黄酮纯化
纯化微粒化黄酮成份
纯化微粒化黄酮成份
纯化微粒化黄酮成份是一种从天然植物中提取的活性成分，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
这种成分在自然界中广泛存在，如柑橘类水果、茶叶、红酒等。
纯化微粒化黄酮成份可以通过不同的提取方法获得，如溶剂提取法、超声波提取法、超临界流体萃取法等。
提取得到的黄酮成份经过进一步的分离纯化，如吸附、沉淀、结晶等，可以得到高纯度的微粒化黄酮成份。
这种成分具有以下特点：
1.高纯度：纯度可达到90%以上，甚至更高。
2.微粒化：黄酮成份被制备成微粒形式，具有较好的分散性和溶
解性，可提高其在药剂中的分散性和溶解度，从而改善药物的
生物利用度和药效。
3.活性强：具有较强的生物活性，可起到良好的药理作用。
4.来源广泛：可从多种天然植物中提取得到，具有广泛的应用前
景。
纯化微粒化黄酮成份在药剂学、食品科学、化妆品等领域有广泛的应用。
例如，可以作为药物的有效成分，提高药物的疗效和稳定性；可以添加到食品中，起到抗氧化、抗炎等作用；可以作为化妆品的添加剂，起到美白、抗衰老等作用。
总之，纯化微粒化黄酮成份是一种具有广泛应用前景的天然活性成分，在多个领域中都有着重要的应用价值。
黄酮类化合物的提取纯化方法
黄酮类化合物的提取、药用价值和产品开发应用前景任红丽2009090141摘要：对黄酮类化合物的药用价值、提取工艺、分离方法等方面进行综述。
在药用价值方面,讨论了其抗抑郁作用、抗氧化与自由基消除活性作用、对化学性肝损伤的保护作用、抗肿瘤作用、抗骨质疏松作用、抗心肌缺血作用;在提取工艺方面,讨论了溶剂提取法、超声提取法、酶法、微波法等;及其开发应用，为今后黄酮类化合物的深入研究提供理论基础。
关键词：黄酮类化合物提取工艺药用价值黄酮类物质是一类低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚类物质[14]，又称生物黄酮或植物黄酮，属植物次级代谢产物，广泛存在于各种植物的各个部位，尤其是花、叶，主要存在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科与菊科中。
迄今，已有数百种不同类型的黄酮类化合物在植物中被发现，人工合成的黄酮类化合物也不断问世。
最初这类物质仅用于染料方面，自20世纪20年代，槲皮素、芦丁等黄酮类物质用于临床后，才开始引起人们的关注，研究发现其中相当一部分具有显著的生理及药理活性，例如抗氧化、抗病毒、抗炎、调节血管渗透性，改善记忆，抗抑郁、抗焦虑、中枢抑制、神经保护等功能[2,12]诸多生理和药理特性使其广泛应用于食品、医药等领域。
1.提取纯化方法1．1 传统提取方法1．1．1 热水提取法水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。
但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。
此外，水提取物容易发霉发酵[22]。
1．1．2 碱性水、碱性稀醇浸提法中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基[7]，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。
黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。
黄酮类物质的分离纯化实验报告结果
黄酮类物质的分离纯化实验报告结果
实验目的：对黄酮类物质进行分离和纯化，以获得高纯度的黄酮类化合物。
实验步骤：
1.将黄酮类植物材料加入适量的乙醇中，进行浸提。
2.过滤浸提液，得到植物材料的提取液。
3.将提取液转入蒸发器中，进行蒸发浓缩。
4.将浓缩液溶解于适量的无水乙醚中，进行萃取。
5.分取有色相的有机相液体。
6.用饱和盐酸溶液，使有机相与无水乙醚中的黄酮类物质发生转化反应。
7.经过酸化反应后，形成无色的无机酸盐。
8.用横向冷冻离心机进行冷冻离心，分离提取的黄酮类物质。
9.将离心沉淀物重新溶解于适量的去离子水中。
10.通过制备薄层层析法或者柱层析法对黄酮类物质进行进一步的分离和纯化。
11.通过紫外可见分光光度计检测黄酮类物质的纯度。
实验结果：
根据实验结果，我们成功地得到了一种高纯度的黄酮类化合物。
该化合物的纯度通过紫外可见分光光度计检测，纯度较高。
讨论和结论：
通过本次实验，我们成功地分离纯化了黄酮类物质。
该实验证明了所使用的方法在分离黄酮类物质方面的有效性。
此外，我们还可以利用其他分离纯化方法，如色谱法或逆流法等，进一步提高黄酮类物质的纯度。
然而，尽管我们得到了高纯度的黄酮类化合物，但该实验结果仅表示特定工作条件下的实验结果，并不能保证在不同条件下得到相同的结果。
因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的方法和条件进行黄酮类物质的分离纯化。
总之，本次实验成功地分离纯化了黄酮类物质，并得到了高纯度的黄酮类化合物。
该实验结果将有助于我们进一步研究和应用黄酮类物质。
黄酮和单体黄酮的实验原理
黄酮和单体黄酮的实验原理黄酮是一类具有苯环结构和一个或多个羟基取代的天然化合物，广泛存在于植物中，尤其是在豆科植物中含量较高。
黄酮具有很多生物活性，包括抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等，因此引起了广泛的研究兴趣。
黄酮化合物的结构特点是带有两个芳香环，它们的π-π电子转移能力较强，使得其具有明显的吸收和荧光性质，这为实验研究提供了便利。
单体黄酮是指黄酮类化合物的单体化合物，即不是黄酮类化合物的聚合物或衍生物。
在研究黄酮化合物的生物活性时，通常会从天然材料中提取黄酮类化合物，然后将其纯化为单体黄酮。
单体黄酮的实验原理主要有以下几个方面：1. 提取：首先，将含有黄酮类化合物的植物材料经过粉碎并与适当溶剂进行浸泡，将溶解在细胞壁中的黄酮类化合物溶出。
然后，通过过滤、浓缩和干燥等方法，得到含有黄酮类化合物的提取物。
2. 纯化：提取物中可能包含除黄酮类化合物外的其他杂质，如脂类、蛋白质等。
为了得到纯度较高的黄酮类化合物，需要进行纯化步骤。
常用的纯化方法有色谱技术，如硅胶层析、凝胶柱层析、高效液相色谱等。
色谱技术可根据黄酮类化合物的物理化学性质，如极性、分子大小等，进行分离和纯化。
3. 结构鉴定：利用纯化得到的单体黄酮进行结构鉴定是非常关键的，一方面可以确认黄酮类化合物的纯度和结构，另一方面可以为后续的生物活性研究提供参考。
常用的结构鉴定方法有核磁共振波谱（NMR）、质谱（MS）和红外光谱（IR）等。
通过这些技术，可以确定黄酮类化合物的分子式、分子量、官能团和键键。
4. 生物活性评价：单体黄酮的生物活性可通过各种体外和体内实验进行评价。
常见的体外实验包括抗氧化活性、抗炎活性、抗菌活性等。
抗氧化活性可通过测定单体黄酮的清除自由基能力来评估，如DPPH自由基、超氧阴离子自由基等。
抗炎活性可以通过测定单体黄酮对炎性介质的产生、炎症相关基因的表达等来评估。
抗菌活性则涉及到对细菌、真菌等微生物的生长抑制。
5. 结构-活性关系研究：通过对单体黄酮的结构和生物活性的相关性进行研究，可以揭示单体黄酮的结构-活性关系。
蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究
蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究随着现代药物的发展，蒲公英药用成分的开发及应用研究受到了广泛的关注。
从蒲公英中可以提取到一类特殊的有机化合物黄酮类。
黄酮类具有保肝、抗菌、抗病毒等活性，在临床上具有重要的作用，但由于其低稳定性，在蒲公英中含量较低且分布不均，因此如何有效提取黄酮类成分及稳定性研究便显得尤其重要。
蒲公英中黄酮类化合物的提取，一般采用溶剂提取法。
首先，可以使用有机溶剂或者水溶剂，进行蒲公英的提取，从而获得所需的植物提取物。
接着，可以采用凝胶层析方法，对得到的提取物进行分离纯化。
采用不同的凝胶进行黄酮类化成分的分离，可以获得更高纯度的黄酮类化合物。
在此基础之上，可以进一步采用液相色谱等分离技术，进行深入的研究分析，从而筛选出更多的黄酮类化合物。
蒲公英中黄酮类化合物的应用研究，主要涉及到药物的活性研究及作用机制的研究。
在药物的活性研究中，首先可以采用实验性模型（如抗细菌、抗病毒及抗肿瘤），进行相关活性研究，从而鉴定出有效的黄酮类化合物。
此外，可以采用细胞培养等技术，利用黄酮类化合物作为药物，进行作用机制的探究。
举例而言，在抗肿瘤研究中，可以利用细胞培养研究，观察黄酮类化合物对于肿瘤细胞的抑制作用，从而探讨其抗肿瘤的机制。
此外，蒲公英中黄酮类化合物的应用研究还可以包括与现代药物相关的研究。
例如，可以采用细胞培养等方法，运用药物联合疗法，深入研究黄酮类化合物与其他药物的联合作用，从而提高药效。
此外，为了优化配伍、提高活性及降低毒副作用，可以结合全面的实验模型，进行活性成分组效应研究，尝试寻求新的抗疾病组合方案。
从总体上来看，蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究具有重要的意义。
在提取纯化研究方面，可以采用溶剂提取法、凝胶层析法等技术，分离获得优质的黄酮类化合物；在应用研究方面，可以采用实验模型、药效组合研究等方式，鉴定出有效的作用机制，从而提高药物的活性。
由此可见，蒲公英中黄酮类化合物的提取纯化及应用研究对于促进药物研发具有十分重要的意义。
银杏中黄酮的提取分离纯化
银杏中黄酮的提取分离纯化一、综述银杏树具有观赏、经济、食用、药用等价值，银杏叶含多种活性成分，包括黄酮、萜类、内酯、聚戍烯醇、生物碱、术酯体等，在药用方面，银杏叶提取物的有效成分主要是黄酮苷类和萜类物质，有通过降低血液黏弹性改善微循环系统的功能，银杏叶中黄酮类化合物的含量较高，主要有黄酮及其苷、双黄酮、儿茶素这三类物质。
其中黄酮及其苷类化合物大多数是由槲皮素、山萘醇及其苷组成。
黄酮类化合物主要是指母核为2-苯基色原酮的一类化合物，现在则泛指具有C6-C3-C6基本结构骨架的一大类天然化合物。
天然黄酮类化合物母核上常含一些助色团，使该类化合物多显黄色，又因为分子中γ-吡酮环上的氧原子能与强酸成盐而表现为弱碱性，因此称为黄碱素类化合物。
黄酮类化合物不仅来源广泛而且表现出多种多样的药理活性,具有对免疫系统作用、防癌抗癌作用、抗肿瘤作用、抗心血管疾病作用、对内分泌系统的作用、消除自由基和抗氧化活性。
二、实验依据1、黄酮类化合物的分析方法①分光光度法该法是测定黄酮类化合物含量最为普遍的一种分析方法。
；黄酮类化合物可与氯化铝、硝酸铝、氢氧化钾等形成稳定的络合物,并产生特征吸收光谱，通常采用硝酸铝比色法,黄酮类化合物与Al(NO3)3进行络合显色，测定其含量[33]。
②高效液相色谱法高效液相色谱的固定相有硅胶柱和氨基柱，C18在黄酮类化合物的分析过程中应用广泛，在检测器的选择中，紫外检测仍是最普遍的检测方法，此外还有电化学检测器、光电二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器等2、黄酮类化合物提取方法①有机溶剂提取法最常用的黄酮类化合物提取溶剂为乙醇和甲醇，高浓度的醇(如90%～95%)有利于于提取苷元，浓度为60%的乙醇或甲醇水溶液适则有利于于提取苷类物质；乙酸乙酯和丙酮也常用来提取黄酮类化合物。
②水浸提法随着黄酮类提取物在市场上销售价格的降低，对于提取剂的选择，首先要考虑其成本问题，显然水浸提法对于降低成本，提高产品的市场竞争力有很大的帮助，而且就环保的角度出发，水浸提法更加环保、安全。
银杏叶提取黄酮及分离纯化
银杏叶提取黄酮及分离纯化组员：李佳辉、黄埔、赵超武一、实验目的1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置3.学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。
其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。
先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。
显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。
（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。
因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。
其工艺流程如下：银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。
三．实验材料及器材1.材料酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸2.相关溶液的配制和树脂预处理0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇（1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。
黄酮类化合物提取分离纯化及其活性的研究进展
黄酮类化合物提取分离纯化及其活性的研究进展姓名常姣专业微生物学摘要文章综述了黄酮类化合物的结构特征及提取、分离纯化技术介绍了黄酮类化合物的生物活性，并对其开发利用进行了展望。
旨在为黄酮类化合物的研究、开发以及应用提供参考。
关键词黄酮；提取；分离纯化；生物活性民以黄酮类化合物也称黄碱素, 是广泛存在于自然界的一大类化合物, 在植物体内大多与糖结合成甙的形式存在, 也有部分以游离状态的甙元存在。
由于最先发现的黄酮类化合物都具有一个酮式羰基结构, 又呈黄色或淡黄色, 故称黄酮[ 1]。
目前对天然黄酮类化合物的提取方法较多,如溶剂提取法、微波提取法、超声波提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法及半仿生提取法等, 每种方法都有它各自的优点和点。
用上述方法提取的黄酮类化合物仍然是一个混合物, 不仅是含有其它杂质的粗品, 而且是几种黄酮类成分的混合物, 需进一步分离纯化, 常用的方法有柱层析法、重结晶法、铅盐沉淀法和高效液相色谱法等。
黄酮类化合物具有降低血管脆性及异常的通透性、降血脂、降血压、抑制血小板聚集及血栓形成、抗肝脏病毒、抗炎、抗菌、解栓、抗氧化、清除自由基、抗衰老、抗癌、防癌、降血糖、镇痛和免疫等生理活性[ 2-5]。
这些生理活性已被关注，对该类化合物的研究成为医药界的热门课题。
人体自身不能合成黄酮类化合物而只能从食物中摄取，因此多年来科学家都在积极研究探讨从植物体中分离纯度高、活性强的黄酮类化合物[6]。
1黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物是以2-苯基色原酮为母核而衍生的一类通过三碳链相互连接而成的大多具有基本碳架的一系列化合物，且母核上常有羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等助色取代基团。
黄酮类化合物多为晶体固体，多数具有颜色，少数（如黄酮苷类）为无定形粉末，除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有旋光性外，其余则无旋光性) 黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态（苷或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷）不同而有很大差异) 一般游离态苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂) 其中，黄酮、黄酮醇、查儿酮等平面型分子，因堆砌较紧密，分子间引力较大，故更难溶于水；而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面型分子，故排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，水中溶解度稍大。
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1.1.1.1.重结晶法重结晶法重结晶法重结晶法重结晶法利用黄酮类化合物不溶于酸，易溶于碱水、乙醇和丙酮的性质，将黄酮类化合物分离和纯化。
多次重结晶可以获得较高纯度的黄酮类化合物[2]。
2.2.2.2.薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法薄层色谱法2．1制备型薄层色谱法(PTLC) 制备型薄层色谱法具有操作简单、用时少、分离效果好等特点，可以得到毫克级的物质，一直是分离微量天然药物不可或缺的方法。
陈欣安等[3]利用制备型薄层色谱法，以硅胶H—CMC为薄层板。
以氯仿—丙酮—醋酸和甲苯—氯仿—丙酮两种三元展开剂．双向展开的方式，从鱼藤中分离出了9种异黄酮类化合物。
刘玉红等[4]对聚酰胺柱层析得到的黄酮类化合物组分进行硅胶GGGGFFFF254254254254 薄层板(100 mmx200 mm)层析，加点数次．层析后刮下并合并比移值相同的物质。
用乙醇溶解洗脱，得到各组分的溶液后，以HPLC鉴定由薄层层析得到的样品已经达到色谱纯的要求，可以用于结构鉴定。
2．2高效薄层色谱法（HPTLC）该法可用于混合物的分离、定性及定量分析，与薄层色谱相比，主要是因为支持剂的改进，而具有了展开时间短、所需样品少、分辨率高等特点，且具有较好的光学活性。
王克勤等[5]采用G60高效硅胶板，以氯仿—甲醇—水(18．00：2．30：0．35)为展开剂，芹菜素标样和试样有相同的比移值0．65；用最小二乘法作线性回归，芹菜素含量与斑点峰面积的标准曲线回归方程：Y= 15 138X+7 594．8，r²= 0．993，线性范围：0．332--0．996µg斑点。
精密度实验RSD=1. 33％(n=5)，平均回收率达到97．82％。
3.3.3.3.柱色谱分离法柱色谱分离法柱色谱分离法柱色谱分离法3．1硅胶柱色谱该法以硅胶为吸附剂，是一种较为广泛的分离方法。
可用于分离二氢黄酮，二氢黄酮醇和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇等。
加水活化后可用于分离多羟基黄酮醇及其苷类等极性较大的化合物。
通常使用的洗脱剂主要有：乙酸乙酯—石油醚，氯仿—甲醇，石油醚—丙酮。
可用氯仿—甲醇—水或乙酸乙酯—丙酮—水作流动相来分离黄酮苷，以氯仿—甲醇为流动相来分离酮苷元。
应注意的是硅胶中含有微量金属离子，可用浓盐酸预先处理。
另外，甲醇可溶解部分硅胶，要注意调整甲醇比例及分出物质后的处理问题。
梁鸿等[6]从北柴胡根醇提物中取正丁醇萃取物，经硅胶(200～300目)干柱层析，以氯仿—甲醇—水(65：30：10)进行洗脱，经纯化后得到8 g黄酮类化合物。
姜红芳等[7]从毫菊花纯提物中取正丁醇萃取物30 g，拌以等量硅胶，装入600 g(160～200目)硅胶柱内，以石油醚—乙酸乙酯(3：1、1：1、1：4)梯度洗脱，得到三个黄酮类化合物。
3．2聚酰胺柱色谱聚酰胺是一种最常用于分离黄酮类化合物的吸附剂，具有吸附量大、分离效果好等特点。
聚酰胺通过与黄酮类化合物形成氢键，化合物酚羟基越多，吸附的程度越强，从而根据吸附作用的强弱进行分离。
另外．聚酰胺的吸附能力还与溶剂有关.在水中形成氢键的能力最强，有机溶剂中较弱。
在含水系统中类似于反相分配，非水系统中类似于正相分配。
所以，聚酰胺分离黄酮类化合物时，用含水流动相时对苷元的吸附能力较强。
有机溶剂流动相中，对苷吸附能力较强。
杨海艳等[8]用正丁醇、乙酸乙酯、乙醚分别对川楝水溶液中萃取，取正丁醇部萃取物，采用聚酰胺(60～90目)柱层析反复层析，以乙醇—水梯度洗脱，主3．3葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶可以根据分子的大小对化合物进行分离，常用的有Sephadex G型和Sephadex LH—20两种。
分离黄酮苷时可以起到分子筛的作用，分子量越大的越先分离出去。
分离苷元时，根据酚羟基的多少而分离，越少的越先分离出去。
常用的有机溶剂系统有：醇和醇水，水及水的酸、碱液，氯仿甲醇等[9]。
以上是三种最常用的分离黄酮类化合物的柱色谱分离方法．可以相互结合起来使用。
王红燕等[10]运用上述三种柱色谱法从黄芩茎叶中分离得到白杨素、红花素、异红花素等七种黄酮类化合物，日本学者运用硅胶柱色谱和聚酰谱从黄芩中分离得到三种黄酮类化合物[11]。
3．4大孔树脂色谱大孔树脂是一种吸附性与分子筛性相结合的分离材料。
被分离的物质根据其分子的大小以及与树脂形成氢键及范德华力作用的大小而被分离。
大孔树脂稳定性高、吸附选择性独特、耐腐蚀、再生简便、解吸条件温和，使用周期长、可重复使用；选择性好，易于分离极性不同的物质；避免了用有机溶剂分离而造成的有机溶剂回收难、
损耗大、成本高、易燃易爆、对环境污染严重等缺点；分离得到的产物具有良好的化学纯度；操作条件温和，不易破坏物质的性能，能耗低，操作简单方便，易于工业化[12]。
周嫒等[13]采用大孔树脂D101柱层析，分别以40％、70％、100％乙醇一水的体系进行洗脱，从虎杖醇提物中得到了黄酮类物质α-葡萄糖苷酶抑制剂。
丁彩丽等[14]采用6种大孔吸附树脂，比较其对款冬花总黄酮的吸附量、解吸率及吸附动力学特性，筛选出较优的款冬花黄酮吸附树脂。
陆英等[15]用大孔树脂分离纯化鼠曲草中黄酮类化合物。
王婷婷等[16]研究了AB-8和H103两种大孔吸附树脂对丰城鸡血藤总黄酮的吸附特性，筛选出适合丰城鸡血藤总黄酮分离纯化的树脂，并对其进行了动态吸附特性研究。
4.4.4.4.高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)(HPLC)(HPLC)(HPLC) 高效液相色谱已经广泛应用于天然化合物的分离纯化手段．其柱效高、分离迅速是分离纯化不可缺少的方法。
HPLC与纸色谱、柱色谱、薄层色谱的分离效果相比，效果均后者比理想。
更多的是制备型的HPLC在中草药有效成分分离上应用较广．且比分析型的进样量大，更适于分离。
田娜等[17]采用高效制备液相色谱法从荷叶中制备分离荷叶黄酮类化合物。
用60％乙醇回流提取荷叶，粗提液浓缩后经大孔树脂D—101柱及聚酰胺柱色谱分离，再在CCCC18181818 柱上分离，以水—乙腈为流动相进行梯度洗脱，得到了三种黄酮类化合物。
经分析确定．该三种物质分别为金丝桃苷、异槲皮苷和紫云英苷。
所制备的三种化合物的纯度都在97％以上。
5.5.5.5.高速逆流色高速逆流色高速逆流色高速逆流色谱法谱法谱法谱法(HSCCC)(HSCCC)(HSCCC)(HSCCC) 高效逆流色谱法是一种新的分离技术，主要具有两大优点：①分离量较大，分离效率较高，一次进样可达几十毫升，一次可分离近10 g样品；
②不需要载体作为固定相，避免了载体对样品的不可逆吸附，造成样品的损失。
陈四平等[18]运用高效逆流色谱法，从黄芩茎叶中分离出了7-O-β-D葡萄糖醛酸苷。
李彩侠等[19]运用HSCCC分离纯化荷叶中的黄酮类化合物。
TLC分析、颜色反应鉴定得到的分离物纯度很高。
6.6.6.6.液滴逆流色谱法液滴逆流色谱法液滴逆流色谱法液滴逆流色谱法(DCCC)(DCCC)(DCCC)(DCCC) 原理：化合物在两相溶剂中的溶解度不同而实现的分离．具有上样量大、分离快、损失少等特点。
该方法可用于黄酮苷类化合物的分离，常用溶剂体系有氯仿—甲醇—水、氯仿—甲醇—丙醇—水等。
在分离异东方蓼黄素-3-O -葡萄糖苷、芦丁和异东方蓼黄素时，使用水层作移动相。
结果双糖苷先于单糖苷流出。
对极性较小的黄酮，则宜用氯仿—甲醇—水(7：13：8)系统。
如从墨西哥的一种药用植物黄钟花中得到纯苷。
经鉴定为异槲皮素(槲皮素-3-O-葡萄糖苷)，采用正丁醇—醋酸—水(4：1：5)作移动相。
7.7.7.7.络合沉淀法络合沉淀法络合沉淀法络合沉淀法具有邻位羟基、邻二酚羟基、邻位羰基结构的黄酮类化合物与镁、铝、铅等金属形成络合物，而与其他物质分开，加酸可还原。
如果所含的黄酮类化合物不具有上述结构，则加中性乙酸铅发生的沉淀为杂质．过滤除去。
再向滤液中加碱式乙酸铅。
可使其他黄酮类化合物沉淀析出。
近年来，在用铅盐沉淀法不理想的情况下，可用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作沉淀剂．PVP与酚羟基形成氢键的最合适条件是pH 值为3．5的1％～10％甲醇水溶液。
马慧萍等[20]采用铅盐沉淀法对淫羊藿黄酮进行分离，将提取液浓缩后，加入醋酸铅溶液，放置，至无沉淀发生为止，抽滤，冲洗沉淀数次后，将沉淀置于70％乙醇中，加硫酸进行脱铅、过滤、滤液减压浓缩、真空干燥，收率为2．321％，收率较低。
8.8.8.8.萃取
黄酮类化合物中有酚羟基的取代而显酸性，由于羟基的数目和位置不同，酸性强弱也不同，利用这一特性，可以将植物提取的总黄酮溶于有机溶剂中，分别按弱碱至强碱，由稀碱到浓碱的水溶液的顺序进行梯度萃取，就可以将黄酮从强酸性至弱酸性的顺序中萃取出来。
比如将黄酮类化合物的混合物溶于有机溶剂乙醚后，依次用5％NaHCO 、5％Na2CO，、0．2％NaOH、5％NaOH碱性水溶液分别萃取，可依次萃取出7，4'-二羟基黄酮、7-羟基黄酮或4'-羟基黄酮、一般酚羟基黄酮、5-羟基黄酮。