酶活力的测定 国标
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（mL）
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然后按以下流程操作：
试管A（空白）
↓ 加酶液2.00mL
↓（40±0.2）℃，2min 加三氯乙酸4.00mL（摇匀）
↓（40±0.2）℃，10min
加酪蛋白溶液2.00mL（摇匀） 加三氯乙酸4.00mL（摇匀）
↓ 取出静止10min，过滤
（慢速定性滤纸）
100mL，即得到100μg/mL的L-酪氨酸标准储备溶液。 3. 氢氧化钠溶液（20g/L）
称取氢氧化钠2g，加水搅拌溶解。待溶液到室温后 ，以水定容 至100mL，搅拌均匀。 4. 盐酸溶液
1mol/L:取22.5ml的浓盐酸溶液，加水定容至250ml。 0.1mol/L：取1.8ml的浓盐酸溶液，加水定容至200ml。 5. 酪蛋白溶液（10.0g/L） 称取标准酪蛋白1g，用少量氢氧化钠溶液润湿，加入相应的缓冲 溶液约80mL，在沸水浴中100℃加热回流30min。冷却到室温后转入 100mL容量瓶中，用适宜的pH缓冲溶液稀释至刻度。此溶液在冰箱内 贮存，有效期为3d。使用前重新确认并调整pH至规定值。
式（1）中：
X1—由标准曲线所得的样品最终稀释液的酶活力，u/mL；
X2—样品的酶活力，u/g；
V—溶解样品所使用量瓶的体积，mL；
n—稀释倍数；
8—反应试剂的总体积，mL；
2—吸取酶液的体积，mL；
m—样品的质量，g；
1/10—反应时间 10min，以 1min 计。
1、标线的绘制
管号 酪氨酸的浓度
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
饲料用β-甘露聚糖酶活力的测定
乙酸钠缓冲溶液混合溶解， 待完全溶解后， 加
乙 酸-乙 酸 钠 缓 冲 溶 液 定 容 ， 得 到 1.0mg/mL 的
D-甘露糖溶液。 然后， 用乙酸-乙酸钠缓冲溶液
分 别 稀 释 ， 配 制 浓 度 为 0.100mg/mL、 0.200mg/
mL、
0.300mg/mL、0.400mg/mL、0.500mg/mL、
关 键 词 ：β-甘 露 聚 糖 酶 ；活 力 测 定
β-甘露聚糖酶能够把豆粕、 玉米中高含量 的甘露聚糖分解为甘露寡糖及单糖。 甘露寡糖 能很好的调理肠道微生物， 有助于提升机体免 疫力； 单糖可被动物机体直接利用。 市场上饲 料用 β-甘露聚糖酶产品有逐年增加的趋势,广大 饲料质检实验室迫切需要相应的国家检验标准 或行业检验标准。 国家标准 《GB/T36861 饲料添 加 剂 β- 甘 露 聚 糖 酶 活 力 的 测 定 》 于 2019 年 4 月 1 日开始实施， 为行业提供了测定 β-甘露聚 糖酶活力的标准方法。 我们第一时间依照该方 法开展了实践。
2019 年第 5 期
健康养殖
角 豆 胶 完 全 溶 解 ， 停 止 加 热 ， 继 续 搅 拌 10 分
钟 。 转 入 100mL 容 量 瓶 中 ， 待 冷 却 至 室 温 后 ，
用乙酸-乙酸钠缓冲溶液定容。 使用前摇匀。
D-甘露糖标准溶液： 精密称取 D-甘露糖
0.100g 至 100mL 容 量 瓶 中 ， 加 入 约 50mL 乙 酸-
于棕色瓶中， 避光， 室温保存 7 天后可以使用。
1.3 待测样品
湖南省内抽取的样品。 产地有湖南省岳阳
市、 汨罗市、 黑龙江省齐齐哈尔市等。
2 方法
2.1 标曲绘制 取 8 支 25mL 刻 度 试 管 , 分 别 加 入 空 白 溶 液 （ 乙 酸 - 乙 酸 钠 缓 冲 溶 液 ） 、 0.100mg/mL、 0.200mg/mL、 0.300mg/mL、 0.400mg/mL、 0.500mg/mL、 0.600mg/mL、 0.700mg/mL 的 D- 甘 露糖标准溶液各 2.00mL,后再加入 2.00mL 乙酸乙酸钠缓冲溶液和 5.00mL DNS 试剂,充分摇匀， 置 沸 水 浴 中 反 应 5min， 迅 速 冷 却 至 室 温 ， 定 容 至 25.0mL， 以 试 剂 空 白 溶 液 调 零 ， 测 各 试 管 试
蛋白酶活力测定方法
酸性蛋白酶产品概述:蛋白质由氨基酸组成，是自然界中发现的最复杂的有机化合物之一。
由盐酸和蛋白酶分解成易被高等动物的肠道和微生物有机体的细胞膜吸收的氨基酸。
包括人类在内的每种动物，必须要有足够的蛋白质来维持自身生长，来生成每个细胞所必需的氨基酸，一些特种蛋白质还是某些特殊细胞、腺体分泌物、酶和激素的功能性组成元素。
蛋白酶是指一些有催化功能的酶，能够水解（断裂）蛋白质，因此也被称为蛋白水解酶。
蛋白水解酶在许多的生理和病理过程中发挥着重要作用，在食品和乳品加工业也有着广泛应用。
工作机理蛋白水解酶制剂本产品能在酸性条件下水解蛋白质食品中的缩氨酸键，释放氨基酸或者多肽。
在酒精、葡萄酒、果汁、啤酒、黄油和酱油生产中，添加酸性蛋白酶可澄清发酵液中的雾气。
酵母在发酵阶段的生长可以通过悬浮蛋白质转化的氨基酸来加以促进，从而加速发酵并提高产量。
本产品是一种酸性蛋白酶制剂，在酸性条件下具有较高活性，由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌深层发酵而成。
它广泛应用于饲料、纺织、废水处理和果汁提纯方面。
酸性蛋白酶（Acid protease ）是指蛋白酶具有较低的最适pH，而不是指酸性基团存在于酶的活性部位，酸性蛋白酶的最适PH从2左右（胃蛋白酶）到4左右。
从酶的活力-PH曲线分析，在酶的活性部位中含有一个或更多的羟基。
这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。
（酸性蛋白酶537容易失活）简介：酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉优良菌种经发酵精制提炼而成，它能在低PH条件下，有效水解蛋白质，广泛应用于酒精、白酒、啤酒、酿造、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业。
1、产品规格：，规格有5万u/g～10万u/g液体型为黑褐色液体，规格有50000u/ml～10000u/ml.2、酶活力定义：一个酶活力单位是1g酶粉或1ml酶液在40℃，PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位（u/g或u/ml）特性1、温度范围为：最适温度范围为40℃-50℃2、PH为：最适PH范围为2.5～3.5使用方法1、白酒工业：本品用以淀粉为原料的生产酒精及白酒行业，提高出酒率0.25%个酒分，提高发酵速度。
10-酶活性测定
酶活性测定---介绍酶活力、比活力的概念以及测定方法⏹酶活力（enzyme activity)●酶活力与酶反应速度酶活力指酶催化一定化学反应的能力，以测出的酶促反应速度表示酶的活力即测定单位时间、单位体积底物减少量或产物增加量来表示测定初速度，测定产物增加量[P]0 X 时间TVVX产物浓度产物浓度变化曲线反应初速度V o●酶的活力单位（U activity unit)酶活力单位（U）的定义：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物的酶量。
国际单位：最适条件下，在1分钟内催化1微摩尔底物转化为产物所需的酶量定为1个单位，即1IU=1μm/minKcat单位：最适条件每秒钟催化1摩尔底物转化为产物所需的酶量，定为1个Kcat单位.Kcat单位与IU单位之间的换算关系如下：1Kcat=60×106IU1IU=1/60uKcat=16.7nKcatBUT………•限制性核酸内切酶3种定义•用粘度法测活性：30℃，1分钟，使底物DNA溶液的比粘度下降25%的酶量为1个酶单位。
•转化率法：5分钟使1ug供体DNA残留37%的转化活性所需的酶量为1个酶单位。
•凝胶电泳法测活：37℃，1小时，使1ugλDNA完全水解的酶量为1个酶单位。
⏹酶的比活力（specific activity)●每毫克蛋白质或每毫升蛋白质所含酶的活力单位数，用单位/毫克蛋白或单位/毫升来表示，n U/mg或n U/ml●代表酶的纯度:比活力越大纯度越高●可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力，酶产品质量评价中常使用的指标⏹酶活力的测定方法测定酶活力就是测定产物的增加或底物的减少，根据产物或底物的物理或化学性质来决定具体酶催反应的测定方法●分光光度法：利用底物和产物在紫外或可见光部分的光吸收的不同，选择一适当的波长，测定反应中反应进行的情况，酶活力测定中最重要的方法。
优点：简便、节省时间和样品增加底物浓度213456780 2 4 6 8底物(m mole)产物80604020S+E↓P(在一定时间里)●荧光法：根据底物或产物的荧光性质的差别来进行测定优点是灵敏度高，缺点是易受其它物质的干扰。
国标—蛋白酶活力测定法
中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法 SB/T 10317-1999Measurement of proteinase activity━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1 福林法1.1 试剂及溶液: 以下试剂都为分析纯1.1.1 福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O) 100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。
若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。
冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
即成已稀释的福林试剂。
1.1.2 0.4mol碳酸钠溶液: 称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4g,定容至1000mL。
1.1.3 0.4mol三氯乙酸(T C A)溶液: 称取三氯乙酸(CCL3COOH)65.4g,定容至1000mL。
1.1.4 pH7.2磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)31.2g,定容至1000mL,即成0.2mol溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)71.63g,定容至1000mL,即成0.2mol溶液(B液)。
取A 液28mL 和B 液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成0.1mol pH7.2的磷酸盐缓冲液。
1.1.5 2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至0.002g,加入0.1N氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用pH7.2磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。
酶活力测定方法
空白和对照试验： 空白试验：是指杂质反应和自发反应引起
的变化量，它提供的是未知因素的影响。空 白值可以通过不加酶，或不加底物，或二者 都加（酶预先经过失效处理）。
对照试验：是指用纯酶或标准酶制剂测得 的结果，主要作为比较或标定的标准。
3）测定方法：
取样测定法：
酶变性剂：5% 三氯醋酸 3% 高氯酸 其它酸、碱、醇类
A1 - A2
0.003 : 1 =
:X
T
A1 - A2 0.003T
每mg供试品中含胰蛋白酶单位数为
A1 - A2
0.003TW
A1—A 2 P=
0.003 T W
重组人白细胞介素 11的胰蛋白酶切肽 图分析
肽图分析是评价重组产品蛋白质结构及其 生产工艺稳定性的重要方法,目前常用的方 法有ＣＮＢｒ裂解ＳＤＳ-ＰＡＧＥ微量肽 图法和胰蛋白酶切ＲＰ ＨＰＬＣ肽图法。返回练习与思考
1．何谓：生化药物、生物技术药物、 基因工程药物和生物制品？ 2．生化药物和基因工程药物各分哪 几种？ 3．与化学合成药物的分析相比，生 物药物的分析有何特点？
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加热：使酶失效
酶反应
不同的时间取样
终止反应
测定
连续测定法：在反应过程中对反应系统进 行直接连续检测。
检测方法： 紫外-可见分光光度法 旋光法 荧光分光光度法 电化学测定法 酶偶联测定法 离子选择性电极测定法等。
示例：胰蛋白酶效价测定 胰蛋白酶 肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸） 水解速率：酯键﹥酰氨键﹥肽键 供试品溶液：50～60单位/ml 底物溶液：N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯
2．酶活力测定法
1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶
活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学 反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越 高。
蛋白酶活性的测定方法
精品文档蛋白酶活性的测定方法（GB/T23527-2009）1 原理蛋白酶对酪蛋白、乳清蛋白、谷物蛋白等都有很好的水解作用。
磷钨酸和磷钼酸混合试剂，即福林 - 酚试剂，碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钨兰和钨兰混合物）。
由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），因此，蛋白质及其水解产物也呈此反应。
利用蛋白酶分解酪素（底物）生成含酚基氨基酸的呈色反应，来间接测定蛋白酶的活力。
2 仪器和设备2.1 分析天平：精度 0.0001g2.2 恒温水浴：精度土 0.2 C2.3 计时表2.4 分光光度计2.5 沸水浴器2.6 振荡混合器2.7 pH计：精度0.01pH单位3 试剂和溶液3.1 乳酸缓冲液（pH=3.0）适用于酸性蛋白酶甲液：称取乳酸（ 80%-90%）1 0 .6g, 加水溶解并定容至 1000ml。
乙液：称取乳酸钠（70% 16g,加水溶解并定容至1000ml.使用溶液：取甲液 8ml, 加乙液 1ml, 摇匀，稀释一倍，即成 0.05mol/L 乳酸缓冲溶液。
3.2 磷酸缓冲液的制备（pH=7.5）适用于中性蛋白酶准确称取磷酸氢二钠（ Na2HPO3.12H2O）6.02 和磷酸二氢钠（ NaH2PO3.2H2O） 0.5g, 加水定容至1000ml3.3 硼酸缓冲液（pH=10.5）适用于碱性蛋白酶甲液：称取硼酸钠19.08g, 加水溶解并定容至 1000ml。
乙液：称取氢氧化钠 4.0g, 加水溶解并定容至 1000ml. 使用溶液：取甲液500ml, 加乙液 400ml, 摇匀，用水稀释至 1L。
3.4 0.4mol/L 碳酸钠溶液：准确称取无水碳酸钠 42.4g, 以蒸馏水溶解定溶至 1000ml.3.5 0.4mol/L 的三氯醋酸液：准确称取 65.4 三氯醋酸, 以蒸馏水溶解定溶至 1000ml3.6 0.5mol/L 的 NaOH：准确称取2g NaOH溶解并定至100ml3.7 10.00mg/ml 酪素溶液称取酪素 1.000g, 准确至 0.001g, 用少量的 0.5mol/L 的氢氧化钠溶液（若为酸性蛋白酶则用浓乳酸 2-3 滴）润湿,, 加入适量的各适宜的缓冲液约80ml,在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转入100ml容量瓶中 , 用适宜的缓冲液稀释至刻度 , 此溶液在冰箱内贮存 , 有效期为三天 .3.8 100卩g/ml酪氨酸标准溶液3.8.1准确称取预先于105C干燥至恒重的L-酪氨酸0.1000g ,用1mol/L 的盐酸 60ml 溶解后定容至 100ml, 即为 1.00mg/ml 的酪氨酸溶液 .精品文档3.8.2 吸取 1.00mg/ml 酪氨酸标准溶液 10.00ml, 用 0.1mol/L 盐酸定容至100ml,即得100.0卩g/ml L-酪氨酸标准溶液.3.9 酶样的制备准确称取 1.000g 固体酶或移取 1ml 液体酶样，用少量的适宜缓冲液溶解并用玻璃棒捣研 , 然后将上清液倒入 100ml 容量瓶, 沉渣中再添入少量缓冲液捣研多次 , 最后全部移入容量瓶 , 稀释到刻度 , 用四层纱布过滤。
各种酶活力测定方法及注意事项
碱性蛋白酶及各种蛋白酶活力测定方法及测定有感因长期测定碱性蛋白酶酶活力与角蛋白酶活力与胶原酶活力和弹性蛋白酶活力，碱性蛋白酶活力测定还好，因有国家标准，测定按照国标来便可大大减少误差。
其余酶活力测定过程中因无统一标准且底物差异大，导致长期酶活力测定的混乱，各种酶活力测定方法与各种试剂添加，最后实际测定的酶活力只能仅作参考。
以下是各种蛋白酶活力测定方法及标曲绘制：碱性蛋白酶测定方法根据国标GB/T 23527-2009 附录B 蛋白酶活力测定福林法以下是方法碱性蛋白酶的测定方法参考GB/T 23527-2009 附录B中福林酚法进行，即1个酶活力单位（U/mL）定义为1 mL 酶液在40℃、pH= 10.5条件下反应1 min水解酪蛋白产生1 μg 酪氨酸所需要的酶量，主要步骤如下。
2.2.6.1 标准曲线的绘制（1）L-酪氨酸标准溶液：按表2-6配制。
表2-6 L-酪氨酸标准溶液配置表Table 2-6 L-Tyrosine standard solution form管号酪氨酸标准溶液的浓度/（μg/mL）取100 μg/mL酪氨酸标准溶液的体积/（mL）取水的体积/（mL）0 0 0 101 10 1 92 20 2 83 30 3 74 40 4 65 50 5 5（2）分别取上述溶液各1.00 mL，各加0.4 mol/L碳酸钠溶液5.0 mL，福林试剂使用液1.00 mL，置于40 ℃± 0.2 ℃水浴锅中显色20 min，用分光光度计于波长680 nm，10mm比色皿，以不含酪氨酸的反应管作为空白，分别测定其吸光度值，以吸光度值A为纵坐标，酪氨酸浓度C为横坐标，绘制L-酪氨酸标准曲线。
图2-1 L-酪氨酸标准曲线Fig. 2-1 L-tyrosine standard curve根据作图或用回归方程计算出当吸光度为1时的酪氨酸的量（μg），既为吸光度常数K 值。
其K值应在95-100范围内。
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木瓜蛋白酶活力的测定
一、试剂与溶液
1. 三氯乙酸
称取三氯乙酸6.54g，用水溶解并定容至100mL。
2. L-酪氨酸标准储备溶液（100μg/mL）
精确称取L-酪氨酸0.1000g，用1mol/L盐酸溶液60mL溶解后定容至100mL，即为1mg/mL酪氨酸溶液。
吸取1mg/mL酪氨酸溶液10.00mL，用0.1mol/L盐酸溶液定容至100mL，即得到100μg/mL的L-酪氨酸标准储备溶液。
3. 氢氧化钠溶液（20g/L）
称取氢氧化钠2g，加水搅拌溶解。
待溶液到室温后，以水定容至100mL，搅拌均匀。
4. 盐酸溶液
1mol/L:取22.5ml的浓盐酸溶液，加水定容至250ml。
0.1mol/L：取1.8ml的浓盐酸溶液，加水定容至200ml。
5. 酪蛋白溶液（10.0g/L）
称取标准酪蛋白1g，用少量氢氧化钠溶液润湿，加入相应的缓冲溶液约80mL，在沸水浴中100℃加热回流30min。
冷却到室温后转入100mL容量瓶中，用适宜的pH缓冲溶液稀释至刻度。
此溶液在冰箱内贮存，有效期为3d。
使用前重新确认并调整pH至规定值。
二、分析步骤
1. 标准曲线的绘制
L-酪氨酸标准溶液：按表1配制。
L-酪氨酸稀释液应在稀释后立即进行测定。
表1 L-酪氨酸标准溶液
分别取上述所配的溶液，以0管为空白，利用紫外分光光度计于波长275nm下测定吸光度。
以吸光度A为纵坐标，酪氨酸的浓度c为横坐标，绘制标准曲线。
利用回归方程，计算出吸光度为1时的酪氨酸的量（μg），即为吸光常数K值。
其K值应在130~135范围内，如不符合，需重新配制试剂，进行实验。
2. 样品的测定
待测酶液的制备：称取酶样品1g。
然后用磷酸缓冲溶液充分溶解，定容至50ml。
测定：先将酪蛋白溶液置于（40±0.2）℃恒温水浴中，预热5min，
然后按以下流程操作：
试管A（空白）
↓
加酶液2.00mL
↓（40±0.2）℃，2min
加三氯乙酸4.00mL（摇匀）↓（40±0.2）℃，10min
加酪蛋白溶液2.00mL（摇匀）↓
取出静止10min，过滤
（慢速定性滤纸）
定容至100ml
↓
测滤液吸光度试管B（酶试样，需三个平行样）↓
加酶液2.00mL
↓（40±0.2）℃，2min
加酪蛋白溶液2.00mL（摇匀）
↓（40±0.2）℃，10min
加三氯乙酸4.00mL（摇匀）
↓
取出静止10min，过滤
（慢速定性滤纸）
定容至100ml
↓
测滤液吸光度
三、计算过程
从标准曲线上读出样品最终稀释液的酶活力，单位为u/mL。
样品的酶活力按下式计算：
X2= (X1×V×n×8)/(2×m ×10) 式（1）
式（1）中：
X1—由标准曲线所得的样品最终稀释液的酶活力，u/mL；
X2—样品的酶活力，u/g；
V—溶解样品所使用量瓶的体积，mL；
n—稀释倍数；
8—反应试剂的总体积，mL；
2—吸取酶液的体积，mL；
m—样品的质量，g；
1/10—反应时间10min，以1min计。
1、标线的绘制
∵吸光度A=1时的酪氨酸的量（μg），即为吸光常数K值∴求得K=134.0135
2、样品的测定。