用不同方法制备鱼类染色体装片的比较研究
鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察
鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察
要进行鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察，可以按照以下步骤进行操作：
1. 选择合适的鱼类样本：选择合适的鱼类样本，确保鱼体健康且处于成熟状态。
2. 准备鱼体标本：将鱼类标本进行解剖，取得鳃片。
小心保持鳃片的完整性，避免扭曲或损伤。
3. 预处理鳃片：用PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）或其他合适的缓冲液浸泡鳃片，以去除杂质和细胞间的粘附物质。
4. 染色体制备：将浸泡后的鳃片转移到含有半胱氨酸（Cysteine）和酶解液（例如10% 酵素溶液）的培养皿中，并用放大镜轻轻剪碎鳃片。
留在培养皿中15～30分钟，室温下酶解。
5. 停止酶解：添加冰冷的PBS或其他合适的缓冲液终止酶解作用，以停止细胞的消化。
6. 制备细胞悬液：用吸管和移液器将酶解后的鳃片过滤去除大颗粒物，获得细胞悬液。
7. 染色：将细胞悬液滴到清洁的载玻片上，利用染色方法（如吉姆萨染色、格尔染色等）给细胞染色。
8. 封片：在染色后的载玻片上加一滴透明封片剂，然后用盖玻片盖住。
9. 观察：将封好的玻片放到光学显微镜下，通过目镜或相机观察鱼类鳃细胞的染色体。
以上是鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察的步骤，具体操作时还需根据实验要求调整和优化步骤细节。
鱼类染色体制片与观察实验报告
鱼类染色体制片与观察实验报告引言染色体在生物学研究中起着重要的作用，对于理解遗传信息的传递和基因组结构至关重要。
本实验旨在采用细胞学技术，制作鱼类染色体制片，并观察染色体结构和数量的变化。
通过实验，我们希望进一步了解鱼类的细胞遗传学特征。
实验方法1. 实验材料准备：- 新鲜鱼悬浮液- 漂白液：含有3%的鳗鱼酸和0.9%的氯化钠溶液- 10%氯化锂溶液- 醋酸铬酸乙酯溶液- 各类显微镜标本玻片- 显微镜- 辅助工具：玻璃棒、塑料移液管等2. 实验步骤：- 步骤1：取适量鱼悬浮液放入离心管中，离心后将上清液倒掉；- 步骤2：向离心管中加入适量漂白液，并在4°C下放置1小时，使细胞解离；- 步骤3：去除漂白液，加入10%氯化锂溶液，温和摇动离心管，使细胞悬浮均匀；- 步骤4：去除锂溶液，加入醋酸铬酸乙酯溶液，摇动离心管，使细胞制片；- 步骤5：将制片取出，放入烘箱中，将其加热至80°C，使制片固定；- 步骤6：将制片放入显微镜标本玻片中，加入一滴甘油，并用显微镜观察染色体结构和数量的变化。
结果与讨论通过制片，并利用显微镜观察，我们可以得到鱼类染色体的结构和数量信息。
鱼类的染色体通常是线状的，并且数量较多。
我们可以通过观察染色体的形状、大小和着色情况，了解不同种类鱼类的染色体差异。
在本实验中，我们使用了漂白液和锂溶液来解离细胞和制备染色体制片。
漂白液可以去除细胞内的色素，提高显像效果。
锂溶液则是用来均匀分散细胞和保持形态的。
制片成功后，我们将制片放入标本玻片中，加入甘油来保持制片的透明度。
在显微镜下观察时，可以调整倍镜放大倍数，以获得更清晰的图像。
通过观察染色体的形态，我们可以进一步研究鱼类的遗传特征和进化关系。
不同物种间染色体的差异可以为物种分类和生物进化研究提供重要的线索。
结论本实验成功制备了鱼类染色体制片，并通过显微镜观察染色体的结构和数量的变化。
该实验方法为研究鱼类细胞遗传学特征提供了可行的技术手段。
鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析-最新国标
鱼类种质检验第12部分：染色体组型分析1 范围本文件规定了鱼类染色体玻片标本的制备和组型分析的通用方法。
本文件界定了鱼类染色体组型分析的术语和定义，描述了染色体组型分析的原理、试剂和材料、仪器和设备、玻片标本的制备和组型分析。
本文件适用于鱼类种质鉴定。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验第2部分：抽样方法3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1体细胞体外培养法somatic cell culture in vitro通过无菌操作，获取鱼的肾脏组织细胞或血细胞，在体外培养过程中，加入细胞分裂刺激物，刺激淋巴细胞大量进入分裂状态。
然后，加入适当浓度的秋水仙素，使细胞分裂被阻抑在分裂中期，而获得鱼类细胞染色体中期分裂相。
3.2体细胞体内培养法somatic cell culture in vivo通过向鱼体内注射细胞分裂刺激物，刺激淋巴细胞大量进入分裂状态。
取出肾脏组织在生理盐水中将其充分剪碎或撕碎，再加入适当浓度的秋水仙素。
3.3体细胞直接法direct method of somatic cells将小鱼浸泡在适当浓度的秋水仙素溶液中，使其分裂旺盛的鳃丝上皮细胞被阻抑在分裂中期，而获得鱼类细胞染色体中期分裂相。
3.4胚胎细胞直接法direct method of embryo cells选用发育正常的囊胚期或原肠期早期胚胎，将其细胞吹打分散后，加入适当浓度的秋水仙素，将细胞阻抑在分裂中期，获得鱼类细胞染色体中期分裂相。
3.5空气干燥法air-drying technique将收集的细胞经过低渗、固定、滴片，然后斜放静置，待其自然干燥。
3.6火焰干燥法flame-drying technique将收集的细胞经过低渗、固定、滴片，然后立即将玻片在酒精灯火焰上来回快速过火4次～5次。
鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察
鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察
摘要：
I.引言
- 介绍鱼类鳃细胞染色体标本的重要性
- 阐述快速制备和观察的必要性
II.实验材料与方法
- 列举所需材料
- 详述制备步骤
- 描述观察过程
III.结果
- 展示实验结果
- 分析结果的意义
IV.讨论
- 探讨实验过程中的问题
- 提出可能的改进措施
V.结论
- 总结实验成果
- 对未来研究的展望
正文：
鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察，对于研究鱼类生物学、遗传学和生态学等方面具有重要意义。
本文旨在提供一个简便、快速且高效的染色体
标本制备方法，并对其进行观察。
实验材料主要包括：鱼类鳃细胞、醋酸洋红溶液、盐酸酒精溶液、显微镜等。
首先，将鳃细胞置于载玻片上，用醋酸洋红溶液进行染色。
接着，用盐酸酒精溶液对染色后的细胞进行固定。
最后，利用显微镜观察染色体标本的形态和结构。
实验结果显示，通过本方法制备的染色体标本清晰可见，形态完整。
观察结果与传统的染色方法基本一致，证明了本方法的有效性。
在实验过程中，我们发现了一些问题，如染色过程中的时间控制、染色剂的浓度等。
针对这些问题，我们提出了一些可能的改进措施，如增加染色时间的梯度设置，优化染色剂的配方等。
总之，本方法为鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察提供了一个有效的手段。
鲤鱼染色体组型的研究
鲤鱼染色体组型的研究吕真(河南科技学院动物科学系，新乡，453003)摘要：方法：本文采用空气干燥法制备鲤鱼的中期染色体。
结果表明：鲤鱼染色体是二倍体，数目为2n=100，核型公式为：2n=22m+24sm+54st.t, 染色体总臂数NF=146。
结论：不同产地的鲤鱼核型之间存在差异。
关键词：鲤鱼染色体组型核型（Karyotype）是指染色体组在有丝分裂中期的表现，包括染色体的数目﹑大小﹑形态特征等。
按照染色体的数目﹑大小和着丝粒位置﹑臂比﹑次缢痕﹑随体等形态特征，对生物体内的染色体进行配对﹑分组﹑归类﹑编号等分析的过程称为染色体核型分析(Karyotype analysis)[1]。
对鱼类细胞染色体组型进行分析研究，不仅有助于了解生物的遗传组成，遗传变异规律和发育机制，而且对预测鉴定种间杂交和多倍体育种的结果，了解性别遗传机理以及基因组数，物种起源，进行种族关系的鉴定都具有重要的参考价值[ 2]。
早在本世纪三十年代就开始了对鱼类染色体的研究，以后，许多学者对大量鱼类的染色体组型进行过考察，在我国2千多种鱼类中已对约240种鱼的染色体核型作过介绍。
日本研究者Makino[3]曾以精巢为材料，以经典的切片方法，研究了鲤鱼的染色体，指出二倍体染色体数目为104，单倍体染色体数目为52。
后来Ojima和Hitotsumachi[4]以精巢与肾为材料，未经培养（直接法），采用低渗处理和空气干燥法制作染色体标本，对鲤鱼的染色体组型进行过分析,得出其二倍体染色体数目为100。
我国的相关研究是从八十年代才开始的，吴志安[5]﹑王蕊芳[6]﹑余先觉[7]等相继作出了有关染色体研究的报道。
本文对鲤鱼染色体核型进行研究分析，以期为鲤科鱼类种质资源的利用和保护提供基础资料，同时与以前的相关报道加以比较。
1．材料与方法1.1实验材料实验用鲤鱼（Cyprinus carpio）于2004年5月购于新乡市洪门镇市场，共6条，性别经过性腺鉴定为4雄﹑2雌，体重470—670g，体长25—32cm。
鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察
鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察【最新版】目录一、鱼类鳃细胞的重要性二、鱼类鳃细胞染色体标本的制备方法1.实验材料准备2.实验操作步骤a.细胞悬液的制备b.染色体的染色c.显微镜下的观察三、鱼类鳃细胞染色体标本的观察结果四、实验的结论与展望正文鱼类鳃细胞染色体标本的快速制备及观察一、鱼类鳃细胞的重要性鱼类作为水生生物，其鳃部是鱼类与水环境进行气体交换的重要器官。
鳃部的细胞结构复杂，其中的鳃细胞在鱼类的生长发育、生理生态等方面具有重要的研究价值。
通过对鱼类鳃细胞的研究，可以揭示鱼类的适应性进化、环境适应能力等方面的信息，为鱼类资源的保护与利用提供科学依据。
二、鱼类鳃细胞染色体标本的制备方法1.实验材料准备主要包括实验鱼种、消毒器械、载玻片、盖玻片、细胞悬液、染色剂等。
2.实验操作步骤a.细胞悬液的制备将实验鱼种鳃部组织剪碎，用细胞悬液将组织细胞溶解，制成细胞悬液。
b.染色体的染色将制备好的细胞悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，然后在盖玻片边缘滴加染色剂。
染色剂会逐渐渗透到细胞内部，使染色体着色。
c.显微镜下的观察在显微镜下观察染色后的鳃细胞染色体标本，观察染色体的形态、数量、排列等特征。
三、鱼类鳃细胞染色体标本的观察结果通过显微镜观察，可以发现鱼类鳃细胞染色体具有明显的条带状结构，染色体数量与鱼类基因组大小相一致。
同时，不同鱼类的鳃细胞染色体在形态、数量等方面存在差异，反映出不同鱼类在遗传信息上的差异。
四、实验的结论与展望本实验成功地制备了鱼类鳃细胞染色体标本，并进行了显微观察。
实验结果为鱼类鳃细胞的研究提供了有力的实验依据。
2种制备黄河鲤鱼染色体方法的比较及条件优化
ｖ ｒ ｔ ｅｍｅ ａ ｈ ｓ ｎ ｅ ｓａｓ ｈ ｉ ｈ ｓ １ ４ ）ｗｈ ｎ ｃ ｌｈ ｃｎ ｓｔｅ ｔ ｅ ｔｔｍｅｗａ ． ｙ ｆ ｉｇ ｅ ，ｈ ｔｐ ａ ｅｉ ｄ ｘ ｉ ｌｏ ｔ ｅｈｇ ｅ ｔ（ ． ９ ｅ ｏ ｃ ｉｉ ｅ ｒ ａｍ ｎ ｉ ｓ２ ０ｈ ｂ ｉ ｎ ｘ
的标本 背景清晰 ， 色后形态可辨 ， 染 且染色体分散 良好 ， 此间没有交联 ， 彼 放大后染色体 的测量较 易完成 ， 以进行 可
核 型分 析 ．
关键词 ： 黄河鲤 鱼 ； 染色体制备 ； 分裂
中 图 分 类 号 ： ６ ． １ ； ９ ３ Ｓ９ ５ １６ Ｑ ５
，＾、 ‘ ，
理时 间一定 时 ， 培养 时间 ３ｄ后分裂指数最 高 ， １４ ， 为 ． ６ 且分裂相在前 ３ｄ逐渐增多 ， ４ｄ 第 开始减 少 ； 同时发现 ，
在 培养 时间一定时 ， 秋水仙素处理时 间为 ２ｈ时分裂 指数最 高 ， １４ ． 为 ． ９ 因此 认为最 佳染色 体制备 条件 为 ： 培养 时间 ３ｄ秋 水仙素处理 ２ｈ 与传统 的体 内注射 Ｐ ， ； ＨＡ短期培养 法制备的染 色体标本 相 比， 外 肾细胞 培养法制备 体
文献标识码 ： Ａ
１
文 章 编 号 ：１ ０—３ ５ ２ １ ） １０ ４ —４ ０ ３４ １ （０ ２０ ～０ １０
・ ・ ．１ ．
ｏｍ Ｄａｒｌ ｏｎ Ｃｈｒｏｍ ｏｓｏｍ ｅ ｓ ｏｔ ｐｒｅｐａｒ １ ａｔ Ｏｎ ｌ ｎ ｔ Ｏ Ｗ ｔ Ｗ
ｍ ｅ ｈ ｄ ｎ ｐ ｉ ｉａ ｉ ｎ ｏ ｏ ｄ ｔ ｎ ｔ ｏ ｓ ａ ｄ ｏ ｔｍ ｚ ｔｏ ｆｃ ｎ ｉｉ ｓ ｏ ｆ ｒＹ ｅｌ ｗ ｖ ｒ ｃ ｒ ｏ ｌｏ Ｒｉ ｅ ａ ｐ
鱼类染色体制备方法概述
染色体具有数 目多、 形态小 、 分裂指数低 的特点 ， 培养皿中 ． 用小剪刀将其剪碎 ． 再将其转移到 １ ０ ｍ ｌ
制备大量分裂相且染色体 图像 清晰的片子较难 ． 离 心管 中并用 吸管 反复 吹打 ．再 吸人 一 些 生理 盐 Ｏ ｍ １ ． 混合均匀 ． 静置 ５ 分钟后取上层细胞悬 这就给鱼类染色体研究带来了诸多不便 ．加大了 水至 ｌ
人０ ． ５ 一 ｌ ｍ ｌ 卡诺 氏固定液 （ 冰醋酸 ： 甲醇体积 比为 索 出的有 ： 牙鲆在细胞终止培养前 ４ ｈ 加入终浓度 １ ： ３ ， 现配现用 ） 吹 打均匀 ， 离心 （ １ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ） ８ ｍ ｉ ｎ ， 为１ ． ５ ｕ ｇ ／ ｍ ｌ 的秋水仙素效果最好 ：半滑舌鳎在细 弃上清 。 胞终止培养前 ３ ｈ 加入终浓度为 ０ ． ０ ８ ｕ ｇ ／ ｍ ｌ 的秋水
关键词 ： 鱼类； 染 色体 ； 制 备
目前鱼类染色体标本 的制备主要有以下 ３ 种 染色体 （ Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ｏ ｓ ｏ ｍ ｅ １ 是细胞 的生命形式所携 带的 Ｄ Ｎ Ａ结构 ． 是遗传物质 的主要载体 生物体 方 法 。 细胞 中的染色体数 目和结构是该生物重要 的遗传 １ ． １ 头肾一 Ｐ Ｈ Ａ注射法 标 志之 一 。 在 真 核细 胞 中更 是 如此 。在 自然 界 中 ， 头 肾一 Ｐ ＨＡ注 射 法 是 由 山西 大 学 生物 系的 林 每个物种 的细胞 中都存在一定数量 、 大小 、 形状 的 义浩先生『 ６ １ 最早报道 的， 这是一种快速 简捷 的染 染色体 ．不 同物种 的染色体都有各 自特定 的形态 色体制备方法 ．自报道以来一直被业内学者所借 结构（ 包括染色体的长度 、 臂 比、 着丝点位置等 ） 特 鉴 。 具体实验步骤如下 ： １ ． １ ． １ 注射 Ｐ Ｈ Ａ和秋水仙素 征． 即不同物种 的染色体组型特征不一样 因此染 实 验前 １ 天按质量 比 １ ０ ｕ ｇ ／ ｇ鱼 体 重 注 射 色体研究对认识和了解生物遗传组成 、遗传变异 规 律 和物种 起 源 、进化 及种 族关 系具 有 重要 的科 Ｐ Ｈ Ａ （ 植物血球凝集素 ） ， 注射部位为实验鱼 的胸 １ ２小 时后 ，按 ８ ｕ ｇ ／ ｇ 鱼体 重 再 次 注射 学意义。 随着染色体技术的飞速发展 ， 染色体技术 鳍 基部 。 在鱼类遗传育种中的应用越来越广泛 ．如对鱼类 Ｐ Ｈ Ａ ． ４ 小时后 ．按 ２ ｕ ｇ ／ ｇ 鱼体重在实验鱼胸鳍基 进行核型分 析 、 荧光原位杂交 、 基 因定位 等 ， 然而 部 注射秋 水仙素 这些染色体研究技术都 离不开染色体标本 的制 １ ． １ ． ２ 取 材 注射秋水仙素 １ ． ５ — ２ 小时后 ．将实验鱼断尾 Ｏ分钟 ． 取 出实 验鱼 头 肾 鱼类染色体标本制备的基本原理是使用化学 及鳃 部 动 脉在水 中放 血 １ 试剂（ 秋水仙素 ） 破坏纺锤体 ． 使分裂的细胞处于 放 人 盛有 生理 盐 水 （ ０ ． ８ ％ Ｎ ａ Ｃ １ ） 的培 养 皿 中清 洗 ２ — ３ 遍 ．然 后 再将 其 置 于盛 有少 量 的生 理盐 水 的 有丝分裂中期 ． 染色体破膜后平铺在玻片上 鱼类
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Study on Different Techniques of Fish Chromosome Preparations
摘要
通过胸腔注射PHA和秋水仙素，取 血液和头肾细胞，经低渗法制片， 分别用Giemsa染液和苏木精染液染 色，观察鱼类的染色体组型，比较 收集不同组织、使用不同染色剂制 作鱼类染色体装片的效果。实验结 果表明，取血细胞分离出的淋巴细 胞和头肾，并用Giemsa染色的鱼类 染色体装片效果更好。
成本高、暂养 成活率低
测定染色体数 目并观察形态
只测定染色体 数目 测定染色a染液
头肾细胞法+苏 木精染液 头肾细胞法 +Giemsa染液
成本低、暂养 成活率高
论文框架
1 2 3 4
前言（背景） 实验方法
实验结果
分析结论
前言（背景）
研究目的：比较不同制片方法效果 研究意义：为鱼类染色体分析服务 研究现状：两种制片方法（按采集 方法不同） 1、肾细胞法 2、静脉采血法
实验方法
前 处 理 胸 腔 注 射 P H A 和 秋 水 仙 素
尾椎采血
离心 （1000 r/min， 5min ） 低渗 （30mi n~45mi n)
固 定
滴 片
染 色 （ 吉 姆 萨 和 苏 木 精）
镜 检 照 相
取头肾组织
实验结果 1、不同采集方法效果比较
头肾细胞法
（Giemsa染液）
静脉采血法
2、不同染色剂制片效果比较
Giemsa染液
（淋巴细胞）
苏木精染液
苏木精被氧化为深紫红色
肾细胞法的评价
优点：快速简便、实验条件要 求低 缺点：对实验鱼生命造成伤害、 药物浓度难以把握 适合对象：实验成本过高且在 实验室内暂养成活率不高的 鱼类
用苏木精染液染色制片的评价
优点：能够长时间存放、着色效 果明亮、背景清晰、便于辨认 染色体数目 缺点：配制试剂等待成熟时间长、 已被氧化、着色深影响对染色 体形态的观察 适合对象：不做染色体形态的深 入研究、只需要辨认染色体数 目的实验
鱼类染色体制片方法的综合结论
实验对象 实验目的 只测定染色体 数目 采用方法 静脉采血法+苏 木精染液
静脉采血法的评价
优点：染色体形态舒展自由、形 态清晰 实验鱼可以得到充分利用 缺点：技能要求高、分裂中期染 色体少 适合对象：实验成本不高且能较 快适应实验室环境的鱼类
用Giemsa染液染色制片的评价
优点：保存条件简单、染色效果 柔和、着色程度浅、染色体形 态清晰 缺点：配制过程繁琐、需现配现 用、配制时间长 适合对象：需要同时观察染色体 形态和数目的实验