酶联免疫检测方法的影响因素
影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法

影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法摘要】酶联免疫吸附试验是免疫酶技术中固相酶免疫测定的一种技术。
ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但是操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大,如不注意排除干扰因素,有可能导致显色不全、花板等现象。
现将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。
【关键词】酶联吸附试验影响因素【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2012)09-0369-021 试剂的因素1.1 试剂的选择试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。
虽然国家采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,但不同厂家出产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别,要选购知名度相对高、具有“三证”的试剂,不要用无批号的试剂,最好选用与仪器配套的试剂。
更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。
使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。
因此。
选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一。
1.2 试剂的准备在临床实验室,对试剂的准备一般不太注意,通常的做法是在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此,在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20~30 min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。
2 样本的因素2.1 标本严溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净,残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性,催化底物显色造成假阳性,严重溶血标本禁用。
2.2 标本的污染菌体可能含有内源性辣根过氧化物酶,可使实验出现非特异性显色。
因此,ELISA检测宜采集新鲜标本,如不能当时测定,5 d之内应4℃保存,1周后检测应低温冻存;同时,收集标本采用无菌试管,可防止标本的污染。
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施

影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫(EliSA)是检验科目前常用的免疫学检测方法之一,其操作方便、简单,不须要特殊设备,使其在各级医院都可应用。
但如果忽视了影响其结果的因素,难免会造成假阴性或假阳性的结果。
因此了解影响结果的因素,是减少差错事故发生很必要的。
1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面:思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。
因为我们是为人服务的,所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。
如果在工作中出现了张冠李戴,就有可能造成严重后果。
其次文化素质和技术素质很重要,我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。
还要不断努力学习新的理论知识,努力提高业务水平。
有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折,在繁忙工作中有条不紊。
所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。
2标本处理因素实验室人员收到标本后应:“三查七对”,对不符合要求的标本和申请单拒收,合格标本及时分离血清,避免溶血。
提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分,对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱,做好原始记录。
从冰箱取出的标本要预温至室温,对冰冻的样品要融化好,充分混匀再用。
3操作过程的影响因素3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18~25℃),反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等,各种条件必须符合要求。
3.2 正确使用加样器,加样器应垂直加入标本或试剂,避免摩擦包被板底部。
加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要一次性使用,加样次序要与说明书一致,否则易发生错误,造成实验重复性差。
3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大,洗涤次数不超过说明推荐的次数,洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。
不要让洗液造成孔间污染,导致假阴性和假阳性。
3.4 要保证加液量一致,我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确,滴瓶加液量不准造成显色不一,造成判断错误。
酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析

酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析发表时间:2014-05-13T09:24:22.107Z 来源:《中外健康文摘》2013年第41期供稿作者:钱瑞[导读] 因其操作简单,灵敏度高,特异性好,经济安全,不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。
钱瑞(山丹县人民医院 734100) 【摘要】目的通过对酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析,探讨各因素对结果的影响,以便寻找解决的方法和加强质量控制,从而保证检测结果的准确性和精确性。
【关键词】酶联免疫吸附试验影响因素分析【中图分类号】R446.61 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2013)41-0059-02 酶联免疫吸附试验(ELISA)是将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来,可敏感地检测生物标本中微量的特异性抗体或抗原的临床检验方法,而且其反应中各组分的成本较为底廉,特别是对肝炎病毒的检测,最基层的医院也能开展。
因其操作简单,灵敏度高,特异性好,经济安全,不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。
为辅助临床诊断与生物科研起到了积极的推动作用。
在从事检验工作多年中深知ELISA测定中影响因素较多,由于其操作步骤复杂,操作过程中每个环节都会对试验结果产生影响,甚至出现错误的结果,因此,必须加强ELISA检测的全面质量控制,保证其结果的准确可靠。
现将影响因素做以分析。
1 材料1.1试剂的准备目各种ELISA试验均有商品化的专用试剂盒。
应选择质量优良、有批准文号且在有效期内的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作。
从冰箱中取出的试剂应放在室温下或37℃平衡30分钟再进行测试。
保存试剂盒的冰箱应经常检查储存温度并做好记录,冰箱应避免频繁开关,试剂使用前应摇匀。
1.2标本的准备酶联免疫吸附实验中标本的质量也是影响结果的关键因素之一,标本的干扰物质容易引起假阳性或假阴性的结果。
1.2.1严格执行样本的查对制度,接受标本应将标本上的标签与申请单逐一核对,验收签字。
酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法

成污染或效价降低 , 可引起假 阴性 , 因此应尽量 用新鲜标本 。 冰
冻标本应避免反 复冻融 , 因冰冻标本 的反 复冻融产生的机械力
查找原因可能是这批试剂在进入科室前储存温度出现了问题,
与试剂商联 系更换新 的批号试 剂后 , 此现象 消失 。
对标本中的蛋白分子有破坏作用 , 可引起假 阴性鹳 。
箱 中取 出, 检测 时试剂盒可与室温平衡。 2 标本因素
吸附试验 。该试验用 已知抗原检测未知抗体 , 或用 已知抗 体检
测未知抗原 , 虽 然操作 简便 , 但影响 因素诸多 , 一个环节出现问 题, 都可能会导致检 测的失败 。现将 酶联免疫吸附试验常见影 响因素及处理方法总结如下。
酶联免疫 吸附试验 的常见影 响因素及处理方法
董 文婷
( 夏县人民医院 , 山西 夏县 O 4 4 4 O 0 )
临床免疫室开展的乙肝系列 、 丙肝抗体 、 艾滋病抗体 、 梅毒
特异性检测等 日常检测工作 , 最 为常用 的检测方法 为酶联免疫
疫 吸附试验 中, 试剂准备最关键的是使试剂盒在使用前 与室温 平衡 , 以满足检测要 求 , 一 般检测前 3 0 m i n即应将试剂盒从 冰
的质量 , 试剂盒从 出厂到用户手 中 , 均要历 经运输 ( 如送检 、 检
定、 发货等 ) 及运输 中的储存 环节 , 某一环节 不当 , 均影 响试 剂 盒 的临床使 用质量 。去年 我科有一段 时间所做 的表面抗 原项
目, 今天阳性 , 同一份标本 明天复检有可能是弱 阳性甚 至阴性 ,
结 果 比 较 q值 分 别 为 1 . 9 7 , 2 . 0 4和 1 . 1 2 , P均 > 0 . O 5 。
酶联免疫吸附试验的影响因素分析及控制方法

的方法 是 : 要注 意 采血 手 法 , 心 速度 , 育 温度 , ① 离 孵 避 免 组 织 液 过 多 的 进 入 血 液 。 ② 采 用 二 步 法 操 作 可 以 排 除 H 对 E IA的 影 响 。③ 良好 的 洗 涤 效 果 可 减 少 b LS
非 特异 吸 附 的干扰 。
事 , 能 有 丝 毫 差 错 , 须 克 服 一 切 困 难 , 得 最 满 不 必 取 意 的效 果 。
参 考 文 献
1 C a o H . , a c W . Can zo h mpin R S co J, r az A . T e J, h Tru S oe. a ma c r
3 m n 热 血 清 使 C q 活 ‘ 溶 血 的 影 响 主 要 是 反 应 0 i加 l灭 。 板 对 血 清 中 Hb 非 特 异 性 吸 附 和 细ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胞 内 液 对 血 清 的 的
1 1 LS . E IA是 将 酶 的 催 化 作 用 与 抗 原 抗 体 免 疫 反 应 相 结 合 的 一 种 分 析 技 术 ,低 温 试 验 材 料 影 响 抗 原 与 抗 体 免疫 反 应的特 异性 , 降 低酶 本 身 的催 化 活性 , 也
从 而 影 响 实 验 结 果 , 故 从 冷 藏 环 境 中 取 出 的 试 剂 及
稀 释 作 用 。 具 有 类 过 氧 化 物 酶 活 性 , 以 辣 根 过 氧 Hb 在
化 物 酶 为 标 记 的 E IA测 定 中 ,如 果 反 应 板 非 特 异 性 LS 吸 附H b而 残 留 , 可 催 化 底 物 显 色 引 起 假 阳性 。 制 则 控
热 变 性 IG的 固 相 吸 附 剂 处 理 。 ③ 检 测 抗 原 时 , 可 用 g 2 基 乙 醇 加 入 到 标 本 稀 释 液 中 使 R 降 解 。 补 体 的 一巯 F
酶联免疫试验法检测梅毒的影响因素及结果分析

AB S T RAC T : 0b j e c t i v e t o i n v e s t i g a t e t h e e n z y me — l i n k e d i mmu n o s o r b e n t a s s a y t e s t s y p h i l i s i n f l u e n c i n g f a c t o r s a n d r e s u l t
r e c o g n i t i o n f o r s y p h i l i s a n t i b o d y n e g a t i v e . Ea c h i S d i v i d e d i n t o t h r e e . t h r e e me t h o d s we r e u s e d t o p r e p a r e . Me t h o d On e : P l a c e t h e s p e c i me n i n a r e f r i g e r a t o r a t 4 o C o v e mi g h t 。 nd a s e r u m s e p a r a t i o n ; Me t h o d T1 】 l , 0 : Do n o t a d d n a nt a i c o a g u l a n t r a p i d s e r u m s e p a r a t i o n ;M e t h o d t h r e e : Ad d t h e EDTA a n t i c o a g u l a t e d h u ma n c a u s e s v a r y i n g d e g r e e s o f h e mo l y t i c or f p l a s ma s e p a r a t i o n. Us i n g a u t o ma t i c me t h o d s or f s y p h i l i s a n t i b o d i e s . F o r t h e d e t e c t i o n o f p o s i t i v e s a mp l e s b e r e t e s t e d i n t h e n e x t d a y . T h e r e s u l t s a n d me t h o d s o f t h r e e me t h o d s p o s i t i v e r a t e s we r e l 1 . 4 %, 2 0 . 5 %, 1 . 1 %, c o mp a r e d wi t h t h e me t h O d 0 f a d i fe r e n c e wa s s i g n i i f c a n t ,
酶免检测技术原理及影响

2、反应环境条件: 电解质 酸8·碱5度g/LNaCl溶液
酸碱度 pH6--9为宜
温 度 温最适度温度为37℃
.
11
二、酶免疫技术的分类、特点及原理
.
12
1、酶免技术的分类
.
酶 免 疫 技 术
酶免疫组化 组织切片或其它标本中抗原的定位
均相 1、酶放大免疫测定技术EMIT 2、克隆酶供体免疫分析CEDIA 小分子激素、半抗原测定
2加样量不一致3孵育时间不一致4洗涤条件不同5操作人员不同阳性对照不显1把终止液误当作酶结合物或底物使用严格按试剂说明书操作加液时看准标签正确稀释洗涤液不要漏加试剂2漏加试剂如酶结合物底物a3蒸馏水被污染或盛洗涤液桶被污染留有使酶失活的物质换用合格水盛蒸馏水的瓶子要洁净现象可能原因解决方法1底物失效或被污染更换底物2加好底物后在保温时受强光或紫外线照射显色时避光保温3反应时间过长准确定时4水浴箱温度过高调准水浴箱温度5加酶量过多50ul误当100ul
.灰区是客观存在的,没 有不存在灰区 的试剂, 我们只是尽量减少灰区的 出现比例。 .减少灰区最有效的方法 就是尽量将板洗涤干净。
.
33
五、ELISA法检测常见问题及解决方法
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34
ELISA实验常见问题及解决方法
内源性标本因素 :
p 类风湿因子:一般为IgM型,可与变性IgG Fc段非特异结合,因此可能与包
.
35
现象
可能原因
解决方法
1、试剂盒未平衡至室温 2、水浴箱温度不到37℃
实验前试剂盒置于室温平衡30分钟 以上
调整水浴箱温度至37℃ 孵育期间不宜多开门
3、孵育时间不够
显 色 4、样品加样量偏少
淡 5、酶结合物加样量偏少
影响酶联免疫检测因素的分析

实验室人 员的素质主要包括五个方面 : 思想素质 、 文化 素质 、
技术 素 质 、 理 素 质 、 体 素 质 。首 先 应 具 备 一 个 良好 的 思 想 素 心 身
量保证体系 , 在操作过程 中时刻 注意 , 质控贯 穿到 整个实 验过 将
程, 包括待标本 的采集 、 输 、 运 处理 、 操作 过程 、 检验 结果 的审核 、 结果 的登记 与保存 、 报告单 的发放等 全过程 , 而为 临床提供 正 从 确可靠的检测结果。
中外 医学 研 究
21 0 0年 1 第 8卷 1月
第2 5期 C I E EA D F R I N ME IA E E R H H N S N O EG D C LR S A C
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影 响 酶联 免 疫 检 测 因素 的分 析
黄 培 胜
崇左市人 民医院( 西 崇左 5 2 0 ) 广 32 0
【 关键词 】 影响 ; 检测 ; 酶联 免疫
酶联免疫 吸附试验 ( LS 是 目前 临床 上最 为常用 的免 疫 E IA) 测定方法之一 , 由于 E IA方法灵敏 , 异性 强不需要特殊设备 , LS 特 所 以被广泛应用于各种 抗原 和抗体 测定 J 。但在 临床 实验检 测
中 , 常 出 现不 同 的 检 验 科 , 同 的 检 测 人 员 所 测 定 的 检 测 结 果 经 不
3 操作 过程的影响因素 3 1 操作前 应 对 实验 的物理 参 数 有充 分 的 了解 , 环境 温 度 . 如 (8℃ ~ 5℃ ) 反应孵育温度是否符合实验要求 。 1 2 、
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酶联免疫检测方法的影响因素
发表时间:2012-03-14T15:11:15.000Z 来源:《中外健康文摘》2011年47期供稿作者:敬晓云
[导读] 创造一个良好的工作环境,实验室工作人员应团结友爱,互相关心,互相学习自然心情舒畅,工作情绪高涨。
敬晓云(四川省南充市西充县中医医院检验科四川南充637200)
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)47-0258-01
酶联免疫(EIJISA)是检验科目前常用的免疫学检测方法之一,其操作方便、简单,不须要特殊设备,使其在各级医院都可应用。
但如果忽视了影响其结果的因素,难免会造成假阴性或假阳性的结果。
因此了解影响结果的因素,是减少差错事故发生很必要的。
1 实验室操作人员的基本素质因素
实验室人员的素质主要包括五个方面:思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。
因为我们是为人服务的,所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。
如果在工作中出现了张冠李戴,就有可能造成严重后果。
其次文化素质和技术素质很重要,我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。
还要不断努力学习新的理论知识,努力提高业务水平。
有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折,在繁忙工作中有条不紊。
所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。
2 标本处理因素
实验室人员收到标本后应:“三查七对”,对不符合要求的标本和申请单拒收,合格标本及时分离血清,避免溶血。
提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分,对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱,做好原始记录。
从冰箱取出的标本要预温至室温,对冰冻的样品要融化好,充分混匀再用。
3 操作过程的影响因素
3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解,如环境温度(保持在18~25℃),反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等,各种条件必须符合要求。
3.2 正确使用加样器,加样器应垂直加入标本或试剂,避免摩擦包被板底部。
加样过程中避免液体外溅,血清残留在反应孔壁上,加样器吸头要一次性使用,加样次序要与说明书一致,否则易发生错误,造成实验重复性差。
3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大,洗涤次数不超过说明推荐的次数,洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。
不要让洗液造成孔间污染,导致假阴性和假阳性。
3.4 要保证加液量一致,我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确,滴瓶加液量不准造成显色不一,造成判断错误。
3.5 显色液的量不可过多,加样的工作环境不能阳光直射,加显色液后避光反应,显色液量要合适。
4 试剂的影响因素
应选用有国家批准文号,质量保证的产品。
试剂要妥善保存于4℃冰箱内,在使用时先恢复至室温,不同批号的试剂组分不宜交叉使用。
试剂打开后要在一周内用完,剩余试剂下次用时先检查是否变质,显色剂如被污染变化将造成全部显色,导致错误结果。
过期试剂不宜,应做好双份质控品的监测,确保结果的可靠性。
5 采取措施,避免差错事故的发生
创造一个良好的工作环境,实验室工作人员应团结友爱,互相关心,互相学习自然心情舒畅,工作情绪高涨。
再就是建立完善的质量保证体系,以书面的形式发给每位成员以及临床科室,做到人人熟悉,人人重视影响实验结果的因素,并在操作过程中时刻注意,将质控贯穿到整个实验过程中。
制定一系列的制度,用制度管人,明确责任,这样才能提高质量,避免错误结果的发生。