院感细菌培养操作20813讲课讲稿
院感细菌培养
院感细菌培养院感细菌培养是指在医疗机构中进行的细菌培养实验，旨在检测和分析医院内的感染源和感染传播途径，以便采取相应的预防和控制措施。
以下是对院感细菌培养的详细解析。
一、背景介绍院感（医院感染）是指患者在接受医疗过程中，由于各种原因在医疗机构内感染的情况。
院感细菌培养是一种常用的方法，用于检测和鉴定医院内的细菌感染源和传播途径。
通过对细菌的培养和分离，可以确定感染源，并采取相应的预防和控制措施，以减少院感的发生率。
二、实验目的本实验的目的是通过对医院内不同部位的样本进行细菌培养，分离和鉴定细菌，以确定感染源和传播途径，并提供科学依据，制定相应的院感防控策略。
三、实验步骤1. 样本采集：从医院内不同部位（如手术室、病房、洗手间等）采集样本，包括空气、地面、器械、人员等。
采集样本时要注意无菌操作，避免外界污染。
2. 细菌培养基准备：根据实验需要，制备适当的培养基，包括富养基和选择性培养基。
3. 样本处理：将采集到的样本进行处理，包括稀释、均匀涂布于培养基上等。
4. 培养条件：将培养基培养于适当的温度和湿度条件下，利于细菌的生长和繁殖。
5. 细菌分离：观察培养基上的细菌形态和特征，根据形状、颜色、大小等特征，进行细菌的初步鉴定和分类。
6. 细菌鉴定：通过进一步的生化试验、药敏试验等方法，对初步鉴定的细菌进行鉴定，并确定其种属和毒力。
7. 数据分析：对实验结果进行统计和分析，得出感染源和传播途径的结论，并提出相应的防控建议。
四、实验注意事项1. 采样时要保持无菌操作，避免外界污染。
2. 培养基的配制要准确无误，避免细菌的污染。
3. 培养条件要符合细菌的生长要求，包括温度、湿度等。
4. 在进行细菌鉴定时，要严格按照操作规程进行，避免误判和交叉感染。
5. 对实验结果进行统计和分析时，要注意数据的准确性和可靠性。
五、实验结果与讨论通过对医院内不同部位的样本进行细菌培养和鉴定，得出以下结果：1. 细菌种类：根据培养基上观察到的细菌形态和特征，初步鉴定出多种细菌，包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
院感细菌培养
院感细菌培养院感细菌培养是指在医疗机构中对院内感染相关的细菌进行培养和鉴定的过程。
院内感染是指在医疗机构内，患者在接受诊疗过程中感染的疾病。
细菌培养是一种常用的实验室技术，通过培养细菌样本，可以确定细菌的种类和数量，为医疗机构采取相应的感染控制措施提供依据。
一、培养基的准备1.1 选择适当的培养基：根据需要培养的细菌种类和目的，选择适当的培养基。
常用的培养基包括营养琼脂、大肠杆菌肉汤、血琼脂等。
1.2 培养基的制备：按照培养基的使用说明书，准确称取相应的培养基粉末，并加入适量的蒸馏水或生理盐水，充分搅拌溶解，然后进行高压灭菌。
二、样本的采集和处理2.1 样本的采集：根据需要进行细菌培养的部位和类型，采集相应的样本。
常见的样本包括血液、尿液、呼吸道分泌物、伤口分泌物等。
2.2 样本的处理：将采集到的样本转移到无菌容器中，并在无菌条件下进行处理。
根据样本的特点，可以进行离心、稀释等处理，以获得合适的培养物。
三、细菌的培养和鉴定3.1 培养：将处理后的样本接种到已经准备好的培养基上。
根据细菌的需求，可以选择不同的培养条件，如温度、氧气含量等。
将接种好的培养基放入恒温培养箱中，进行培养。
3.2 鉴定：根据培养结果，观察菌落的形态、颜色等特征，并进行初步鉴定。
可以使用显微镜观察细菌形态，进行革兰氏染色等常见的鉴定方法。
对于需要进一步鉴定的细菌，可以进行生化试验、分子生物学检测等。
四、结果的分析和报告4.1 菌落计数：根据培养结果，对菌落进行计数。
可以使用计数板、显微镜等工具，将菌落的数量进行统计。
4.2 结果的分析：根据细菌的种类和数量，结合临床信息，进行结果的分析。
判断是否存在院内感染相关的细菌，并进行进一步的分析。
4.3 报告的编写：将结果整理成报告，包括样本信息、培养结果、鉴定结果等内容。
报告应准确、清晰，并按照医疗机构的规定进行格式的规范。
五、质控措施5.1 培养基的质控：定期对所使用的培养基进行质控，包括培养基的配制、灭菌效果等。
院感细菌培养
院感细菌培养院感细菌培养是一种常见的实验技术，用于检测医疗机构中的细菌感染情况。
本文将详细介绍院感细菌培养的标准格式，包括实验目的、实验材料和方法、实验步骤、结果和讨论等内容。
一、实验目的院感细菌培养的目的是检测医疗机构中的细菌感染情况，为制定感染控制措施提供依据。
通过培养和鉴定细菌，可以确定感染的细菌种类和数量，进而采取相应的预防和治疗措施。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- 培养基：如血琼脂、肠道培养基等。
- 细菌培养物：来自医疗机构中的患者标本，如血液、尿液、伤口分泌物等。
- 培养皿：如琼脂平板、斜面琼脂培养物等。
- 培养箱：用于提供适宜的温度和湿度条件。
- 培养皿标签、标本袋等。
2. 实验方法：- 标本采集：按照规范的标本采集程序，采集来自患者的标本。
- 标本处理：将标本送至实验室后，进行初步处理，如离心、过滤等。
- 细菌分离：将处理后的标本取少量涂布于培养皿上，采用不同的培养基进行分离培养。
- 培养条件：将培养皿置于培养箱中，设置适宜的温度和湿度，并进行培养。
- 细菌鉴定：根据细菌的形态、生理特性和生化反应等进行鉴定。
- 结果记录：记录培养皿上出现的细菌种类和数量。
- 结果解读：根据细菌的种类和数量，判断感染的程度和类型。
- 讨论和建议：根据实验结果，提出相应的感染控制建议。
三、实验步骤1. 准备工作：- 准备所需的培养基、培养皿、培养箱等实验材料。
- 检查培养基和培养箱的质量和消毒情况。
- 校准培养箱的温度和湿度。
- 检查实验室的无菌条件和消毒情况。
2. 标本采集和处理：- 按照规范的标本采集程序，采集来自患者的标本。
- 将标本送至实验室后，进行初步处理，如离心、过滤等。
3. 细菌分离和培养：- 取少量处理后的标本，用无菌的匀涂棒均匀涂布于培养皿上。
- 使用不同的培养基进行分离培养，如血琼脂培养基、肠道培养基等。
- 将培养皿置于培养箱中，设置适宜的温度和湿度，并进行培养。
4. 细菌鉴定：- 根据培养皿上出现的细菌形态、生理特性和生化反应等进行鉴定。
院感细菌培养
院感细菌培养引言概述：院感细菌培养是医疗机构中非常重要的一项工作，它有助于监测和预防院内感染的发生。
本文将从不同角度介绍院感细菌培养的相关内容，包括培养方法、培养基的选择、培养条件的控制、培养结果的解读以及培养过程中的注意事项。
一、培养方法1.1 无菌技术：在进行院感细菌培养之前，必须保证培养环境的无菌。
这包括使用无菌操作台、无菌培养器具以及无菌培养基等。
无菌技术的关键在于操作者要穿戴干净的实验服，并采取正确的无菌操作步骤，如消毒、灭菌等。
1.2 样本采集：正确的样本采集方法是获得准确培养结果的前提。
在采集样本时，应注意使用无菌采样器具，避免污染。
对于不同类型的样本，如血液、尿液、创伤分泌物等，采集方法和培养基的选择也有所差异。
1.3 培养技术：培养技术是培养细菌的关键环节。
常用的培养方法有液体培养和固体培养。
液体培养适用于大量细菌的培养，而固体培养则适用于单个菌落的分离和鉴定。
在培养过程中，还需要控制培养条件，如温度、湿度和氧气浓度等。
二、培养基的选择2.1 选择适宜的培养基：培养基的选择应根据细菌的生长特性和营养需求来确定。
常用的培养基有营养琼脂、血琼脂、MacConkey琼脂等。
不同类型的培养基适用于不同的细菌，如血琼脂适用于血液细菌的培养。
2.2 添加抗生素：为了选择特定类型的细菌，可以在培养基中添加抗生素。
抗生素的选择应根据细菌的敏感性来确定。
添加抗生素可以抑制其他非目标细菌的生长，从而更好地培养目标细菌。
2.3 培养基的质量控制：培养基的质量直接影响细菌培养结果的准确性。
因此，应定期检测培养基的质量，包括pH值、透明度和无菌性等。
三、培养条件的控制3.1 温度控制：不同细菌对温度的要求不同，一般分为常温培养、37℃培养和低温培养。
根据细菌的生长特性选择合适的温度，确保细菌能够正常生长。
3.2 湿度控制：湿度对于细菌的生长和繁殖也有一定影响。
一般情况下，细菌培养需要在相对湿度较高的环境下进行，以保持培养基的湿润度。
院感细菌培养
院感细菌培养一、引言医院感染是医疗质量安全的重要问题之一，而细菌培养是预防和控制院感的重要手段。
本文将详细介绍院感细菌培养的采样、方法、质控、耐药性监测以及结果解读等方面的知识，以期为临床工作者提供有益的参考。
二、细菌培养的采样采样时机：选择在抗菌药物使用前或停用后进行采样，以避免抗菌药物对培养结果的影响。
采样部位：应根据感染部位选择合适的采样部位，如呼吸道、泌尿道、血液等。
采样方法：严格按照无菌操作进行，避免交叉感染。
常用的采样方法包括拭子法和穿刺法。
三、细菌培养的方法常规培养：将采集的标本接种于适宜的培养基上，观察菌落的形态、颜色等特征，进行初步鉴定。
自动化培养：利用自动化仪器进行细菌培养，可大幅提高培养效率。
常见的自动化仪器有BacT/Alert、phoenix等。
特殊培养：对于某些特殊病原体，如分枝杆菌、真菌等，需要进行特殊培养。
四、细菌培养的质控培养基质控：确保培养基的质量，符合无菌、营养成分适宜等要求。
操作质控：严格按照无菌操作规程进行，避免污染。
试剂质控：确保试剂的质量和有效性。
仪器质控：定期对仪器进行校准和维护，确保其准确性。
五、细菌耐药性的监测药敏试验：通过药敏试验了解细菌对各种抗菌药物的敏感性和耐药性。
耐药基因检测：利用分子生物学方法检测细菌的耐药基因，预测其耐药性。
耐药性监测网：建立耐药性监测网，定期发布细菌耐药性监测报告，指导临床用药。
六、细菌培养结果的解读与临床应用结果解读：根据培养结果，确定感染病原体的种类和药敏试验结果，为临床治疗提供依据。
临床应用：根据细菌培养结果，选择适宜的抗菌药物治疗，同时注意药物的剂量、给药途径和疗程等问题。
对于多重耐药菌感染的患者，应采取隔离措施，防止交叉感染。
七、展望与总结随着医疗技术的不断发展，细菌培养技术也在不断进步和完善。
未来，随着自动化和信息化技术的应用，细菌培养的效率和质量将得到进一步提高。
同时，随着耐药性问题的日益严重，耐药性监测和抗菌药物的研发将成为研究重点。
院感细菌培养
院感细菌培养标题：院感细菌培养引言概述：院感细菌培养是指对医院感染病例中的细菌进行培养和鉴定，以便及时采取有效的控制措施。
对院感细菌进行培养可以帮助医院了解感染病例的病原体，指导临床治疗，预防院内感染的传播。
本文将从细菌培养的原理、方法、操作步骤、结果解读和应用方面进行详细介绍。
一、细菌培养的原理1.1 细菌的生长特点：细菌是单细胞微生物，具有快速繁殖的特点，能在适宜的培养条件下迅速增殖。
1.2 营养需求：细菌在培养基中需要提供适当的营养物质，如碳源、氮源、矿物盐等，以支持其生长和繁殖。
1.3 条件要求：细菌培养需要一定的温度、湿度、氧气和pH值等条件，以创造适宜的生长环境。
二、细菌培养的方法2.1 选取培养基：根据细菌的特性选择适合的培养基，如富含血液的富营养基、选择性培养基等。
2.2 接种细菌：将患者样本或分离的纯培养物接种到培养基上，利用无菌技术避免外源性污染。
2.3 培养条件：将接种好的培养基置于恒温培养箱中，控制适宜的温度和湿度，观察细菌的生长情况。
三、细菌培养的操作步骤3.1 样本采集：从患者体液、分泌物或组织中采集样本，避免外部污染。
3.2 培养基接种：将样本接种到含有适宜营养物的培养基上，避免交叉污染。
3.3 培养观察：定期观察培养基上的细菌生长情况，记录菌落形态、颜色、大小等特征。
四、细菌培养结果的解读4.1 菌落鉴定：根据菌落的形态、气味、颜色等特征初步判断细菌种类。
4.2 生化试验：进行生化试验，如革兰氏染色、氧化酶试验等，进一步确认细菌种类。
4.3 抗生素敏感性测试：对分离出的细菌进行抗生素敏感性测试，指导临床治疗。
五、细菌培养的应用5.1 临床诊断：通过细菌培养可以明确感染病例的病原体，指导临床治疗方案的制定。
5.2 感染控制：对院内感染进行细菌培养可以及时发现感染源，采取有效控制措施，预防感染的传播。
5.3 药物研发：细菌培养结果可以为药物研发提供参考，指导新药的开发与临床应用。
院感细菌培养
院感细菌培养引言概述：院感细菌培养是医院感染控制中的重要环节，通过对院感细菌的培养，可以追踪感染源头，了解感染病原体的种类和分布情况，为制定有效的感染控制措施提供依据。
本文将从培养方法、培养基的选择、培养条件、培养时间和培养结果的解读等五个方面，详细介绍院感细菌培养的相关内容。
一、培养方法1.1 常规培养方法：包括液体培养和固体培养两种方式。
液体培养适用于大规模筛查，固体培养则适用于分离和鉴定。
1.2 快速培养方法：采用自动化培养系统，可大大缩短培养时间，提高检测效率。
1.3 特殊培养方法：如厌氧培养、微生物生物膜培养等，适用于特定的感染病原体。
二、培养基的选择2.1 常用培养基：如血琼脂、肉汤琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等，可用于一般细菌培养。
2.2 选择性培养基：如大肠杆菌选择性琼脂培养基、金黄色葡萄球菌选择性琼脂培养基等，可选择性地培养特定的细菌。
2.3 富营养培养基：如营养琼脂培养基、富营养肉汤培养基等，可提高细菌的生长速度和培养效果。
三、培养条件3.1 温度：根据不同的菌种选择适宜的培养温度，如37摄氏度适用于大多数人体病原菌。
3.2 pH值：细菌对pH值的敏感性不同，一般细菌培养的pH值范围在7.2-7.4之间。
3.3 氧气需求：根据细菌的氧气需求选择相应的培养条件，如厌氧菌需要在无氧或低氧条件下培养。
四、培养时间4.1 常规培养时间：一般细菌培养需要24-48小时，具体时间根据菌种和培养方法的不同而异。
4.2 快速培养时间：快速培养方法可以将培养时间缩短到几个小时，提高了感染病原体的快速检测能力。
4.3 长时间培养：某些特殊细菌需要较长时间的培养，如放线菌属细菌需要7-14天才能获得可见的菌落。
五、培养结果的解读5.1 形态学观察：观察菌落的形状、颜色、透明度等特征，结合显微镜观察菌体形态，进行初步鉴定。
5.2 生理生化特性检测：通过生理生化试验，如氧化酶试验、糖发酵试验等，进一步鉴定细菌种属。
院感知识演示课件
院感知识演示课件一、教学内容本节课的教学内容选自人教版小学科学六年级下册第五单元《微生物与人类》的第三节《细菌和真菌》。
本节课主要介绍细菌和真菌的基本结构、生活习性以及与人类生活的关系。
通过学习，使学生认识到细菌和真菌在自然界和人类生活中的重要作用，培养学生的探究能力和生命观念。
二、教学目标1. 了解细菌和真菌的基本结构、生活习性以及与人类生活的关系。
2. 培养学生观察、思考、交流和合作的能力。
3. 培养学生热爱科学、探究真理的情感。
三、教学难点与重点1. 教学难点：细菌和真菌的结构特点，细菌和真菌在自然界和人类生活中的作用。
2. 教学重点：通过观察、实验等活动，掌握细菌和真菌的基本特征，了解其与人类生活的关系。
四、教具与学具准备1. 教具：电脑、投影仪、微生物演示课件、细菌和真菌模型、显微镜等。
2. 学具：笔记本、彩色笔、实验材料等。
五、教学过程1. 导入：通过播放微生物动画课件，引导学生关注细菌和真菌，激发学生的学习兴趣。
2. 新课导入：介绍细菌和真菌的基本概念，引导学生了解细菌和真菌在自然界和人类生活中的作用。
3. 自主学习：让学生通过阅读教材，了解细菌和真菌的基本结构，培养学生自主学习的能力。
4. 课堂讲解：利用微生物演示课件，详细讲解细菌和真菌的结构特点，引导学生直观地理解细菌和真菌的生活习性。
5. 实验观察：组织学生进行细菌和真菌的观察实验，让学生通过显微镜观察细菌和真菌的结构，加深对细菌和真菌的认识。
6. 课堂讨论：让学生分组讨论细菌和真菌在自然界和人类生活中的作用，培养学生的合作交流能力。
8. 布置作业：设计课后作业，巩固所学知识。
六、板书设计细菌和真菌1. 结构特点细菌：细胞壁、细胞膜、细胞质、未成形的细胞核真菌：细胞壁、细胞膜、细胞质、成形的细胞核2. 生活习性细菌和真菌需要水分、有机物和适宜的温度等生活条件。
3. 与人类生活的关系细菌和真菌在自然界中参与物质循环，与人类生活密切相关。
院感细菌培养
院感细菌培养院感细菌培养是一种用于检测医疗机构中细菌感染的方法。
它通过培养和鉴定细菌样本，可以帮助医疗机构监测和控制院内感染的风险，保障患者和医护人员的安全。
一、实验室准备1. 实验室应具备洁净、无菌的工作环境，确保实验结果的准确性。
2. 准备所需的培养基和试剂，包括琼脂、营养琼脂、血琼脂、大肠埃希菌选择性琼脂等。
3. 准备培养皿、试管、移液器等实验器材。
二、样本采集和处理1. 从医疗机构中采集患者和医护人员的相关样本，如血液、尿液、伤口分泌物等。
2. 严格遵守无菌操作规范，避免样本污染。
3. 对于血液样本，应先进行血液培养，以便检测细菌感染的情况。
三、细菌培养1. 将样本分别接种于不同的培养基上，包括营养琼脂、血琼脂等。
2. 根据需要，可以添加抗生素或选择性培养基，以筛选特定的细菌。
3. 将接种好的培养皿置于恒温培养箱中，一般在37摄氏度下培养。
4. 定期观察培养皿中的细菌生长情况，记录菌落的数量、形态和颜色等特征。
四、细菌鉴定1. 根据菌落的形态、颜色和其他特征，初步判断细菌的种类。
2. 采用进一步的鉴定方法，如生化试验、药敏试验等，确定细菌的种属和特性。
3. 可以利用鉴定试纸、试剂盒等快速鉴定方法，加快鉴定的速度和准确性。
五、数据分析和报告1. 对于每个样本，记录细菌的种类、数量和鉴定结果。
2. 分析细菌的分布情况和变化趋势，评估院内感染的风险。
3. 根据实验结果，及时向医疗机构提供报告和建议，帮助制定感染控制措施。
六、质量控制1. 定期进行实验室内部的质量控制，包括培养基的质量检测、实验操作的准确性验证等。
2. 参加外部质量评估，与其他实验室进行比对，确保实验结果的准确性和可靠性。
综上所述，院感细菌培养是一项重要的检测方法，可以帮助医疗机构监测和控制院内感染的风险。
通过严格的实验室准备、样本采集和处理、细菌培养、鉴定以及数据分析和报告，可以提供准确的细菌感染情况和建议，保障患者和医护人员的安全。
院感细菌培养
院感细菌培养院感细菌培养是一种常见的实验技术，用于检测医院环境中的细菌污染情况。
该技术可以匡助医院管理者及时发现和控制细菌感染的风险，保障患者和医护人员的健康安全。
下面将详细介绍院感细菌培养的标准操作流程及相关数据。
一、实验材料和设备准备1. 培养基：常用的培养基有血琼脂培养基、大肠杆菌培养基等，根据实验需求选择合适的培养基。
2. 培养皿：选择符合实验要求的培养皿，如琼脂培养皿、平板培养皿等。
3. 试管：用于制备培养基和细菌悬浮液。
4. 灭菌器：用于灭菌培养器具和培养基。
5. 灭菌棉签：用于取样时的消毒。
6. 培养箱：用于维持适宜的培养温度。
二、标本采集和处理1. 标本采集：根据实验要求选择合适的标本，如空气、表面物体等。
使用灭菌棉签在采样区域来回擦拭，确保采集到足够的细菌样本。
2. 标本处理：将采集到的标本放入含有适宜培养基的试管中，用旋转摇床摇匀，使细菌均匀分布在培养基中。
三、培养基制备和接种1. 培养基制备：根据培养基的配方，按比例将培养基粉末加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀。
然后将制备好的培养基分装到培养皿中，每一个培养皿约倒入15-20ml的培养基。
2. 接种：用灭菌的铁环或者棉签，在培养基表面均匀划线或者划网格，然后将标本中的细菌悬浮液滴在划线或者划网格的位置上，使其均匀分布。
四、培养条件和观察1. 培养条件：将接种好的培养皿放入预先设定好的培养箱中，保持适宜的培养温度（如37℃）和湿度，培养时间根据实验要求确定。
2. 观察：在培养一定时间后，观察培养皿上是否有细菌生长。
细菌的生长形态、颜色和数量等可以提供有关感染源和细菌种类的信息。
五、结果记录和分析1. 结果记录：记录每一个培养皿上细菌生长的情况，包括生长形态、颜色和数量等。
2. 分析：根据细菌的生长情况，结合实验目的和相关标准，判断细菌污染的程度和种类，并进行相应的控制措施。
六、实验安全注意事项1. 实验操作时要佩戴实验手套和口罩，避免细菌污染和呼吸道感染。
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院感细菌培养操作208131.目的: 医院是病原微生物较集中,抵抗力低的人群密集的地方,加之化疗、放疗等手段的采用，影响病人免疫机能下降，大量使用抗生素，引起耐药菌株增多，菌群失调，以及先进医疗仪器广泛应用等原因，增加消毒灭菌的难度，致使院内感染已成为当前医疗实践的严重障碍，直接影响医疗效果。
进一步规范院内感染监测标本的程序，更好、更快检测病原微生物的生长情况，预防医院感染的发生。
2.设备、试剂与材料2.1 VITEK 2 compact鉴定药敏分析系统2.2 VITEK 32鉴定药敏分析系统2.3美国FORMAⅡ级生物安全柜2.4显微镜2.5酒精灯2.6接种环2.7恒温培养箱2.8各种培养基2.9 革兰氏染色液2.10触酶试剂2.11氧化酶试剂2.12移液器2.13无菌吸嘴3.院感标本采集3．1空气的采样3．1．1采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。
3．1．2采样高度与地面垂直高度80-150CM。
3．1．3布点方法室内面积＜30m2，设一条对角线上取三点，即中心一点，两端各距墙1m处各取一点；室内面积＞30m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。
3．1．4采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检。
3．2物体表面采样3．2．1采样时间选择消毒处理后4小时内进行采样。
3．2．2采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面＞100cm2，则取100cm2。
3．2．3采样方法用5×5 cm2的标准来灭菌规格板，放在被检物体表面，用无菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1-4个规格板面积，剪支手接触部位，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
3．3医护人员手采样3．3．1采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。
3．3．2采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一枝在双手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30 cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。
采样面积按平方厘米（cm2）计算。
3．4医疗用品采样3．4．1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。
3．4．2采样方法右用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射针等，取其中的一部分放培养液中培养。
对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
3．5使用中消毒剂的采集3．5．1采样时间采取使用中的消毒剂。
3．5．2采样方法在无菌条件下，用无菌注射器抽取1ml被检样品，加入10ml稀释液混匀。
（对于醇类与酚类消毒剂稀释液用灭菌生长盐水；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入0.1%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80和0.3%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种消毒剂，需在灭菌生理盐水中加入3%（w/v）吐温80，以中和被检样液的残效作用。
）3．6内镜的采样3．6．1咽喉镜、支纤镜用10ml戊二醛中和液冲洗内镜后，送检实验室。
3．6．2胃镜、消化镜、宫腔镜用10ml0.1%硫代硫酸钠中和液冲洗内镜后，送检实验室。
3．6．3鼻咽镜、过氧化氢消毒的腔镜类用10ml生理盐水中和液冲洗内镜后，送检实验室。
3．7透析液的采样用灭菌的空试管取透析液10ml送检。
4.院感标本的运送及交接签收4．1标本的采集4．1．1空气标本的采集由临床科室负责完成，标本采集完毕，由临床各科在规定的时间内将标本安全送回实验室。
4．1．2物体表面、医务人员手、消毒剂、内镜等由院感科负责组织采样，在规定时间内将标本安全送达实验室。
4．2采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6小时，若样品保存于0-4℃条件时，送检时间不得超过24小时。
4．3标本收回实验室后,将标本的信息登记在“院感监测登记本”上。
4．4微生物室工作人员的验收根据微生物室院感标本拒收标准进行检查，对不符合要求的，将拒收，立即退回给送检人员，指出问题，告知标本重取，所有拒收标本均需在《标本拒收记录本》上登记。
拒收情况如下：4．4．1空气培养平板数目击者不正确（房间小于30平方米做3个平板培养，房间大于30平方米做5个平板培养）。
4．4．2未注明标本采集科别、来源和培养目的。
4．4．3标本明显受污染。
5.检测步骤见本文件末面流程图5．1空气标本的检测5．1．1细菌室收到标本后，将标本编写当日日期，用平板压住验单，直接放入35℃培养箱培养48小时后，观察结果。
5．1．2有菌生长，则挑取可疑菌落进行鉴定，排除金黄色葡萄球菌、β溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出。
5．1．3结果计算及菌落换算空气细菌菌落总数（cfu/m3）=50000N/AT，式中A——平板面积，cm2；T——平板暴露时间，min；N——平均菌落数，cfu/平皿。
即平皿上1个菌落等于空气中菌落数为157 cfu/m3 ，如果标本为3个点时换算=平皿上的菌落数×157÷点数。
5．2物体表面样本检测5．2．1细菌室收到标本后，将标本编号，振摇80次后，吸500ul于普通琼脂平板中，把平板摇均匀，放入35℃培养箱培养48小时后，观察结果。
5．2．2有菌生长，则挑取可疑菌落进行鉴定，排除金黄色葡萄球菌、β溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出，如为儿科、爱婴区、新生儿科、儿科ICU 的标本时，还要排除沙门氏菌的检出。
5．2．3结果计算及菌落换算物体表面细菌菌落总数（cfu/c m2）=平皿上菌落数×采样液稀释倍数（A）/采样面积（cm2）。
采样液稀释倍数即是采集液总量与接种的采集液量之比值，即平皿上1个菌落等到于物体表面上菌落数为0.2cfu/cm2。
5．3医护人员手样本检测5．3．1将标本编号，振摇80次后，吸500ul于普通琼脂平板中，如为儿科、爱婴区、新生儿科、儿科ICU 的标本时，加做一个HE平板，以监测沙门氏菌的检出。
把平板摇均匀，放入35℃培养箱培养48小时后，观察结果。
5．3．2有菌生长，则挑取可疑菌落进行鉴定，排除金黄色葡萄球菌、β溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出。
5．3．3结果计算及菌落换算手细菌菌落总数（cfu/c m2）=平皿上菌落数×采样液稀释倍数（A）/30×2（cm2），即平皿上1个菌落等到于物体表面上菌落数为0.33cfu/cm2。
5．4灭菌或一次性医疗用品样本检测5．4．1样本采集完成后，接种于肉汤培养基，置35℃培养箱培养7天，每天观察一次，培养基有混浊则转种普通平板继续培养，观察最后结果。
5．4．2有菌生长，则挑取可疑菌落进行鉴定，结果报告是否检出细菌。
5．5使用中消毒剂5．5．1细菌室收到标本后，将标本编号，振摇80次后，吸500ul于普通琼脂平板中，如为儿科、爱婴区、新生儿科、儿科ICU 的标本时，加做一个HE平板，以监测沙门氏菌的检出。
把平板摇均匀，放入35℃培养箱培养48小时后，观察结果。
另接种于1个沙保劳培养基，置28℃培养箱培养7天，每天观察一次，观察最后结果。
5．5．2有菌生长，则挑取可疑菌落进行鉴定，结果报告是否检出细菌及真菌。
5．5．3结果计算及菌落换算使用中消毒剂细菌菌落总数（cfu/ ml ）=平皿上菌落平均数×采样液稀释倍数（A）/采样体积（1ml），即平皿上1个菌落等于消毒剂中菌落数为10 cfu/ ml。
5．6灭菌效果监测5．6．1压力蒸汽灭菌效果监测采用嗜热脂肪芽胞杆菌菌片，放于溴甲酚紫蛋白胨水指示剂中，标本送检后，把里面的玻璃压碎，置于56℃培养箱培养48小时，如指示剂颜色为紫色，说明无嗜热脂肪芽胞杆菌生长；如指示剂颜色为黄色则说明有嗜热脂肪芽胞杆菌生长。
5．6．2气体灭菌效果监测采用枯草芽胞杆菌菌片，放于溴甲酚紫蛋白胨水指示剂中，标本送检后，置于35℃培养箱培养48小时，如指示剂颜色为紫色，说明无枯草芽胞杆菌生长；如指示剂颜色为黄色则说明有芽枯草胞杆菌生长。
5．7内镜标本检测5．7．1将标本编号，用旋涡器充分震荡（振摇80次），取0.5ml，加入直径9CM的普通琼脂平板上，把平板摇均匀，放入35℃培养箱培养48小时后计数，观察结果。
5．7．2有菌生长，则挑取可疑菌落进行鉴定，排除金黄色葡萄球菌、β溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出。
5．7．3结果计算及菌落换算细菌菌落数/镜=平皿菌落数×205．8透析液样本检测5．8．1将标本编号，振摇80次后，吸200ul于普通琼脂平板中，反平板摇均匀，放入35℃培养箱培养48小时，观察结果。
5．8．2有菌生长，则挑取可疑菌落进行鉴定，排除金黄色葡萄球菌，、β溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出。
5．8．3结果计算：透析液细菌菌落总数=平皿菌落数×56.质量控制6．1做好培养基及样本采集液的质量控制，确保其无菌以及适宜于细菌的生长。
6．2标本采集严格按照采集要求进行。
6．3做好培养箱的温度控制。
7.各类环境空气、物体表面、医护人员手细菌菌落总数卫生标准，见下表7．2致病性微生物不得检出金黄色葡萄球菌，、β溶血链球菌及其他致病性微生物。
在可疑污染情况下进行相应指标的检测，母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿及儿科病房的物体表面和医护人员手上，不得检出沙门氏菌。
7．3医疗用品卫生标准7．3．1进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。
7．3．2接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数应≤20cfu/g或100 cm2，致病性微生物不得检出。
7．3．3接触皮肤的医疗用品细菌菌落总数应≤200cfu/g或100 cm2，致病性微生物不得检出。
7．4使用中消毒剂卫生标准使用中消毒剂：细菌菌落总数应≤100 cfu/ml；致病性微生物不得检出。
7．5内镜消毒后的卫生标准细菌菌落总数应＜20cfu/件；致病性微生物不得检出。
7．6透析液消毒后的卫生标准7．6．1入水口细菌菌落总数应＜200cfu/ml；致病性微生物不得检出。
7．6．2出水口细菌菌落总数＜2000cfu/ml；致病性微生物不得检出。
8.院感标本报告的录入8．1在电脑点击“院感系统”，进入“院内检测”，在“环境卫生学及消毒灭菌效果监测结果”中根据检测的结果输入相关的项目。