熊果酸液相检测方法(1)

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高效液相色谱法测定湖北栀子熊果酸含量

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高效液相色谱法测定湖北栀子熊果酸 பைடு நூலகம்量
曾令红
（黑龙江天辰药业有限公司，黑龙江哈尔滨１５００００）
摘要：本文采用高校液相测定了湖北栀子中熊果酸的含量，固定相为：安捷伦Ｃ１８（４．６ａｒｍ ×２５０ｍｍ，５ｕｍ），以乙腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺（５０：３０：２０：０．０２：０．０４）为流动相，检测波长为２１０ｎｍ，流速１．０ｍＬ・ｍｉｎ一１，柱温：３０￣Ｃ。熊果酸在１００～５００ｇ－ｍＩ１范围内呈良好的线性关系。熊果酸的平均回收率为９９－３％，ＲＳＤ为０．６６％（ｎ＝６）；此方法简便、准确、重现性好，可用于湖北栀子中熊果酸的含量测
定。
关键遢湖北栀干锯果酸玲量栀子（学名：ＧａｒｄｅｎｉａｉａｓｍｉｎｏｉｄｅｓＥｌｌｉｓ）￣名：支子、越桃、山栀结果表明此方法的重现性良好。子、枝子、小卮子、黄栀子、山栀、木丹、鲜支、卮子、黄鸡子、白蟾，是２．７稳定性试验。茜草科植物栀子的果实。栀子的果实是传统中药，具有护肝、利胆、依照２．３项下供试品制备方法制备供试品溶液至于零摄氏度分别在０，０．５、１．０、１．５、２．０小时精密吸取供试品溶液注入液降压、镇静、止血、消肿等作用。在中医临床常用于热病心烦、湿热黄冰箱内，进样测定，供试品熊果酸峰面积积分值的ＲＳＤ为０．５８％。疸、淋证、肝火目赤、口舌生疮、扭伤肿痛等。《药性赋》记载： “ 味苦，相色谱仪，性大寒，无毒。沉也，阴也。其用有二：疗心中懊憔颠倒而不得眠，治结果表明熊果酸至于零摄氏度冰箱内至少在２小时内稳定。２．８回收率试验。脐下血滞小便而不得利。易老云：轻飘而象肺，色赤而象火，又能泻采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各６份，精密肿中之火。 ” 栀子具有保护肝脏、抑制肝癌细胞、防治动脉粥样硬化、抗血栓、镇痛解热、抗炎等作用。本文采用高校液相测定了湖北栀称定，分精密添加一定量的熊果酸对照品，按供试品制备所述方法子中熊果酸的含量。制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。６次１仪器与试药测定的平均回收率为９９．３％，ＲＳＤ为０．６６％。ＧＷ— ＵＮ超纯水器（北京普析通用仪器有限责任公司）；ＬＣ３０００２．９样品含量测定。高效液相色谱仪（安徽皖仪科技股份有限公司）；ＤＣ一０５０６Ａ高精度依照上述含量测定方法，测定湖北栀子三批样品，每批测定三液晶显示低温恒温槽（上海衡平仪器仪表厂）；ＳＰＣＣ一６一ＨＴＤ数码可次。调超声波清洗机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；奥豪斯Ｅｘ — ｐｌｏｒｅｒ专业型分析天平（奥豪斯仪器上海有限公司）；ＵＶ一５１００Ｈ型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。熊果酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（现代东方（北京）科技发展有限公司海淀分公司）、冰醋酸（现代东方（北京）科技发展有限公司海淀分公司）、甲醇（格耐博生物科技（上海）有限公司）、磷酸（现代东方（北京）科技发展有限公司海淀分公司）、三乙胺（格耐博生物科技（上海）有限公司）、三氟乙酸（现代东方（北京）科技发展有限公司海３讨论淀分公司）。分别考察流动相为１％醋酸（Ａ）一乙腈（Ｂ），梯度洗脱（０ｍｉｎ，２含量测定１０％Ｂ；７ａｉｒｎ，３３％Ｂ；５５ｍｉｎ，３３％Ｂ），乙腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺２．１色谱条件。（５０：３０：２０：０．０２：０．０４），乙腈（Ａ）一水（Ｂ）为流动相，梯度洗脱［０ｍｉｎ依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安（１８％Ａ）２４ｍｉｎ（２２％Ａ）＿＋２６ｍｉｎ（２６％Ａ）一３０ｍｉｎ（３２％Ａ）一５０ｍｉｎ捷伦ｃ。规格为（４．６ｍｍｘ２５０ｍｍ，５ｕｍ）；流动相为乙腈一甲醇一水一磷（３３．５％Ａ）－－＊５５ｍｉｎ（３８％Ａ）１，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，乙腈一水一三氟乙酸酸一三乙胺（５０：３０：２０：０．０２：０．０４）；检测波长为２１０ｎｍ；流速１．０ｍＬ・（６：９４：０．０５），水一甲醇一三乙胺（６０：４０：０．０１），甲醇一水一冰醋酸（４５：ａｉｒｎ；柱温：２５￣Ｃ。理论板数按熊果酸峰计算应不得低于２０００。５５：１），乙腈一０．０８％磷酸溶液（２０：８０）不同比例的流动相，结果以乙２．２供试品溶液的制备。腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺（５０：３０：２０：０．０２：０．０４）为流动相，供试品各取湖北栀子，低温干燥，粉碎，精密称取，加４０毫升甲醇，超声峰分离效果最好，故选用以乙腈一甲醇一水一磷酸一三乙胺（５０：３０：２０：提取ｏ．５小时，过滤，将滤液转移置５０ｍｌ棕色容量瓶中，用甲醇稀０．０２：０．４）０为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于湖北栀子释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 ≮中熊果酸的含量测定。湖北栀子中熊果酸的含量按干品算不少于２．３对照品溶液的制备。０．３ｍｇｇ。试验发现对照品溶液、样品溶液要置于０￣Ｃ冰箱中贮存，测精密称取熊果酸对照品约５ｍｇ，用流动相溶解并稀释成每ｌｍｌ定时分析室的温度控制在２５￣Ｃ左右，以避免熊果酸分解对结果造成中含２００１ｘｇ的溶液，作为对照溶液。影响。２．４准曲线的制备。参考文献制备浓度为１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００￣ｇ・ｍＬ一［１］毛卫，贾玉杰，姜妙娜．栀子提取液对重症胰腺炎大鼠过氧化损伤的对照品溶液，分别精密吸取１０１￣Ｌ注入ＨＰＬＣ，记录色谱图。以峰的影响【Ｊ】．中国中西医结合外科杂志，２００４（２）．面积积分值Ａ（ｇ）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算［２］张德权，吕飞杰，台建祥，等．栀子黄色素对四氯化碳肝损伤小鼠回归方程。试验表明，熊果酸对照品在１００ — ５００￣ｇ・ｍＩ『范围内线性的影响ｆＪ】．营养学报，２００２（３）．关系良好。【３】王莎，周小琴，司徒少金，等．栀子药材环烯醚萜类和西红花酸类２．５精密度试验。成分ＨＰＬＣ指纹图谱研究［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１２（１９）．依照２．３项下制备对照品溶液，精密吸取熊果酸对照品溶液［４】杨奎，闵志强，石娅萍，等．栀子总环烯醚萜苷对脑出血大鼠炎症ｌＯＩｘＬ重复进样６次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的反应与神经元凋亡的影响［Ｊ］．中药新药与临床药理，２００９（１）．ＲＳＤ为０．８１％。结果表明，本实验精密度良好。［５］何兵，田吉，李春红，等．不同成熟期和不同部位栀子中４种主要２．６重珊陛试验。活性成分的含量变化叨．药物分析杂志，２０１０（５）．称取同一批的湖北栀子样品６份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的ＲＳＤ值，结果ＲＳＤ为Ｏ．５６％，

超声提取高效液相色谱测定保健食品中熊果酸

超声提取高效液相色谱测定保健食品中熊果酸
靳学远;任晓燕;王谦
【期刊名称】《中国卫生检验杂志》
【年(卷),期】2008(18)3
【摘要】目的：建立测定保健食品中熊果酸的分析方法。

方法：采用超声提取熊果酸，以高效液相色谱（HPLC）法为含量测定方法。

结果：样品超声提取30 min后，其熊果酸的提取率与回流提取6 h相当。

HPLC法测定熊果酸的线性范围在0.2-2.0μg范围（相关系数为0.9999）。

相对标准偏差为3.02%，加标回收率为97.65%-98.75%。

结论：此法简单、快速、经济，是测定保健食品中熊果酸含量的有效方法。

【总页数】2页(P440-441)
【关键词】超声提取;高效液相色谱;保健食品;熊果酸
【作者】靳学远;任晓燕;王谦
【作者单位】淮南联合大学化工系
【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
【相关文献】
1.超高效液相色谱串联四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱同时测定含银杏叶提取物保健食品中的萜类内酯和黄酮醇类成分 [J], 钮正睿;郑天驰;曹进;李珉;丁宏
2.超声辅助酶法提取-高效液相色谱-原子荧光光谱联用技术测定大米中6种硒形态
[J], 曾云想; 梁婷婷; 汤明河; 金璇; 俞兴伟; 刘国强
3.超声提取-凝胶渗透色谱法净化-超高效液相色谱-串联质谱法测定鸭肠及其制品中6种常见抗生素的残留量 [J], 宁方尧;温韬
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乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱含量测定(一)讲解

乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱含量测定(一)作者：范成杰，刘友平，陈鸿平，石宇华【摘要】目的应用高效液相色谱（HPLC）法测定乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量，并以齐墩果酸和熊果酸为指标成分建立乌梅肉的质量标准。

方法采用Hypersil ODS C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；甲醇－0.2%乙酸铵水溶液（83∶17）为流动相；检测波长210 nm，流速0.8 ml/min，柱温25℃。

结果齐墩果酸的线性范围为0.168～1.512 μg，r＝0.999 6，回收率为98.00%（RSD=0.53%）；熊果酸的线性范围为0.452～4.068 μg，r=0.999 9，回收率为97.13%（RSD=1.17%）。

结论该方法简便、可靠、准确，可用于乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量比较和乌梅肉的质量控制。

【关键词】高效液相色谱法乌梅肉齐墩果酸熊果酸Abstract：ObjectiveTo determine the ursolic acid and oleanolic acid in the pulp of Fructus Mume by HPLC. MethodsThe ursolic acid and oleanolic acid were separated on C18 column.Methanol-0.2% Ammonium acetate solution (83∶17) was used as mobile phase and the detection wavelength was 254nm.ResultsThe linearity of ursolic acid and oleanolic acid was in the range of 0.168～1.512μg, 0.452～4.068μg, respectively; the average recoveries of ursolic acid and oleanolic acid were 98.00%(RSD=0.53%,n=5) and 97.13%(RSD=1.17%,n=5). ConclusionThe method is simple, quick and reproducible，and it can be used for the quality control of the pulp of Fructus Mume.Key words：HPLC; Pulp of Fructus Mume; Ursolic acid; Oleanolic acid乌梅，别名酸梅、黑梅，由蔷薇科植物梅Prunus mume (Sieb.) Sieb. et Zucc.（Armeniaca mume Sieb.）的干燥近成熟果实加工而成。

夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定

夏枯草中熊果酸含量的UPLC测定目的建立夏枯草药材中熊果酸含量的超高效液相色谱法（UPLC）测定方法。

方法采用UPLC进行测定，色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），以甲醇-0.5%冰乙酸水为流动相进行等度洗脱，流速为0.3 ml/min，柱温30℃，检测波长210 nm。

结果熊果酸在0.2461～0.4922 mg 范围内呈良好的线性关系（r2=0.9999），平均回收率为99.29%，RSD=1.74%，熊果酸在夏枯草中的含量为0.28%～0.53%。

结论该方法快速、高效、重现性好，可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。

标签：夏枯草；熊果酸；超高效液相色谱法；含量测定夏枯草为唇形科植物夏枯草（Prunella vulgaris L.）的干燥成熟果穗，味辛、苦，性寒，具有清肝泻火、明目、散结消肿之功效[1]。

夏枯草的主要化学成分有三萜、黄酮、甾体、香豆素、蒽醌、苯丙素等[2]。

其中的主要成分熊果酸具有镇静、抗溃疡、降低血糖、抗炎、抗菌等多种生物学效应[3-5]。

近年来，又发现熊果酸具有抑制癌细胞增长、转移和诱导癌细胞凋亡等作用，极有可能成为一种新型抗癌药物[6-8]。

另外，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，被广泛用作医药和化妆品原料[9]。

目前关于夏枯草药材的质量控制研究主要是以熊果酸、齐墩果酸和迷迭香酸等的HPLC含量测定和夏枯草药材的HPLC指纹图谱为主[10-14]，关于夏枯草超高效液相色谱法（UPLC）含量测定的研究还未有报道，且相比于传统的HPLC 而言，UPLC具有柱效高、分离度好和分离快等优点，大大缩短了样品运行的时间，可以满足当下高通量分析的要求。

因此，本实验采用UPLC建立夏枯草药材中熊果酸含量测定方法[15]，测定不同批次的夏枯草药材中熊果酸的含量，该方法灵敏度高，分离度好，重现性好，可以为夏枯草药材的质量控制提供更有效的手段。

高效液相色谱法测定藏药结血蒿中熊果酸含量

高效液相色谱法测定藏药结血蒿中熊果酸含量目的建立藏药结血蒿药材中活性成分熊果酸的定量分析方法，测定熊果酸含量。

方法采用高效液相色谱法（HPLC法），色谱柱为Aglient XDB C18（4.6 mm × 150 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液，体积流量1.0 mL/min，检测波长210 nm。

结果熊果酸在60~190 μg的质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r = 0.9997）；平均回收率为93.22%，RSD为2.64%。

结论所建立的HPLC 法简便快捷、准确，可用于结血蒿药材成分的定量测定及质量控制，为安全、合理、有效用药及制定藏药结血蒿的药材质量标准提供科学依据。

[Abstract] Objective To establish a HPLC method for determining ursolic acid in different fractions of Artemisia vestita Wall. ex Bess. Methods The separation was performed on Aglient XDB C18 (4.6 mm × 150 mm, 5 μm) by HPLC, using methanol - 0.1 % phosphoric as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 210 nm. Results The linear range of ursolic acid was 60-190 μg ( r = 0.9997). The average recoveries was 93.22% with RSD of 2.64%. Conclusion This method is simple, rapid and sensitive, and it can be used for the quality control of Artemisia vestita Wall. ex Bess..[Key words] Artemisia vestita Wall. ex Bess.; Ursolic acid; Assay; Quality control; HPLC结血蒿Artemisia vestita Wall. ex Bess.，藏语名普尔芒嘎保、普尔芒、普尔那，是菊科蒿属植物毛莲蒿干燥的地上部分，是西藏自治区常用植物藏药材之一。

熊果酸检测方法-药典

熊果酸
取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，作为供试品溶液。

另取枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

再取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮（5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】水分不得过5.0%(附录IX H第一法)。

总灰分不得过5.0% (附录IX K)。

【含量测定】照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-0.5%乙酸铵溶液（67:12:21）为流动相；检测波长为210nm。

理论板数按熊果酸峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加乙醇分别制成每1ml含熊果酸0.2mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品约10mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W 频率50kHz)30分钟，放冷，称定重量，加乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含熊果酸（C30H48O3）的总量不得少于90%。

高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量

高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量摘要：为建立质控指标，有效控制药品质量，建立高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸的含量。

色谱柱为Agilent zorbax SB-18柱（4.6mm×150mm，5µm），流动相为乙腈—甲醇—0.5%乙酸胺（60：12：28），流速为1.0ml·min-1，检测波长为215nm，柱温为25℃。

熊果酸在0.05088～0.2544mg·mL-1的范围内与峰面积呈良好线性关系，熊果酸回收率为95.87%，RSD为0.67% ，方法重复性良好，RSD为1.8%，12小时稳定性的RSD为1.6%，结果表明此方法高效便捷，为熊果酸含量测定提供了依据。

关键词: 高效液相色谱法；六味地黄胶囊；熊果酸；含量测定六味地黄胶囊由六味药制成，其特点是补泻并用，具有滋阴补肾之功效，是的滋补肾阴的经典名方。

对六味地黄胶囊主药的有效成分建立质控指标，是控制药品质量的主要手段。

山茱萸中含有多种有效成分，熊果酸、齐墩果酸、山茱萸苷、没食子酸等[1]。

其中熊果酸具有抗肿瘤，护肝、抗菌、免疫调节等多种药理作用[2-3]。

具有较高的研究价值。

目前熊果酸含量的测定方法有薄层扫描法、比色法、高效液相色谱法[4-6]。

《中国药典》2015版一部[7]采用薄层扫描法对六味地黄胶囊中熊果酸进行含量检测，该法操作复杂、烦琐，耗时费力，准确性和重现性差。

为了更高效准确测定熊果酸的含量，建立高效液相色谱法进行含量测定，现报道如下。

1.材料、试剂与仪器1.1供试品六味地黄胶囊：修正药业集团股份有限公司，S1；江西普正制药有限公司，S2；黑龙江省济仁药业有限公司，S3；大连汉方药业有限公司，S4；通化茂祥制药有限公司，S5。

1.2试剂及试药熊果酸对照品，购于中国食品药品检定研究院，批号为110742-200519）；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇、乙酸胺为分析纯。

1.3仪器电子分析天平：MS205Du，梅特勒-托利多（上海）有限公司；超声仪器：KQ5200DB，江苏省昆山市超声仪器有限公司；紫外可见光分光光度计：Agilent Cary60，安捷伦科技有限公司；高效液相色谱仪：Agilent 1260（紫外检测器），安捷伦科技有限公司1.试验方法与结果2.1色谱条件与系统试用性试验Agilent zorbax色谱柱：SB-C18；流动相：乙腈-甲醇-0.5%的乙酸铵溶液（60：12：28）；流速:1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：215nm；进样量：20µL。

高效液相色谱法测定苦丁茶含片中熊果酸含量

高效液相色谱法测定苦丁茶含片中熊果酸含量
危华玲;蒙大平;郭炎荣
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2008(17)3
【摘要】目的建立苦丁茶含片的熊果酸含量测定方法.方法采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-水-磷酸(90:10:0.03).流速为0.5
mL/min,检测波长为220 nm.结果熊果酸进样量在0.426～4.26μg 范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 8,平均回收率为97.56%,RSD 为0.62%(n=9).结论HPLC 法简便、准确、重现性好,适用于苦丁茶含片的质量控制.
【总页数】2页(P14-15)
【作者】危华玲;蒙大平;郭炎荣
【作者单位】广西壮族自治区人民医院药剂科,广西,南宁,530021;广西壮族自治区人民医院药剂科,广西,南宁,530021;广西壮族自治区人民医院药剂科,广西,南
宁,530021
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
【相关文献】
1.微波辅助萃取-高效液相色谱法测定苦丁茶中熊果酸的含量 [J], 丘秀珍;郭凤飞;郭建新
2.高效液相色谱法测定山楂精降脂片中齐墩果酸和熊果酸含量 [J], 林轶男;金慧子;
苏娟
3.高效液相色谱法测定小儿胃宝咀嚼片中熊果酸含量 [J], 杜小英;姜锦花;宋愿智;马东卫
4.高效液相色谱法测定消食健胃片中熊果酸含量 [J], 李培;潘广洲
5.反相高效液相色谱法测定苦丁茶含片中槲皮素和山柰素的含量 [J], 路玫;荣延平;蒙大平
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HPLC 法测定迷迭香叶提取物中熊果酸的含量
1 试剂
超纯水
甲醇（色谱纯）
乙腈（色谱纯）
磷酸
2 对照品
熊果酸对照品
3 仪器和用具
万分之一电子天平
玻璃仪器：容量瓶
0.45μm 微孔滤膜及针筒式过滤器
超声波清洗器
日本岛津LC-15C 型高效液相色谱仪
4 色谱条件
色谱柱：Diamonsil ® C18(2) 5μ 250×4.6mm
流动相：甲醇﹕乙腈﹕水﹕磷酸=57﹕33﹕10﹕0.01（V/V ）
流速：1.0mL/min
检测波长：210nm
进样量：20μL
柱温：40℃
5 操作步骤
供试品溶液的制备
取样品约30mg （精确至0.1mg ）至25mL 容量瓶，加15mL 甲醇超声溶解，溶解后加甲醇定容至刻度，摇匀，再取1mL 定容至10mL 容量瓶，摇匀，过0.45μm 微孔滤膜，待测。

标准品溶液的制备
精密称取熊果酸标准品适量，加甲醇配成浓度为0.12mg/mL 左右的溶液，过0.45μm 微孔滤膜，待测。

将标准品溶液、供试品溶液各20μL 分别注入高效液相色谱仪中检测。

6 计算
含量（%）=%1001
221⨯⨯⨯⨯⨯P M A V C A 其中 1A ：样品峰面积
2A ：标准品峰面积
C：标准品浓度（mg/mL）2
M：样品称样量（mg）1
V：样品的稀释体积（mL）P：标准品的含量。