脊髓和背根神经节免疫组化制片的实践和体会
资料：免疫组化成功的经验和失败的教训汇总
提醒0» »窗体顶端版内版内全站搜索窗体底端1...【原创】免疫组化成功的经验和失败的教训汇总 [精华]丁香园版主2007-09-22 10:37 分享分享到哪里？本人最近已做石蜡切片的免疫组化多次，多是成功的，但也遇到许多预想不到的结果和现象，现汇总问题如下，望高手们参与讨论，给出正确的、完整的、权威答案。
同时也希望大家补充问题，共同交流经验、体会、感悟。
1. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？2. DAB显色后发现切片着色不均匀：如一片着色，一片不着色或染色浅？3. 免疫组化结果老是出现阴性结果？4. 切片染色后背景太深，不易区分特异性与非特异性着色？5. 一抗从4度拿出后，为什么有人说要37度复温，目的是什么？6. 免疫组化中抗原修复的最佳条件是什么？尤其是微波修复。
7. 有人在一抗孵育前用tritonX100来通透细胞，对石蜡切片需要否？8. 苏木素复染的时间应该是多少？复染过度咋办？9. 抗原修复应在灭活POD之前还是之后？10. DAB显色时间到底多少为最佳？一定要是3~10分钟吗？11. DAB呈色后到底什么样染色是特异性染色？。
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可以60度烤20min，立即放入新鲜的xylene1－2；2. 水化不全。
应经常配制新鲜的梯度乙醇；3. 抗体没混匀。
用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂；4. 抗体孵育时，切片放倾斜；5. 抗体孵育后PBS冲洗不充分。
6. 制片厚薄不均匀等问题。
脊髓实训报告
一、实训背景脊髓是中枢神经系统的重要组成部分，负责传递大脑与身体各部位之间的信息，控制肌肉运动和感觉。
为了更好地理解和掌握脊髓的结构与功能，我们开展了脊髓实训课程。
本次实训旨在通过实验操作，加深对脊髓生理学知识的理解，提高实验操作技能。
二、实训目的1. 了解脊髓的解剖结构，掌握脊髓的节段划分。
2. 熟悉脊髓的生理功能，了解脊髓损伤后的临床表现。
3. 学会脊髓的实验操作技能，提高实验操作能力。
三、实训内容1. 脊髓解剖学观察（1）观察脊髓的横切面，了解脊髓的灰质和白质分布。
（2）观察脊髓的纵向切面，了解脊髓的节段划分。
（3）观察脊髓与脊神经的关系，了解脊神经根的起始位置。
2. 脊髓生理学实验（1）观察脊髓反射实验，了解脊髓对刺激的反应。
（2）观察脊髓损伤后的感觉、运动功能障碍实验，了解脊髓损伤后的临床表现。
3. 脊髓实验操作技能训练（1）学习脊髓的解剖操作技巧，如脊髓的分离、固定等。
（2）学习脊髓反射实验的操作步骤，如刺激脊髓、观察反应等。
四、实训过程1. 实验准备（1）提前预习脊髓解剖学知识，了解脊髓的结构与功能。
（2）准备实验器材，包括显微镜、解剖刀、生理盐水等。
2. 实验操作（1）观察脊髓横切面，了解脊髓的灰质和白质分布。
（2）观察脊髓纵向切面，了解脊髓的节段划分。
（3）观察脊髓与脊神经的关系，了解脊神经根的起始位置。
（4）进行脊髓反射实验，观察脊髓对刺激的反应。
（5）进行脊髓损伤后的感觉、运动功能障碍实验，了解脊髓损伤后的临床表现。
（6）学习脊髓的解剖操作技巧，如脊髓的分离、固定等。
（7）学习脊髓反射实验的操作步骤，如刺激脊髓、观察反应等。
3. 实验总结（1）总结脊髓的结构与功能，加深对脊髓生理学知识的理解。
（2）总结脊髓损伤后的临床表现，提高对脊髓损伤的识别能力。
（3）总结实验操作技能，提高实验操作能力。
五、实训结果与分析1. 脊髓解剖学观察结果通过观察脊髓横切面和纵向切面，我们了解到脊髓的灰质和白质分布，脊髓的节段划分，以及脊髓与脊神经的关系。
脊髓形态结构实验报告(3篇)
第1篇实验目的：了解脊髓的形态、位置、结构及其功能，通过实验观察脊髓的横切面，认识脊髓的灰质和白质分布，以及脊髓的神经纤维走向。
实验材料：新鲜牛脊髓样本、显微镜、切片、染色剂、解剖剪、解剖针、载玻片、盖玻片等。
实验步骤：1. 解剖脊髓：- 将新鲜牛脊髓样本置于解剖盘上，用解剖剪沿脊髓纵向切开，暴露脊髓的全貌。
- 观察脊髓的外观，记录其颜色、质地、长度等特征。
2. 制备脊髓横切片：- 使用解剖针轻轻将脊髓取出，置于含有生理盐水的容器中。
- 使用解剖剪将脊髓切成1-2mm厚的横切片。
- 将切片置于载玻片上，用盖玻片覆盖。
3. 染色：- 使用苏木精-伊红染色剂对切片进行染色。
- 将切片置于染色液中，浸泡约10分钟。
- 水洗切片，去除多余的染色剂。
4. 显微镜观察：- 将染色后的切片置于显微镜载物台上。
- 调整显微镜的焦距，观察脊髓的横切面。
- 观察脊髓的灰质和白质分布，记录其形态和结构。
5. 分析脊髓结构：- 观察脊髓中央的灰质，注意其形状和内部结构。
- 观察灰质周围的白色区域，即白质，注意其分布和走向。
- 观察脊髓的前根和后根，记录其走向和组成。
实验结果：1. 脊髓外观：- 脊髓呈圆柱形，颜色为淡红色，质地柔软。
- 脊髓全长约40-45cm，上端与延髓相连，下端尖削呈圆锥状。
2. 脊髓横切面：- 中央为灰质，呈蝴蝶形或H状，中心有中央管。
- 灰质周围为白质，由神经纤维组成，分为前索、侧索和后索。
- 前根和后根分别从前外侧沟和后外侧沟走出或进入脊髓。
3. 脊髓膨大：- 脊髓有两个膨大，颈膨大位于颈髓第四至胸髓第一段，腰膨大位于胸髓第九段至脊髓圆锥。
实验讨论：1. 脊髓是中枢神经的低级部分，负责躯干和四肢的初级反射活动。
2. 脊髓的灰质由神经元胞体、树突及神经胶质细胞组成，是神经冲动的处理中心。
3. 脊髓的白质由神经纤维组成，负责神经冲动的传导。
4. 脊髓的膨大与四肢的出现有关，是由于脊髓内部神经元的增多所致。
大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察
大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察
大鼠脊髓背根神经节内神经前体细胞的观察
目的:探讨大鼠脊髓背根神经节(DRG)内是否存在神经前体细胞.方法:取成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片,进行Brdu,Nestin,P75免疫荧光组织化学检测,分别取成年和胚胎大鼠DRG进行原代细胞培养,观察其增殖与分化情况,并行Nestin免疫组织化学和Brdu,P75,NF,GFAP免疫荧光组织化学鉴定.结果:在成年和胚胎大鼠DRG冰冻切片上均见有Brdu/Nestin和Nestin/P75免疫荧光双标细胞.细胞培养观察到取自DRG的细胞有分裂增殖,呈Nestin免疫组织化学阳性反应和Brdu,P75免疫荧光组织化学阳性反应;培养第三代细胞加入胎牛血清后出现分化,分化细胞呈NF和GFAP免疫荧光组织化学阳性反应.结论:大鼠DRG内存在有分裂增殖的神经前体细胞,这些细胞可以分化为神经元和神经胶质细胞.
作者：宋嵬曾水林朱建宝王磊李升阎荣李凤飞SONG Wei ZENG Shui-Lin ZHU Jian-Bao WANG Lei LI Sheng YAN Rong LI Feng-Fei 作者单位：东南大学神经生物学研究所,江苏,南京,210009 刊名：第四军医大学学报ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 27(18) 分类号：Q24 关键词：大鼠神经前体细胞神经节,脊细胞培养技术免疫荧光组织化学。
免疫组化经验总结
免疫组化经验总结免疫组化经验总结冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么？1、从一抗的选择方面来看。
有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。
2、从研究目的来看。
石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。
3、从抗原的保真性来看。
冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。
4、从操作步骤的繁琐程度看。
染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。
5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。
如何避免荧光素提前衰退？1、从荧光标记的二抗孵育开始、二抗孵育后的清洗、保存均要进行避光；2、选择质量好的荧光素标记的二抗：亲和力强且衰退时间延长；3、用含有抗荧光萃灭的封片液来封片；4、拍照时尽量缩短激发光对切片的照射时间，最好在暗场环境；5、保存要用指甲油封固后4度避光保存。
6、荧光素标记的二抗浓缩液一定要避光保存：没加石蜡，最后-70度以下低温保存；若加了石蜡油，则-20度保存即可。
普通荧光显微镜的操作指南和注意事项？1、操作指南：（1）关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯。
为延长汞灯的使用寿命，汞灯开启不到15-30分钟的请在15-30分钟后关闭汞灯。
几种免疫组化显色系统的选用与比较
第３６卷温卅Ｉ医学院学报第２期图１ＤＡＢ＋苏木素系统显色效果欠理想，背景非特异性着色明显（×１００）。
Ｆｉｇ．１ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆＤＡＢ＋Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｃｏｌｏｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｗａｓｇｏｏｄ；ｉｎｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ，ｔｈｅｎｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｓｔａｉｎｗａｓｏｂｖｉｏｕｓｌｙ（Ｘ１００）．图２ＡＥＣ＋苏木素系统显示：胞浆阳性定位准确、清晰，与背景反差强（Ｘ２００）。
Ｆｉｇ．２ＡＥＣ＋ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｃｏｌｏｒａｔｉｏｎｓｙｓ＝ｓｈｏｗｅｄ：ｃｙｔｏｐｌａｓｍｗａｓｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｌｏｃａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｗａｓａｎｄｂｅｔｔｅｒｗｉｔｈｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ．ｆ×２００）．极强，但色彩强度略低；甲基绿复染后，虽两种色彩对比欠强，但阳性细胞仍能明显区分；核快红复染后色彩对比增强，阳性部位胞浆显示明显，背景无干扰（见图４）。
２．４几种显色系统的总体比较从显色时间，阳性部位定位，复染后背景干扰情况，显色剂和复染剂反差等进行综合比较（见表１）。
表１．显色系统的效果比较Ｔａｂｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｃｏｌｏｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ注：＋表示显色效果一般；＋＋表示中等；＋＋＋表示效果最好。
一表示不能组合使用３讨论为使免疫组化结果容易识别，我们用食管下端肌间神经丛（位于环形肌和纵行肌之间）的氮能神经元作为阳性细胞。
实验结果表明，同一组织，在抗体浓度、孵育时间等条件完全相同的情况下，选用不同显色系统后，其显色效果差异很大。
尤其是对一些弱表达的抗原，用常规ＤＡＢ＇ｆＥ难清晰显示出来，因此可能产生完全相反的结果［１］，也可能在某些组织与内外源性棕黄色颗粒难区分［引，同时，ＤＡＢ系统作为实验室最常用的免疫组化显色试剂，与本实验中所选用的几种显色系统比较，其显色效果欠理想。
ＡＥＣ＋苏木素系统和４一ＣＮ＋核快红系统显色效果最佳，但该类切片只能用水溶性封片剂封图３ＡＥＣ＋甲基绿系统中，胞浆阳性显示清晰，但背景细微结构显示差（×１００）。
脊髓穿刺术实训报告总结
一、实训背景脊髓穿刺术是一种常用的神经外科操作，主要用于诊断和治疗中枢神经系统疾病。
随着医学技术的不断发展，脊髓穿刺术在临床上的应用越来越广泛。
为了提高医学生的临床操作技能，加强理论知识与实践技能的结合，我们组织了脊髓穿刺术实训。
本次实训旨在让学生掌握脊髓穿刺术的操作方法、适应症、禁忌症以及注意事项，提高临床诊断和治疗水平。
二、实训目的1. 掌握脊髓穿刺术的操作步骤和技巧；2. 了解脊髓穿刺术的适应症、禁忌症和并发症；3. 提高医学生的临床思维能力和团队合作意识；4. 培养医学生严谨、细致、负责的工作态度。
三、实训内容1. 脊髓穿刺术的理论知识：讲解脊髓穿刺术的定义、发展历程、适应症、禁忌症、并发症、术前准备、术中注意事项等。
2. 脊髓穿刺术的操作技能：通过模拟操作和真人操作，让学生掌握脊髓穿刺术的操作步骤、技巧和注意事项。
3. 脊髓穿刺术的并发症处理：讲解脊髓穿刺术可能出现的并发症，如出血、感染、神经损伤等，并介绍相应的处理方法。
4. 脊髓穿刺术的临床应用：分析脊髓穿刺术在临床诊断和治疗中的应用案例，提高学生的临床思维能力。
四、实训过程1. 理论学习：通过课堂讲解、阅读教材、查阅资料等方式，让学生掌握脊髓穿刺术的相关理论知识。
2. 模拟操作：在模拟人模型上进行脊髓穿刺术的操作练习，熟悉操作步骤和技巧。
3. 真人操作：在临床老师的指导下，对真人进行脊髓穿刺术的操作，巩固所学知识。
4. 交流讨论：在实训过程中，学生之间、学生与老师之间进行交流讨论，分享操作心得，提高操作水平。
五、实训成果1. 学生掌握了脊髓穿刺术的操作步骤和技巧，能够独立进行脊髓穿刺术操作。
2. 学生了解了脊髓穿刺术的适应症、禁忌症和并发症，提高了临床诊断和治疗水平。
3. 学生培养了严谨、细致、负责的工作态度，提高了临床思维能力。
4. 学生加强了团队合作意识，能够与临床老师和其他同学共同完成实训任务。
六、实训总结1. 脊髓穿刺术实训是医学教育中非常重要的一环，有助于提高医学生的临床操作技能和理论水平。
脊髓电刺激和背根神经节脉冲射频术治疗带状疱疹后神经痛的优劣差异
脊髓电刺激和背根神经节脉冲射频术治疗带状疱疹后神经痛的优劣差异1. 引言1.1 概述带状疱疹是一种由水痘-带状疱疹病毒引起的急性感染性疾病，常见于中老年人及免疫功能低下者。
带状疱疹后神经痛是其最常见的并发症之一，患者常表现为剧烈的持续性神经痛，给患者的生活质量造成了严重影响。
脊髓电刺激和背根神经节脉冲射频术作为治疗带状疱疹后神经痛的方法，都是通过刺激神经系统来减轻疼痛症状。
虽然二者都有各自的优劣势，但其治疗效果却存在差异。
本文将对脊髓电刺激和背根神经节脉冲射频术进行深入探讨，以期为临床医生提供更科学的治疗方案，为患者带来更好的治疗效果和生活质量。
1.2 研究背景带状疱疹是由水痘-带状疱疹病毒感染引起的急性疾病，其特征性的症状就是疼痛。
一旦带状疱疹疹疱干后，大约10%-15%的患者会发展为带状疱疹后神经痛，这是由于病毒通过感染神经细胞，导致神经炎症和神经病理性改变所致。
为了更好地了解脊髓电刺激和背根神经节脉冲射频术在治疗带状疱疹后神经痛中的优劣差异，需要深入研究两种治疗方法的治疗原理、优势和劣势，以及临床治疗效果的比较。
这将有助于为临床医生选择更合适的治疗方法，提高患者的治疗效果和生活质量。
2. 正文2.1 脊髓电刺激的治疗原理脊髓电刺激是一种通过刺激脊髓神经纤维来减轻疼痛的治疗方法。
其治疗原理主要基于“网关控制理论”。
这一理论认为，通过刺激脊髓神经纤维，可以改变痛觉信号的传导，从而干扰疼痛信息在中枢神经系统中的传递和处理过程，达到减轻疼痛的效果。
在脊髓电刺激治疗中，通过外部植入的电极在脊髓神经纤维上提供电刺激，刺激频率、电流强度和脉冲宽度等参数可以根据病人的个体差异进行调节。
这些电信号可以干扰疼痛信号的传导，促进疼痛信号的抑制，从而减轻疼痛感。
通过定期调节电刺激参数，可以实现长期稳定的治疗效果。
2.2 背根神经节脉冲射频术的治疗原理背根神经节脉冲射频术是一种通过利用电磁波的能量作用于神经节, 阻断神经传导, 从而减轻痛感的治疗方法。
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脊髓和背根神经节免疫组化制片的实践和体会第一篇：脊髓和背根神经节免疫组化制片的实践和体会脊髓和背根神经节免疫组化制片的实践和体会免疫组织化学ABC法是一种古老而经典的染色技术，由于敏感性高，操作时间短而被广泛使用，也是研究生最常用的实验方法之一[1]。
免疫组化制片过程包括灌注、取材、切片和染色四个部分，任何一个环节的失误都会影响到最终片子的质量，从而影响实验结果的展示。
作者在研究生期间采用ABC法进行了大量大鼠脊髓和背根神经节（DRG）冰冻切片的免疫组化染色实验，通过重视操作的每一个环节，改良优化一些细节，使制作出的脊髓片和DRG片质量大为提高，实验结果更为精准、美观。
以下是在实验中总结出的一些心得体会。
1灌注的好坏直接影响了固定的质量。
灌注是免疫组化实验的第一步，主要包括两个环节：灌注液的配制和灌注时的操作。
在我们实验中通常配制含4%多聚甲醛的PB缓冲液作为灌注液，一般都能有较好的固定效果。
但如果发现灌注后大鼠四肢不硬或取材脊髓太软时，可通过在灌注液中添加50~75%的饱和苦味酸，增加灌注液的组织穿透性和增强组织韧性来解决。
我们早期实验中曾使用过一只十分难染的抗体TRPV4，在DRG中染色很多次都没有阳性结果。
一次降低灌注液的浓度至2%后，可见有明显的阳性染色出现，因此适当降低灌注液的甲醛浓度，是一种针对难染抗原的方法之一。
做好准备工作后就可以进行灌注了，此过程并不复杂，但如果操作不慎，也会导致灌注失败，浪费辛苦所得的模型动物。
在我们实验中会注意以下一些细节，通常都能取得较高质量的固定效果。
①灌注前务必要彻底排尽管子内的空气和气泡，这样做主要是为了防止空气栓塞于小血管，影响灌流液与组织的充分接触。
②在暴露心脏和升主动脉根部时不仅速度要快，而且视野要充分，尽量在心脏停跳后不久即完成灌注，促进灌注液的流动。
另外，穿刺时可先在心尖处剪一小口，这样不仅能减少穿刺时的阻力，防止组织堵塞针头，也可降低因血容量急剧增多引起末梢微血管破裂。
同时应注意穿刺时，针头尖端进入升主动脉内1~2 mm即可（大鼠），不宜过长，以免因针头顶住血管壁而增加灌流阻力；也不宜过短，否则部分灌注液可能会从心脏剪开的部位漏掉。
③当灌注液进入体内后，大鼠出现四肢明显抽搐，肝脏发白，以及内脏鼓起即表明灌注成功。
如果初次灌注或操作不熟练造成组织固定效果不好时，可将组织置于灌注时的同一灌注液中4~6 h，进行后固定以增加固定效果，但后固定的时间不要超过24 h，否则会形成结晶，影响染色结果。
2取材时组织的完整性对于标本的美观十分重要。
脊髓取材相对较为简单，注意操作时器械尖端紧贴椎骨一点点掀开骨片，避免划伤组织即可。
但是DRG由于位于椎间孔内，标本小且位置深，直接去椎骨取材常易损伤DRG组织。
因此，我们采用沿坐骨神经逆行追踪L4和L5神经至椎间孔，再沿神经走行方向用力将DRG 从椎间孔拉出的方式进行取材，这样既能保证DRG结构的完整性，在熟练掌握的基础上也相对简单易行。
而且即使神经被拉断，仍可通过掀开椎骨的方式取出DRG。
需注意的是：如同时需要脊髓组织时，务必先取脊髓后拉DRG，否则会因牵拉对脊髓组织造成一定的损伤。
取材后的脊髓或DRG需在30%的蔗糖溶液中放置至组织沉底，目的是将组织中的水分充分置换出，以减少在冰冻时形成冰晶损伤组织。
但蔗糖溶液易生霉菌，若要较长时间保存组织则必须在溶液中加入0.03%的叠氮钠，否则会使组织发生霉变而无法使用。
3切片的质量是染色的前提。
神经组织多采用冰冻切片。
由于在组织冻结过程中，细胞内、外的水分都会形成冰晶，且冻结速度越慢，形成的冰晶越大，对组织和细胞形态结构的损害也就越严重。
因此我们会在冻结前将组织浸埋于OCT包埋剂中，再速冻到-20℃，以达到尽量减少冰晶形成，且支撑组织的目的。
在此过程中，包埋剂的使用既不能过多也不能太少，太少不能起到对组织的支撑作用，使切片时组织容易出现皱褶或碎裂，但太多也会增加切片后的漂洗过程，更为重要的是由于包埋剂和组织的硬度不同，容易在切片过程中带离部分或全部组织，造成切片失败。
脊髓的实验常采用连续冠状切片，而DRG因组织小，为了得到最大组织截面通常采用矢状切片，且将片厚减小到10 μm以增加切片数量。
但是由于切片薄，面积小且纤维较多，如果像脊髓片那样进行漂片染色，则可能会因漂洗过程反复挑起组织而造成损伤，而且染色结束后很难保证DRG片的平整，影响镜下观察。
因此在我们的实验中DRG片均是在切片后即贴片。
不仅如此，我们还进行连续贴片，通常一个大鼠的DRG可以连续贴出6张载玻片，每张玻片上4~5个DRG 片，这样做目的是为了得到6套结构基本相似的DRG玻片，有利于进行相似结构不同抗体的对比实验。
然而，贴片染色最大的问题就在于反复漂洗等过程中容易脱片，因此对载玻片的前期处理就显得格外重要。
我们实验中对新购的载玻片依次要经过泡酸、自来水清洗、洗洁精搓洗、双蒸水清洗、逐一挂胶、烤干、再逐一挂胶、再烤干等步骤，目的是使载玻片具有较好的粘附性；在使用时要挑选光洁无胶痕的挂胶片用来贴片，只有这样才能尽可能地减少脱片的几率。
此外，如果经费充足，也可直接购买用赖氨酸包被好的载玻片进行贴片。
4染色的质量直接决定了免疫组化的结果。
染色是免疫组化制片过程中的最后一步，也是最关键的一步。
为了保证染色的效果，我们通常会将标本进行预处理：用H2O2去除组织中的过氧化物酶，以及用血清封闭非特异性抗原。
但需注意H2O2处理时应注意时间和避光，若长时间H2O2浸泡，会使组织易破碎，而不避光则会使H2O2分解失效。
预处理之后就是加入抗体进行染色的步骤了，该过程一般需经3次抗体孵育，其中第一抗体最为重要，它将特异性地结合组织中的抗原。
由于通常购买的第一抗体大多都是多克隆抗体，往往会出现非特异性染色，因此确定抗体染色最佳浓度就显得至关重要。
那么如何确定抗体最佳浓度呢？最简单的方法当然是借鉴前人的使用结果。
但很多时候实验中会使用到新购抗体，这时就只能采用抗体梯度稀释染色的方法，筛选出染色效果最好的抗体工作浓度进行后续实验。
另外在染色过程中还需注意抗体的孵育时间。
第一抗体的孵育时间通常<24 h，生物素结合的二抗6~8 h，AB复合物则2 h左右即可。
然而对于一些不易染出的抗体，可将孵育时间均适当延长，如一抗延长至72 h，以增加抗体与抗原的充分作用。
但是孵育时间长，非特异性染色也会增多，为此最好在4℃条件下孵育抗体（除AB复合物外），这样在增加抗体作用时间的同时并不会增强染色背底。
抗体孵育后的显色一般是用DAB作用5~10 min，并加入少量H2O2加速反应。
此过程中H2O2的加入应少量多次逐步加入，这样显色才能均匀；此外若无阳性结果时也不必过度延长DAB显色时间，因加入DAB后一段时间，阳性产物是不会随着时间延长而继续增多的。
5实验中主要存在的问题和解决办法对脊髓片和DRG片免疫组化制片实验中的问题进行总结，主要包括两个方面：①没有阳性结果：可能原因主要有抗体质量不好或工作浓度不合适、标本放置时间太久等。
除了抗体质量问题外，其余都可在实验中通过摸索条件来解决。
而抗体质量不好则最难解决，可先通过降低灌注液浓度、对组织进行抗原修复、延长抗体孵育时间或适当提高抗体浓度等方法，若仍旧无法染出阳性结果，则最好尽快更换抗体，以免浪费实验时间。
②有阳性结果但质量不好：质量不好分为两种：一种是标本中出现明显空洞或标本残缺，这可能是浸糖时间不够，蔗糖脱水不充分；或取材、漂片时动作过于粗暴所致，这些问题比较容易解决。
而另一种则是出现假阳性、非特异性染色或对比度不好等，这通常是因第一抗体工作浓度过高、漂洗不充分、血清封闭不够或DAB反应时间太长所致，因此预实验就显得格外重要。
免疫组化ABC法虽然技术古老，操作简单，然而要得到高质量的脊髓片或DRG片，却并非易事。
研究生在实验中应重视细节操作，在掌握原理的基础上进行合理改良，不仅能得到满意的实验结果，也能更好地培养和提高研究生的科研素质。
参考文献：[1] 李云庆.神经解剖学[M].西安:第四军医大学出版社, 2011: 60-66.编辑/王海静第二篇：实践体会暑期社会实践心得体会成长，是一种经历；经历，是一种人生的体验。
人生的意义不在于我们拥有了什么，而在于从中我们体悟了什么。
在生命的短暂与存在的永恒之间锻造了自我，拥有真正的价值和真实的幸福。
暑假社会实践（打工际遇）给了我一个锻炼自我的平台，让我有所体会、有所启迪、有所感悟。
社会实践只是一种磨练的过程。
对于结果，我们应该有这样的胸襟：不以成败论英雄，不一定非要用成功来作为自己的目标和要求。
人生需要设计，但是这种设计不是凭空出来的，是需要成本的，失败就是一种成本，有了成本的投入，就预示着的人生的收获即将开始。
小草用绿色证明自己，鸟儿用歌声证明自己，我们要用行动证明自己。
打一份工，为以后的成功奠基吧!一首歌里面这样唱道：不经风雨，怎见彩虹，没有人能轻轻松松成功。
在现今社会，招聘会上的大字板都总写着“有经验者优先”，可是还在校园里面的我们这班学子社会经验又会拥有多少呢?为了拓展自身的知识面，扩大与社会的接触面，增加个人在社会竞争中的经验，锻炼和提高自己的能力，以便在以后毕业后能真正的走向社会，并且能够在生活和工作中很好地处理各方面的问题记得老师曾说过学校是一个小社会，但我总觉得校园里总少不了那份纯真，那份真诚，尽管是大学高校，学生还终归保持着学生身份。
而走进企业，接触各种各样的客户、同事、上司等等，关系复杂，但你得去面对你从没面对过的一切。
在学校，理论学习的很多，而且是多方面的，几乎是面面俱到的，而实际工作中，可能会遇到书本上没学到的，又可能是书本上的知识一点都用不上的情况。
或许工作中运用到的只是简单的问题，只要套公式就能完成一项任务，有时候你会埋怨，实际操作这么简单，但为什么书本上的知识让人学的那么吃力呢? 也许这是很多人都在深思的问题。
“两耳不闻窗外事，一心只读圣贤书”只是古代读书人的美好意愿，它已经不符合现代大学生的追求，如今的大学生身在校园，心儿却更加开阔，希望自己尽可能早地接触社会，更早地融入丰富多彩的生活。
时下，打工的大学生一族正逐渐壮大成了一个部落，成为校园里一道亮丽的风景。
显然，大学生打工已成为一种势不可挡的社会潮流，大学生的价值取向在这股潮流中正悄悄发生着改变。
对于大学生打工，一直是“仁者见仁，智者见智”，许多人的看法不尽相同。
每个人都有自己的人生模式，我有理由走自己选择的人生路，只要把握住自己，掌握好学习与打工的分寸，肯定能把大学这个人生阶段过得丰富多彩。
打工的途径或者形式多种多样，只要是对社会有益，对自己积累人生经历有益，还能够有少量收入，就可以毫不犹豫的参与其中。