金樱子多糖的分离纯化及药理作用研究进展

金樱子多糖的分离纯化及药理作用研究进展关键词：金樱子；多糖；分离；纯化；提取；药理中药金樱子为蔷薇科蔷薇属的传统药食两用野生植物金樱子（Rosa laevigata Michx）的果实，始载于《蜀本草》，又名刺榆子、刺梨子、金罂子、山石榴、糖罐子等，我国分布广泛、资源丰富。

《本草纲目》中记载金樱子：性酸、涩、平、无毒；主治脾泻下痢、止小便利、涩精气；久服，令人耐寒轻身，补血益精，有奇效[1]。

现代研究表明，金樱子具有调节免疫、降糖降脂、抗炎抗菌等药理作用[2]，其有效成分主要为黄酮、三萜、乌索酸、齐墩果酸、多糖等[3]。

本文就金樱子多糖的分离纯化以及药理作用进行综述。

1 金樱子多糖的提取金樱子多糖为白色粉末，不溶于正丁醇、丙酮等有机溶剂，由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖组成[4]，果实中总糖含量约24 %，多糖含量达13.73%[5]。

多糖分子结构中羟基较多、极性大，因此通常采用不同温度的水、稀碱溶液或稀酸溶液提取，常用的方法有：溶剂法、微波法和酶法。

1.1溶剂法为植物多糖提取的常用方法。

多糖极性大，根据相似相溶原则，可采用水等强极性溶剂提取。

由于采用碱或稀酸水溶液提取多糖，容易破坏糖苷键及水解多糖链上的基团如硫酸酯基、磷酸酯基等，因此金樱子多糖提取的溶剂法常采用水提醇沉法。

王瑞兰等[6]将金樱子干燥，粉碎，用无水乙醇与无水乙醚混合液（体积比为1:l）浸泡12h去脂，布氏漏斗抽滤，滤渣风干后用80℃左右热水浸提3次，每次5h，合并提取液，浓缩，用sevag法脱蛋白，H2O2脱色，透析，旋转蒸发浓缩，加人4倍体积的95%的乙醇沉淀过夜，离心，沉淀物连续用无水乙醇和丙酮洗涤，冷冻干燥得近似金黄色金樱子粗多糖。

1.2微波法微波是频率介于300MHz-300GHz之间的电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部。

由于溶剂及细胞液吸收微波能，细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。

此法提取时间短，提取率高。

薛梅等[7]使用石油醚脱脂后，辅以微波，用乙醇提取金樱子黄酮，去黄酮后挥干剩余物的乙醇，继辅以微波，水回流提取、浓缩，得金樱子多糖。

1.3其他提取法植物多糖还有多种尚未用于金樱子多糖的提取方法。

如酶法、超滤法、超声法。

以上方法各有优势，酶技术是近年来广泛应用的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，比较温和的分解植物组织，加速多糖的释放或提取；超滤法所采用的超滤膜能够从水中分离出多糖分子，具有浓缩条件温和，多糖损失小，速度快，节约能源，浓缩的同时可除去小分子杂质和色素等优点；超声法是应用超声波强化提取植物多糖的方法，具有缩短提取时间，提高提取率等优点，目前已应用于南瓜总糖、还原糖和多糖、海带多糖、甘草多糖、海藻多糖的提取。

2 金樱子多糖的纯化多糖中常含有无机盐、大分子蛋白质、木质素、色素及醇不溶物的小分子有机物，提取过程中常用使用Sevag法，三氟三氯乙烷法，三氯乙酸法，酶法，等电点沉淀法去除杂质[8]。

此外，通过上述方法所得到的是多糖混合物，如果要得到单一的多糖，还必须对该混合物进行纯化。

常用的纯化方法有：分级沉淀法，季铵盐沉淀法，层析法，盐析法等[8].。

柱层析在多糖的纯化中较为常用，常分为两类：一是只有分子筛作用的凝胶柱层析，它根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离目的，常用的凝胶有葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶，以及性能更佳的Sephacryl等。

洗脱剂为各种浓度的盐溶液及缓冲液，其离子强度不应低于0.02mol／L。

二是离子交换层析，它不仅根据分子极性的不同，同时也具有分子筛的作用，常用的交换剂有DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖和DEAE-琼脂糖等，此法适合于分离各种酸性，中性多糖和粘多糖。

多糖的纯化还可用其他方法，如制备性高效液相层析、制备性区带电泳，亲和层析等，这些方法适用于制备少量纯品供分析用。

多糖的检测可用比旋度、示差折射及紫外检测等方法，也可以用苯酚－硫酸法测定多糖。

纯度的鉴定可以用超离心法、高压电泳法、凝胶过滤法、高效液相法、示差折射法、紫外检测法等。

王瑞兰等[6] 制备性高效液相层析分离纯化金樱子多糖，其方法是：通过DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析，盐梯度洗脱，用苯酚一硫酸法检测。

收集到2个洗脱曲线主峰的多糖组分，经检测分子量分别为22712和16051，其中之一由D-半乳糖、D-甘露糖和木糖组成。

3 金樱子多糖的药理作用植物多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的诊断与治疗等有着密切的关系。

此外它还能控制细胞的分裂和分化，调节细胞的生长和衰老等[9]。

目前，对多糖的化学研究以及生物功能的研究方兴未艾，不同来源多糖的潜在功能尚须进一步研究。

专家预测，随着对多糖结构和功能关系的研究，将会产生生物学的新领域[10]。

金樱子具有多种药理和保健功能，金樱子多糖是其主要有效成分之一，具有多种生物活性，而且金樱子果实中多糖含量很高，探索金樱子多糖的生理和药理活性具有一定的意义。

3.1抗氧化作用超氧阴离子自由基、羟自由基等含氧自由基，在人体中含量过多会引起机体损伤，其中·OH 对细胞的危害最大，可直接损伤各种生物大分子和生物膜，导致多种疾病的发生。

赵云涛[11]等人探讨了金樱子多糖体外抗氧化作用。

采用邻苯三酚自氧化法测定金樱子多糖清除超氧阴离子自由基效果；比色法测定金樱子多糖对羟自由基诱导红细胞溶血、脂质过氧化反应的影响。

结果表明金樱子多糖能显著清除超氧阴离子自由基、抑制羟自由基对细胞膜的破坏而引起的溶血和脂质过氧化产物的形成，从而具有显著的抗氧化作用。

陈晓麟[12]等人将金樱子多糖加入到猪油当中,测定其对猪油的抗氧化作用。

研究显示，一定浓度的金樱子多糖对猪油的抗氧化能力与丁基羟基甲苯（BHT）相当。

李铭[13]观察到金樱子多糖抑制体外肝匀浆脂质过氧化的作用，表现出较强的抗氧化活性。

3.2调脂降糖作用金樱子多糖具有较强的降脂作用，马云[14]等人研究了金樱子对高糖高脂兔腹部脂肪及血糖、血脂含量的影响。

结果显示：模型兔血糖、血脂均降低，提示金樱子多糖有降低血糖、甘油三酯和减少肝及肠系膜中脂肪堆积的作用。

张庭廷[5]等人观察了金樱子多糖对实验性小鼠高脂血症的作用。

实验发现，金樱子多糖对实验性小鼠的高胆固醇血症具有明显的预防和治疗作用，其机制主要是抑制了肠道胆固醇的吸收。

3.3免疫活性免疫调节功能是维护机体健康的重要保证，多糖化合物特别是从高等动植物中提取的多糖对巨噬细胞、网状内皮细胞、T、B淋巴细胞都有激活作用，因而可提高机体的免疫调节功能。

张庭廷[15]等人探索了金樱子多糖的免疫活性。

实验中让小鼠服用金樱子多糖，测定服用后的小鼠的巨噬细胞清除血中刚果红能力以及金樱子多糖对以鸡红细胞为抗原的溶血素生成、2, 4-2二硝基氟苯所致迟发型超敏反应的影响和对卡介苗和脂多糖致免疫性肝损伤的保护作用。

研究结果显示一定浓度的金樱子多糖可提高小鼠巨噬细胞对血中刚果红的吞噬能力、增加小鼠溶血素的生成、显著恢复免疫功能低下小鼠的DTH反应并能降低血中转氨酶活性,逆转肝、脾指数。

说明金樱子多糖具有增强小鼠非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫作用,还有免疫调节作用。

3.4抑菌和抗炎作用近年来的研究发现金樱子煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、破伤风杆菌及钩端螺旋体均有抑制作用，对流感病毒也有较强的抑制作用，其中金樱子多糖为主要活性成分。

张庭廷[16]等人研究了金樱子多糖的抗菌活性和抗炎作用。

实验表明金樱子多糖对大肠杆菌、副伤寒杆菌、白葡萄球菌以及金黄色葡萄球菌具有抑制作用，特别是对前3种细菌的抑制作用很强，其抑菌圈直径随多糖的浓度增大而有所增加，当多糖浓度达到10～15 mg/ml时，其抑菌效果就已超过了50 ppm的链霉素。

金樱子多糖对酿酒酵母和放线菌也有较强的抑制作用，但对霉菌则没有显示抑制活性。

金樱子多糖还能抑制二甲苯引起小鼠的耳肿胀，与NS组比较有明显差异( P < 0. 01) ，具有一定的抗炎作用。

但对金樱子多糖的抑菌谱和效价、抗炎作用的机理等还有待进一步研究。

3.结论与展望：在世界药物研究趋势由化学合成药物转向天然药物的今天，人们对植物多糖的研究正方兴未艾。

到目前为止已对100余种中药多糖进行了活性研究，发现植物多糖具有抗肿瘤、保肝、延缓衰老、免疫调节[17]、抗病毒和治疗心血管疾病等活性[18]。

多糖类化合物作为一种新药物，它具有毒副作用小、安全性高、疗效好等优点，因此在临床应用中显示越来越广阔的前景。

金樱子果实中多糖含量十分丰富，现已发现它有抗氧化、免疫活性、抑菌抗炎、降糖降脂等作用，但对其抑制肿瘤、增强免疫力等药理作用和与此相关的金樱子多糖的分离纯化尚未见报道。

另外，应该加强对金樱子多糖与生物大分子或小分子的识别机制，以及它的高级结构———构象问题和多糖单晶的研究，这是加快其生理活性研究的重要途径，一方面有利于进一步寻找未被发现的药理活性，特别是研究金樱子多糖是否能够作为治疗或辅助治疗药对肿瘤和艾滋病等顽症。

另一方面，还有利于针对性地对金樱子多糖及其衍生物进行结构改造如硫酸化、乙酰化等以提高多糖活性。

这一问题的解决能最终解决寻找高活性免疫多糖的盲目性，加快多糖的研究进程。

金樱子多糖的潜在功能尚需进一步研究，随着多糖的结构和功能关系的研究，将会产生生物学的新领域，导致医学上高速发展和工农业新的应用。

参考文献：[1]李时珍.《本草纲目》下册[M].北京：人民卫生出版社.[2] 闵俊，李燕燕，余华.药理作用及临床应用研究进展[J].环球中医药，2008，2：16-8.[3]刘焱, 高智席.药用植物金樱子有效化学成分研究进展.遵义师范学院学报，2008，10（3）：49-52.[4]张庭廷,李蜀萍,聂刘旺.金樱子多糖的分离纯化及组成分析[J].生物学杂志, 2002, 19(3): 27-9.[5]张庭延，聂刘旺，吴宝军.金樱子多糖的抑脂作用[J].中国公共卫生，2004，20（7）：829-30.[6]王瑞兰,易俗,陈康贵.金樱子果实中多糖的提取与分离纯化[J].湘潭师范学院学报(自然科学版), 2003, 25(2): 77-79.[7]薛梅,王自军,闫豫君,等.金樱子中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定[J]食品工业科技,2005,26(10):134-7.[8]张彤.多糖的研究方法概述[J].化学工程与装备,2008（5）:86-8.[9]Kodama N,Komuta K,Sakai N,et al.Effects of D-fraction,a olysaccharide from Grifola frondosa on tumor growth involve activation of NK cells[J].Biol Pharm Bull,2002,25(12):1647.[10]孔繁祚.糖化学[M].北京:科学出版社,2005.[11]赵云涛,国兴明,李付振.金樱子多糖的抗氧化作用[J].生物学杂志, 2003, 20 (2) : 23-4.[12]陈晓麟,丁小雯. 金樱子提取液对猪油自动氧化作用的影响[J]. 重庆教育学院学报, 2002,15 (3):53-7.[13]李铭,丁小雯,谭建东. 金樱子、木瓜对肝匀浆脂质过氧化抑制作用的研究[J]. 重庆教育学院学报,1999,12(3):44-6.[14]马云,董小英,刘四春,等. 金樱子和鸡内金对饲高糖高脂兔腹部脂肪及血糖血脂的影响[J].现代中西医结合杂志,2003,12(16):1703-5.[15]张庭延,聂刘旺,刘爱民,等. 金樱子多糖的免疫活性研究[J]. 中国实验方剂学杂志,2005,11(40):55-8.[16]张庭延,潘继红, 聂刘旺,等. 金樱子多糖的抑菌和抗炎作用研究[J]. 生物学杂志, 2005,22(2):41-2.[17]吴华振，植物多糖的药理作用及应用进展[J].实用医技杂志,2005.[18] 彭会军,邹群.植物多糖的生物活性研究进展[J].西北药学杂志，2008，23（6）：406-7.。