熊果酸检测方法-药典
熊果酸的测定
【摘要】目的建立山茱萸中熊果酸的含量测定方法方法采用HypersilODS色谱柱;流动相乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;检测波长为220nm;流速为1ml/min。
结果在1.99～9.96μg范围内具有良好的线性关系，r=0.9994，平均回收率为97.63%，RSD =1.00%。
结论该方法简便、重复性好，可作为山茱萸质量控制方法。
中国药典2000年版部山茱萸是用薄层扫描法测定熊果酸含量，由于薄层扫描法测定误差，近年来已有不少用HPLC法测定熊果酸的含量的文献报导。
本文拟用HPLC法对山茱萸中熊果酸进行了定量分析，现将结果报告如下。
1 仪器与试药HP-1050高效液相色谱仪;乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯;熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号742-200111）;山茱萸（购于广东省药材公司中药饮片厂）。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil ODS（250×4.0mm，5μm）;流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;流速:1ml/min;检测波长:220nm;柱温:室温，在上述条件下样品中熊果酸（保留时间为18.9min）与齐墩果酸（保留时间为17.8min）等成分分离度大于1.5，理论塔板大于8000，见图1～2。
图1 熊果酸对照品HPLC图谱图2 山茱萸HPLC图谱2.2 对照品溶液的制备取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，摇匀，即得。
2.3 供试品溶液的制备取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醇醚适量，加热回流提取4h，提取液回收乙醚至干，残渣加石油醚（30℃～60℃）浸泡2次，每次1 5ml（约浸泡2min），倾去石油醚，残渣加甲醇微热使溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.498mg的对照品溶液。
熊果酸液相检测方法(1)
HPLC 法测定迷迭香叶提取物中熊果酸的含量
1 试剂
超纯水
甲醇（色谱纯）
乙腈（色谱纯）
磷酸
2 对照品
熊果酸对照品
3 仪器和用具
万分之一电子天平
玻璃仪器：容量瓶
0.45μm 微孔滤膜及针筒式过滤器
超声波清洗器
日本岛津LC-15C 型高效液相色谱仪
4 色谱条件
色谱柱：Diamonsil ® C18(2) 5μ 250×4.6mm
流动相：甲醇﹕乙腈﹕水﹕磷酸=57﹕33﹕10﹕0.01（V/V ）
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
进样量：20μL
柱温：40℃
5 操作步骤
供试品溶液的制备
取样品约30mg （精确至0.1mg ）至25mL 容量瓶，加15mL 甲醇超声溶解，溶解后加甲醇定容至刻度，摇匀，再取1mL 定容至10mL 容量瓶，摇匀，过0.45μm 微孔滤膜，待测。
标准品溶液的制备
精密称取熊果酸标准品适量，加甲醇配成浓度为0.12mg/mL 左右的溶液，过0.45μm 微孔滤膜，待测。
将标准品溶液、供试品溶液各20μL 分别注入高效液相色谱仪中检测。
6 计算
含量（%）=%1001
221⨯⨯⨯⨯⨯P M A V C A 其中 1A ：样品峰面积
2A ：标准品峰面积
C：标准品浓度（mg/mL）2
M：样品称样量（mg）1
V：样品的稀释体积（mL）P：标准品的含量。
熊果酸提取与结构鉴定
实验仪器与材料
实验器材：超声波仪 ，紫外光谱仪，红外光 谱仪，高效液相色谱仪。 原料与试剂：地榆粉 500g，，薄层层析硅胶 G ，95%乙醇，1%氢氧化钠水溶液 ，石油醚 ， 甲醇 ，活性炭 ，环乙烷 ，氯仿 ，乙酸乙酯 ， 对二甲氨基苯甲醛 ，浓硫酸 。
参考文献
韩小龙，《从枇杷叶中提取、分离熊果酸的工艺研 究》2005 – 西北大学 于明明， 周富强， 刘军海，《熊果酸提取工艺的研 究进展》，氨基酸和生物资源，AMINO ACIDS AND BIOTIC RESOURCES，2009年31期 谷芳芳，《山楂叶中熊果酸提取分离与测定研究》， 中南大学 文小静， 张永利; 《熊果酸的提取工艺研究》，实 用药物与临床, SHIYONG PHARMACY AND CLINICAL REMEDIES , 2006年9期
纯度测定：薄层色谱法
分别取样品用乙醇溶解后制成1 g/L 的溶液，用毛细管分别点样适 量于同一硅胶G薄层板上，以环己 烷一氯仿一乙酸乙酯一甲醇(20：5： 8：0．5)为展开剂，展开(展距 9．0 cm)，取出、晾干喷以 10% 硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑 点显色清晰，置日光灯下检视。观 察样品色谱中，是否为单一斑点且 无其他斑点则证明样品为纯的熊果 酸.， 吴杰， 骆妃静，《山楂中熊果酸的提取与 分离》，西北药学杂志，NORTHWEST PHARMACEUTICAL JOURNAL ，2009年24期相关文 献 张如新， 羊卫平， 樊勤，《超声波法提取山茱萸中 熊果酸的工艺研究》，湖南师范大学自然科学学报， JOURNAL OF NATURAL SCIENCE OF HUNAN NORMAL UNIVERSITY，2008年31期 李丽， 陈剑锋， 林国荣， 黄娟， 陈浩， 郭养浩， 《枇杷叶中熊果酸的分离纯化》，福州大学生物工 程学院,福建,福州 郑艳，苏丹，《女贞子中熊果酸的提取工艺研究》， 陕西科技大学学报（自然科学版）
抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量测定-精品文档资料
抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量测定抗宫炎片由广东紫珠干浸膏、益母草干浸膏和乌药干浸膏等成分组成。
具有清湿热、止带下的作用，临床主要用于湿热下注所致的带下病，如宫颈糜烂、白带量增多等。
研究发现，紫珠中含有黄酮、酚酸、三萜和苯丙素等类别化合物[1-4]，黄酮是其抗宫颈炎有效成份[5]，三萜主要含齐墩果酸和熊果酸等成分[6-7]，有良好的护肝作用和对肝脏的抗脂质过氧化（LPO）作用[8-9]；益母草主要含有生物碱、黄酮和二萜类等成分，总生物碱具有明显的抗炎镇痛作用和改变血流动力学及血液流变学作用[10-11]；乌药主要含有生物碱和萜类成分，生物碱具有较好的抗菌和抗病毒作用[12-13]。
本实验采用高效液相色谱法对抗宫炎片中齐墩果酸和熊果酸的含量进行测定，为抗宫炎片的质量评价提供依据。
1仪器与材料11仪器Agilent1260高效液相色谱仪、G1311B四元泵（带在线脱气机）、G4212B DAD阵列二极管检测器、Agilent汉化版色谱工作站；迪马Diamonil C18（250mm ×46mm，5μm）色谱柱；电子分析天平（岛津AUW120D）；超声波中药处理机（LC-350A）。
12试剂齐墩果酸对照品（批号：110709-201206）、熊果酸对照品（批号：110742 -201220）由中国药品生物制品检定研究院提供；甲醇、乙腈为色谱纯（天津赛福瑞科技XX公司）；水为重蒸水；其它试剂均为分析纯。
13试药抗宫炎片分析样品购置于湖南怀化龙源药业，分别为2个厂家8个批次的样品，编号见表3。
2方法与结果21色谱条件色谱柱：迪马Diamonil C18（250mm ×46mm，5μm）；流动相：乙腈-水（92∶8）；流速：05ml/min；进样量：10μl；检测波长210nm。
上述条件下齐墩果酸和熊果酸基线基本能够分离，峰形对称，色谱图见图1。
22对照品溶液的制备分别精确称取齐墩果酸40mg、熊果酸44mg于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，即得040mg/ml 齐墩果酸储备液和044mg/ml熊果酸储备液。
维药硬尖神香草中熊果酸的薄层鉴别方法研究
维药硬尖神香草中熊果酸的薄层鉴别方法研究目的：以熊果酸为对照品，建立新疆维吾尔药材硬尖神香草的薄层色谱鉴别方法。
方法：收集两个产地8个批次的硬尖神香草生药材，根据2010版《中国药典》附录VI B（薄层色谱法）中相关项下方法进行薄层鉴别，以熊果酸作为对照品，考察不同展开系统、显色剂、温度、湿度、点样量和不同厂家硅胶板对尖神香草中熊果酸薄层鉴别的影响，从中选出维药硬尖神香草中熊果酸薄层鉴别的最佳条件。
结果：吸取供试品溶液和对照品溶液各3μl点于青岛海洋化工有限公司产高效硅胶板上，在三氯甲烷-丙酮（12∶1）系统中展开，喷以10%硫酸乙醇显色，供试品与熊果酸对照品在同样的位置显紫色的斑点，所得的薄层色谱分离效果较好。
结论：研究建立的硬尖神香草药材中熊果酸的薄层鉴别方法操作简便，重现性好，专属性强，可以用于维吾尔药硬尖神香草的质量控制。
标签：硬尖神香草；质量标准；薄层鉴别；熊果酸Abstract：Objective To set up the TLC identification of Hyssopu cuspidatus Boriss with ursolic acid as standard compound.Method According to the Chinese Pharmacopoeia （2010 Revision）Appendix VI B （TLC），different extract methods and solvents，developing system，comogemc agents，temperature，humidity，drawing amounts and thin layer boards were investigated for optimizing TLC identification of ursolic acid. Results Drawing 3μl solution on efficient layer board （200mm×100mm，Qingdao Ocean Chemical Co.Ltd），developing system trichloromethane-acetone（12∶1）was applied.After spaying with 10% sulfuric acid in ethanol，significant purple color appeared on the sample solution with the ursolic acid at same position.Conclusion The established TLC identification on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss（ursolic acid as the standard compound）is simple，repeatable and specific. It can improve and lay a foundation on the quality standardization of Hyssopu cuspidatus Boriss.Keywords：Hyssopu cuspidatus Boriss；Quality Standards；TLC；Ursolic Acid硬尖神香草Hyssopu cuspidatus Boriss为唇形科植物，主要产于新疆北部阿勒泰地区[1]，维吾尔医常用名称为神香草。
熊果酸检测方法-药典
熊果酸
取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，作为供试品溶液。
另取枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】水分不得过5.0%(附录IX H第一法)。
总灰分不得过5.0% (附录IX K)。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5%乙酸铵溶液（67:12:21）为流动相；检测波长为210nm。
理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加乙醇分别制成每1ml含熊果酸0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W 频率50kHz)30分钟，放冷，称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含熊果酸（C30H48O3）的总量不得少于90%。
夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定
夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定口的建立夏枯草药材中熊果酸含量的超高效液相色谱法（UPLC）测定方法。
方法釆用UPLC进行测定，色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18 （2.1 mmxlOO mm, 1.7 pm）,以中醇-0.5%冰乙酸水为流动相进行等度洗脱，流速为0.3 ml/min,柱温30°C,检测波长210 nm。
结果熊果酸在0.2461〜0.4922 mg 范围内呈良好的线性关系（r2=0.9999）,平均回收率为99.29%, RSD=1.74%,熊果酸在夏枯草中的含量为0.28%〜0.53%。
结论该方法快速、高效、重现性好, 可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。
标签：夏枯草；熊果酸；超高效液相色谱法；含量测定夏枯草为唇形科植物夏枯草（Primella vulgaris L.）的干燥成熟果穗，味辛、苦，性寒，具有清肝泻火、明目、散结消肿之功效［1］。
夏枯草的主要化学成分有三菇、黄酮、當体、香豆素、蔥覘、苯丙素等［2］。
其中的主要成分熊果酸具有镇静、抗溃疡、降低血糖、抗炎、抗菌等多种生物学效应［3-5］o近年来，乂发现熊果酸具有抑制癌细胞增长、转移和诱导癌细胞凋亡等作用，极有可能成为一种新型抗癌药物［6-8］o另外，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，被广泛用作医药和化妆品原料［9］。
U前关于夏枯草药材的质量控制研究主要是以熊果酸、齐墩果酸和迷迭香酸等的HPLC含量测定和夏枯草药材的HPLC指纹图谱为主［10-14］,关于夏枯草超高效液相色谱法（UPLC）含量测定的研究还未有报道，且相比于传统的HPLC 而言，UPLC具有柱效高、分离度好和分离快等优点，大大缩短了样品运行的时间，可以满足当下高通量分析的要求。
因此，本实验釆用UPLC建立夏枯草药材中熊果酸含量测定方法［15］,测定不同批次的夏枯草药材中熊果酸的含量，该方法灵敬度高，分离度好，重现性好，可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。
山茱萸及其制剂中熊果酸的含量测定方法研究
山茱萸及其制剂中熊果酸的含量测定方法研究
孙立华;闫光军
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】1995(017)007
【摘要】应用３种方法：薄层扫描法、薄层比色法、薄层限量法，分别测定了杞菊地黄丸中熊果酸的含量。
其中薄层扫描法为中国药典（１９９０年版一部）法，即药典中山茱萸和六味地黄刃中熊果酸的含量测定法。
实验结果表明，该方法同样适用于杞菊地黄丸中熊果酸的含量测定，但受仪器、展开剂、显色剂等多种因素影响，特别是仪器不普及，基层单位难以实施。
薄层比色法操作繁琐、精密度差、结果不稳定；而薄层限量法可准确定量、不用仪器，操作简
【总页数】3页(P9-11)
【作者】孙立华;闫光军
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.山茱萸中熊果酸的提取及含量测定 [J], 赵玉丛;李建军;刘国际;屈凌波
2.川鄂山茱萸不同部位中熊果酸的含量测定 [J], 王丽萍;宋良科;董关涛;李迪强
3.山茱萸果核中白桦脂酸和熊果酸含量测定 [J], 李军;姜华;张宁;王琦;陈雯雯;宋文博
4.甲肿消制剂及其含药血清中熊果酸的含量测定 [J], 崔翰明;程慧平;刘喜明;陈双
厚;朱晓芸
5.高效液相色谱法测定山茱萸制剂中熊果酸的含量 [J], 宋宝珠;张建超;刘义梅;万江陵
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
熊果酸
取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，作为供试品溶液。
另取枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】水分不得过5.0%(附录IX H第一法)。
总灰分不得过5.0% (附录IX K)。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5%乙酸铵溶液（67:12:21）为流动相；检测波长为210nm。
理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加乙醇分别制成每1ml含熊果酸0.2mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品约10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W 频率50kHz)30分钟，放冷，称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含熊果酸（C30H48O3）的总量不得少于90%。