝胶电泳的原理是基于DNA和RNA分子在电场下按照大小进行分离的特性。
在电场作用下，DNA或RNA分子荷负性被引向正极（阴极）方向移动。
琼脂糖凝胶的孔隙大小可以根据需要调控，大分子难以通过，小分子易于通过。
因此，DNA或RNA分子根据其大小不同，通过孔隙大小的限制，从而形成条带，完成了对DNA或RNA的分离。
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告一、实验目的本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，对DNA分子进行分离和检测，掌握琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解其在生物学领域中的应用。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离DNA分子的方法。
其原理是利用电场作用力将DNA分子从样品中移动到凝胶中，并根据DNA分子大小不同，在凝胶中形成不同迁移距离的带状图案。
根据带状图案可以得到DNA片段大小及其相对含量。
三、实验步骤1.制备琼脂糖凝胶：将1g琼脂糖加入100ml TAE缓冲液中，加热搅拌至溶解，冷却至60℃左右时倒入模具中，待冷却成固体后取出。
2.制备DNA样品：将待检测DNA样品加入适量TAE缓冲液中，使其浓度为50ng/ul。
3.装载样品：取出制备好的琼脂糖凝胶，将其置于电泳槽中，加入适量TAE缓冲液，然后将DNA样品注入琼脂糖凝胶孔中。
4.进行电泳：将电泳槽盖好，接通电源，设定电压和时间，进行电泳。
5.染色和成像：取出琼脂糖凝胶，进行染色处理，然后用成像仪拍摄带状图案。
四、实验结果通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，成功分离出待检测DNA样品中的DNA分子，并形成了带状图案。
根据带状图案可以看出不同大小的DNA片段在凝胶中形成了不同迁移距离的带状图案。
五、实验分析1.影响DNA迁移距离的因素：DNA片段大小、琼脂糖浓度、电场强度等因素都会影响DNA分子在凝胶中的迁移距离。
一般来说，较小的DNA片段在相同条件下迁移距离较大。
2.应用领域：琼脂糖凝胶电泳技术广泛应用于生物学领域中对DNA分子的检测和分析。
例如，可以用于分析DNA序列、检测基因突变等。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解了其在生物学领域中的应用。
同时，我们也发现琼脂糖凝胶电泳技术具有操作简单、成本低廉、结果可靠等优点，是一种常用的DNA分子检测方法。
实验二 琼脂糖凝胶电泳实验
实验二琼脂糖凝胶电泳实验【实验目的】（1）学习琼脂糖凝胶电泳的基本原理；（2）掌握使用水平式电泳仪的方法；（3）学习在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳的方法。
【实验原理】琼脂糖凝胶电泳是基因工程实验室中分离鉴定核酸的常规方法。
核酸是两性电解质，其等电点为pH2-2.5，在常规的电泳缓冲液中（pH约8.5），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。
核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。
因此，核酸分子的迁移率由下列几种因素决定：（1）DNA的分子大小。
线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。
（2）DNA分子的构象。
当DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。
相同分子量的线状、开环和超螺旋质粒DNA在琼脂糖凝胶中移动的速度是不一样的，超螺旋DNA移动得最快，而开环状DNA移动最慢。
如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时，可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收，用同一种限制性内切酶分别水解，然后电泳，如在凝胶上出现相同的DNA图谱，则为同一种DNA。
（3）电源电压。
在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
但是随着电场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。
要使大于2kb 的DNA 片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。
（4）离子强度影响。
电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
dna的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤
一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常常利用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方式，这种电泳方式以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在必然的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA核酸分子是两性解离分子，是碱基上的氨基解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离，所以分子带正电，在电场中向负极泳动；而时，碱基几乎不解离，而磷酸基团解离，所以核酸分子带负电，在电场中向正极泳动。
不同的核酸分子的电荷密度大致相同，因此对泳动速度影响不大。
在中性或碱性时，单链DNA与等长的双链DNA的泳动率大致相同。
影响核酸分子泳动率的因素主如果：一、样品的物理性状即分子的大小、电荷数、颗粒形状和空间构型。
一般而言，电荷密度愈大，泳动率越大。
可是不同核酸分子的电荷密度大致相同，所以对泳动率的影响不明显。
对线形分子来讲，分子量的常常利用对数与泳动率成反比，用此标准样品电泳并测定其泳动率，然后进行DNA分子长度（bp）的负对数——泳动距离作标准曲线图，可以用于测定未知分子的长度大小。
DNA分子的空间构型对泳动率的影响很大，比如质粒分子，泳动率的大小顺序为：cD NA＞IDNA＞ocDNA可是由于琼脂糖浓度、电场强度、离子强度和溴化乙锭等的影响，会出现相反的情况。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分离和分析DNA、RNA 等核酸分子。
本次实验的目的是：1、掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和操作方法。
2、学会制备琼脂糖凝胶，并能够正确上样和进行电泳。
3、能够通过电泳结果判断核酸样品的质量、大小和浓度。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的多糖，加热溶解后冷却可形成凝胶。
琼脂糖凝胶具有多孔的网状结构，能够起到分子筛的作用。
核酸分子在电场中会向正极移动，由于其分子大小、形状和电荷密度的不同，在琼脂糖凝胶中的迁移速度也不同。
小分子的核酸迁移速度快，大分子的核酸迁移速度慢，从而实现分离。
DNA 和 RNA 分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度主要取决于以下因素：1、分子大小：分子越大，迁移速度越慢。
2、分子构象：超螺旋 DNA 比线性 DNA 迁移速度快，而线性DNA 又比开环 DNA 迁移速度快。
3、琼脂糖浓度：琼脂糖浓度越高，凝胶孔径越小，对分子的阻碍作用越大，迁移速度越慢。
4、电场强度：电场强度越大，迁移速度越快，但过高的电场强度可能导致发热和条带扭曲。
在电泳过程中，通常使用溴化乙锭（EB）或其他核酸染料对核酸分子进行染色，以便在紫外灯下观察和拍照。
三、实验材料和仪器1、材料DNA 样品：已知大小的 DNA 标准品、待测 DNA 样品。
琼脂糖：电泳级琼脂糖。
电泳缓冲液：常用的有 TAE（Tris乙酸EDTA）和 TBE（Tris硼酸EDTA）缓冲液。
核酸染料：溴化乙锭（EB）或其他安全的核酸染料。
上样缓冲液：通常含有甘油、溴酚蓝等成分，用于增加样品密度和指示电泳进程。
2、仪器电泳仪：提供稳定的电场。
水平电泳槽：用于容纳琼脂糖凝胶和进行电泳。
微波炉：用于加热溶解琼脂糖。
紫外透射仪：用于观察和拍照电泳结果。
移液器：用于准确量取和移取液体。
四、实验步骤1、制备琼脂糖凝胶称取适量的琼脂糖粉末，加入一定量的电泳缓冲液，在微波炉中加热至琼脂糖完全溶解，溶液澄清透明。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告琼脂糖凝胶电泳实验报告引言：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析生物大分子的方法，它基于分子在凝胶孔隙中的迁移速率差异，从而实现分离和测定目标分子的目的。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术，对DNA分子进行分离和测定，以加深对琼脂糖凝胶电泳原理和操作流程的理解。
材料与方法：实验所需材料包括琼脂糖凝胶、DNA样品、TAE缓冲液、电泳仪等。
首先，将琼脂糖凝胶加入适量的TAE缓冲液中，加热溶解后冷却至室温，并倒入电泳槽中。
接下来，将DNA样品与DNA标记物混合，加入琼脂糖凝胶槽中的孔隙中，然后将电泳槽置于电泳仪中，连接电源，设定合适的电压和时间，开始电泳。
结果与分析：经过一段时间的电泳，我们观察到琼脂糖凝胶中DNA分子的迁移情况。
根据DNA分子的大小，我们可以看到在凝胶中形成了一系列的DNA带。
较大的DNA分子迁移速度较慢，位于凝胶的起点附近，而较小的DNA分子则迁移速度较快，位于凝胶的末端。
通过比较目标DNA样品与DNA标记物的迁移距离，我们可以估算出目标DNA的大小。
讨论：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和测定DNA分子的方法。
琼脂糖凝胶具有较好的孔隙结构，能够根据DNA分子的大小将其分离开来。
在电泳过程中，电场作用下，DNA分子向阳极迁移，较大的DNA分子受到凝胶孔隙的阻碍，迁移速度较慢，而较小的DNA分子则能够较快地穿过凝胶孔隙，迁移到凝胶的末端。
通过观察电泳结果，我们可以对DNA分子的大小进行初步估算。
然而，需要注意的是，琼脂糖凝胶电泳只能提供DNA分子的相对大小，而无法提供精确的分子量。
这是因为琼脂糖凝胶中的孔隙大小并非恒定不变，而是受到多种因素的影响，如凝胶浓度、电泳时间等。
因此，为了更准确地确定DNA分子的分子量，我们需要在实验中加入DNA分子的标准品，以便进行比较和推断。
此外，琼脂糖凝胶电泳还可用于检测DNA分子的纯度和杂质。
通过在电泳过程中加入DNA染料或核酸探针，可以使DNA分子在凝胶上呈现出特定的颜色或荧光，从而判断样品中是否存在杂质或其他DNA序列。
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4、点样：用移液器将DNA加到样品孔中。注意加DNA Marker。
5、接通电源，红为正极，黑为负极，DNA往正极移动，1-5V/cm，
6、根据指示剂移动位置决定终止电泳。将电压调到零，关机，再 取出凝胶，EB染色10-20分钟，紫外灯下观察，照相。
Байду номын сангаас
4、电泳缓冲液(10*) TAE TBE TPE
50×TAE Buffer(pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸, 100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 加入57.1 ml的醋酸，充分搅拌。 4. 加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。
凝胶中加入EB 进行电泳，便于随时紫外线下观察电泳状态， 但EB会导致线性DNA迁移率下降１５％．
1、凝胶制备：称取1g agarose,加100ml 0.5 TAE or TBE，微波炉 或电炉溶解。
2、制胶：待熔化的agarose温度降到60℃以下后，将agarose倒进 插了梳子的胶盒中。30-40 min后，胶完全凝固，取梳子，将胶放 入电泳槽中，缓冲液没过胶约 0.5 –1cm。
实验１１ 琼脂糖凝胶电泳
一 原理
1、带电荷的物质在电场中趋向运动称为
二 目的
电泳。
掌握核酸电泳的方法。与蛋白质分子相似，核酸分子也是两性解 离分子，在pH3.5时，碱基上的氨基基团
三 材料
解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解
质粒DNA 四 步骤
离，整个核酸分子带正电荷，在电场中向 负极泳动，在pH8.0-8.3时，碱基几乎不 解离，磷酸根全部解离，核酸分子带负电
溴化乙锭(Ethidium bromide，EB）是一种荧光染料，这种扁平分子可以 嵌入核酸双链的配对碱基之间，在紫外激发下，发出红色荧光。
激发荧光的能量来自两个方面，一是核酸吸收波长为260nm的紫外线后 将能量传给溴化乙锭，二是结合在DNA分子中的EB本身，主要吸收波长为 300nm和360nm的紫外线的能量，来源于这两方面的能量，最终激发EB发 射出波长为590nm的可见光谱红橙区的红色荧光。EB-DNA复合物中的EB发 出的荧光，比游离的凝胶中的EB本身发射的荧光强度大10倍，因此不需要 洗净背景就可以清楚地观察到核酸的电泳条带，若核酸量少，而EB的背景 太深致使带型不清，可将凝胶浸泡于1mmol/LMgSO4中1小时或 10mmol/LMgCl2中5min,使非结合的EB褪色，减少未结合的EB产生的背景 荧光，这样可以检测到10ng的DNA样品。
(DNA用)
本制品是核酸电泳用Loading Buffer。制品中含有SDS， 可即刻停止各 种酶促反应。使用时向酶促反应液中加入1/10量的本制品，即可上样 电泳。 本制品中含有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)，可以观察电泳的进行 情况。溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状 DNA的迁移速度相同（在0.5×TBE中)。 本缓冲液配制组成合理，缓冲液中不含核酸酶（DNase或RNase)，特别 适用于各种酶促反应的停止以及各种酶促反应后的琼脂糖凝胶电泳。 一般来说，各种限制酶、修饰酶的酶促反应后电泳时，常使用本制品。
10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度 配制量 配制方法
10×MOPS Buffer 组份浓度200 mM MOPS, 20 mM NaOAc, 10 mM EDTA 配制量1 L 配制方法 1. 称量41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2. 加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3. 使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 4. 再向溶液中加入下列试剂。 5. 用DEPC处理水将溶液定容至1 L。 6. 用0.45 mm滤膜过滤除去杂质。 7. 室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
电泳仪有电压不一定标志电泳槽已经接通，应该观察正负极 铂金丝是否有气泡出现，如负极的气泡（H2)比正极的(O2)多一 倍，表示电泳槽已接通电源，几分钟后可见指示剂溴酚蓝向正 极移动；
电泳过程中，EtBr向负极移动，与DNA的泳动方向相反，较 长时间的电泳会造成靠正极方向的凝胶中EB的含量降低，对于 含量较少的DNA fragment检测困难，可重新染色．
10×Loading Buffer (RNA电泳用) 组份浓度
配制量10 ml 配制方法 1. 称量下列试剂，置于10 ml离心管中。
2. 向离心管中加入约4 ml的DEPC处理水后，充分搅拌溶解。 3. 加入5 ml的甘油（Glycerol）后，充分混匀。 4. 用DEPC处理水定容至10 ml后，室温保存。
凝胶浓 度和
DNA 分子的 有效分 离范围
凝胶 PAG PAG PAG PAG PAG agarose agarose agarose agarose agarose agarose agarose
胶浓度（％） 3.5 5 8 12 20 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
线性DNA的大小 100-2000bp 80-500 60-400 40-200 6-100 5-60kb 1-20 0.8-10 0.5-7 0.4-6 0.2-4 0.1-3
上样注意事项
加样时枪头不要碰坏凝胶控壁，否则DNA带型不整齐，加样 前要用枪头吸打凝胶孔中的溶液以赶走样品空中的气泡；
每孔最大上样量取决于DNA样品片段的大小，数目及样品孔 形状与容量；
每孔最大上样容积决定于样品孔体积； DNA marker可在两侧的样品孔均加上．
电泳注意事项
电源接通前应该核实凝胶的方向是否放置正确；
Total RNA from Arabidopsis plants
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 M
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
2011.5.23
14 15 16 17
Total RNA from Arabidopsis Plants
荷，向正极移动，不同大小和构象的核酸
分子的电荷密度大致相同。在自由泳动时
各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。
所以采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支
持物，发挥分子筛的功能，使得大小和构
象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，
达到分离目的。
2、指示剂与染色剂 溴酚兰 二甲苯青 溴化乙锭
3、上样缓冲液（loading buffer,6*, 10*) 0.25%溴酚兰 0.25%二甲苯青 30% 甘油
单链DNA,RNA分子中常存在自身配对的双链区，也可嵌入EB分子，但嵌 入量少，因而荧光较低，其最低检出量为0.1ug.
(DNA用)
本制品是核酸电泳用Loading Buffer。向电泳样品溶液中加入1/6量即可 上样电泳。 本制品中含有色素溴酚蓝（Bromophenol Blue)、二甲苯腈蓝FF（Xylene Cyanol FF)，可以观察电泳的进行情况。溴酚蓝在琼脂糖凝胶（0.5% ~ 1.4%）中约与300 bp的双链线状DNA的迁移速度相同（在0.5×TBE中)， 而二甲苯腈蓝FF则与4 k bp的双链线状DNA的迁移速度相等。溴酚蓝与 二甲苯腈蓝FF在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率则随凝胶浓度的改变而不 同。 本缓冲液配制组成合理，缓冲液中不含核酸酶（DNase或RNase)，泳带 清晰，是实验室常用的凝胶电泳上样用缓冲液。一般来说，PCR反应后 的琼脂糖凝胶电泳以及短链DNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，常使用本制 品。
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617181920212223M
M12 3
4 5 67 8 9
2011-5-24
10 11 12