作物分子育种
分子育种的方法范文
分子育种的方法范文
分子育种是一种利用分子生物学和遗传学的方法来改良农作物的育种
方法。
它通过研究和利用基因组的结构和功能，以及基因之间的相互作用，以实现对农作物的精确改良。
下面将详细介绍几种常见的分子育种方法。
1.基因定位和标记辅助选择
2.基因组选择
基因组选择是一种通过高通量测序技术和数学模型，对整个基因组进
行全面分析的方法。
育种者可以通过对大量标记位点的分析来了解不同基
因型之间的差异。
这种方法可以准确地评估每个基因位点对目标性状的贡献，并综合考虑多个位点的效应。
这种全面的基因组分析能够显著提高选
择效果，并有效地加速育种进程。
4.转基因技术
转基因技术是一种将外源基因导入农作物基因组中的方法。
通过转基
因技术，育种者可以将来自其他物种的有益基因导入到农作物中，以获得
改良的性状。
转基因技术常用于提高农作物的抗病性、耐逆性、品质和产
量等方面。
然而，由于转基因技术的争议和风险，它在一些国家和地区的
应用受到限制。
5.RNA干扰技术
RNA干扰技术通过导入外源RNA分子来抑制特定基因的表达。
这种技
术可以通过选择性地抑制特定基因的表达来改变目标性状。
RNA干扰技术
的应用广泛，可以应用于提高农作物的抗病性、延长保鲜期等方面。
分子设计育种发展现状
分子设计育种发展现状分子设计育种是现代农业发展的重要技术之一，它通过对农作物的基因组进行精确改良，实现对农作物产量、品质、抗病性等特性的精确控制，为农业生产提供了更多的选择和可能性。
近年来，随着分子设计育种的不断发展和应用，其在种业发展中的地位和作用愈发凸显。
首先，分子设计育种在提高农作物产量方面发挥着重要作用。
通过利用分子标记辅助选择和基因克隆等技术，可以快速选育出高产品种。
以水稻为例，通过分析水稻种质资源的基因组，鉴定出控制产量相关特性的关键基因，并通过分子标记辅助选择在育种中筛选出高产性状的基因型，从而实现水稻产量的大幅度提升。
其次，在提高农作物品质方面，分子设计育种也发挥了重要的作用。
通过基因工程技术，可以精确改良农作物的品质特性，例如提高水果的甜度、改善食用油的品质等。
这不仅满足了人们对农产品品质的需求，也提高了农作物的市场竞争力。
另外，分子设计育种在提高农作物的抗病性方面也有显著效果。
许多传统农作物品种在抗病性方面存在弱点，容易受到病菌的侵袭。
通过分子设计育种，可以精确插入抗病相关基因，提高农作物的抗病性，降低农药使用量，减少病害对农作物的危害。
此外，分子设计育种也为农业发展提供了更多的可能性。
传统的育种方法，如自交系选择和杂交育种，存在耗时耗力的问题。
而分子设计育种则可以在短时间内快速获取所需特性的育种材料，缩短品种改良的周期。
此外，还可以通过全基因组选择和基因组编辑等技术，创新地开展育种工作，提高育种效率。
然而，分子设计育种也存在一定的挑战和问题。
首先，高昂的研发成本限制了该技术的推广应用。
此外，分子设计育种在涉及到基因编辑的时候，还存在着一定的伦理和法律风险。
对于一些粮食作物和农业生态系统的影响也需要认真评估。
综上所述，分子设计育种作为现代农业发展的重要技术之一，通过基因改良和精准选择等手段，可以实现农作物产量、品质、抗病性等性状的精确控制。
其在提高农作物产量、改善品质、提高抗病性等方面发挥着重要作用，并为农业发展带来了更多的可能性。
作物遗传育种的发展趋势。
作物遗传育种的发展趋势。
作物遗传育种是通过改良和优化作物的遗传性状来提高作物的产量、品质、抗性等方面的一种科学方法。
随着科技的不断进步和研究的深入，作物遗传育种的发展趋势主要表现在以下几个方面：
1. 分子育种：分子育种利用分子生物学和基因组学等技术手段，对作物的基因组进行深入研究和分析，从而更好地了解作物的遗传特性和功能基因。
通过分子标记辅助选择和基因编辑等技术，可以精确地选择和改良有利基因，加快育种进程。
2. 高通量技术应用：高通量技术如基因芯片、全基因组测序等的应用，可以快速、全面地获取大量的遗传信息。
这些技术可以帮助育种者更好地了解作物的遗传多样性，发现新的遗传资源，并加速基因筛选和功能解析的进程。
3. 基因编辑技术的应用：基因编辑技术如CRISPR-Cas9等的出现，使得育种者能够更精确地编辑作物的基因组，包括基因敲除、基因修饰等，以实现特定性状的改良。
这种技术的应用可以提高育种的效率和准确性。
4. 引入非传统作物种质资源：传统作物种质资源的遗传多样性相对有限，因此引入非传统作物种质资源成为一种趋势。
通过引入野生近缘种、异源杂交等手段，可以引入新的基因型和基因组组合，提高作物的抗性、适应性和品质。
5. 综合性育种策略的应用：综合性育种策略将遗传育种与其他学科的知识结合，如生理学、生物化学、生态学等。
通过综合利用多种手段和技术，全面提高作物的产量、品质和适应性。
总体来说，作物遗传育种的发展趋势是从传统的观测选种逐渐向基于分子遗传学和基因组学的精确选育转变。
新兴的技术和方法的应用将为作物育种带来更广阔的发展前景，并为粮食安全和农业可持续发展做出贡献。
现代化农作物育种方法和技术要点
现代化农作物育种方法和技术要点1. 引言随着科学技术的不断发展，农作物育种技术也在不断进步。
现代化农作物育种方法主要包括传统育种方法和分子育种方法。
本文将详细介绍现代化农作物育种的方法和技术要点。
2. 传统育种方法传统育种方法主要包括选择育种、杂交育种和突变育种。
2.1 选择育种选择育种是基于植物或动物的遗传变异，通过人工选择具有某种有利性状的个体进行繁殖，逐步改良品种。
选择育种的关键在于准确识别和选择具有目标性状的个体。
2.2 杂交育种杂交育种是通过将具有不同有利性状的亲本进行人工杂交，从而产生具有更好性状的子代。
杂交育种的关键在于合理选择亲本和优化杂交组合。
2.3 突变育种突变育种是通过诱导或筛选植物的基因突变，获得具有新性状的变异体。
突变育种的关键在于高效诱导突变和准确筛选变异体。
3. 分子育种方法分子育种方法主要包括标记辅助选择（MAS）、基因工程和基因组编辑。
3.1 标记辅助选择（MAS）标记辅助选择是通过分子标记技术，追踪与目标性状相关的基因，从而提高选择育种的准确性。
MAS的关键在于开发与目标基因紧密相关的分子标记。
3.2 基因工程基因工程是通过体外重组技术，将具有特定功能的基因导入农作物，实现对外源基因的控制和表达。
基因工程的关键在于安全评估和生物伦理问题。
3.3 基因组编辑基因组编辑是利用CRISPR/Cas9等核酸内切酶技术，精准修改农作物基因组中的特定基因。
基因组编辑的关键在于避免脱靶效应和基因伦理问题。
4. 技术要点4.1 育种目标的设定明确育种目标是成功开展育种工作的前提。
根据市场需求和生产实际，合理设定育种目标，如产量、品质、抗病性和适应性等。
4.2 亲本选择与杂交组合优化合理选择亲本，充分考虑亲本的遗传背景和有利性状。
通过杂交实验，优化杂交组合，提高后代育种的效率。
4.3 分子标记开发与应用针对目标性状，开发相应的分子标记，提高选择育种的准确性。
通过分子标记技术，追踪目标基因在后代中的遗传规律。
《作物分子设计育种》课件
利用分子设计育种技术提高作物对环境适应的能 力，增强其抗逆性。
作物遗传多样性保护
利用分子设计育种技术保护作物自然遗传多样性。
未来展望
分子设计育种有望在粮食安全、生态环境保护和 可持续农业发展方面发挥重要作用。
实践案例分享
水稻分子设计育种
利用分子设计育种技术改良水稻 的产量和抗逆性，为粮食安全做 出贡献。
玉米分子设计育种
通过分子设计育种技术提高玉米 的品质和耐旱性，满足不同地区 的种植需求。
小麦分子设计育种
利用分子设计育种技术改良小麦 的抗病性和适应性，提高产量和 品质。
总结
• 分子设计育种的优势是可以针对性地改良作物的特性，提高产量和适应性。 • 分子设计育种的挑战是技术的复杂性、道德伦理的问题以及公众对基因编辑的质疑。 • 分子设计育种有着广阔的应用前景，可以为粮食安全和农业发展做出重要贡献。
《作物分子设计育种》PPT课 件
探索作物分子设计育种的原理、方法和应用，以及未来的发展前景。
简介
作物分子设计育种是一种利用基因编辑技术、基因质量控制技术、基因组学 与表观遗传学技术和分子标记辅助选择技术等手段来改良作物的育种方法。
原理与方法
1
基因编辑技术
利用CRISPR/Cas9等工具精确编辑作物
基因质量控制技术
2
基因，实现目标性状的改良。
通过筛选、鉴定和优化基因变异体，提
高作物的遗传质量。
3
基因组学与表观遗传学技术
研究作物基因组和表观遗传调控机制，
分子标记辅助选择技术
4
为作物育种提供理论基础。
利用分子标记鉴定和选择具有优良特性 的作物品种。
应用与前景
分子育种的原理与应用
分子育种的原理与应用一、引言分子育种是利用分子生物学技术在遗传层面上对作物进行改良的一种育种方法。
通过分析和利用作物的基因组信息，可以快速精准地筛选出具有优良性状的杂交组合，提高作物的产量、抗病虫害能力和适应性等，为粮食安全和农业可持续发展做出重要贡献。
二、分子育种的原理分子育种的原理是基于作物的基因组信息进行分析和筛选，主要包括以下几个步骤：1.基因组测序：使用高通量测序技术对作物的基因组进行测序，获取作物基因组的完整序列信息。
2.基因组比较：将测序得到的作物基因组序列与已知基因组序列进行比较，寻找差异及变异的位点。
这些位点可能与作物的优良性状相关。
3.分子标记开发：在基因组比较中发现的差异位点可以作为分子标记进行标记开发。
这些分子标记可以作为遗传标记，用于引导育种工作。
4.标记辅助选择：利用已开发的分子标记对作物进行筛选。
通过分子标记的检测，可以快速鉴定作物具有优良性状的个体，并进行后续育种工作。
5.基因功能解析：通过基因组比较和分子标记的筛选，找到与作物优良性状相关的基因。
进一步研究这些基因的功能，可以揭示作物的形态、生理等方面的变化机制。
三、分子育种的应用分子育种在实际应用中已经取得了一系列的成功，并在农作物改良中起到了重要作用。
以下为分子育种在不同作物的应用情况：1. 水稻•利用分子育种技术，可以提高水稻的产量和抗病虫害能力。
通过筛选出抗病虫害的基因，并进行基因转移，可以培育出对病虫害具有抗性的水稻品种。
•分子育种还可以对水稻的性状进行改良，如提高稻谷的品质、耐旱性、耐寒性等。
通过分析水稻基因组信息，找到与这些性状相关的基因，可以利用分子标记进行筛选和选择。
2. 小麦•分子育种技术可以加速小麦的育种进程。
通过分子标记的筛选，可以提高杂交组合的育种成功率。
同时，利用分子标记进行选育，可以提高小麦的抗逆性、耐病性等性状。
3. 蔬菜•分子育种技术广泛应用于蔬菜的育种中。
通过筛选具有抗病虫害能力的基因，在蔬菜中进行基因转移，可以培育出抗病虫害的蔬菜品种。
分子设计育种在粮食作物生产中的潜力与挑战
分子设计育种在粮食作物生产中的潜力与挑战背景介绍：随着世界人口的不断增长，粮食安全问题成为全球关注的焦点之一。
种植高产、耐病、适应多种环境条件的粮食作物，是保障全球粮食安全的关键。
传统的育种方法通常需要耗费大量时间和金钱，而分子设计育种则可以更快速、高效地产生理想品种。
本文将探讨分子设计育种在粮食作物生产中的潜力与挑战。
潜力：1. 加速育种进程：分子设计育种利用基因编辑技术，可以直接对作物基因进行精确的修改，以实现对目标性状的改良。
通过这种方法，可以无需长时间繁琐的筛选工作，快速地获得理想的品种。
2. 提高作物产量：作物收量是粮食生产的关键指标之一，而分子设计育种可以通过改良产量相关的基因来提高作物的产量表现。
例如，通过调节光合作用相关基因的表达，可以提高作物的光合效率，从而增加光合产物的积累和产量。
3. 抗病性的改良：病害是影响作物生产的主要因素之一。
传统育种方法需要进行长期的抗病性评估和筛选，而分子设计育种则可以直接针对抗病相关基因进行精确的编辑和改良，从而增强作物的抗病性。
挑战：1. 技术限制与成本：尽管分子设计育种具有巨大的潜力，但目前技术上还存在一些限制。
例如，基因编辑技术仍面临一些难以解决的问题，如难以实现大规模的基因改良和高效的基因传递。
此外，高昂的技术成本也是制约分子设计育种广泛应用的一个挑战。
2. 法规和伦理问题：分子设计育种涉及到对作物基因的直接修改，因此引发了一系列的法规和伦理问题。
例如，基因编辑被用于开发转基因作物的情况下，是否需要进行严格的风险评估和安全监管，以及关于基因修改是否符合公众利益等问题都需要深入探讨和解决。
3. 利益分配问题：分子设计育种可以为作物育种带来新的突破，但如何确保这些突破的利益能够公平地分配给作物育种的各方利益相关者，仍然是一个需要解决的挑战。
例如，农民和种植者在使用分子设计育种的品种时，是否能够分享创新的利益，需要在政策和实践层面上进行认真考虑。
作物分子设计育种课件
对每个三交组合,2 种标记选择方案得到的 F8家系数相等(表1) 。从三交组合1 平均获得 716 个目标基因型F8 家系,三交组合2 平均获得 2318 个,三交组合3 平均获得1118 个(表1) 。但 从2 种标记选择方案需要测试的DNA 样品数和 每个中选的F8家系需要测试的DNA 样品数来 看,2 种标记选择方案有着巨大的差异。以三交 组合1 为例,利用标记选择方案1 需要测试3000 个DNA 样品,而利用标记选择方案2 需要测试 459 个DNA 样品;对标记选择方案1 来说,每个 中选的F8 家系需要测试的DNA样品数是395 , 对标记选择方案2 来说,这个数字只有60 。因此, 包含两个阶段标记选择的方案2 在基因聚合过 程中可以大大地降低实验室测定标记的花费。
1、重要农艺性状基因/QTL 高效发掘 构建作物的高代回交导入系群体, 并结合
定向选择,消除复杂的遗传背景对基因 /QTL 定位精度的不良影响,高效发掘种质 资源中重要农艺性状的基因/QTL 。
三、我国作物分子设计育种的研 究重点
2、建立核心种质和骨干亲本的遗传信息 链接
获取亲本携带的基因及其与环境互作的 信息预测不同亲本杂交后代在不同生态 环境下的表现提供信息支撑。
不同三交组合获得目标基因型的几率有显
著差异。三交组合2 的几率最高,达0181 % ,组合1 的几率最低,只有0125 %。因此 三交组合2 结合标记选择方案2 是最佳的 实现目标基因型的途径。
2、结合育种目标设计目标基因型
（1）QTL 在染ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ体上的位置 （2）遗传效应 （3） QTL 之间的互作 （4） QTL 与背景亲本和环境之间的互
作 （5）模拟预测各种可能基因型的表现型,
从中选择符合特定育种目标的基因型。
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一、作物分子育种作物育种基本任务：1.在研究和掌握作物形状遗传变异规律的基础上，发掘研究和利用作物种植资源；2.选育优良品种或杂种以及新作物；3.繁殖生产用种。
作物分子育种：即在经典遗传学和分子生物学等理论指导下，将现代生物技术手段整合于传统育种方法中，实现表现型和基因型选择的有机结合，培育优良新品种。
分子标记育种：又称为分子标记辅助选择，是利用与目标基因紧密连锁的分子标记，在杂交后代中准确鉴别不同个体基因型，从而进行辅助选择育种。
特点：能有效结合基因型与表现型鉴定，显著提高选择的准确性。
转基因育种：利用基因重组DNA技术，将功能明确的基因通过遗传转化手段导入受体品种的基因组，并使其表达期望形状的育种方法。
特点：能打破基因不同物种交流障碍，克服传统育种的困难问题。
分子设计育种（刚起步）：目的——通过各种技术的集成与整合，在育种家的田间试验之前，对育种程序中的各种因素进行模拟、筛选和优化，确立目标基因型，提出最佳亲本选配和后代选择策略，提高育种试验可见性。
我国作物分子育种中存在的问题：1.基因资源挖掘力度有待加强；2.实用分子标记和具重要育种价值的基因十分贫乏；3.作物分子育种技术尚待突破；4.通过分子育种培育的突破性品种不多，产业化程度不高；5.作物分子育种的组织体系和实施机制需要创新。
作物分子育种意义：1.发展作物分子育种是保障国家安全的重大需求；2.全面实现作物分子育种相关技术突破；3.加速作物分子育种研发和产业化。
常规育种和分子育种比较：1.常规育种表现型选择时，会受时空因素影响，而分子育种不会；2.常规育种来源广，育种亲本贫乏；分子育种基因来源广，基因资源丰富。
3.常规育种基因局限于种内，少数局限于亚种间；分子育种基因交流不受物种限制。
4.常规育种目标性状有不明确性；分子育种目的基因功能已知，目标性状明确。
5.最明显特征：常规育种选择时间长；分子育种选择时间短，可调控基因及其产物的功能、表达。
分子育种与传统育种关系：分是传的延伸和发展，二者是互补、嫁接、结合的关系，常规育种与分子育种形成了现代作物育种。
二、作物分子标记育种遗传标记：指可追踪染色体，染色体某一节段，某个基因座在家系中传递的任何一种遗传特性。
两个特点：可遗传性、可识别性。
在植物遗传育种研究中可被应用的遗传标记应具备以下四个条件：1.多态性高；2.最好表现为共显性，能够鉴别出纯合基因型和杂合基因型；3.对主要农艺性状影响小；4.经济方便，容易观察记载。
植物中常用的遗传标记：形态学标记：即植物的外部形态特征，主要包括肉眼可见的外部特征，如：矮秆、紫鞘、卷叶等；也包括色素、生理特性、生殖特性、抗病虫性等有关的一些特性。
细胞学标记：即植物细胞染色体的变异：包括染色体核型（染色体数目、结构、随体有无、着丝粒位置等）和带型（C带、N带、G带等）的变化。
生化标记：利用电泳技术对蛋白质、酶等生物大分子进行鉴定。
主要包括同工酶和等位酶标记。
分子标记分子标记的类型：RFLP、RAPD、AFLP、SSR分子标记：在生物系统和进化研究中，每个能反应遗传变异的，能提供系统学信息的多态位点称为一个分子标记，在遗传育种研究中每个与感兴趣的性状或目的基因链锁的多态性位点也称为一个分子标记。
特点：1.表现稳定（DNA形式）；2.数量多；3.多态性高；4.表现中性，不影响目标性状表达；5.区别Aa和AA；6.成本不太高。
分子标记技术：能提供分子标记的分子生物学技术。
特点（优点）：1.分子标记技术选用的分子信息比较稳定；2.提供遗传信息量是无限的；3.能很好区分同源性和相似性；4.能提供物种间比较共同的尺度；5.打开了遗传学研究的大门。
三、DNAPEX（异基磺原甲酸）提取方法的具体步骤包括：1.研磨：加入液氮研磨后，放入液氮预冷的离心管，尽量用2ml管，研碎材料不超过离心管一半；2.水浴：加800ul的PEX提取液，充分混匀，65℃水浴45分钟，期间混匀3次，动作不能剧烈；3.离心：12000rpm室温离心10分钟，取灭过菌管，将上清液转入，再次离心；4.沉淀DNA：离心后上清液再次转移，在装有转入上清液的离心管中加1/10体积的3mol/l醋酸钠和1倍体积的异丙醇，混匀，放入-20℃的冰箱中至少沉淀30分钟；5.洗DNA：离心15分钟，倒掉上清液，70%酒精洗所得的DNA，分两次进行；6.室温干燥：用适量的TE溶解DNA；7.再次离心：DNA中的杂质和不溶物会沉于离心管底部，将上清转移到5ml的离心管中，管壁标记材料名称；8.检测DNA质量及浓度，放入冰箱。
DNA提取注意事项：1.提取材料尽量要幼嫩叶片；2.整个提取过程应低温，一般利用液氮、冰浴；3.当DNA处于溶解状态，尽量减弱溶液涡旋，动作要柔缓。
DNA降解的外源因素：1.外界物理因素：温度、湿度；2.化学因素：PH值、水解反应、氧化反应；3.生物因素：酶解及微生物侵染等作用。
这些因素都直接与DNA的构型分子组成有关。
四、植物DNA的分子和检测在琼脂糖凝胶电泳中影响DNA迁移的因素：DNA分子质量、DNA分子构型、琼脂糖、凝胶浓度、电场强度、EB影响。
聚丙烯酰胺凝胶电泳电泳板的制备：①清洗电泳板②处理电泳板③组装电泳板④电泳板灌胶。
电泳板灌胶是最关键的一步。
影响泳动速度的因素：①电场强度②缓冲溶液的PH③缓冲溶液的离子强度④电渗⑤焦耳热⑥筛孔五、RAPD标记RAPD标记技术的实验原理：RAPD标记技术的应用：①RAPD标记可用于植物亲缘关系及种质资源遗传多样性分析②RAPD标记构建分子标记遗传连锁图谱③对优异基因定位及优异性状的选择④构建DNA指纹图谱及品种鉴定⑤鉴定及标记外援染色体片段⑥分子标记辅助育种RAPD标记技术的特点：1.优点：①RAPD标记技术中使用的随机引物，不需要预先了解目的基因和相应的序列，引物价格便宜，成本较低；②RAPD标记技术操作技术简单，试验周期短、能在较短时间筛选大量样品③选用引物没有种属限制④需要模板量较少⑤无需借助于有伤害性的同位素，耗费的人力物力少⑥灵敏度高⑦可以覆盖整个基因组⑧RAPD产物有大于50%的条带扩增于单拷贝区。
2.缺点：①用于二倍体生物时，不能很好的区别杂合子和纯合子②在某种情况下，实验重复性不高，实验结果可靠性低③使用效果受生物种类的影响如何简单设计一个实验，运用RAPD标记分析植物间的遗传多样性？六、SSR标记SSR标记技术实验原理：SSR即简单重复序列，又称微卫星DNA，根据微卫星DNA两端的单拷贝序列设计一堆特异引物，利用PCR技术，扩增每个位点的微卫星序列，通过电泳分析核心序列的长度多态性。
一般的，同一类微卫星DNA可分布于整个基因组的不同位置上，而通过其重复的次数不同以及重复程度的不完全而造成每个座位的多态性。
SSR标记的多态性丰富，重复性好，其标记呈共显性，且在基因组中分散分布，因此可作为遗传标记。
SSR标记技术的应用：SSR标记技术已被广泛用于遗传图谱构建，品种指纹图谱绘制及品种纯度检测，以及目标性状基因标记等领域。
特别在人类和哺乳动物的分子连锁图谱中，微卫星标记已成为取代RFLP标记的第二代分子标记。
SSR标记技术特点：1.优点：①数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高②具有多等位基因的特性，提供的信息量高③以孟德尔方式遗传，呈共显性，可鉴别出杂合子和纯合子④每个位点由设计的引物顺序决定⑤结果重复性高，稳定可靠⑥DNA用量少，对DNA质量要求不高，操作简单⑦SSR标记一般检测到的是一个单一的多等位基因位点⑧SRR序列的两侧序列常较保守，在同种而不同遗传型间多相同⑨需要事先知道重复序列两侧的DNA序列的信息来设计引物，因此引物开发成本高，但一旦开发，同行受益无穷。
2.缺点：①开发和合成新的SRR引物投入高、难度大②现有的SSR标记数量有限，不能标记所有的功能基因，不能构建饱和的SRR遗传图谱③SSR多态性的检测和应用很大程度上依赖PCR扩增的效果④SSR座位突变率高，对变异反应非常敏感等。
SSR标记如何设计引物：①建立基因组DNA的质粒文库②根据欲得到的SRR类型设计并合成寡聚核苷酸探针，通过菌落杂交筛选所需重组克隆③对阳性克隆DNA插入序列测序④根据SSR两侧序列设计并合成引物⑤以待研究的植物DNA为模板，用合成的引物进行PCR扩增反应⑥高浓度琼脂糖凝胶，非变性或变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其多态性。
七、AFLPAFLP标记技术的原理：AFLP技术是基于PCR反应的一种选择性扩增限制性片段的方法。
由于不同物种的基因组DNA大小不同，基因组DNA经限制性内切酶完全消化后，在限制性片段两端连接上人工接头作为扩增的模板。
实际的引物与接头和酶切位点互补，并在3’加上2~3个选择性碱基，因此在基因组被酶切后的无数片段中，只有一小部分限制性片段被扩增，即只有那些与引物3’端互补的片段才能进行扩增，称为选择性扩增。
为了对扩增片段的大小进行灵活的调节，一般采用两个限制性内切酶。
扩增产物经放射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，可产生数量丰富的带型标记，然后根据凝胶上DNA指纹的有无来检测多态性。
分辨率高，是一种十分理想和高效的遗传标记。
所用的两种酶：酶切频率较高的限制性酶，酶切频率较低的稀有酶；（4个识别位点的Mse I,6个识别位点的EcoR I）AFLP引物包括3部分：5’端的与人工接头序列互补的核心序列，限制性内切酶特定序列和3’端的选择性碱基。
AFLP的应用：①可用于构建分子遗传连锁图谱②可用于构建指纹图谱，进行品种鉴定③可用于种内和种间的遗传多样性研究④可用于分子标记辅助选择育种⑤可用于基因定位基因克隆的研究。
AFLP标记技术特点;1.优点：AFLP不需要预先知道DNA序列的信息，因此可以用于没有任何分子生物学研究基础的物种，概括其特点如下：①用于AFLP分析的限制性内切酶与选择性碱基组合的数目和种类很多②AFLP多态性远远超过其他分子标记③多数表现孟德尔方式遗传④模板用量少，且对模板浓度的变化不敏感⑤AFLP标记中由于扩增片段较短，其分辨率很高⑥由于利用特定引物扩增，退火温度高，因而假阳性低，可靠性高⑦AFLP分析的大多数扩增片段与基因组的单一位置相对应，可用于分析基因组DNA及克隆相应的DNA片段，可作为遗传图谱和物理图谱的位标和联系两者的桥梁。
2.缺点：①AFLP标记技术试验中对样品DNA的质量要求较高②内切酶质量要求比较高③技术难度高，成本比较昂贵④很难鉴别等位基因⑤受专利保护，目前用于分析的试剂盒价格昂贵，分析成本高⑥实验中产生的大量谱带，对其分析和解释有时存在困难，需要借助计算机软件的帮助。
DNA甲基化：是由DNA甲基化酶催化的一种天然修饰方式。
甲基化是基因组DNA的一种主要的表观遗传修饰方式，是调控基因组功能的重要手段。