熊果酸的含量测定

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熊果酸的测定

【摘要】目的建立山茱萸中熊果酸的含量测定方法方法采用HypersilODS色谱柱;流动相乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;检测波长为220nm;流速为1ml/min。

结果在1.99～9.96μg范围内具有良好的线性关系，r=0.9994，平均回收率为97.63%，RSD =1.00%。

结论该方法简便、重复性好，可作为山茱萸质量控制方法。

中国药典2000年版部山茱萸是用薄层扫描法测定熊果酸含量，由于薄层扫描法测定误差，近年来已有不少用HPLC法测定熊果酸的含量的文献报导。

本文拟用HPLC法对山茱萸中熊果酸进行了定量分析，现将结果报告如下。

1 仪器与试药HP-1050高效液相色谱仪;乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯;熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号742-200111）;山茱萸（购于广东省药材公司中药饮片厂）。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil ODS（250×4.0mm，5μm）;流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸铵（68∶10∶22∶0.5）;流速:1ml/min;检测波长:220nm;柱温:室温，在上述条件下样品中熊果酸（保留时间为18.9min）与齐墩果酸（保留时间为17.8min）等成分分离度大于1.5，理论塔板大于8000，见图1～2。

图1 熊果酸对照品HPLC图谱图2 山茱萸HPLC图谱2.2 对照品溶液的制备取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醇醚适量，加热回流提取4h，提取液回收乙醚至干，残渣加石油醚（30℃～60℃）浸泡2次，每次1 5ml（约浸泡2min），倾去石油醚，残渣加甲醇微热使溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.498mg的对照品溶液。

山楂含片中熊果酸的含量测定

山楂含片中熊果酸的含量测定目的建立山楂片中熊果酸的含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法测定熊果酸。

色谱柱：phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm），流动相：以乙腈-0.1%磷酸水洗脱，流速1.0ml/min，检测波长：210nm，柱温40℃。

结果阴性对照无干扰，熊果酸在13.5～53.9ng范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为98.3%，RSD=0.9（n=9），该法操作简便，方法稳定，专属性强，可作为三箭草和堂山楂含片的质量控制方法。

标签：山楂含片；HPLC；熊果酸；含量测定三箭草和堂山楂含片由山楂、白砂糖制成。

山楂中富含熊果酸等成分，具有疏肝理气，活血化瘀，助消化等功效，主要用于治疗脂肪肝和肝纤维化等症状。

本研究采用HPLC法对三箭草和堂山楂含片中指标成分熊果酸进行含量测定。

经查阅文献，尚未有对其成分熊果酸做含量测定的报道。

1 仪器与试药1.1 仪器Aglient 1260生物惰性四元高效液相色谱仪，德国梅特勒-托利多XA205DU电子分析天平。

1.2样品山楂含片：广西梧州三箭制药有限公司保健品厂出品（批号20120816，20121217，20120320）；阴性样品：按处方缺山楂按工艺制备。

熊果酸对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110742-200517，供含量测定用）；其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱phenomenex Kinete x2.6u XB-C18 100A柱（100 mm×4.6 mm ，5μm）；乙腈-0.1%磷酸水溶液（68：32）为流动相；流速为1.0ml.min-1；检测波长为210nm。

2.2 对照品溶液的制备精密称取熊果酸对照品1.078mg置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1ml含107.8μg的溶液。

高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量

高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量摘要：为建立质控指标，有效控制药品质量，建立高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量。

色谱柱为Agilent zorbax SB-18柱（4.6mm×150mm，5µm），流动相为乙腈—甲醇—0.5%乙酸胺（60：12：28），流速为1.0ml·min-1，检测波长为215nm，柱温为25℃。

熊果酸在0.05088～0.2544mg·mL-1的范围内与峰面积呈良好线性关系，熊果酸回收率为95.87%，RSD为0.67% ，方法重复性良好，RSD为1.8%，12小时稳定性的RSD为1.6%，结果表明此方法高效便捷，为熊果酸含量测定提供了依据。

关键词: 高效液相色谱法；六味地黄胶囊；熊果酸；含量测定六味地黄胶囊由六味药制成，其特点是补泻并用，具有滋阴补肾之功效，是的滋补肾阴的经典名方。

对六味地黄胶囊主药的有效成分建立质控指标，是控制药品质量的主要手段。

山茱萸中含有多种有效成分，熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、没食子酸等[1]。

其中熊果酸具有抗肿瘤，护肝、抗菌、免疫调节等多种药理作用[2-3]。

具有较高的研究价值。

目前熊果酸含量的测定方法有薄层扫描法、比色法、高效液相色谱法[4-6]。

《中国药典》2015版一部[7]采用薄层扫描法对六味地黄胶囊中熊果酸进行含量检测，该法操作复杂、烦琐，耗时费力，准确性和重现性差。

为了更高效准确测定熊果酸的含量，建立高效液相色谱法进行含量测定，现报道如下。

1.材料、试剂与仪器1.1供试品六味地黄胶囊：修正药业集团股份有限公司，S1；江西普正制药有限公司，S2；黑龙江省济仁药业有限公司，S3；大连汉方药业有限公司，S4；通化茂祥制药有限公司，S5。

1.2试剂及试药熊果酸对照品，购于中国食品药品检定研究院，批号为110742-200519）；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇、乙酸胺为分析纯。

1.3仪器电子分析天平：MS205Du，梅特勒-托利多（上海）有限公司；超声仪器：KQ5200DB，江苏省昆山市超声仪器有限公司；紫外可见光分光光度计：Agilent Cary60，安捷伦科技有限公司；高效液相色谱仪：Agilent 1260（紫外检测器），安捷伦科技有限公司1.试验方法与结果2.1色谱条件与系统试用性试验Agilent zorbax色谱柱：SB-C18；流动相：乙腈-甲醇-0.5%的乙酸铵溶液（60：12：28）；流速:1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：215nm；进样量：20µL。

熊果酸的含量测定

微波-超声辅助协同萃取-高效液相色谱法测定新疆野蔷薇根中总皂苷的含量其买古丽·阿沙木，努尔皮达·阿卜拉江，迪丽努尔·马里克*（新疆师范大学化学化工学院,新疆乌鲁木齐840054）摘要：建立了用微波-超声辅助提取，高效液相色谱测定野蔷薇根中总皂苷的方法，以野蔷薇根总皂苷含量为考察标准，研究了提取时间、乙醇浓度、微波-超声功率、料液比这四个因素对总皂苷含量的影响。

该方法线性范围宽，检测限为0.3μg/L，平均相对标准偏差2.2%，加标回收率在99~104%之间。

结果表明，该方法的灵敏度高并且具有较好的重复性、准确性及稳定性。

关键词：野蔷薇根；总皂苷；超声；微波；HPLC法。

Determination of total saponins in Rosa multiflora Thunb by Microwave-ultrasonic assisted extraction -high performance liquid chromatography (HPLC)QIMANGUL·Hasan，NURPIDA·Ablajan，DILNUR·Malik(School of chemistry and chemical engineering xin jiang normol university，Urumqi 830054）Abstract： A microwave-ultrasonic assisted extraction-high performance liquid chromatography(HPLC) method for the determination of total saponins in Rosa multiflora Thunb was established ，Regarding the content of total saponins in Rosa multiflora Thunb as the index of investigation, the factors such as the extraction time, ethanol concentration, power of microwave, ratio of solid to liqud as affecting the content of total saponins were studied.Under the optimum extraction conditions,the method yields a good linearity and the low limits of detection are 0.3 μg/L.The recovery was between 99%～104% with relative standard deviation was2.2% . The results shown that the method has Good Repeatability, sensitivity ,stability and accuracy. Keywords: Rosa multiflora Thub; Total saponins; Ultrasonic; Microwave; HPLC 野蔷薇（Rosa multiflora Thub）属于蔷薇科蔷薇属植物，野蔷薇富含多种人体所需的营养物质[1-2]，有较大开发利用价值，现代研究证明，野蔷薇中含有熊果酸、齐墩果酸等三萜类化合物[3]。

熊果酸含量测定

熊果酸含量测定
照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VID）测定。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂，以0.5%磷酸溶液：乙睛：甲醇（7:33：60）为流动相；检测波长为210nm，理论塔板数不低于3000。

对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品0.0063g，至25ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取本品适量，研细，精密称取0.0065 g至25ml 容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

健胃消食片中熊果酸的含量测定

ＨＬＰＣ法测定健胃消食片中熊果酸的含量，灵敏度高、准确、快速、属性强、专重现性好。可用于健胃消食
片中熊果酸的含量测片；ＰＣ；熊果酸
ＤｔｍｉａｏｆｓｌｃｉｗｉｉｓｉａｌＬＵＷＷＵＹ— ｏｇＧａｇｈｕＣｅｌｉｈｒｅｅｎｔｎｏｏｃＡｉｉＪａｅＸａｈｂｅｒｉＵｒｉｄｎｎｏＴｔ／ｅ．ｉｈｎ．ｕｎｚｏｈｎｉＰａ— ｚｊ
ａｏｎｗｓ．３０３ｇ１ｖｒｇｅｏｅａ９．４，ＲＤ０８％（ｍｕｔａ００２— ．２，１ｅａｅａｅｒｃｖｒｗｓ９７％１ｙＳ．４ｎ：６．ｏｃｕｉＴｅ）Ｃｎｌｓｎｏｈ
ｍｅｈｄｉｉｌ，ｆｓｎｃｕａｅＩｃｎｂｓｄｆｒｔｅｑａｉｏｔｌｆＪａｗｉａｓｉａｌｔｔｏｓｓｍｐｅａｔｄａｃｒｔ．ｔａｅｕｅｏｕｌｙｃｎｒｉｎｅＸｉｏｈｂｅ．ａｈｔｏｏｔ
当提高温度一方面有利于蔗糖的水解，利于脱水有反应的进行，应温度低，解速度慢，水不完反水脱全，收率低。但温度过高，然水解完全，可能发虽但生产物深度裂解，化，合，反应物粘稠，黑，氧聚使焦
ｈｏａｅｗａ．／ｎＴｅｅｔａｅｅｇｈｗｓ２０ｎＲｅｕｔＴｅｆｗｒｔｓ１０ｍｌｍｉ．ｅｄｔｃｉｅｗｖｌｎｔａ１ｍ．ｓｌＴｅｌｅｒｒｎｅｏｒｏｉｃｄｌｈｖｓｈｉａａｇｆｓｌａｉｎｕｃ

HPLC法测定熊果酸自微乳中熊果酸的含量

安徽医药
Ａｈｉｄａｎｈｒｃｕｉｌｏｒａ２１ｅ；６９ｎｕＭｅｉｌｄＰａｍａｅｔａＪｕｎｌ０２Ｓｐ１（）ｃａｃ
・２７・１５
◇药物分析 ◇
ＨＬＰＣ法测定熊果酸自微乳中熊果酸的含量
钦富华，林杭娟高建青，
（５１）ｎｏａａ．ｌｒｎＴｅｄｔｔｎｗｖｌｇａｔ１ｎｎｅｔｐｒｔｒａ３ ℃ ．ｓｌＵｓｌｃｄ８：５ａｄｆｗｒｔｗｓ１０ｍ・ｉ～．ｈｅｃｏａｅｅｔｗｓａ２０ｍａｄｔｍｅｕｅｔ０Ｒｅｕｔｌｅａｅｉｎｈｈｅａｓｒｏｃａｉｉｐｅｅｔｏｄｌｅｒｏｅａｏｅｒｎｅｏ４ｒｓｎｅａｇｏｎａｒｌｔｎｉｔｇｆ０—１０ｍＬ（：．９）Ｔｅｐｅｉｏｎｃｖｒｆｅｏｏｆｒｅｄｉｃｒｉｎｈａ６ｇ’ ｒ０９９９．ｈｒｃｉａｄｒｏｅｏｔｄｃｎｍｄｔｓｎｅｙｍｈｏｏ
０３．％磷酸（５１）８：５为流动相，流速１０ｍｍｎ检测波长２０ｎ柱温３￣．ｌ・ｉ～，１ｍ，０Ｃ。结果面积呈良好的线性关系（＝０９９９，ｒ．９）方法精密度和回收率均符合要求。结论
微乳制剂的质量控制。关键词：熊果酸；自微乳；ＰＣ；量ＨＬ含
ｔｍＭｅｏｓＡｉｎＣＣ８ｏｍ２０ｍ × ．ｍ，ｍ）ｗｓｕｅｉｏｉｈｓｆｃｔｎｒｅ．％ｐｏｐｏｃａｉｅ．ｔｄｇｅｔ・ｌｃｌｎ（５ｍ４６ｍ５ｈｌＴｕａｓｄｗｔａｍｂｌｐａｅｏｅｉｉ－３ｈｓｈｒｃｄｈｅａｏｔｌＯｉ

健胃消食片中熊果酸的含量测定

健胃消食片中熊果酸的含量测定刘炜吴义忠摘要目的建立健胃消食片中熊果酸的含量测定方法。

方法采用HPLC法测定熊果酸含量,ODS为色谱柱,流动相为乙腈-0 2%磷酸(90:10),检测波长210n m,流速1m l/m i n。

结果熊果酸进样量在0 032~0 32 g范围内线性关系良好,平均回收率99 74%,RSD为0 84%(n=6)。

结论HPLC法测定健胃消食片中熊果酸的含量,灵敏度高、准确、快速、专属性强、重现性好。

可用于健胃消食片中熊果酸的含量测定。

关键词 HPLC;健胃消食片;熊果酸Determ i nation ofU rsolic Aci d i n Jianwei X iaoshi Tabl et L IU Wei,WU Yi-zhong.Guangzhou Chenliji Phar-m aceutica Fact ory.Guangzhou510130,ChinaAbstract Objective To establi sh a m et hod for deter m i n i ng ursoli c aci d i n Ji an w ei X i aosh i tab l e.t M ethods HPLC m ethod w as used.Themob ile phasew as aceton itrile-0 2%phosphori c acid sol ution(90:10). The fl ow rate was1 0m l/m i n.The detecti ve w avelength w as210n m.R esults The li near range of ursolic acid a m ount was0 032~0 32 g,The average recovery w as99 74%,RSD0 84%(n=6).Conclusi on The m ethod i s sm i p l e,fast and accurate.It can be used for the qualit y control of Jian w ei X iaos h i table.t K ey words Jianwei X iaos h i Tab l e;t H PLC;U rsolicA ci d健胃消食片有健胃消食的功能,临床多用于脾胃虚弱所致的食积之症,处方由太子参、陈皮、山药、炒麦芽、山楂组成。

熊果酸检测

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熊果酸检测
熊果酸（Ursolic acid），又称为乌索酸、乌苏酸，是一种五环三萜类化合物，存在于夏枯草、铁冬青等多种植物中。

具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗糖尿病、抗溃疡等多种生物学功能，目前已广泛应用于医药领域。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液质联用(LC-MS)技术，可高效、精准的检测熊果酸的含量变化。

此外，迪信泰检测平台还可检测其他多种中药成分，方法成熟，可高效处理大批量样本。

HPLC和LC-MS测定熊果酸样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周。

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。

2. 相关质谱参数（中英文）。

3. 质谱图片。

4. 原始数据。

5. 熊果酸含量信息。

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。

熊果酸含量测定方法研究进展

熊果酸含量测定方法研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【关键词】熊果酸；含量测定方法熊果酸（ursolie acid，UA）又名乌索酸、乌苏酸，属于三萜类化合物，广泛存在于熊果、白花蛇舌草、女贞子、乌梅等天然植物和草药中，具有抗炎、护肝、降血脂等多种生物学活性［1～4］。

目前许多中药材及其制剂常选用熊果酸的含量作为其质量控制指标。

本文对熊果酸含量测定方法的研究进展综述如下。

1 分光光度法李国章等［5］建立了湘产3种苦丁茶中熊果酸含量测定的分光光度法，具体操作是取苦丁茶经索氏提取器提取后，加入5%香草醛－冰醋酸、高氯酸显色，在波长548 nm处测定吸光度，结果熊果酸在4～20 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好，加样回收率为98.96%。

罗启剑等［6］采用同样方法测定了连钱草中熊果酸含量，结果熊果酸在0～18 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好，加样回收率为100.64%。

2 薄层扫描法白洁等［7］采用双波长薄层扫描法测定了夏枯草中熊果酸的含量，具体操作为取夏枯草药材粗粉经95％乙醇超声提取两次，滤液用70℃水浴蒸干，残渣用石油醚浸泡两次，挥干溶剂，用95％乙醇溶解后测定。

采用硅胶G板，以环己烷－氯仿－醋酸乙酯（20∶5∶8）为展开剂，用10％硫酸乙醇溶液显色，选用λS=540 nm，λR=700 nm进行双波长反射式锯齿扫描，结果熊果酸在0.314～1.570 μg范围内线性关系良好，加样回收率为99.3％。

张军等［8］建立了狼疮静颗粒中熊果酸的薄层扫描法测定方法，具体操作为取狼疮静颗粒用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液水浴蒸干乙醚，残留物加无水乙醇－氯仿（3∶2）混合液溶解后测定，以环己烷－氯仿－醋酸乙酯－甲酸（20∶5∶8）为展开剂，用10％的硫酸乙醇液显色，以λS=520 nm，λR=700 nm进行双波长薄层扫描，结果熊果酸在0.498～3.084 μg范围内线性关系良好，加样回收率为97.91％。

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该方法线性范围宽，检测限为0.3μg/L，平均相对标准偏差2.2%，加标回收率在99~104%之间。

结果表明，该方法的灵敏度高并且具有较好的重复性、准确性及稳定性。

关键词：野蔷薇根；总皂苷；超声；微波；HPLC法。

三萜类化合物是自然界中一类重要化合物，*基金项目：国家自然科学基金（21165018）项目资助作者简介：其买古丽，女，（维吾尔族）硕士研究生，主要从事天然产物的研究。

联系作者：迪丽努尔.马里克（1964-），女，教授，主要从事天然产物研究。

（pkudilnur@）具有广泛的生理活性，有溶血、抗癌、解热、抗炎、镇痛、抗菌和抗病毒作用[4]。

总皂苷（Total saponins）是存在于植物界的一类比较复杂的苷类化合物，按其苷元结构可分为甾体皂苷和三萜皂苷。

它的分子式C30H48O3分子质量456，它具有溶血，止血，提高血小板内C AMP含量，降低血小板凝剂，降低血脂，清除血自由基，扩张冠脉，扩张血管，降低心肌耗氧量抗心律失常，抗炎，抗氧化，镇痛作用，抗纤维化，抗衰老，抗肿瘤，目前主要应用之中在心脑血管系统疾病何种去神经系统疾病[5]。

由于其广泛的生物学活性,近年来国内外对其提取、含量测定等方面进行了大量的研究工作[6-10]。

由于超声微波协同萃取与传统提取方法相比具有快速、高效、安全可靠、环保等优点，本实验采用超声微波协同萃取新疆野蔷薇根中总皂苷并且尝试利用HPLC方法对新疆野蔷薇根中总皂苷进行测定，HPLC方法简单、分离度好、精密度高、分析时间短，可用于实际样品的测定，对开发新疆野蔷薇有一定的参考价值。

1.试验材料，试剂与仪器1.1材料蔷薇根：采自阿勒泰县，粉碎，过筛，备用。

1.2 试剂齐墩果酸标准品（中国药品生物制品检定所），无水乙醇，甲醇（色谱纯），超纯水，乙腈（色谱纯）。

1.3 仪器高效液相色谱仪（安捷伦1200LC，美国）；色谱柱（安捷伦公司HC-C184.6×150mm,粒径为5μm）；XH300B型微波超声波组合合成∕萃取仪（北京样祥鹄科技发展有限公司生产）；SHZ_D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂生产)；RE_52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂生产）；AL204型电子天平（梅特勒—托利多仪器有限公司生产）。

2．试验方法2.1.色谱条件AgilentHC-C18(4.6mm×150mm，粒径为5um）色谱柱，分别选取流动相乙腈-水，甲醇-水，乙腈和酸度不同的去离子水，同时对不同流速，不同控制温度进行实验。

2.2标准溶液的配制、线性范围及最低见出线精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品2.4mg置于10ml容量瓶中,，加甲醇定容至刻度，摇匀得浓度为0.24mg/ml的对照品储备液，置于冰箱中密封保存。

准确量取储备液用甲醇定容，配成不同浓度的溶液，即0.024mg/ml，0.048mg/ml，0.096mg/ml，0.144mg/ml，0.192mg/ml，0.24mg/ml超声处理30min，并用0.45μm 微孔滤膜过滤，待仪器进行使用。

并测定出最低检出限。

2.3野蔷薇根样品前处理准确称取粉碎后的野蔷薇根5g于100mL圆底烧瓶中，在一定料液比、溶剂浓度、温度、功率、提取时间等条件下微波超声波组合合成∕萃取仪提取一定时间，取出过滤，将滤渣重复提取2次后过滤，合并3次所得滤液进行减压浓缩。

将浓缩溶液分别放入25mL容量瓶用甲醇定容至刻度，取上清液用0.45μm微孔虑膜过滤，待仪器进行使用。

2.4 样品回收率实验选用在空白样品中添加齐墩果酸标准溶液的浓度0.17mg/ml，每个加标水平重复5次，测定总皂苷的回收率。

2.5正交试验因素水平设计根据已有的资料和实际情况，试验选用提取时间、乙醇浓度、微波-超声功率、料液比作为考察因素，采用L9(34)正交表进行优选。

正交试验各因素水平如表1 所示。

表1 因素水平表Table1 factors level table水平A提取时间/min B料液比(g/mL) C功率/w D乙醇浓度/％1 10 1:10 400 852 20 1:15 500 903 30 1:20 600 953, 结果与分析3．1 色普条件的优化最佳波长的选择：在206～380nm 下，对48ug/ml的齐墩果酸进行扫描，结果选择254nm 为实验最佳吸收波长，该色谱条件下可以降低最小检测量。

HPLC 分离条件的确定：流动相由乙腈和水（0.01%磷酸水溶液）组，因为使用乙腈能更快的获得极限的稳定，改善峰形，缩短出峰时间。

如用乙腈-水作流动相不能获得很好的峰形而且峰托尾，改用0.01%磷酸水溶液-乙腈作流动相可以峰形较大改善。

随着酸性的加大峰形更好，但酸度过高对色谱柱造成损伤。

因此以乙腈–去离子水（0.01%磷酸水溶液）选为流动相，即乙腈：水=12：88 。

根据已有的资料和实际情况（柱子温度对分离度影响较小），结果柱温选为30℃，流速0.8mL/min。

综上所述，高效液相色谱操作条件确定为：流动相乙腈：水=12：88，流速0.8mL/min，紫外检测波长254nm，柱温30℃，进样量为20μl。

在该色谱条件下齐墩果酸标准品的色谱图（如图1），保留时间为3.39min。

图1 对照品色谱图Figure 1 reference substance chromatogram图2 样品色谱图Figure 2 sample chromat3．2 回归方程、相关系数与检出限取6种不同浓度的标准溶液，即0.024、0.048、0.096、0.144、0.192、0.24mg/ml，依次进样20μL ，在选定色谱条件下对每个质量浓度进行3次测定，以峰面积为纵标，对照品浓度为横坐标做标准曲线(见图3)，得回归方程：y=36617.8008x-194.58907 ，相关系数R2=0.998。

线性范围0.024～0.24mg/ml 。

按照仪器振动峰3倍的峰可以计算出齐墩果酸的浓度，该浓度成为检出限，检出限为0.3ug/l 。

图3 齐墩果酸标准品工作曲线Figure 3 oleanolic acid standard product work curve3. 3加样回收率选用在空白样品中添加齐墩果酸标准溶液的浓度0.17mg/ml，每个加标水平重复5次，测定野蔷薇跟中总皂苷的回收率和标准偏差，结果如表2所示，样品加标色谱图见图2表2回收率与精密度Table 2 recovery rate and prec样品测定量加入量测出总量回收率/％ RSD/％(n=5) 1.91 1.02 2.94 100.11.92 1.022.96 101.91.91 1.022.92 99.0 2.21.90 1.022.94 101.91.94 1.02 3.01 1043．4 正交试验结果以齐墩果酸提取率为指标，对表1 所选定的考察因素做L9(34)正交试验，其结果见表3。

由试验结果并通过极差R的大小可知,各试验因素对总皂苷提取率影响的大小次序为：C>A>D>B，即对野蔷薇根中总皂苷提取影响最大的因素是微波-超声提取功率,其后依次为微波-超声提取时间、乙醇浓度和料液比。

最佳提取条件是：C3A3B1D2，微波-超声提取时间30min，乙醇浓度90%，功率600w，料液比1:10表2L9(34)正交试验设计及结果。