乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱含量测定(一)讲解
高效液相色谱法测定石见穿中齐墩果酸及熊果酸的含量
ｌ ３ ４
２ ０ １ ３年 ３月 ２ ５日第 ３ １ 卷 第 ２期
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｐｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ｅ ， Ｖｏ １ ． ３１ ，Ｎｏ ． ２， Ｍａ ｒ ｃ ｈ ２ ５， ２ ０ １ ３
ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ｐａ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ ｂ ａ ｓ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ．ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｗａ ｓ １ １． ５５ ～４ ６ ２． ０ Ｉ ｘ ｇ ／ｍｌ ｆ ｏ ｒ ｕ ｒ ｓ ｏ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ａ ｎ ｄ ５． ２ ６５ ～２１ ０． ６ ｌ ￣ｇ ／ｍｌ ｏｒ ｆ ｏ ｌ ｅ ａ ｎｏ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ．
Ｂ ｅ ｎ ｔ ｈ ．Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄｓ ＨＰ Ｌ Ｃ — ＤＡＤ ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ； ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ｗａ ｓ Ａｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ ＨＣ１ ８ （ ４ ． ６ ｍｍ ×２ ５ ０ ｍｍ ， ５ Ｉ ｘ ｍ） ； ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｗａ ｓ Ａ： ０ ． １ ％（ ｖ ／ ｖ ）
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者分别在 １ １ ． ５ ５～ ４ ６ ２ ． ０ 、 ５ ． ２ ６ ５～ ２ １ ０ ． ６ ｐ ￣ ｇ ／ ｍｌ ， 呈 良好 的线 性 关 系 ， 日内、 日间 精 密 度 均 小 于 ５ ％（ ｎ＝３ ） ， 平 均 回 收 率 分 别 为
高效液相色谱法测定牛白藤中齐墩果酸和熊果酸含量
高效液相色谱法测定牛白藤中齐墩果酸和熊果酸含量
沈守仁;陈少锋
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2012(28)20
【摘要】目的建立以高效液相色谱法(HPLC)同时测定牛白藤药材中齐墩果酸和熊果酸含量的方法.方法色谱柱为Diamonsil C18 (4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇:0.1％磷酸(80:20),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为210 nm.结果齐墩果酸和熊果酸分别在0.0910～0.9100 μg(r=0.999 8)和0.084 6～0.821 8 μg(r=0.999 7)呈良好线性关系,二者平均加样回收率分别为99.91％、98.38％,相对标准偏差(RSD)分别为2.5％、2.2％.结论高效液相色谱法简便、准确、可靠,可用于牛白藤的质量控制.
【总页数】2页(P3067-3068)
【作者】沈守仁;陈少锋
【作者单位】广西壮族自治区民族医药研究院,广西南宁530001
【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定芍药中齐墩果酸和熊果酸含量 [J], 周春华;吕三三;张莹;胡玥;陶俊
2.高效液相色谱-蒸发光散射法测定马鞭草中齐墩果酸与熊果酸的含量 [J], 丁家欣;
张秋海;李先端;李淑莉;刘泓
3.高效液相色谱法测定中草药中齐墩果酸熊果酸含量的应用进展 [J], 周先明;吕美红
4.高效液相色谱法测定石见穿中齐墩果酸及熊果酸的含量 [J], 施红
5.高效液相色谱法测定山茱萸中熊果酸与齐墩果酸的含量 [J], 刘毅;金传山;许甜甜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
资木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定
资木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定【摘要】目的建立以RP-HPLC法测定资木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。
方法色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(90∶10)，流速0.57 ml・min-1，检测波长210 nm。
结果齐墩果酸和熊果酸进样浓度分别在6.4～256.0 μg・ml-1和6.32～252.8 μg・ml-1范围内具有良好的线型关系，r分别为0.999 6和0.999 9，平均加样回收率分别为97.4%和96.7%，RSD分别为2.6%和2.2%(n=6)。
结论该方法简便、准确、重现性好，可用于控制资木瓜的质量。
【关键词】高效液相色谱法;资木瓜;齐墩果酸;熊果酸木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa (Sweet)Nakai的干燥近成熟果实，中医认为具有平肝舒筋，和胃化湿等功效，用于湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，吐泻转筋，脚气水肿[1]。
资木瓜因主产于湖北长阳资丘而得名，与浙江淳木瓜、安徽宣城木瓜齐名，同为皱皮木瓜三大道地药材，是鄂西南特有的一种道地中药材，主要分布在恩施土家族苗族自治州以及宜昌市的长阳、五峰县一带。
木瓜中含有的齐墩果酸和熊果酸具有抗癌、提高免疫力、降血脂和降血糖等功效[2]。
本文建立了RP-HPLC法测定资木瓜药材中齐墩果酸和熊果酸含量的方法，为资木瓜的质量控制提供依据。
1仪器与材料1.1 仪器Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦)，含在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器、化学工作站;CPA124S型电子天平(德国赛多利斯);CQ-80型超声波清洗机。
1.2 试药齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110709-200505);熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110742-200516);甲醇为色谱纯，注射用水(四川科伦药业股份有限公司，批号：H090519)，其余试剂均为分析纯;资木瓜分别采自湖北省宣恩县长潭河侗族乡易家坪村和湖北省长阳县资丘镇水帘村。
高效液相色谱法同时测定二至丸中齐墩果酸和熊果酸的含量
测定成分 齐墩果酸
熊果酸
表 1 二至丸中齐墩果酸、熊果酸加样回收率（n＝9）
样 品 中 含 量 ／ mg
加 入 量 ／ mg
测 得 量 ／ mg
回收率 ／%
2.0
4.402
101.9
2.357
2.0
4.369
100.5
2.0
4.383
101.1
2.5
4.899
101.8
2.357
2.5
4.925
102.9
11.770
6.249
10
0.5014
11.668
6.269
平均含量
11.794
6.239
3讨论 3.1 流动相及流速的确定是基于齐墩果酸和熊 果酸是同分异构体，两者不易分离，根据文献报道 曾采用乙腈－水作为流动相， 发现分离效果不好， 后 改 用 甲 醇－水 作 为 流 动 相 ，并 考 察 了 （90∶10；88∶ 12；85∶15；80∶20） 多 种 比 例 和 （1 mL ／ min；0.8 mL ／ min；0.5 mL ／ min）多个流 速 ，发 现 甲 醇 比 例 过 大 或 流速过大， 则分离效果不好， 甲醇比例或流速过 小，出峰时间较长。 经试验用甲醇－水（87∶13）作流 动相，流速为 0.7 mL ／ min 时，分离效果最佳。 3.2 HPLC 法 检 测 齐 墩 果 酸 和 熊 果 酸 的 含 量 ，采
用紫外检测器时， 需正确选择波长。 检测波长太 小，溶剂系统的截止波长接近检测波长，造成基线 噪音大，平衡基线所需时间长，流动相的本底吸收 高，从而影响组分的检测；检测波长太大，齐墩果 酸和熊果酸的吸收值太低，响应因子小，同样影响 组分的检测。 因此，HPLC 法检测齐墩果酸和熊果 酸含量时，选择 210 nm 作为检测波长较适宜。 3.3 所建立的方法具有简便，快速，结果准确，可 靠等优点，同时也可用于制备工艺的的控制，可用 于该样品的分析。
高效液相色谱法同时测定香青兰中熊果酸和齐墩果酸含量
高效液相色谱法同时测定香青兰中熊果酸和齐墩果酸含量李频【摘要】目的:建立药材香青兰中熊果酸和齐墩果酸HPLC含量同时测定方法.方法:ZORBAXC18色谱柱(4.6mm×250mm,5um),检测波长:220nm,流速:0.6mL/min,柱温:25℃,流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(85:15:0.04:0.08).结果:所测成分熊果酸进样量在0.1017μg～2.5425μg(r=0.9994)范围内与峰面积呈良好线性关系;齐墩果酸进样量在0.3063μg～7.6575μg(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好线性关系.加样回收率分别是98.07％ (RSD=0.66％)和99.41％(RSD=1.02％).结论:本文所采取的方法准确可靠,适用于香青兰中熊果酸和齐墩果酸的含量的同时测定.【期刊名称】《陕西中医》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】3页(P622-624)【关键词】熊果酸/中药分析化学;齐墩果酸/中药分析化学;色谱法,高压液相;香青兰【作者】李频【作者单位】四川自贡市中医医院药剂科自贡643010【正文语种】中文【中图分类】R283主题词熊果酸/中药分析化学齐墩果酸/中药分析化学色谱法, 高压液相@香青兰香青兰为唇形科植物香青兰的干燥地上部分[1]，维吾尔名为巴德兰吉布牙香青兰[2](Dracocephslum moldavicae L.)，是维吾尔族、蒙古族习用药材，属于豆属豆科菜一年生草本，茎叶带有芳香味[3]。
香青兰有安神补脑、暖胃养肝、止喘镇咳等作用，一般用于心脏性的脑病、高血压引起的头昏、气管炎等，《后续医典》中治疗肝热的七味清肝红花散中就加有此味药材，其对胃出血也有良好治疗效果，在《蒙医药方汇编》记载中七味松石散就加有此药治疗胃出血。
近些年有学者研究发现此药中含有许多化合物如：黄酮类、氨基酸、木脂素类、萜类、黄酮醇类等[4-6]。
虽香青兰在中药治疗中使用广泛，近些年有不少学者对其有进一步研究，但目前对其含量测定方面报导特别是同时测定的报导并不多见。
高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸和熊果酸含量
高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸和熊果酸含量发表时间：2015-03-25T17:18:52.290Z 来源：《医药前沿》2014年第31期供稿作者：谢俊梅[导读] 自制的利器盒完全符合《医疗废物专用包装物、容器标准及警示标识规定》的要求，按医疗废物集中收集处理，临床使用效果满意。
谢俊梅（从化市食品药品检验所广东广州 510900）【摘要】目的研究多种中药中齐墩果酸和熊果酸含量的检测方法，观察齐墩果酸和熊果酸在中药材中的存在形式。
方法采用高效液相色谱法对多种中药中齐墩果酸和熊果酸的含量进行测定，色谱柱Shim-packCLC-ODS，检测的波长在220nm处，流动相为甲醇（85）-水（15）-冰乙酸（0.05）-三乙胺（0.03），流速为0.5ml/min，柱温为25℃。
结果齐墩果酸和熊果酸的平均回收率均为102%，RSD均小于2.3%。
结论齐墩果酸和熊果酸在中药中的含量测定可以用高效液相色谱法，该方法具有简单、准确的特点，可以推广应用。
【关键词】高效液相色谱法中药齐墩果酸熊果酸含量【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2014）31-0322-02据有关文献报道显示，多使用比色或薄层扫描的方法对齐墩果酸和熊果酸在中药材中含量进行检测[1]。
高效液相色谱法（HPLC）在经典液相色谱法的基础上引入了气相色谱理论而迅速发展起来的[2]。
与经典液相色谱法比较，高效液相色谱法的优点是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但是由于其容易引起高阻力，流动相需要用高压输送，故又称高压液相色谱法[3]。
本研究应用高效液相色谱法测定中药中齐墩果酸和熊果酸含量，先报道如下。
1 试剂与仪器1.1试剂中药材：连翘、泽兰、山楂、女贞子、白花蛇舌草、毛冬青、夏枯草、枇杷叶等购于广州药材公司。
熊果酸对照品、齐墩果酸对照品来源：中国药品生物制品检定所，甲醇为色谱纯、水为超纯水。
1.2仪器仪器：高效液相色谱仪；纯水器；高效液相色谱柱；高效液相色谱工作站；紫外检测器；电子天平2 色谱条件色谱柱Shim-packCLC-ODS180mmX4.6mm，流动相为甲醇（85）-水（15）-冰乙酸（0.05）-三乙胺（0.03），流速为0.5ml/min，柱温25℃，检测的波长在220nm。
高效液相色谱法测定金叶接骨木中熊果酸和齐墩果酸的含量
高效液相色谱法测定金叶接骨木中熊果酸和齐墩果酸的含量赵淑红;高亦珑;马学琴;杨美玲【摘要】目的建立高效液相色谱法(HPLC法)同时测定金叶接骨木茎叶中齐墩果酸和熊果酸含量的方法.方法采用Thermo ODS-2HYPERSIL(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(80%∶ 20%);检测波长210 nm,流速0.8ml/min,柱温25 ℃.结果齐墩果酸的线性范围为12.17-243.36 μg/ml(r=0.999 9),回收率为98.50%(RSD为3.03%);熊果酸的线性范围为3.25-64.92μg/ml(r=0.999 8),回收率为99.49%(RSD为1.37%).金叶接骨木茎中齐墩果酸含量(mg/g)为1.485,熊果酸为0.348;叶中齐墩果酸为0.636,熊果酸为0.437.结论HPLC法操作简单,测定结果准确,可用于金叶接骨木中齐墩果酸与熊果酸的含量测定.%Objective To establish a HPLC method for simultaneously determining contents of oleanolic acid and ursolic acid in leaves and stems of Sambucus canadensis Aurea. Methods Ursolic acid and oleanolic acid were separated and analyzed on Thermo ODS2HYPERSIL ( 250 mm ×4. 6 mm,5 μm ) with methanol - 0. 4％ orthophosphoric acid water( 80％∶ 20％ )as mohile phase at a flow rate of 0. 8 ml/min. UV detection was 210 nm and the column temperature was 25 ℃ . Results An recovery rate was 98. 50％ with a RSD of 3. 03％ in the range of 12. 17 - 243. 36μg/ml( r =0. 999 9 )for oleanolic acid. An average recovery was 99. 49％ with a RSD of 1. 37％ in the range of 3. 25 - 64. 92μg/ml( r =0. 999 8 )for ursolic acid. The contents of oleanolic acid in the stem and leaves were 1. 485 mg/g and 0. 636 mg/g, respectively. The ursolic acid in the stem and leaves were 0. 348 mg/g and 0. 437 mg/g. Conclusion This is asimple,convenient.accurate and reliahle method, and can be used to determine the contents of oleanolic acid and ursolic acid in Sambucus canadensis Aurea.【期刊名称】《山西医科大学学报》【年(卷),期】2011(042)003【总页数】4页(P207-210)【关键词】金叶接骨木;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法【作者】赵淑红;高亦珑;马学琴;杨美玲【作者单位】宁夏医科大学高职学院,银川,750004;宁夏医科大学高职学院,银川,750004;宁夏医科大学药学院;宁夏医科大学高职学院,银川,750004【正文语种】中文【中图分类】R927.2金叶接骨木(Sambucus canadensis.Aurea)为忍冬科接骨木属植物加拿大接骨木(Sambucus Canadensis L.)的彩色叶变种，我区作为观赏植物从外地引进并在银川地区栽培［1］。
高效液相色谱法测定中草药中齐墩果酸熊果酸含量的应用进展
高效液相色谱法测定中草药中齐墩果酸熊果酸含量的应用进展周先明;吕美红【期刊名称】《安徽医学》【年(卷),期】2011(032)011【摘要】齐墩果酸与熊果酸是一对同分异构体,均为五环三萜类化合物,不同之处仅仅是E环上的一个甲基的位置不同,熊果酸是齐墩果酸G20位上的一个甲基移位到C19位上的结果,此两种天然的三萜类化合物,是许多中草药的有效成分.现已证实,齐墩果酸与熊果酸具有非常广泛的生理和药理活性,据文献报道[1-3],齐墩果酸具有消炎和抑菌,降转氨酶作用.对四氯化碳引起的大鼠急性损伤有明显的保护作用,还有促进肝细胞再生、防止肝硬化、强心、利尿、升白、降血酯、降血糖、增强有机体免疫功能、抑制变态反应等作用.是当前治疗肝炎的有效药物之一,近年又证明有抗癌活性等作用,熊果酸,又名乌索酸,乌苏酸,1990年被日本列为最有希望的肿瘤预防药物之一.它对中枢神经系统有明显的安定与降温作用;体外对G+和G-菌及酵母菌均有抗菌活性;有抗糖尿病、抗溃疡及降低血脂的作用;对多种致癌、促癌物有抵抗作用;对多种恶性肿瘤细胞有抑制生长作用;熊果酸及其衍生物对病毒具有抑制活性;另外,可诱导F9畸胎瘤细胞成为内胚层细细胞及抗血栓生成,齐墩果酸与熊果酸在美容养颜方面的作用是近年来一个十分活跃的研究课题,两者是多种化妆品的有救成分.因此,研究中草药中齐墩果酸与熊果酸的测定方法具有重要意义.【总页数】3页(P1950-1952)【作者】周先明;吕美红【作者单位】243100 当涂解放军八六医院;230051 合肥安徽丰原药业股份有限公司【正文语种】中文【相关文献】1.高效液相色谱法测定芍药中齐墩果酸和熊果酸含量2.高效液相色谱-蒸发光散射法测定马鞭草中齐墩果酸与熊果酸的含量3.高效液相色谱法测定石见穿中齐墩果酸及熊果酸的含量4.高效液相色谱法测定山茱萸中熊果酸与齐墩果酸的含量5.高效液相色谱法测定牛白藤中齐墩果酸和熊果酸含量因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱含量测定(一)作者：范成杰，刘友平，陈鸿平，石宇华【摘要】目的应用高效液相色谱（HPLC）法测定乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量，并以齐墩果酸和熊果酸为指标成分建立乌梅肉的质量标准。
方法采用Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；甲醇－0.2%乙酸铵水溶液（83∶17）为流动相；检测波长210 nm，流速0.8 ml/min，柱温25℃。
结果齐墩果酸的线性范围为0.168～1.512 μg，r＝0.999 6，回收率为98.00%（RSD=0.53%）；熊果酸的线性范围为0.452～4.068 μg，r=0.999 9，回收率为97.13%（RSD=1.17%）。
结论该方法简便、可靠、准确，可用于乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量比较和乌梅肉的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法乌梅肉齐墩果酸熊果酸Abstract：ObjectiveTo determine the ursolic acid and oleanolic acid in the pulp of Fructus Mume by HPLC. MethodsThe ursolic acid and oleanolic acid were separated on C18 column.Methanol-0.2% Ammonium acetate solution (83∶17) was used as mobile phase and the detection wavelength was 254nm.ResultsThe linearity of ursolic acid and oleanolic acid was in the range of 0.168～1.512μg, 0.452～4.068μg, respectively; the average recoveries of ursolic acid and oleanolic acid were 98.00%(RSD=0.53%,n=5) and 97.13%(RSD=1.17%,n=5). ConclusionThe method is simple, quick and reproducible，and it can be used for the quality control of the pulp of Fructus Mume.Key words：HPLC; Pulp of Fructus Mume; Ursolic acid; Oleanolic acid乌梅，别名酸梅、黑梅，由蔷薇科植物梅Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zucc.（Armeniaca mume Sieb.）的干燥近成熟果实加工而成。
关于乌梅的入药方式，历代本草记载有去核和连核使用两种，现代研究证明乌梅中有效成分有机酸及水浸出物大多集中在果肉中，核含量甚少〔1〕，且核仁含大量脂肪油成分，具滑泄作用，与乌梅的固涩作用相驳；同时也有报道认为乌梅核特征明显，有利于乌梅的鉴定，而且乌梅核还含有约5％的有机酸，且去核繁琐费时费工〔2〕，所以乌梅是否应分部位药用仍存在争议。
《中国药典》Ⅰ部（2005年版）中，净乌梅和乌梅肉都有收载〔3〕。
因此明确乌梅的入药方式，是建立乌梅规范的质量标准的前提。
本课题组前期对乌梅各部位的化学成分进行了初步比较研究，结果表明乌梅各部位的药理作用不同，代表乌梅涩肠止泻作用的主要药用部位为乌梅果肉。
本实验以齐墩果酸和熊果酸为对照品，建立了乌梅果肉中齐墩果酸和熊果酸的RP-HPLC含量测定方法，为乌梅肉的质量标准的规范奠定了基础。
1 仪器与试剂1.1 仪器岛津LC-10A高效液相色谱仪，岛津工作站（日本岛津公司）；高效液相色谱柱〔Hypersil-ODS C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），大连依利特公司〕；BP211D（十万分之一），BP121S（万分之一）型电子分析天平（德国Sartorius公司）；BUG25-12超声波清洗机（25 kHz,500 W,上海必能信超声波有限公司）。
1.2 试剂齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定，批号：709-8501），熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定，批号：110742-200314）。
甲醇为色谱纯,水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
1.3 样品药材采或购自不同产地，均经鉴定。
2 方法与结果2.1 色谱条件及系统适应性实验色谱柱为Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相为甲醇－0.2%乙酸铵水溶液（83∶17）；检测波长为210 nm；流速0.8 ml/min，柱温25℃。
在此条件下分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μl注入液相色谱仪。
结果，对照品采用峰面积归一化法计算，二者含量>98％。
在此色谱条件可将供试品溶液中齐墩果酸、熊果酸与其它成分峰分离，分离度达1.2，理论塔板数应不低于3 000。
对照品溶液、供试品溶液的色谱图见图1～2。
2.2 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品10.50 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为齐墩果酸对照品储备液。
精密称取熊果酸对照品11.31 mg，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为熊果酸对照品储备液。
分别从两种储备液中精密量取1ml溶液，置同一5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升含齐墩果酸84 μg，含熊果酸226 μg）。
2.3 供试品溶液的制备取乌梅果肉粗粉约4 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理（25 kHz,500 W ）50 min，放至室温，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液2，6，10，14，18 μl 进样，分别以齐墩果酸、熊果酸峰面积积分值（Area）为纵坐标，其含量（Amt）为横坐标，绘制标准曲线。
计算回归方程，齐墩果酸的回归方程为A＝493 338(Amt)+10 620，相关系数为r＝0.999 6，齐墩果酸含量在0.168～1.512μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
熊果酸回归方程为A＝524917 (Amt)+9640.4，相关系数为0.999 9，熊果酸含量在0.452～4.068 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5 稳定性实验取乌梅肉药材，依法制备供试品溶液，室温放置，在0，4，8，12，24 h分别进样5 μl，测得齐墩果酸的含量RSD为1.25%，熊果酸的含量RSD为1.46%。
实验表明：样品溶液在24 h内基本稳定。
2.6 精密度实验取同一对照品溶液，重复进样5次，每次5μl，齐墩果酸峰面积积分值的RSD为0.53%，熊果酸峰面积积分值的RSD为1.17%。
表明精密度符合要求。
2.7 重复性实验取样品适量，精密称取5份，分别按“2.3”项下的方法操作，分别测定齐墩果酸、熊果酸含量，测得齐墩果酸的含量RSD为2.10%，熊果酸的含量RSD为1.57%。
2.8 加样回收率实验取乌梅果肉粉末5份，每份约2 g，精密称定，精密加入齐墩果酸对照品0.464 mg，熊果酸对照品1.895 mg，以后按供试品溶液制备方法制备供试液，精密吸取续滤液5 μl，对照品溶液5 μl，分别注入液相色谱仪，测定含量，计算加样回收率（本品另同时测定，含齐墩果酸0.2451 mg/g，熊果酸0.885 5 mg/g）。
平均回收率齐墩果酸为98.00%，熊果酸为97.13%。
2.9 乌梅不同入药部位的测定分别取乌梅核壳和种子粉末各约4 g，按供试品溶液的制备方法制成供试液，按上述色谱条件分别精密吸取乌梅果肉供试品溶液、乌梅核壳供试品溶液、乌梅种仁供试品溶液各5μl注入液相色谱仪。
测定。
结果核壳和种子样品在齐墩果酸、熊果酸相对应的保留时间未出峰，与果肉样品HPLC图谱比较，三者有明显区别。
乌梅果肉供试品溶液、乌梅核壳供试品溶液、乌梅种仁供试品溶液的色谱图见图2～4。
2.10 不同产地样品测定按前述方法制备各供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算含量。
结果见表1。
表1 不同产地及品种乌梅肉样品中齐墩果酸、熊果酸含量测定结果（略）根据11批乌梅果肉样品中齐墩果酸和熊果酸含量测定结果，其中10批样品齐墩果酸和熊果酸的总量在1.0 mg/g以上。
3 讨论关于乌梅的入药方式一直存在争议。
本课题组首先对乌梅各部位即果肉、核壳、种仁的药理作用进行了初步比较研究，结果表明乌梅各部位药理作用不同〔4〕。
本实验采用HPLC法对乌梅果肉、核壳和种仁的化学成分进行了比较，结果表明齐墩果酸和熊果酸仅存在于果肉部位，这为乌梅各部位药理作用的差异提供了物质基础依据，进一步证明了乌梅应分部位药用的必要性。
提示应分别建立各部位的质量控制标准，保证临床用药的安全有效。
有文献报道乌梅仅含熊果酸而不含齐墩果酸〔5〕。
本研究首次发现乌梅果肉中齐墩果酸和熊果酸两者同时存在，因此本研究以齐墩果酸和熊果酸为对照品，建立了用乌梅果肉中齐墩果酸和熊果酸的反相HPLC含量测定方法。
【参考文献】〔1〕张丽丽,耿小平. 乌梅、醋乌梅等有机酸及水浸物含量比较〔J〕.山东中医杂志,1999,8(8):370.〔2〕胡彩霞,姜世秋.小议乌梅炮制与用量〔J〕.时珍国药研究,1998,9(1):18.〔3〕国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部〔S〕. 北京:化学工业出版社,2005:54.〔4〕陈林,陈鸿平,刘友平.乌梅不同部位药理作用比较研究〔J〕.中国药房,2007,18(27):2089.〔5〕阴健.中药现代化研究与应用(2)〔M〕.北京:中医古籍出版社,1995:75.。