皂树皂苷QS21增强猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫小鼠效果评价
冯志新_猪支原体肺炎弱毒疫苗的局部免疫效果更好_柏丽华
46特写Feature 对话猪支原体肺炎，作为一种慢性呼吸道疾病，因导致生长速度减缓，出肉率降低，蚕食猪场利润，受到诸多一线人员和研究者的关注。
猪支原体肺炎疫苗的研究历史悠久，早在20世纪50年代，江苏省农科院的老一批研究专家就分离出来猪肺炎支原体强毒，并经过体内外致弱试验后，分离出了具有免疫原性的弱毒株。
然而，很多养猪人对支原体肺炎的免疫并不十分重视。
本刊记者对话江苏省农科院副研究员冯志新，探讨猪支原体肺炎在致病机理、疫苗研发和检测标准等方面存在的问题及解决方案。
《今日养猪业》：目前猪支原体肺炎在众多猪病中处于何种地位？冯志新：全球猪肺炎支原体的感染率达到70%～90%。
该病在我国众多猪病中虽然不是龙头地位，但从经济效益来看危害很大。
据不完全统计，每年猪呼吸道疾病引起的直接损失达到100亿元以上，而猪支原体肺炎又是猪呼吸道疾病的原发性病原，它的主要发病机制是通过破坏呼吸道上皮细胞的纤毛，导致病原菌长驱直入，可以随意侵入呼吸道，引起呼吸道疾病。
因此，支原体肺炎作为慢性消耗性疾病引起的经济损失也是不容小觑的。
《今日养猪业》：本病从20世纪出现至今已有近80年的时间，但感染率却越来越高，这是为什么？ 国内外防治该病都有哪些措施？冯志新：这跟本病的特性有关系，首先，支原体病原的分离就很困难，造成目前可用的疫苗毒株比较少；第二，该病长期在猪群中处于隐性感染状态，可引起宿主的免疫抑制，猪群的环境一旦改变出现应激等，此病便很快显现。
目前在国内外控制本病的方法有抗生素治疗和疫苗免疫。
需要注意的是，由于支原体猪支原体肺炎的主要免疫机制是黏膜免疫，只有药物或者疫苗在呼吸道达到一定浓度才能起到保护作用。
支原体肺炎弱毒疫苗相对于灭活疫苗，肺部局部免疫力更好。
冯志新：猪支原体肺炎弱毒疫苗的局部免疫效果更好文 | 柏丽华PIGS TODAYAugust 2016病原定植于呼吸道纤毛上，并不会进入血液，而药物代谢能真正到呼吸道表面的有效浓度很低。
几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究
几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究熊祺琰;范志鹏;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青【摘要】To achieve the intramuscular injection of the attenuated live vaccine against Mycoplasma hyopneumoniae .different adjuvants were applied to enhance the immunogenicity of the vaccine. Cellular and humoral immune response was detected after the immunization. The results showed that ISCOM-matrix.as well as the mixture of levamisole and chitosan,effectively increased the proliferation of PBMC and the level of serum IgG antibody. The mixture of levamisole and astragalus polysaccharide only enhanced the cellular immune response while the antibody level showed no change. No obvious enhancement was detected in saponin adjuvant group, These data would help the subsequent researches of the intramuscular inoculating method of this live vaccine.%为增强现有猪支原体肺炎活疫苗的免疫刺激能力以实现肌肉注射免疫,向现有活疫苗中添加几种不同佐剂,考察其经肌肉免疫后机体的免疫应答情况.结果表明,免疫刺激复合物基质佐剂和左旋咪唑+壳聚糖混合佐剂能有效激发细胞免疫应答和体液免疫应答；左旋咪唑+黄芪多糖混合佐剂能增强疫苗的细胞免疫刺激能力,而对体液免疫无作用；皂角素佐剂未显示明显的免疫增强效果.本试验结果为肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗的开发奠定了数据基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)010【总页数】6页(P163-168)【关键词】佐剂;活疫苗;猪支原体肺炎【作者】熊祺琰;范志鹏;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;山西农业大学研究生学院,山西太谷030801;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S851.3猪支原体肺炎（猪气喘病）在世界范围内广泛流行，是造成现代养猪业经济损失的重要疾病之一（Barbara等，2008；Sibila等，2009；Maes等，2008）；其主要症状是咳嗽和气喘，病变特征主要为肺脏的心叶、尖叶、膈叶产生对称性的“肉样”实变。
211088004_猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价
312023年40卷第3期 SWINE INDUSTRY SCIENCE 猪业科学主题策划F E A T U R E猪肺炎支原体是危害养猪业的重要病原，由于感染后临床症状不明显，多以慢性消耗性感染为主，猪场在进行疾病防控时往往关注度不够。
但是由于该病原能够长期破坏猪只呼吸道纤毛上皮细胞，导致其他呼吸道病原体频繁入侵，是最终形成感染情况复杂、经济损失巨大的猪呼吸道疾病综合征（PRDC ）的重要诱因。
因此，猪肺炎支原体的防控应该得到充分重视。
1 猪肺炎支原体的感染率猪肺炎支原体只感染猪只，该病原随着养猪业的发展分布于全球各地。
如果没有特意净化，几乎全世界所有的国家和猪场都有发现，并且有超过70%以上的猪群感染。
从美国国家猪病报告系统（SDRS ）2020—2022年的统计数据来看，猪场猪肺炎支原体整体阳性率在10%～30%左右，母猪场和育肥场阳性率差异不大。
阳性率随季节变化而波动，每年的9—12月是肺炎支原体阳性率较高的季节，如图1所示。
对于母猪来说，感染率随着胎次的增加而下降，头胎次占73%，2～4产次为42%，6～7产次为50%，而8～11产次为6% 。
因此，猪场的保育猪、育肥猪和后备种猪是防控猪支原体肺炎的关键群体。
2 猪肺炎支原体疫苗是否需要免疫关于猪肺炎支原体疫苗是否需猪肺炎支原体疫苗的免疫策略及效果评价张择扬 1，张 军 2（法国诗华动物保健公司，北京 100102）图1 不同日龄阶段猪群肺炎支原体阳性率变化曲线（SDRS 2020—2022）图2 不同感染压力的猪场免疫建议（D. Maes ）要免疫，一直是个有争议的话题。
赞同的观点认为猪肺炎支原体危害巨大，是其他呼吸道病原的“共犯”，要坚决堵死防疫漏洞，必须免疫。
而反对的观点则认为自己的猪场支原体的感染压力看上去不大，也不知道如何评估；另一方面认为就算投资进行猪肺炎支原体免疫，也不知道怎么去看免疫效果。
对于猪场支原体是否免疫，全球著名支原体专家Dominiek Maes 给出了他的答案，他认为这取决于猪群的感染压力。
猪肺炎支原体自家油乳苗免疫效果评价
猪肺炎支原体自家油乳苗免疫效果评价摘要试验采用已经分离得到的猪肺炎支原体，经扩大繁殖后制成油乳剂灭活疫苗，并采用ELISA抗体检测方法进行疫苗免疫学效果评价。
结果表明：自制疫苗2次采血抗体合格率100%（滴度达1∶16以上）；进口疫苗2次采血抗体合格率为100%；而国产疫苗在抗体滴度和维持时间上比较进口疫苗和自家苗差，第2次采血抗体合格率仅为20%。
自制疫苗的免疫接种效果明显优于国产疫苗，与进口疫苗相当。
AbstractUsing obtained pig mycoplasma，after the expand breeding oil emulsion inactivated vaccine was made，and performance evaluation for immunological vaccine was made by ELISA antibody detection method. Results showed that two blood antibody homemade vaccine were 100%（or above）of 1 drop degrees，Import vaccine twice for 100% qualified blood antibody，And homebred vaccine in antibody and maintain time compared with their seedlings imports of vaccine，second only to blood antibody rate was 20%.Homemade vaccine immunization vaccination was obviously superior to domestic and imported vaccine.Key wordsmycoplasmal pneumonia of swine；vaccine；preparation；immunological effect；evaluation猪支原体肺炎（Mycoplasmalpn eumoniaeof swine，MPS）又称猪地方流行性肺炎（Swineen zooticpneumoniae，SEP），我国常称之为猪喘气病或猪气喘病，是由猪肺炎支原（Myco-plasma hyopneumoniae.Mhp）引起的一种以接触性、高传染性、高发病率和低死亡率特点的慢性呼道传染病[1]。
猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较
目录猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1目录2猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较31 目的32 材料与方法32.1 材料32.2方法42.2.1动物分组说明42.2.2动物分组与试验操作概表52.2.3免疫62.2.4疫苗免疫后临床症状观察记录72.2.5疫苗免疫后血清抗体及分型检测72.2.6疫苗免疫后细胞免疫指标检测72.2.7疫苗免疫后黏膜免疫指标检测72.2.8攻毒7附录1 攻毒保护率计算9附录2 猪支原体肺炎发病猪临床症状评判标准10附录3 动物分组记录表11附录4 动物免疫记录表12附录5免疫后异常临床症状观察记录表13附录6 抗体检测记录表14附录7 淋巴细胞增殖试验结果16附录8 血象分析17附录9 T淋巴细胞分类计数18附录10 黏膜抗体检测记录表19附录11攻毒记录单20附录12特殊情况记录表21附录13 攻毒后临床症状观察记录表22附录14日增重记录24附录15 攻毒后肺部剖检记录26附录16攻毒后剖检记录28附录17 攻毒后肺部病理损伤记录30附录18 攻毒后肺部猪肺炎支原体抗原定量检测32猪支原体肺炎疫苗多菌株免疫效果比较1 目的猪支原体肺炎活疫苗AN306菌株与原168菌株的肺内注射免疫效果比较；猪支原体肺炎疫苗（天邦、吉林正业、辉瑞）免疫效果比较；2 材料与方法2.1 材料2.1.1待试的疫苗产品与试剂2.1.1.1 疫苗A.猪支原体肺炎活疫苗AN306株F321，由江苏省农业科学院兽医所研制，规格为2×107CCU/瓶（2ml冻干），批号为20140325。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
B.猪支原体肺炎活疫苗（168株），由南京天邦生物科技有限公司提供，规格为50头份/瓶，批号为139078-1。
有效期：______。
PCR鉴定:Mhp_____，Mhr_______。
C.猪支原体肺炎活疫苗（乳兔继代株），由吉林正业生物科技有限公司提供，规格为4头份/瓶，批号为2014002。
3种不同类型佐剂的猪支原体肺炎灭活疫苗免疫效果的研究_毛春玲_刘洪斌_丁国杰_张 (1)
猪支原体肺炎（Mycoplasma Pneumonia of Swine， MPS），又称 猪 喘 气 病 、猪 地 方 流 行 性 肺 炎（Enzootic Pneumonia of pig），是造成当今养猪业经济损失的最 重要的疾病之一，其病原为猪肺炎支原体，通过破坏 猪呼吸道的黏液纤毛系统使呼吸道过滤杂质与病原 的功能消失。当猪感染后，表现为发育迟缓，饲料转 化率降低且上市期推迟，并容易导致其他呼吸道病原 继发感染，当继发感染严重时，可造成猪大量死亡[1]。
1.1 佐剂及主要试剂 爱菲金佐剂购自美国杜邦公司；白油购自索诺
邦公司；氢氧化铝胶由哈药集团生物疫苗有限公司
７３
科 技 与 实 践 ·Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ
２０１４ 年 第 ５０ 卷 第 １６ 期
自制。猪肺炎支原体 ELISA 抗体检测试剂盒，由美 国 IDEXX 公司生产。 1.2 试验动物
２０１４ 年 第 ５０ 卷 第 １６ 期
Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ·科 技 与 实 践
3 种不同类型佐剂的猪支原体肺炎灭活 疫苗免疫效果的研究
毛春玲，刘洪斌，丁国杰，张智明，王全杰，窦海艳，孟福强 （哈药集团生物疫苗有限公司，黑龙江哈尔滨 150069）
摘 要：为对比使用爱菲金佐剂、白油佐剂以及氢氧化铝胶佐剂制备的猪肺炎支原体灭活疫苗对猪的免疫效果，
应 用 SPSS 统 计 软 件 对 试 验 数 据 进 行 显 著 性 分析。
2 结果
2.1 不同组疫苗免疫猪后不良反应观察结果 接种疫苗后 21 d 内，注意观察、记录疫苗的不
良反应情况，结果见表 1。
表 1 不同类型佐剂疫苗安全性试验结果
疫苗 观察天数/d 无反应
猪肺炎支原体自家油乳苗免疫效果评价
ｉ ｎ ｌｇ ａ ａｃｎ ａ ｄｅｂ ＬＳ ａ ｔ ｏ ｙｄ ｔｃｉｎｍｅｈｄ Ｒ ｓｈ ｈ ｗ ｄ ｔａ ｏｂｏｄａ ｔ ｏｙｈ ｍｅ ｄ ａｃｎ ｅｅ １０ （ｒ ｍｍｕ ｏｏｉｌ ｖｃ ｉｅｗ ｓｍａ ｙＥ ＩＡ ｎｉ ｄ ｅｅｔ ｔｏ ． ｅｕ ｓｓｏ ｅ ｈ ｔｗ ｌｏ ｎｉ ｄ ｏ ｍａｅｖｃ ｉｅｗ ｒ ０ ％ ｏ ｃ ｂ ｏ ｔ ｂ
Ａｂ ｔａｃ Ｕｓｎｇｏ ｔｉｅ ｉ ｃ ｐａ ｍａ，ｆｅ ｈ ｘ ｎ ｅ ｄｎ ｉｅ ｌｉｎｉ ａ ｔ ａｅ ａ ｃｎ ｓｍａ ｅ， ｎ ｅｆ ｒ ｎ ｅｅ ａｕ ｏ ｏ ｓｒ ｔ ｉ ｂ ａｎ ｄ ｐｇｍｙ ｏ ｌｓ ａｔｒｔｅｅ ｐａ ｄｂｒｅ ｉｇｏｌ ｍｕ ｓｏ ｎ ｃｉ ｔｄｖ ｃ ｉｅｗａ ｄ ａ ｄｐ ｒｏｍａ ｃ ｖ ￣ｉｎｆｒ ｖ ｌ
关键词 猪 肺 炎 支 原 体 ； 苗 ； 备 ； 疫 效 果 ； 价 疫 制 免 评
中图 分 类 号
￥ ５ ．８ ．； ８ ５ ８ ８２ ６３ ￥ ５
文 献标识 码
Ａ
文章 编号Байду номын сангаас
１０ — ７ ９ ２ １ ）９ ０ ５ — ３ ０ ７ ５ ３ （ ０ １０ — ３ ６ ０
Ｉ ｍｕ ｏｏ ｙ Ｅｆ氐 Ｅｖ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｉ ｅ Ｍ ｙ ｏ ｌ ｓ ｔ ｖ ｃ ｉ ｅ ｍ ｎ ｌｇ ｆ ａ ｕ ｔ ｆ Ｐｏ ｃ ｎ ｏ ｃ ｐ ａ ｍａ Ａｕ ｏ ａ ｃｎ
ａ ｏｅ ｏ ｄｏ ｅｒｅ ． ｏｔ ａｃｎ ｉｅｆｒ１０ ｑ ａｉｅ ｌ ｄａ ｔ ｏｙ， ｄｈ ｍｅ ｒｄｖｃｉｅｉ ｎｉｏ ｙａｄｍ ｉｔｉ ｍｅｃｍｐ ｒｄｗ ｔ ｂｖ ）ｆ ｒｐｄｇｅｓ Ｉ ｒｖ ｃｉｅｔ ｃ ０ ％ ｕ ｆ ｄｂｏ ｎｉ ｄ Ａｎ ｏ ｂｅ ａ ｃｎ ａ ｔ ｄ ｎ ａｎａｎｔ ｏ ａｅ ｉ １ ｍｐ ｗ ｏ ｌｉ ｏ ｂ ｎ ｂ ｉ ｈ
猪支原体肺炎活疫苗佐剂体内外促进细胞免疫刺激能力的研究
猪支原体肺炎活疫苗佐剂体内外促进细胞免疫刺激能力的研究熊祺琰;董璐;冯志新;刘茂军;邵国青【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2012(028)006【摘要】为增强猪支原体肺炎活疫苗在肌肉注射免疫时的细胞免疫刺激能力,对7种猪支原体肺炎活疫苗可用佐剂的细胞免疫应答促进作用进行了体外及体内试验评价.7种佐剂中除皂角素外,其余6种对活疫苗活力皆无明显影响.用这6种佐剂体外刺激淋巴细胞,发现左旋咪唑、免疫刺激复合物基质、黄芪多糖和胞壁酰二肽可以在体外单独刺激或协同刀豆蛋白刺激小鼠脾淋巴细胞及猪外周血淋巴细胞增殖,其中免疫刺激复合物基质仅需ng/ml级别浓度即可起效,而壳聚糖和卡波姆不能在体外刺激细胞增殖.选用其中5种佐剂与活疫苗配合肌肉注射免疫小鼠,发现左旋咪唑、免疫刺激复合物基质、黄芪多糖、卡波姆可以显著增加机体针对猪肺炎支原体抗原的细胞免疫应答.结果表明,利用适当佐剂可以实现猪支原体肺炎活疫苗在肌肉注射条件下对机体细胞免疫应答的有效刺激.【总页数】7页(P1354-1360)【作者】熊祺琰;董璐;冯志新;刘茂军;邵国青【作者单位】江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014【正文语种】中文【中图分类】S852.62【相关文献】1.免疫刺激复合物基质为佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫效果评价 [J], 熊祺琰;王占伟;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青2.草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究：疫苗的稳定性及佐剂和加强... [J], 杨先乐;左文功3.几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究 [J], 熊祺琰;范志鹏;甘源;孔猛;冯志新;刘茂军;邵国青4.猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究 [J], 韦艳娜;熊祺琰;董璐;冯志新;邵国青5.猪支原体肺炎灭活疫苗佐剂筛选研究 [J], 朱巧艳;胡东波;翟路峰;张国良;孙哲;李兴国;廖永洪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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皂树皂苷QS21增强猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫小鼠效果评价ZHANG Zhen-zhen;WEI Yan-na;WANG Jia;YU Yan-fei;FENG Zhi-xin;SHAO Guo-qing;XIONG Qi-yan【摘要】为提高猪支原体肺炎活疫苗的滴鼻免疫效果,以猪支原体肺炎(168株)活疫苗为抗原,以QS21为免疫佐剂混合后滴鼻免疫小鼠,ELISA法检测免疫效果,包括血清和支气管肺泡灌洗液中抗原特异性抗体水平,并测定了Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-4和Th17型细胞因子IL-17的分泌情况.结果表明,QS21能激活黏膜和全身性的体液免疫,升高血清和支气管肺泡灌洗液中IgG,IgG1、IgG2a抗体含量,并能提高支气管肺泡灌洗液中黏膜免疫抗体sIgA的含量.QS21还能显著增加支气管肺泡灌洗液中IL-4、IFN-γ和IL-17的分泌,激活Th1、Th2和Th17型细胞免疫应答.以上结果表明QS21能有效激活免疫系统,提示QS21可作为猪肺炎支原体活疫苗的候选黏膜佐剂.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2018(052)012【总页数】6页(P24-29)【关键词】QS21;佐剂;滴鼻;猪支原体肺炎活疫苗【作者】ZHANG Zhen-zhen;WEI Yan-na;WANG Jia;YU Yan-fei;FENG Zhi-xin;SHAO Guo-qing;XIONG Qi-yan【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪支原体肺炎，又称作猪气喘病是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)感染引起的一种慢性呼吸道传染病，具有高传染性和高致病性，同时由于感染后造成生产性能降低，给养猪业带来巨大的损失[1]。
目前，国内外主要通过疫苗免疫来防控猪支原体肺炎[2-3]。
猪支原体肺炎(168株)活疫苗临床上通过肺内免疫具有很好的免疫保护效果。
为了进一步拓展猪支原体肺炎(168株)活疫苗的临床应用，目前主要围绕猪支原体肺炎(168株)活疫苗新的免疫途径进行开发。
前期利用猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫试验猪，具有一定的免疫保护效果，但其免疫效果仍低于肺内免疫组[4]。
因此需要配合佐剂提高猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫效果。
现代中药化学研究表明中药包含的皂苷[5]、多糖[6]等成分具有良好的免疫调节作用，可以被开发成免疫佐剂。
QS21是南美皂树(Quillaja Saponaria Molina)树皮中分离纯化到的活性皂苷成分，其主要化学成分为酰化三萜糖甙，分子量为1990 Da[7]。
以QS21作为主要成分的疫苗佐剂如AS01、AS04已批准应用于人用疫苗，能显著增强疫苗的保护效率[8]。
为了有效提高猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫效果，研究拟利用QS21佐剂联合猪支原体肺炎(168株)活疫苗滴鼻免疫小鼠，探讨其免疫效果。
1 材料与方法1.1 主要试剂猪支原体肺炎(168株)活疫苗，批号20170518，由农业部兽用生物制品工程技术重点实验室制备提供；QS21(商品名：VSP)购自赛德奥生物科技(北京)有限公司；小鼠IL-4 ELISA 检测试剂盒、小鼠IL-17 ELISA检测试剂盒、小鼠IFN-γ EL ISA 检测试剂盒购自武汉基因美生物科技有限公司。
小鼠IgG抗体购自武汉博士德生物公司。
小鼠IgA、IgG1、IgG2a抗体购自BETHYL公司。
1.2 动物分组及免疫 BALB/c雌性小鼠，购自扬州大学医学比较中心。
随机分成3组，分别为QS21+疫苗组、疫苗组和对照组。
QS21+疫苗组滴鼻免疫QS21(6.25 μg/只)和猪支原体肺炎(168株)活疫苗(107CCU/只)；疫苗组滴鼻免疫猪支原体肺炎(168株)活疫苗(107CCU/只)；对照组仅滴鼻同体积的PBS溶液。
首免14 d后加强免疫1次，免疫剂量与首免一致。
1.3 抗体检测在末次免疫后第14天(D14)、第21天(D21)、第28天(D28)和第42天(D42)分别对小鼠进行眼框采血，每组8只，1000 g离心15 min，分离血清，检测小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。
D28和D42分别取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)，每组5只，300 g离心10 min，收集上清，检测其中IgA、IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。
1.4 细胞因子检测 D28和D42天收集小鼠血清和BALF，离心后收集上清。
根据ELISA 试剂盒说明检测血清和BALF 中IL-4、IL-17和IFN-γ的含量。
1.5 数据分析数据采用Graphpad软件进行统计学分析，结果以均数±标准差表示，组间比较采用双侧t检验(two-tailed unpaired t test)分析，P<0.05表示有显著性差异。
2 结果与分析2.1 QS21联合疫苗免疫对小鼠血清中IgG抗体及亚型的影响 QS21与猪支原体肺炎(168株)活疫苗共同滴鼻免疫小鼠，不同时间点眼眶取血并分离血清，利用ELISA法检测小鼠血清中猪支原体肺炎(168株)活疫苗特异性IgG抗体水平。
结果显示(图1)，对照组不能诱导产生活疫苗特异性IgG抗体；末次免疫14 d后，疫苗组能产生较高的活疫苗特异性IgG抗体，与对照组相比有显著性差异(P<0.01)；QS21+疫苗组能够显著提高血清中活疫苗特异性IgG抗体水平(P<0.05)。
同时，检测了QS21对抗体亚型IgG1和IgG2a的影响，结果显示，末次免疫28 d后，QS21能进一步提高活疫苗诱导的IgG1和IgG2a抗体水平，提示QS21能激活全身性体液免疫。
*表示与对照组存在显著差异 (P<0.05)，**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，#表示与疫苗组存在显著差异 (P<0.05)The data labeled * was significant compared with control group (P<0.05). The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled # was significant compared with vaccine group (P<0.05).图1 ELISA检测小鼠免疫后血清抗体水平Fig 1 ELISA detection of antibodies in mice serum post immunization2.2 QS21联合疫苗免疫对小鼠BALF中IgG及亚型和sIgA抗体的影响进一步检测QS21与猪支原体肺炎(168株)活疫苗共同滴鼻免疫小鼠后BALF中IgG抗体及亚型的变化，结果显示，与疫苗组相比，末次免疫28 d后，QS21+疫苗组能够显著提高血清中活疫苗特异性IgG和IgG1的抗体水平(图2)。
sIgA是黏膜免疫中重要的抗体类型，单独疫苗组仅在D42检测到sIgA抗体的升高；而与疫苗组相比，QS21+疫苗组能显著增强sIgA抗体水平(P<0.05)，表明QS21与疫苗共同滴鼻能显著性增强小鼠的黏膜免疫反应。
以上结果表明QS21诱导局部体液免疫。
2.3 QS21联合疫苗免疫对小鼠血清和BALF中细胞因子的影响 IFN-γ是Th1型细胞因子的典型代表，IL-4是Th2型细胞因子的典型代表，IL-17是Th17型细胞因子的典型代表。
通过ELISA法检测了小鼠血清和BALF中IFN-γ、IL-4、IL-17的水平。
结果显示，疫苗组的血清中IFN-γ、IL-4和IL-17含量显著高于对照组(P<0.01，P<0.05)，而QS21+疫苗组能进一步提升血清中IL-17的含量(P<0.05)，但对IFN-γ和IL-4的含量无显著影响(图3)。
*表示与对照组存在显著差异 (P<0.05)，**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，#表示与疫苗组存在显著差异 (P<0.05)。
The data labeled * was significant compared with control group (P<0.05). The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled # was significant compared with vaccine group (P<0.05).图2 ELISA检测小鼠免疫后BALF抗体水平Fig 2 ELISA detection of antibodies in mice BALF post immunization*表示与对照组存在显著差异 (P<0.05)，**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，#表示与疫苗组存在显著差异 (P<0.05)。
The data labeled * was significant compared with control group (P<0.05). The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled # was significant compared with vaccine group (P<0.05).图3 ELISA检测小鼠免疫后血清IFN-γ、IL-4和IL-17水平Fig 3 ELISA detection of IFN-γ、IL-4 and IL-17 levels in mice serum post immunization在BALF中(图4)，与对照组相比，疫苗组未能升高IFN-γ、IL-4和IL-17含量(P>0.05)，而加入QS21佐剂之后，BALF中IFN-γ、IL-4和IL-17的含量极显著升高(P<0.01)。
以上结果表明QS21可以诱导细胞免疫应答。
**表示与对照组存在极显著差异 (P<0.01)，##表示与疫苗组存在极显著差异(P<0.01)。
The data labeled ** was very significant compared with control group (P<0.01). The data labeled ## was very significant compared with control group (P<0.01).图4 ELISA检测小鼠免疫后BALF中 IFN-γ、IL-4和IL-17水平Fig 4 ELISA detection of IFN-γ、IL-4 and IL-17 levels in mice BALF post immunization3 讨论与结论初始CD4+ T淋巴细胞在机体抗菌和抗病毒免疫调节过程中发挥重要作用，其分化方向及各类型细胞比例能够影响机体的抗菌和抗病毒效应。