临床检验仪器——紫外-可见分光光度计
临床检验仪器第四章紫外可见分光光度计习题
第四章紫外-可分光光度计一、名词解释1.分光光度计：是指能够从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器。
2.吸收光谱：不同的物质会吸收不同波长的光。
改变入射光的波长，并依次记录物质对不同波长光的吸收程度，就得到该物质的吸收光谱。
3.液浓度的乘积成正比。
4.摩尔吸光系数（ε）和比吸光系数（a）：摩尔吸光系数ε：摩尔吸光系数表示在一定波长下测得的液层厚度为 1cm, 溶液浓度c为1mol/L时的稀溶液吸光度值。
吸光系数a与入射光波长、溶液温度、溶剂性质及吸收物质的性质等多种因素有关。
当其它因素固定不变时，吸光系数只与吸收物质的性质有关，可作为该物质吸光能力大小的特征数据。
5.颜色互补光：如果将两种颜色的单色光按一定的强度比例混合，可以成为白光，这样的两种光互称为互补光。
6.单色器：将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置，是分光光度计的关键部件。
主要由入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜组成。
7.吸收池：又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测溶液的器件，同时也决定着透光液层厚度、特定波长光的透光度等多种参数，应具有良好的透光度和较强的耐腐蚀性。
8.光电管：是利用碱金属的外光电效应制成的光电装换元件，按电极结构不同可分为中心阳极式、中心阴极式和平行平板式；按管内充气与否又可分为真空光电管与充气光电管。
按使用范围不同分为紫敏光电管和红敏光电管两种。
9.光电倍增管：是在光电管的阴极和阳极之间增加了若干个倍增电极构成。
光电倍增管大大增加了光照的灵敏度。
10.波长准确度：指仪器波长指示器上所示波长值与仪器此时实际输出的波长值之间的符合程度。
可用二者之差来衡量分光光度计的准确性。
11.波长重复性：是指在对同一个吸收带或发射线进行多次测量时，峰值波长测量结果的一致程度。
通常取测量结果的最大值与最小值之差来作为衡量分光光度计的准确性指标之一。
12.光度准确度：是指仪器在吸收峰上读出的透射率或吸光度与已知真实透射率或吸光度之间的偏差。
UV757CRT 紫外可见分光光度计的说明要点
UV757CRT 紫外可见分光光度计的说明
一．应用
UV757 CRT紫外可见分光光度计能在紫外、可见光谱区域内对样品物质作定性和定量的分析。
该产品可广泛应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，使理化实验室常用的分析仪器之一。
二．主机功能
采用微机测量系统，T-A转换精确，自动调整0%（T）和调整100%（T），具有GOTOλ，自动8联样品架，自动扣除比色皿误差，浓度多点标定，斜率和截距设置等功能，具有RS232接口和并行打印口（打印机专用，另行选配）。
三．联机功能
通过RS232串行接口，可利用上层软件作全波长扫描，时间扫描，浓度回归方程（1次、2次、3次），多波长测试，并大大扩展测试功能（除主机功能外）。
四．技术指标
波长范围：200nm～1000nm
光源：钨卤素灯12V20W（进口） DD2.5氘灯（进口）
接收元件：光电池
波长最大允许误差：±0.5nm
波长重复性：≤0.2nm
光谱带宽：2nm
杂散光：≤0.3%（T）（在220nm处和360nm处，以NaNO2测定）
透射比范围：0.0%（T）～200.0% (T）
吸光度范围：-0.301（A）～4.000(A)
透射比最大允许误差：±0.5%（T）（以NBS930D测定）
透射比重复性：≤0.2%（T）
噪声：100%噪声≤0.5%（T） 0%噪声≤0.2%(T)
稳定性：≤0.004A/30min
电源电压：AC220V±22V 50Hz±1Hz。
分光光度计说明
722可见分光光度计使用说明书1．仪器的主要用途722可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的的分析。
仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一2．仪器的工作环境2．1仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃~35℃，相对湿度不超过85%。
2．2使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。
2．3 室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。
2．4 电扇不宜直接向仪器吹向，以免影响仪器的正常使用。
2．5 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
2．6供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。
推荐使用交流稳压电源，以加强仪器的抗干扰性能。
使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。
2．7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使用。
3 仪器的主要技术指标及规格3．1 光学系统：单束光、衍射光栅。
3．2 波长范围：330nm~800nm。
3．3 光源：钨卤素灯12V30W。
3．4 接收元件：光电池。
3．5 波长准确度：≤±2nm。
3．6 波长重复性：1nm。
3．7 光谱带宽：＜6nm。
3．8 杂散光：0.7%τ（在360nm处）。
3．9 透射比测量范围：0.0%τ~100.0%τ。
3．10 吸光度测量范围：0.000A~1.999A。
3．11 浓度直读范围：0000~1999。
3．12 透射比准确度：±1.0%τ。
3．13 透射比重复性：0.5%τ。
3．14 噪声：≤0.3%τ。
3．15 稳定性：亮电流≤0.5%τ/3min，暗电流≤0.2%τ/3min。
3．16 电源：AC220V±22V，50Hz±1Hz。
3．17 外型尺寸：570mm×400mm×260mm。
紫外可见分光光度计的在临床检验中发展和应用
紫外可见分光光度计及其在临床检验中的发展和应用摘要：紫外可见分光光度计是一类很重要的分析仪器，无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域，还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理部门，紫外可见分光光度计都有广泛而重要的应用。
紫外可见分光光度计有着较长的历史，其主要理论框架早已建立，制作技术相对成熟。
在临床检验中的应用更是广泛，现在国内几乎每个乡镇医院的检验科都有紫外可见分光光度计，构成紫外可见分光光度计的光、机、电、算等任何一方面的新技术都可能再推动紫外可见分光光度计整体性能的进步。
在追求准确、快速、可靠的同时，小型化、智能化、在线化、网络化成为了现代紫外可见分光光度计新的增长点。
关键词：紫外可见分光光度计，检验医学l9世纪50年代，首先出现了用千目观比色法的纳氏(Nessler)比色管，不久有杜氏(Duboscq)比色计，后者一直沿用到本世的40年代。
1911年，使用硒光电池的Berg比色计制成。
而这种光电比色计是分光光度计的雏形和基础。
本世纪3O年代看，由于秉灯、氢灯和各种棱镜，光学器材和电学器材的发展，美国Beckman公司的第～台分光光度计终于在1941年问世。
至60年代，紫外可见光分光光度计(UV—V 计)基本上取代了光电比色计 1957年，美国Technicon 公司按照Skeggs医生的方案，推出了世界上第一台自动化的临床生化分析仪。
60年代以后．各种自动化分析仪层出不穷。
特别是70年代起，各种分光光度计与计算机联姻，明显地扩大了仪器功能现在，分光光度计作为综台光学、电学(尤其是计算机技术)和精密机械学的发展和应用，已广泛应用于医学、食品、工业和农业等许多领域。
其中以uV—V计系列彰响最广、应用最普遍，并且还是其他分光光度计(如原子吸收分光光度计)的基础。
紫外可见分光光度法具有仪器价格低廉适用性广泛，尤其是采用微机控制以来，该技术得到了突飞猛进的发展，成为检验医学中必备的一个常规仪器，本文将重点介绍uv—v 计的原理，结构，特点及其在临床检验医学中的发展和应用。
紫外可见分光光度计基本知识
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测定方法
一、 单组分定量方法
单组分是指样品溶液中含有一种组 分，或者是在混合物溶液中待测组分的 吸收峰与其他共有物质的吸收峰无重叠。
其定量方法包括校准曲线法、标准对 比法和吸收系数法。
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1 校准曲线法
方法：配制一系列不同含量的标准溶液，选 用适宜的参比，在相同的条件下，测定系列 标准溶液的吸光度，作A-c曲线，即标准曲 线，也可用最小二乘数处理，得线性回归方 程。
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2. 溶剂 注意如下几点：
（1）尽量选用低极性溶剂； （2）能很好地溶解被测物，并且形成的溶 液具有良好的化学和光化学稳定性； （3）溶剂在样品的吸收光谱区无明显吸收。
3. pH值
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朗伯-比尔定律 一、吸光度和透光度
设入射光强度为I0，吸收光强度为Ia,透 射光强度为 It，反射光强度为Ir，则
A= a cl
a的单位为L/(g.cm)
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摩尔吸光系数
当l以cm，c以mol/L为单位，κ称为 摩尔吸光系数，用 ε表示。
ε的单位为L/mol.cm，它表示物质的 浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时，溶液 的吸光度。
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比吸光系数
比吸光系数是指百分含量为1%， l为1cm
时的吸光度值，用
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1.单波长单光束分光光度计
✓ 特点： • 使用时来回拉
动吸收池 →移动误差
• 对光源要求高 • 比色池配对
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2.单波长双光束分光光度计
✓ 特点：
• 不用拉动吸 收池，可以 减小移动误 差
• 对光源要求 不高
紫外、荧光分光光度计说明
一、设备名称：RF-5301PC荧光分光光度计；二、使用原理1、荧光分光光度计由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。
荧光是光致发光，任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。
荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。
荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。
由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。
有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。
在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
利用某些物质受激发出的荧光，其光强度与该物质的含量成一定函数关系的性质而制成的。
三、组成结构光源、光件、样品池、检测器、数据处理器1、荧光分光光度计图RF5301PC荧光分光光度计主要是由激发光源、激发单色器、样品池、发射单色器、检测器以及数据处理系统几部分组成1. 光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm 范围内强度几乎相等，故较常用。
2．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的激发光谱。
3．发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。
筛选出特定的发射光谱。
4．样品室：通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。
测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。
UV-1200型紫外可见分光光度计使用说明书
仪电752N紫外可见分光光度计使用说明书
752N紫外可见分光光度计使用说明书目次1仪器的主要用途---------------------------------------------1 2仪器的工作环境---------------------------------------------1 3仪器的主要技术指标及规格-----------------------------------1 4仪器的工作原理---------------------------------------------2 5仪器的光学原理---------------------------------------------2 6仪器的安装、使用与维护-------------------------------------3 7仪器的调校和故障分析---------------------------------------5 8仪器的成套性-----------------------------------------------6 9仪器的保管及免费修理期限-----------------------------------7沪制01040048产品执行标准的编号：Q/YXLZ51-20081仪器的主要用途752N紫外可见分光光度计能在紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的分析。
该仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门，是理化实验室常用的分析仪器之一。
2仪器的工作环境2.1仪器应安放在干燥的房间内，使用温度为5℃～35℃，相对湿度不超过85%。
2.2使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。
2.3室内照明不宜太强，且避免直射日光的照射。
2.4电扇不宜直接向仪器吹风，以免影响仪器的正常使用。
2.5尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。
2.6供给仪器的电源电压为AC220V±22V，频率为50Hz±1Hz，并必须装有良好的接地线。
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紫外-可见分光光度计
一、概述
1、分光光度计：指能够从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器。
根据其使用光的波长范围不同，分光光度计又可分为紫外分光光度计、可见光分光光度计、红外分光光度计和全波段分光光度计。
现代常用的分光光度计通常将紫外分光光度计和可见光分光光度计合并在一起，称为紫外-可见分光光度计。
2、吸收光谱（absorption spectrum）：不同的物质会吸收不同波长的光。
改变入射光的波长，并依次记录物质对不同波长光的吸收程度，就得到该物质的吸收光谱。
二、工作原理
1、每一种物质都有其特定的吸收光谱，因此可根据物质的吸收光谱来分析物质的结构、含量和纯度，这就是吸收光谱分析法的理论基础。
2、光的吸收定律（朗伯-比尔定律）：当用一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度与液层厚度b及溶液浓度c的乘积成正比。
3、朗伯-比尔定律适用的条件是：
①入射光为单色光。
波长范围越大，单色光纯度越低，对朗伯-比耳定律的偏离就越大。
②溶液浓度不能过大。
在一定浓度范围内的溶液中，邻近分子的存在并不改变每一给定分子的特性，即分子间互不干扰。
当溶液浓度很大时，由于溶液分子的相互干扰，该定律不再成立。
三、基本结构
（一）光源（light source）：提供入射光的装置。
1、不同类型的分光光度计根据需要配有不同的光源，但对光源有两个基本要求：
①在所需波长范围的光谱区域内发射连续光谱；
②有足够的辐射强度并能长时间稳定。
（二）单色器（monochromator）：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置，是分光光度计的关键部件。
1、主要包括：入射狭缝、色散元件，包括棱镜和光栅、准直镜、出射狭缝组成。
（三）吸收池（absorption cell）：又称为比色皿、比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测溶液的器件。
同时也决定着透光液层厚度、特定波长光的透光度等多种参数，应具有良好的透光性和较强的耐腐蚀性。
1、可见光范围内：用无色光学玻璃或塑料制作；
2、紫外光范围内：需用能透紫外线的石英玻璃或蓝宝石制作。
（四）检测器：把光信号转换为电信号的装置称为检测器，又称为光电转换器。
1、常用的检测器有：光电管、光电倍增管、光电二极管阵列。
（五）信号显示系统：是把放大的信号以适当的方式显示或记录下来的装置。
1、常用的信号显示装置有：指针显示、LD数字显示、VGA 屏幕显示、计算机显示。
分类
紫外-可见分光光度计按其光学系统分可分为
（1）单波长分光光度计：
①单光束单波长分光光度计
②双光束单波长分光光度计
（2）双波长分光光度计
2、单光束分光光度计特点
①单光束光路，从光源到试样至接收器只有一个光通道，使用中依次对参考样品和待测试样进行测定；
②只有一个色散元件，工作波长范围较窄；
③通常采用直接接收放大显示的简单电子系统，用电表或数字显示；
④结构简单、附件少、功能范围小，不能做特殊试样测定。
3、双光束分光光度计特点
①从光源到检测器有试样光路和参考光路两条通路，可同时对检测样品和参考样品进行测定，直接获得检测数据；
②一般采用两个光栅或棱镜加光栅的双单色器，能有效地提高分辨率和降低杂散光；
③可装备各种附件，光、电、机紧密结合，功能范围较宽；
④大大简化测定程序，可以进行波长自动扫描。
4、双波长分光光度计特点
①从同一光源发出的光分为两束，分别经两个单色器分光后得到两束不同波长（λ1，λ2）的单色光，经切光器使两束光以一定频率交替照射同一样品，然后经过检测器显示出两个波长下的吸光度差值（ΔA=Aλ1-Aλ2）；
②双波长分光光度计不用参比溶液，只用一个待测溶液，能较好的解决由于非特征吸收信号影响而带来的误差，大大提高检测的准确度。