脑脊液检验操作规程
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围脑脊液培养。
3.标本3.1标本类型脑脊液。
3.2 标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml，盛于无菌容器中送检。
脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。
因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。
3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本未用无菌试管留取。
3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。
4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。
．4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查6.1.1 一般细菌涂片检查外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。
根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。
6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查参见《分支杆菌属检验标准操作规程》6.1.3 新生隐球菌涂片检查取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养2~5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。
必要时可作生化反应进一步鉴定。
分离培养6.2．6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%~10%CO2环境中35摄氏度培养18~24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。
脑脊液生化的操作内容及流程
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在进行脑脊液生化检测之前，需要进行充分的准备。
脑脊液常规检查标准操作手册
脑脊液常规检查标准操作手册1。
目的：建立脑脊液常规检查的标准化操作;2.范围：适用于脑脊液的常规检查(物理检查、蛋白定性、细胞检查）;3。
标本采集：3。
1 标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得.3.2 标本要求:将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查.每管收集1-2毫升。
3。
3 遇高蛋白标本时可采用EDTA K2抗凝。
4.标本储存:立即送检。
5。
标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准:污染，久置标本。
6。
器材试剂：5％苯酚溶液：取纯苯酚25ml，加蒸馏水至500ml，用力振摇，置37℃温箱内1—2天,待完全溶解后，置棕色瓶内保存.细胞计数板;显微镜。
7.物理检查：7。
1 目测脑脊液颜色与透明度：（1)观察颜色。
(2）观察透明度。
（3）观察凝块或薄膜：收集脑脊液于试管内,静置12-24小时,正常脑脊液不形成薄膜、凝块和沉淀物。
7.2 结果判断与分析：7。
2.1颜色：正常脑脊液是无色透明的液体。
在病理情况下，脑脊液可呈不同颜色改变：(1）红色：常由于各种出血引起。
脑脊液中出现多量的红细胞,主要由于穿刺损伤出血、蛛网膜下腔或脑室出血引起。
前者在留取三管标本时，第一管为血性，以后两管颜色逐渐变淡，红细胞计数结果也依次减少，经离心后上清液呈无色透明.当蛛网膜下腔或脑室出血时,三管呈均匀红色,离心后上清液显淡红色或黄色。
红细胞在某些脑脊液中5分钟后，即可出现皱缩现象，因此红细胞皱缩现象不能用以鉴别陈旧性或新鲜出血。
(2)黄色:可因出血、梗阻、郁滞、黄疸等引起。
陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血，由于红细胞缺乏蛋白质和脂类对膜稳定性的保护，很易破坏、溶解，出血4-8小时即可出现黄色.停止出血后,这种黄色仍可持续3周左右。
椎管梗阻如髓外肿瘤，格林—巴利综合征，当脑脊液蛋白质量超过1。
5g/L时，颜色变黄，其黄色程度与蛋白质含量呈正比。
脑脊液检验操作规程
脑脊液常规检验操作程序1．检验目的保证脑脊液常规检测结果准确、可靠、及时。
2．检测原理2.1一般性状检查采用目测法2.2蛋白定性试验采用Pandy试验蛋白质与石碳酸结合成不溶性蛋白盐下沉,产生白色浑浊或沉淀。
2.3细胞学检查采用显微镜检查法3.标本3..1脑脊液标本由临床医护人员采集检验人员向临床提供脑脊液标本量、保存条件、注意事项、生物参考范围及临床意义等。
3.2脑脊液标本的运送由临床卫生员运送。
3.3收集与处理检验后脑脊液标本由检验卫生员统一送到医院垃圾处理站按相关程序进行处理。
4.设备和试剂4.1 仪器：显微镜。
4.2 试剂：5-7%石碳酸溶液。
4.3 设备：牛鲍氏计数板、毛细滴管。
5. 操作步骤5.1脑脊液理学检验:5.1.1颜色正常脑脊液为无色液体。
当有病变时可出现红色、黄色、绿色、乳白色、黑色等颜色。
5.1.2透明度正常脑脊液清晰透明,当脑脊液中有形物增加时,透明度降低,透明度可按清晰透明,微浑、浑浊三级报告。
5.1.3凝固或薄膜正常脑脊液没有凝块,化脓性脑膜炎时可出现，脑膜炎时可出现薄膜,可用无凝块、胶冻样、有薄膜形成、有凝块等方式报告。
5.2脑脊液化学检验:(一)潘氏(pandy)定性试验5.2.1方法取试剂2－3毫升置于小试管内,用毛细滴管滴入脑脊液1－2滴,衬以黑色背景下观察结果,出现白色浑浊为阳性。
5.2.2结果判断透明无变化(一)阴性微呈白雾状(±)极弱阳性灰白色云雾状(+)弱阳性白色浑浊(++)阳性白色浓絮状沉淀(+++)强阳性白色凝块(++++)最强阳性5.4参考值正常人多为阴性,偶有极弱阳性反应。
6、脑脊液显微镜检验:6.1细胞总数计数6.1.1直接计数法:如细胞数很少,可用此法,用滴管吸取少量充分混匀的脑脊液于血细胞计数池内,等待2~3分钟后,用低倍镜计数四角及中央共五个大方格中的细胞数,将其总数乘以2×106,即为每升脑脊液中的细胞总数。
6.1.2稀释计数法:如脑脊液中的细胞数很多,可用此法。
脑脊液潘氏试验步骤
脑脊液潘氏试验步骤1.准备工作：(1)检测器具：试纸、离心管、镊子、注射器、分装管、药用酒精、创可贴等。
(2)患者准备：检查前一小时禁食水和食物，避免过度劳累。
2.患者体位：(1)侧卧位：患者侧卧，头稍微低于身体，以保持脑脊液流通。
(2)头正中位：患者头部正对前方，颈部略向胸前伸直。
3.皮肤消毒：(1)用药用酒精擦拭检查部位，保证无明显污染。
(2)用干净的棉球将酒精擦拭干净，避免残留酒精进入脑脊液。
4.麻醉与穿刺：(1)选取合适的穿刺点：一般选择第3、4腰椎间隙作为穿刺点。
(2)进行局部麻醉：将注射器中的适量麻醉药液通过刺激剂进入穿刺点周围皮肤和软组织。
(3)穿刺操作：将已经消毒的穿刺器从第3、4腰椎间隙的皮肤上方45度角注入，逐渐向下刺入。
(4)顺利穿刺后，用干净的纱布轻轻按压穿刺点，避免脑脊液外溢，并对穿刺点进行消毒。
5.收集脑脊液：(1)使用干净的离心管和有刻度的注射器，收集脑脊液。
(2)调整注射器的活塞，以避免打损脑脊液。
(3)将脑脊液缓慢抽取至预定容器中，适当分装以备实验室检测。
6.观察脑脊液外观：(1)检查脑脊液的颜色：正常脑脊液呈透明无色，若呈现黄色或其他异常颜色，可能表示存在感染、出血等问题。
(2)检查脑脊液的清澈程度：正常脑脊液应该清澈透明，若呈现混浊情况，可能表示存在菌群、血细胞等异常。
7.测量脑脊液压力：(1)使用水银柱或压力计等仪器测量脑脊液压力。
(2)用刻度纸记录脑脊液的压力值。
8.实验室检测：(1)对脑脊液进行生化学分析：包括蛋白质、糖类、氯离子、钠离子等相关指标的测定。
(2)进行细胞计数：检测脑脊液中的红细胞、白细胞数量及形态等指标。
(3)其他检测项目：如培养细菌、病毒等，以确诊感染病例。
9.结束工作：(1)测量脑脊液压力结束后，将针头拔出，并用创可贴进行止血。
(2)将采集的脑脊液用相应的容器密封，送至实验室检测。
(3)对穿刺部位进行消毒处理，告知患者注意事项，观察是否有异常症状。
脑脊液蛋白定性(潘氏试验)标准操作规程
脑脊液蛋白定性（潘氏试验）标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：脑脊液蛋白定性（潘氏试验）；脑脊液生化测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2．采集与处理2.1 受检者的准备：脑脊液：采用腰椎穿刺。
要严格掌握禁忌证、凡疑有颅内压升高者必须做眼底检查，如有明显视乳头水肿或有脑疝先兆者，禁忌穿刺。
凡病人处于休克、衷竭或濒危状态以及局部皮肤有炎症、颅后窝有占位性病变或伴有脑干症状者均禁忌穿刺。
2.2 样本准备：脑脊液由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
穿刺后应由医师用压力测定，正常人脑脊液压力卧位为0.78-1.76kpa(80-180mmH2O)，儿童为0.4-1.0kpa(40-100mmH2O)。
任何病变使脑组织体积或脑脊液量增加时，脑脊液压力均可升高。
待压力测定后将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。
每管收集1-2毫升。
脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过外将影响检验结果，是细胞破坏、变性、或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等。
存放中的脑脊液葡萄糖会分解，使之含量降低；细菌自溶或残废可影响细菌检出率等。
2.3 抗凝剂：不使用抗凝剂。
2.4 标本处理：脑脊液样品中不能有溶血。
储存在2-8℃可稳定数天。
3 方法原理脑脊液中的蛋白质遇饱和苯酚溶液，生成不溶性蛋白盐而形成浑浊或沉淀。
4 试剂及其他用品饱和苯酚溶液:取苯酚（分析纯）10毫升（有结晶时，先放入56度水浴箱中加热融化），加蒸馏水至100毫升，充分混匀，置入37度温箱中数小时，见底层有苯酚析出，上层为饱和苯酚溶液。
避光保存。
5 标本检测步骤取饱和苯酚溶液约2毫升于小试管内，加入离心后的脑脊液1—2滴，在黑色背景下观察有无混浊。
6结果判断无混浊，清晰（-）；稍有白雾状，对光不易看到，黑色背景下才能看到，（+-）；呈灰白色云雾状，（+）；呈白色云雾状混浊，（++）；呈白色絮状沉淀或白色浓云块状，（+++）；立即形成白色凝块，（++++）。
脑脊液采集规范及操作规程
脑脊液采集规范及操作规程脑脊液采集是一项常见的临床检查方法，用于诊断或排除多种神经系统疾病。
脑脊液采集规范及操作规程的制定对保证采集质量，减少并发症，确保患者安全非常重要。
下面是脑脊液采集规范及操作规程的一般要求及注意事项。
一、脑脊液采集规范要求：1. 严格遵守无菌操作规程，保证采集器械、试剂及环境的无菌。
2. 采集前仔细询问患者病史，特别是有关出凝血异常或颅内压增高的情况。
3. 与患者及家属充分沟通，解释脑脊液采集的目的、方法及可能的并发症，获得患者或其家属的同意。
4. 采集前测量患者的血压、脉搏、呼吸频率和体温。
5. 采集前禁止患者进食，保证采集过程中患者的呼吸道通畅。
6. 采集前准备脑脊液采集所需器械、试剂，包括腰穿针、采集管、标本收集器等，并检查其完好性。
7. 慎重选择穿刺部位，禁止在颈部、脊柱畸形或感染区域进行脑脊液采集。
二、脑脊液采集操作规程：1. 患者仰卧位，双腿屈曲，腰椎屈曲，头略偏向一侧。
2. 无菌操作，穿刺部位用酒精消毒，然后覆盖无菌巾。
3. 注射局部麻醉剂，等待数分钟，确保麻醉充分。
4. 采用细长、切削尖的针头，顺切口方向于终正中线的下水平划线后1-2cm处，逐层穿透皮肤、皮下组织、肌肉，直至穿过硬膜进入蛛网膜。
5. 通过穿刺针的腔道，插入一根0.5ml以下的无菌试管，从而直接收集脑脊液。
6. 采集结束后，轻轻拔出穿刺针，并立即采集血样。
7. 拔出穿刺针后，用带有胶贴的无菌敷料覆盖创口，以避免感染。
8. 患者采集后保持卧床休息，观察其神经系统状态变化，并监测生命体征。
9. 将收集的脑脊液标本送至实验室，及时进行相关检测。
三、脑脊液采集后的注意事项：1. 观察患者有无颈背痛、头痛、恶心、呕吐、腰痛等不适症状，如有及时采取相应措施。
2. 观察患者的生命体征，包括血压、脉搏、呼吸等，如有异常变化应及时处理。
3. 观察脑脊液出血情况，及时处理。
4. 鼓励患者多饮水，以排泄多余的脑脊液。
脑脊液常规检查标准操作程序
脑脊液常规检查标准操作程序1 检验目的鉴别诊断及预后观察神经系统疾病及其并发症。
2 检测原理一般性状检查采用目测法；细胞学检查采用显微镜手工检查法。
3 性能参数脑脊液常规检查是手工试验，目前还没有试验性能指标。
4 标本采集与接收4.1 脑脊液标本由临床医生进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
第一管作细菌学检查，第二管作化学或免疫学检查，第三管作常规检查。
4.2 标本采集后要立即送检，因为放置时间过久，其性质可能发生改变，可能影响检验结果。
采集的脑脊液标本应尽量避免混入血液。
5 设备和试剂5.1 仪器：复星公司 ACT-2000 超高倍显微镜系统，Sysmex XT-4000i 分析仪。
5.2 试剂：冰醋酸。
5.3 设备：血细胞计数池。
6 容器和添加剂脑脊液常规检查试验的容器为消毒的玻璃试管，一般情况下无任何添加剂(如遇高蛋白标本时，可用 EDTA 盐抗凝)。
7 操作步骤7.1 检验申请单及标本的审核整理脑脊液常规检验申请条码及标本，审核合格后，对脑脊液检验申请单姓名和标本标识进行复查，确认一致后进行检测。
7.2 一般性状检查：脑脊液的颜色和透明度测量采用目测法。
7.3 细胞计数7.3. 1 手工法：对澄清的脑脊液混匀后用滴管直接滴入一次性计数板，用低倍镜计数全部方格内细胞数；混浊或带血的脑脊液可用细胞稀释液或者生理盐水稀释后加入事先准备好的管壁带有冰乙酸的小试管中，混匀后滴入一次性计数板内，用低倍镜计数全部方格内细胞数。
7.3.2 仪器法：取混匀好的标本直接在 XT-4000i 上用体液模式进行检测，并记录结果。
7.3.3 有核细胞分类计数7.3.3.1 直接分类法：如果白细胞数不超过 0.015×109/L，可不分类计数；如超过 0.015×109 /L 应分类计数。
在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单核细胞(包括淋巴细胞和单核细胞)与多核细胞，计数100 个白细胞，以百分比表示。
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脑脊液常规检验操作程序
1．目的
保证脑脊液常规检测结果准确、可靠、及时。
2．适用范围
脑脊液常规检测，标本类型为脑脊液。
3．职责
3..1脑脊液标本由临床医护人员采集检验人员向临床提供脑脊液标本量、保存条件、注意事项、生物参考范围及临床意义等。
3.2脑脊液标本的运送由临床卫生员运送。
3.3收集与处理检验后脑脊液标本由检验卫生员统一送到医院垃圾处理站按相关程序进行处理。
4. 检验程序
4.1脑脊液理学检验:
4.1.1颜色正常脑脊液为无色液体。
当有病变时可出现红色、黄色、绿色、乳白色、黑色等颜色。
4.1.2透明度正常脑脊液清晰透明,当脑脊液中有形物增加时,透明度降低,透明度可按清晰透明,微浑、浑浊三级报告。
4.1.3凝固或薄膜正常脑脊液没有凝块,化脓性脑膜炎时可出现，脑膜炎时可出现薄膜,可用无凝块、胶冻样、有薄膜形成、有凝块等方式报告。
4.2脑脊液化学检验:
(一)潘氏(pandy)定性试验
4.2.1【原理】
蛋白质与石碳酸结合成不溶性蛋白盐而下沉,产生白色浑浊或沉淀。
4.2.2【试剂】
5-7%石碳酸溶液。
4.2.3【方法】
取试剂2－3毫升置于小试管内,用毛细滴管滴入脑脊液1－2滴,衬以黑色背景下观察结果,出现白色浑浊为阳性。
4.2.4【结果判断】
透明无变化(一)阴性
微呈白雾状(±)极弱阳性
灰白色云雾状(+)弱阳性
白色浑浊(++)阳性
白色浓絮状沉淀(+++)强阳性
白色凝块(++++)最强阳性
4.3【注意事项】
试剂和脑脊液应按一定比例进行试验,若脑脊液浑浊,应离心沉淀后取上清液试验。
4.4【参考值】
正常人多为阴性,偶有极弱阳性反应。
5、脑脊液显微镜检验:
5.1细胞总数计数
5.1.1直接计数法:如细胞数很少,可用此法,用滴管吸取少量充分混匀的脑脊液于血细胞计数池内,等待2~3分钟后,用低倍镜计数四角及中央共五个大方格中的细胞数,将其总数乘以2×106,即为每升脑脊液中的细胞总数。
5.1.2稀释计数法:如脑脊液中的细胞数很多,可用此法。
于小试管内加红细胞稀释液0.38毫升,再用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20微升加入小试管中,混匀后将其滴人血细胞计数池内,然后用低倍镜计数四角的四个大方格中的细胞总数并乘以50×106。
而即为每升脑脊液中的细胞总数。
5.2白细胞计数
5..1.1直接计数法:用吸管吸冰醋酸后轻轻吹出,使管壁附着少许冰醋酸。
用此滴管吸取混匀的脑脊液数滴,待其中红细胞完全溶解后充入血细胞记数池内,计数四角及中央共五个大方格中的白细胞数(包括间皮细胞)。
总数乘以2×106即为每升脑脊液中的白细胞数。
待其中红细胞完全溶解后充入血细胞记数池内,计数
白细胞数(包括间皮细胞)。
总数乘以2×106即为每升脑脊液中的白细胞数。
待其中红细胞完全溶解后充入血细胞记数池内,计数四角及中央共五个大方格中的白细胞数(包括间皮细胞)。
总数乘以2×106即为每升脑脊液中的白细胞数。
5.1.2、稀释计数法:稀释、充液、计数方法同细胞总数计数的稀释计数法,但改用白细胞稀释液,四角大方格中的细胞总数乘以50×106即为每升脑脊液中的白细胞数。
6.白细胞分类
6.1、直接分类法:于白细胞计数后,将低倍镜改为高倍镜进行分类。
依据细胞形态和核的形态将白细胞分为单核细胞和多核细胞。
一般应计数100个白细胞。
6.2、涂片染色分类法:将脑脊液离心沉淀后,取沉淀物涂片,进行瑞氏染色,然后用油镜分类,报告方式同血液白细胞分类计数。
7.注意事项
7.1、标本应立即进行检查,时间太久细胞易变性、自溶及凝固。
7.2、白细胞数在10×106/L以下时,无须作分类计数。
8.正常值
正常脑脊液中无红细胞或仅含少量因穿刺损伤而带入脑脊液的正常形态的红细胞。
白细胞亦极少,成人为(O~8)×106/L,儿童为(O~15)×106/L,多为单核细胞。