微生物平板划线法共18页文档
平板划线法
实验三菌种的分离纯化技术——平板划线法实验目的了解平板划线分离纯种的原理，并熟练掌握该操作法。
实验内容1．培养基平板的制备。
2．用平板划线分离法分离混菌。
实验原理平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。
为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。
实验器材大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合菌悬液牛肉膏蛋白胨培养基无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。
2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。
如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中)。
左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。
3．作分区标记在皿底将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等的区域。
各区之间的交角应为120℃左右（平板转动一定角度约60℃），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。
平板划线分离_实验六平板划线法分离菌种
平板划线分离_实验六平板划线法分离菌种平板划线法分离菌种一、实验目的1、了解平板划线法分离菌种的基本原理2、练习平板划线法分离菌种的基本操作，掌握无菌操作技术二、实验原理平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。
一般是将混杂在一起的不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。
通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。
实际上同种微生物数个细胞在一起通过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，特别是在菌种鉴定等工作中，必须对实验菌种的单菌落进行多次划线分离，才可获得可靠的纯种。
平板划线分离对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采用稀释分离法进行菌种的分离纯化。
具体的划线形式有多种，这里仅介绍一种经过长期并证明可获得良好实验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不同的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。
由此可知，这4个区的面积安排应做到DCBA。
鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。
这样的培养基称之为鉴别培养基。
例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。
（参考GB4789.38-2012食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数）其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以鉴别肠道病原菌及其他杂菌。
伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，由于细菌带正电荷，所以被伊红着色。
在大肠埃希氏菌中因为伊红与美蓝结合，所以菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且具有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝与伊红结合，所以菌落为淡紫色。
微生物平板划线法
3
细菌接种方法
常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种 法 菌种 培养 基 葡萄球菌和大 肠杆菌的混合 菌液 普通琼脂平板
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法 大肠杆菌培养 物枯草杆菌培 养物 普通肉汤 培养基
2
培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植 物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若 要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行 分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当 细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养 基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌 需要不同的培养基进行培养。
培养基的种类
平板划线法——接种方法
（三）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液 的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试 管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中， 取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管 管口及试管塞再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管 塞，放至原来的位置。
平板划线法——接种方法
（一）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种 的菌名、接种者姓名、日期等。
平板划线法——接种方法
（二）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环 ，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接 种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延 至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然 后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随 后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接 种环移开火焰，待其冷却。
平板划线法——接种方法
（四）分离划线接种细菌（四区接种法） （1）左手手掌持琼脂平板培养基，大 拇指与中指轻轻将平皿盖子拿起，右手持接 种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌 薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线 时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以 腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。
菌种的分离纯化技术——平板划线法
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,
第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区) 是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的 单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积 的分配应是D＞C＞B＞A。
实验目的
态结构等特征的子细胞的群落。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每 个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养
温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
菌苔：细菌在固体培养基接种线上由母细胞繁 殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征 的细菌群落，是许多菌落连成一片形成的 细菌在斜面培养基接种线上长成的一片密集的 细菌群落，不同属种细菌的菌苔形态是不同的
了解平板划线分离纯种的原理，并熟练 掌握该操作法。
实验器材
Βιβλιοθήκη 菌悬液 牛肉膏蛋白胨培养基 无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤
1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水 浴中加热至融化。 2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操 作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
实验原理平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞经培养后生长繁殖成单菌落通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种
平板划线技术
王伟青
名词的认识：
菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固 体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形
《平板划线试验》课件
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接种细菌：用无菌接种环蘸取细菌 培养物，在平板上均匀涂抹
观察结果：培养结束后，观察细菌 的生长情况，记录结果
划线分离
准备平板：选择合 适的平板，如琼脂 平板、培养基平板 等
划线：使用无菌操 作，将菌液或菌落 均匀地涂布在平板 上
干燥：将涂布好的 平板放在干燥箱中 干燥，使菌液或菌 落干燥
划线深度过浅或过深都会影响实验结 果，应保持适中的深度
划线角度过大或过小都会影响实验结 果，应保持适中的角度
划线过程中应避免划破平板，以免影 响实验结果
划线过程中应避免划破平板，以免影 响实验结果
THANK YOU
汇报人：
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平板划线试验
汇报人：
目录
PART One
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PART Two
平板划线试验简介
PART Three
平板划线试验的步 骤
PART Five
平板划线试验的注 意事项
PART Four
平板划线试验的应 用
单击添加章节标题
平板划线试验简介
平板划线试验的定义
平板划线试验是一 种微生物分离和纯 化的方法
实验结束后，应及时清理实 验台和设备，保持实验室整 洁
实验结果应及时分析，包括 菌落形态、生长情况、抗药
性等
实验报告应及时撰写，包括 实验目的、方法、结果、讨
论等
影响实验结果的因素及解决方法
平板划线试验的准确性受划线速度、 划线深度、划线角度等因素的影响
划线速度过快或过慢都会影响实验结 果，应保持适中的速度
特性
菌落计数：通 过平板划线试 验，可以计算 细菌的数量和
平板划线法操作要点docx
平板划线法操作要点 .docx 平板划线法是一种常用的微生物分离纯化方法，用于将一个菌种的单个菌落进行分离、纯化和繁殖。
下面是平板划线法的操作要点：
1.准备所需材料：平皿、接种环、酒精灯、无菌棉签、镊子、培养基等。
2.将培养基倒入平皿中，用无菌棉签均匀涂布在培养基表面。
3.用镊子取出一块无菌滤纸，将其在酒精灯上灼烧后冷却，然后将其放置在培
养基表面。
4.用接种环取少量待分离的菌液，在滤纸上划线，注意不要将线划得过细或过
粗，以避免影响分离效果。
5.将平皿放置在适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
如果需要，可以进
行第二次划线，以进一步纯化菌落。
6.当菌落长成后，用镊子将单个菌落取出，并将其接种到新的培养基上，以进
行下一步的实验或保存。
注意事项：
1.整个操作过程中，必须保证无菌操作，以避免污染。
2.在划线时，要注意力度和角度，以避免菌液过多或过少。
3.在培养过程中，要保持适宜的温度和湿度，以促进菌落的生长。
4.在取出单个菌落时，要用镊子轻轻夹住菌落，避免将其周围的培养基弄碎。
5.在进行下一步实验或保存之前，要对菌落进行最后的检查，以确保其纯度和
质量。
平板划线法是一种简单而有效的微生物分离纯化方法，但需要一定的操作技巧和经验。
通过不断实践和总结经验，可以逐步提高操作水平和实验效果。
菌种的分离纯化技术——平板划线法
态结构等特征的子细胞的群落。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每 个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养
温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
菌苔：细菌在固体培养基接种线上由母细胞繁 殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征 的细菌群落，是许多菌落连成一片形成的 细菌在斜面培养基接种线上长成的一片密集的 细菌群落，不同属种细菌的菌苔形态是不同的
3.划线方法
⑴用接种环以无菌操作挑取悬液一环，先在平板培养基的一边作第 一次平行划线3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩
余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再
用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次 平行划线部分作第四次平行划线A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒
通过本次实验你学到了什么技术?请
列举出来并把它的技术要点写出来.
讨论
培养皿为什么要倒置培养?
斜线划线为什么要在变换角度时灼烧接种环?
曲线划线为基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手 将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰； 然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可 将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。 如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞 则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打 开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养 皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面 上，待凝后即为平板。
置于温室培养。
(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连 续划线(图)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温 室培养。
菌种的分离纯化技术——平板划线法
实验器材
菌悬液 牛肉膏蛋白胨培养基 无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤
1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水 浴中加热至融化。
2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操 作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
倒平板的方法
右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手 将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰； 然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可 将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。 如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞 则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打 开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养 皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面 上，待凝后即为平板。
(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连 续划线(图)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温 室培养。
(3) 其他划线方法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
实验结果及讨论
1．实验结果
检查每个平板划线分离的结果，并绘制菌苔、菌落分布草图。
2．讨论 针对实验原理、步骤、现象进行讨论。
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线, 第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区) 是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的 单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积 的分配应是D＞C＞B＞A。
实验目的
3.划线方法
⑴用接种环以无菌操作挑取悬液一环，先在平板培养基的一边作第 一次平行划线3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩 余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再 用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次 平行划线部分作第四次平行划线A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒 置于温室培养。