环孢菌素A两种不同产生菌原生质体的制备和再生
环孢菌素A生物合成机制研究的新进展
环孢菌素A生物合成机制研究的新进展
方金瑞
【期刊名称】《国外医药：抗生素分册》
【年(卷),期】1997(018)001
【摘要】环孢菌素A(CsA)是一种环状+一肽化合物(图1),已广泛地用临床人体器
官移植和治疗自身免疫疾病。
CsA是由雪白白僵菌(Beauveria nivea)产生的。
至今已鉴定了25种天然产生的CsA组份,它们或在1、2、4、5、7和11位氨基
酸置换,或在1、4、6、9、10和11位含未甲基化的肽键。
此外,通过产生菌发酵
时添加氨基酸前体,获得与CsA在1、2和8位有不同氨基酸的新的环孢菌素组份。
【总页数】4页(P47-49,F003)
【作者】方金瑞
【作者单位】福建海洋研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TQ465.1
【相关文献】
1.环孢菌素A的合成及其治疗糖尿病新进展 [J], 刘娟
2.环孢菌素A治疗免疫性皮肤病新进展 [J], 严煜林
3.氨基酸对Tolypocladiuminflatum环孢菌素A生物合成的影响 [J], 廖福荣
4.环孢菌素A在皮肤科应用的新进展 [J], 吴绍熙
5.华南农业大学园艺学院在辣椒素类物质生物合成领域取得新进展 [J], 无
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环孢菌素A生产菌原生质体转化系统的建立_戴梦
２０１３，Ｖｏｌ．３０Ｎｏ．３化学与生物工程Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ３６ 基金项目：石家庄高端医药产业园创新药物孵化基地资助项目（２０１１ＺＸ０９４０１－３０６）收稿日期：２０１３－０１－０９作者简介：戴梦（１９８０－），男，上海人，工程师，研究方向：微生物功能基因组学及基因工程育种，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄａｉｍｅｎｇ８０９２７＠２００８．ｓｉ－ｎａ．ｃｏｍ，ｄａｉｍｅｎｇ８０９２７＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ；通讯作者：郑桂珍，高级工程师。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－５４２５．２０１３．０３．００９环孢菌素Ａ生产菌原生质体转化系统的建立戴 梦，刘 静，赵 颖，张 佳，章 丽，郑桂珍（华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心，河北石家庄０５００１５）摘 要：以腐草霉素抗性为选择标记，建立了环孢菌素Ａ生产菌株的基因转化体系，成功将外源基因转入环孢菌素Ａ生产菌，并整合到染色体上。
传代实验表明，外源基因可以稳定表达。
该体系的建立为环孢菌素Ａ生产菌的基因工程育种奠定了基础。
关键词：环孢菌素Ａ；多孔木霉；原生质体转化中图分类号：Ｑ ８１３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２－５４２５（２０１３）０３－００３６－０３ 环孢菌素Ａ是由１１个氨基酸组成的环肽，２０世纪７０年代由瑞士巴塞尔（Ｂａｓｅｌ）的Ｓａｎｄｏｚ公司实验室发现，并由该公司成功上市［１］。
１９７８年，环孢菌素Ａ被应用于第一例肾移植患者。
因其具有免疫抑制活性强、对骨髓的毒性低等特点，目前广泛应用于异体器官移植后的排异反应及一些自体免疫缺陷疾病的治疗。
除免疫抑制活性外，环孢菌素Ａ还具有抗真菌、抗寄生物及抗炎活性［２］。
２００５年，环孢菌素Ａ的年销售额已达１０亿美元［３］。
工业生产中，环孢菌素Ａ由丝状真菌多孔木霉（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ ｉｎｆｌａｔｕｍ，又名雪白白僵菌Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｎｉｖｅａ）深层发酵产生。
环孢菌素A高产菌株摇瓶发酵及菌丝体的形态变化
种 子 培 养 基 ２ 固 体 玉 米 浆 粉 ，％ 糊 精 ， ％ ２
０．１ ％ ＫＨ２ Ｐ０４ ０ ２％ Ｍｇ ，． Ｓ０４‘７ ０； Ｈ ． Ｈ２ ｐ ５ ０。
低 ， 酵周 期 短 ， 发 但效 价 和 组分 含量 相 对 较低 。 近来 我
斜 面培 养 物 一 摇 瓶 种 子 （ ８ 、 ２ ｒ ｍ ｎ振 荡 培 ２ ℃ ２ ０／ ｉ
们 采用雪 白 白僵 菌 （ ｅｕｅｉ ｎｖａ 进 行发 酵 ， 但发 Ｂａｖｒ ｉ ） ａ ｅ 不 酵效 价高 （２０ｍｇ Ｌ ， Ａ组 分 的含 量也 高 。 文报 ５０ ／ ）且 本
环孢 菌素 Ａ（ｙｌｓｏｉ 是 由 １ 个 氨基 酸组 成 ｃ ｃ ｐｒ Ａ） ｏ ｎ １
０ ０ ％ Ｋ ２Ｏ ，． ２ ％ Ｋ １２ 琼脂 ；Ｈ ５ ０ ．５ Ｈ Ｐ ４０ ０ ５ Ｃ ，％ ｐ ． 。
的环 肽 ， 临床上 作为 器 官移植 的抗 排斥 药 物 ｎ。 建 省 】 福
发 酵培 养 基 ３ 固体 玉米 浆粉 ，％糊精 ，．％ ％ ６ １２ 葡 萄糖 ，．５ ０ １％尿 素 ；Ｈ４ ５ ｐ ． 。
１ ３ 摇 瓶发 酵 ．
ｓｌｎ ４１ ）并投人 工业 生产 ， 国 内率 先 成功 地研 制 ｏ ｉ ．１ ， ａ 在 了环 孢 菌 素 Ａ２】茄 病 镰 刀 菌所 采 用 的 培 养 基 成 本 ｌ３ ，。
ｉｄ ｅ ．Ｔｈ ｅ ｍｔｔｏ ｏ ｅ ｙ ｏ ｙ ｌｓ ｏ ｉ ｗａ ｎｃ ｅ ｓ ｄ ｂ ｐ ｒ ｘ ｍａ ｅｙ １ ｅ ｆｍｅ ａｉ ｎ ｐ ｔｎｃ ｆｃ ｃｏ ｐ ｒｎ Ａ ｓ ｉ ｒ ａ ｅ ｙ ａ ｐ ｏ ｉ ｔｌ ０％ ａ ｈ ｐ ｉ ｌｇ ｏ ｈ ｐａ ａ ｔ ｒ． １ ｔｔ ｅ ｏ ｔｍａ ｒ ｗｔ ｒ ｍｅｅ ｓ Ｔｈ ｅ ｅ ｔｔｏ ｐ ｒｏ ｏ ｌ ｅ ｅ ｒ ａ ｅ ｙ ２ ａ ｓ Ｄｕ ｉ ｅ ｅ ｔ ｔ ｎ ｗａ ｅ ｅ ｄ ｎ ｏ ｅ ｓ ｗａ ｓ ｄ ｏ ｉ — ｅ ｆ ｒ ｎ ａｉ ｎ ｅ ｄ ｃ ｕｄ ｂ ｄ ｃ ｅ ｓ ｄ ｂ ｄ ｙ ． ｍ ｉ ｒｎｇ ｆｒ ｎ ａ ｉ ， ｍ ｏ ｔ ｒ ｆｅ ｉ ｇ ｐｒ ｃ ｓ ｓ ｕ ｅ ｔ ｎ ｃ ｅ ｓ ｈｅ ｃ ｌｕ ｅ ｇ ｏ ｈ， ｗｈ ｌ ｈ ｒ ｏ ｏ ｉ ａ ｈ ｎ ｅ ｆｔ ｅ ｃ ｌｕ ｅ ａ ｆｅ ｅ ｔｇ ｏ ｈ ｓａ ｅ ｒ ｂ ｅ ｖ ｄ ｕ － ｒ ａ ｅ ｔ ｕ ｔ ｒ ｒ ｗｔ ｉｅ ｔｅ ｍｏｐｈ ｌｇ ｃ ｌｃ ａ ｇ ｓ ｏ ｈ ｕ ｔ ｒ ｔｄｉ ｒ ｎ ｒ ｗｔ ｔｇ ｓｗｅ ｅ ｏ ｓ ｒ ｅ ｎ ｆ
环孢菌素A生产菌原生质体转化系统的建立
环孢菌素A生产菌原生质体转化系统的建立戴梦;刘静;赵颖;张佳;章丽;郑桂珍【摘要】以腐草霉素抗性为选择标记,建立了环孢菌素A生产菌株的基因转化体系,成功将外源基因转入环孢菌素A生产菌,并整合到染色体上.传代实验表明,外源基因可以稳定表达.该体系的建立为环孢菌素A生产菌的基因工程育种奠定了基础.%A protoplasts transformation system for high-productive industrial strain of cyclosporin A was successfully constructed by using phleomycin resistant gene as select marker. The PCR results proved that the foreign DNA had been integrated in the chromosome of T. inflatum and it could be expressed steadily after sev eral generations. This system laid a foundation for genetic engineering breeding of the cyclosporin A-producing strain.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2013(030)003【总页数】3页(P36-38)【关键词】环孢菌素A;多孔木霉;原生质体转化【作者】戴梦;刘静;赵颖;张佳;章丽;郑桂珍【作者单位】华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心,河北石家庄050015;华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心,河北石家庄050015;华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心,河北石家庄050015;华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心,河北石家庄050015;华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心,河北石家庄050015;华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心,河北石家庄050015【正文语种】中文【中图分类】Q813环孢菌素A是由11个氨基酸组成的环肽,20世纪70年代由瑞士巴塞尔(Basel)的Sandoz公司实验室发现,并由该公司成功上市[1]。
环孢菌素A合成酶及其遗传改造研究进展
环孢菌素A合成酶及其遗传改造研究进展
魏树源;王洪跃;薛文达
【期刊名称】《中国医学装备》
【年(卷),期】2009(006)003
【摘要】环孢菌素A是从真菌中提取的一种新型免疫抑制剂,可选择性作用于T细胞,抑制其活化,现主要应用于器官移植时的排斥反应.环孢菌素A是由环孢菌素A 合成酶通过模块指导依次合成并环化成环肽.环孢菌素家族已有2000多种,应用到免疫,抗病毒肝炎等许多领域.本文简要介绍环孢菌素A合成酶的结构及合成环孢菌素A的机制,以及对其实施遗传工程改造方面的研究进展.
【总页数】4页(P58-61)
【作者】魏树源;王洪跃;薛文达
【作者单位】武汉生物制品研究所,湖北,武汉,430060;武汉生物制品研究所,湖北,武汉,430060;武汉生物制品研究所,湖北,武汉,430060
【正文语种】中文
【中图分类】R197
【相关文献】
1.甘氨酰-tRNA合成酶相关的遗传性周围神经病研究进展 [J], 郑婵新;钟春玖
2.典型产纤维小体梭菌的遗传改造及其在纤维素乙醇中的应用研究进展 [J], 刘亚君;崔古贞;洪伟;张杰;崔球
3.聚羟基脂肪酸酯合成酶的改造和代谢途径构建的研究进展 [J], 李浩;黄媛媛;李曼;宋水山
4.遗传改造微生物代谢途径生产新型柴油燃料的研究进展 [J], 付爱思;刘然;朱静;刘天罡
5.遗传改造乳酸链球菌合成Nisin的研究进展 [J], 罗林根;穰杰;夏立秋
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高产环孢菌素A镰刀菌的育种及遗传特性研究的开题报告
高产环孢菌素A镰刀菌的育种及遗传特性研究的开题报告
一、研究背景
环孢菌素A（Cyclosporin A，CsA）是一种天然孢肽，是从毒青霉属真菌中分离出来的镰刀菌素类似物。
CsA可以抑制食物链底层的免疫细胞，从而抑制免疫细胞的活性，被广泛用于器官移植、干细胞移植等免疫抑制领域。
然而，CsA的生产效率和产量一直是制约其应用的瓶颈问题。
近年来，研究表明，CsA的产生菌株是环孢菌属真菌中的一种，通过对其进行基因工程和筛选，可以获得CsA高产的育种菌株。
二、研究目的
本研究旨在通过对高产CsA的环孢菌属真菌进行育种和遗传特性分析，以了解CsA生产能力的遗传机制和提高CsA生产效率的控制策略，为CsA生产的应用提供更优质的菌株基础。
三、研究内容
1.环孢菌属真菌育种：通过现有育种技术和基因工程技术，对环孢菌属真菌进行育种和突变，筛选出高产CsA的优良菌株，并对其生长和CsA生成环节的遗传调控进行分析。
2.遗传特性分析：通过对高产CsA的优良菌株的基因组序列进行分析，探索CsA 生产的遗传机制。
同时，通过对CsA生成周期中关键酶系统的调控以及CsA合成过程中的代谢流程进行分析，探索CsA生产的调控机制。
四、研究意义
本研究通过对高产CsA的环孢菌属真菌进行育种和遗传特性分析，为CsA的生产提供有力的育种基础和控制策略。
同时，对CsA生产领域的基础研究和CsA的应用也具有重要意义。
白血病多药耐药逆转剂研究进展
白血病多药耐药逆转剂研究进展1叶霈智，李冬云，陈信义北京中医药大学东直门医院肿瘤血液科，北京（100700）E-mail：Lidy0039@摘 要：克服白血病多药耐药是提高难治性白血病化疗效果的主要途径之一，白血病多药耐药逆转剂是目前研究热点。
本文分别从西药逆转剂、中药逆转剂两大方面详细论述了白血病多药耐药逆转剂的研究历史与现状，并就逆转剂研究进展情况做了评述，认为中医药在逆转白血病多药耐药性的基础及临床研究方面具有良好前景。
关键词：白血病，多药耐药，逆转，中医药白血病多药耐药性（MDR）是指白血病细胞对非同类结构、细胞靶点和作用机制迥然不同的多种抗白血病药物同时产生耐受。
MDR形成的机理十分复杂，白血病细胞可以通过不同途径导致MDR产生，而一种MDR细胞可以同时存在多种耐药机制。
研究MDR现象产生的机制及克服方法是提高白血病化疗效果的主要途径之一，本文主要就白血病多药耐药逆转剂的研究进展做一综述。
1.西药逆转剂研究进展1.1 钙离子通道阻滞剂与钙调蛋白拮抗剂（1）维拉帕米：钙拮抗剂是最早发现的具有逆转MDR作用的药物，其中作用肯定、最具代表性的是维拉帕米（VER）。
尚世丽等[1]研究VER对白血病K562细胞多药耐药性的作用，证实VER可通过提高耐药细胞内药物浓度逆转K562/D的耐药性。
程坚等[2]研究VER 对VP-16耐药的逆转，发现VER对VP-16的耐药逆转作用可能与其具有增强VP-16诱导HL-60细胞凋亡作用有关，BCL-2蛋白可能是这一作用的靶点。
本类药物有较严重的心血管毒性，相当程度上妨碍了其临床应用，故目前主要研制其具有较强MDR逆转作用的异构体。
（2）洛美利嗪：洛美利嗪（Lom）被认为是钙、钠二元通道拮抗剂，同时又具有选择性抑制脑血管收缩、阻断α1受体和5-HT2受体等多种药理作用。
李运曼等[3]研究Lom对多药耐药的逆转作用发现，Lom能增加K562/AO2耐药细胞系的Rh123潴留，其逆转K562/AO2多药耐药的机制可能与通过抑制Pgp功能，增加细胞内药物浓度有关，而非直接下调mdr1 mRNA及Pgp水平。
环孢菌素A生产菌原生质体转化系统的建立
养条件的优化 ， 环孢 菌素 Ａ 的产量不断提高［ ６ ］ 。但 对于产量已较高的生产菌株， 再通 过常规的诱 变育种 来 提高产 量就很 困难 。基 因工 程和代 谢途 径工程 技术 的发展 ， 为工 业生产 菌 种 的 改 良和 改 造 提供 了更 为直 接有效 的手 段 ， 在 很 多 品 种 上 已 经 获 得 了 成 功［ ｑ ¨。
摘 要 ： 以 腐 草 霉 素抗 性 为 选择 标记 ， 建 立 了环孢 菌素 Ａ 生产 菌株 的基 因转 化 体 系 ， 成 功 将 外 源基 因转 入 环 孢 菌素
Ａ生产茵， 并 整合 到 染 色体 上 。传 代 实 验 表 明 ， 外 源 基 因 可 以稳 定 表 达 。该 体 系 的 建 立 为 环孢 茵 素 Ａ 生 产 菌 的 基 因 工
ｉ ｎ ｌ ｆ ａ ｔ ｕ ｍ） ０ ６ ０ ９ ０ １ ， 华北制药集团新药研究有限责任公 司。质粒 ｐ Ｐ Ｉ Ｐ Ｋ Ａ， 自 行保存 ， 含有融合了产黄青霉异
青 霉 素 Ｎ 合成 酶基 因启 动 子 （ Ｐ ｉ ｐ ｎ ｓ ） 的腐草 霉 素抗 性
基 因ｎ 。
性强 、 对骨髓的毒性低等特点 ， 目 前广泛应用于异体器 官移植 后 的 排 异 反应 及 一 些 自体 免疫 缺 陷疾 病 的 治
１ ． １ 材 料
纪７ Ｏ年代 由瑞 士 巴塞 尔 （ Ｂ ａ ｓ ｅ １ ） 的Ｓ ａ ｎ ｄ ｏ ｚ 公 司实 验 室发现 ， 并 由该 公 司成 功 上市 ［ １ ］ 。１ ９ ７ ８年 ， 环孢 菌 素 Ａ被应 用于 第一例 肾移植 患 者 。因其具 有免疫 抑制 活
１ ． １ ． １ 菌种 、 质粒 与试 剂 环孢 菌素 Ａ 高 产 菌 株 多 孔 木霉 （ Ｔ ｏ ｌ ｙ ｐ ｏ ｃ ｌ ａ ｄ ｉ ｕ ｍ
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环孢菌素A两种不同产生菌原生质体的制备
和再生
作者：林永勉郑孝贤郑卫程元荣
【摘要】以环孢菌素A两种不同产生菌——雪白白僵菌和茄病镰刀菌为出发菌株，开展了原生质体制备和再生条件的研究，并分别实现了两个不同种的菌株原生质体再生。
【关键词】环孢菌素A 雪白白僵菌茄病镰刀菌原生质体
Formation and regeneration of protoplasts from two
ABSTRACT Protocols for formation and regeneration protoplasts for two different fungus species, Beauveria nivea and Fusarium solani, were described. High yield of protoplasts was obtained by using a combined enzyme system containing lywallzyme and snailase. The effects of factors such as osmotic stabilizers, cultivation time, temperature, pH, incubation time on the formation and regeneration were studied.
KEY WORDS Cyclosporin A; Beauveria nivea; Fusarium solani;
Protoplast
环孢菌素A(cyclosporin A)是由11个氨基酸组成的环肽，已作为高效免疫抑制剂在人体器官移植上广泛应用［1］。
1976年瑞士Sandoz公司首次报道了由半知菌属多孔木霉(Tolypocladium inflatum)［后更名为雪白白僵菌Beauvcria nivea)］和光泽柱孢菌(Cylindrocarpon lucidum)产生的环孢菌素A［2］。
此后各国的科学家又陆续报道了由13种其他产生菌，如茄病镰刀菌(Fusarium solani)和侵菅新赤壳菌(Neocosmospora varinfecta)等产生环孢菌素A。
福建省微生物研究所于1983年首次报道了从我国土壤中筛选到环孢菌素A的产生菌茄病镰刀菌411，在国内率先研制成功环孢菌素A［3，4］。
根据Ains worth的真菌分类法，茄病镰刀菌和国际上常用的环孢菌素A产生菌雪白白僵菌分别属于丝孢纲(Hyphomycetes)的丝孢目(Hyphomycetales)和瘤座孢目(Tuberculariales)。
这两种产生菌不但在形态、培养特征和生理特性上有所不同，而且在工业化生产工艺和结果各有不同的特点。
茄病镰刀菌生产环孢菌素A具有发酵培养基成本低，发酵周期短(5d)的优点，但环孢菌素A效价和组分含量偏低；雪白白僵菌生产环孢菌素A具有环孢菌素A效价和组分含量较高的优点，但发酵培养基成本高，发酵周期长(10～15d)。
Kim等［5］利用雪白白僵菌进行种内融合，所获得的依赖L Val和L Leu的融合株环孢菌素A效价高达8920 mg/L，但发酵所需的培养基价格昂贵，使用培养基中氨基酸含量高达36g/L，发酵周期长达10～13d。
我们设
想将两种不同的环孢菌素A产生菌的菌种进行目间原生质体融合，试图筛选出集合两个不同菌种优点的融合子应用于生产，获得提高环孢菌素A生产能力和经济效益的新菌株。
本文报道以雪白白僵菌和茄病镰刀菌为出发菌株，分别进行原生质体制备与再生条件的研究。
1 材料和方法
1.1 菌种
茄病镰刀菌S421502和雪白白僵菌X44150均由福建省微生物研究所提供。
1.2 培养基
PDA液体培养基称取20g去皮土豆，切成小块状，加适量水煮30min。
用4层纱布过滤，弃去滤渣，于滤液中加入2g葡萄糖，定容到100ml。
PDA斜面琼脂培养基 100ml PDA液体培养基加琼脂2g进行制备。
PDA再生培养基 PDA液体培养基，酵母浸汁(膏状)0.3g，KCl 3.9g，琼脂2g，定容至100ml。