第九章_兽药残留分析
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兽药残留
中华人民共和国农业部 二OO三年一月二十二日
兽药残留
2.2.1高效液相色谱仪
•
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、
色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中
的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进
入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由
于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系
二.兽药残留检测
兽药残留
兽药残留检测方法
1.兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。 2.
兽药残留
兽药残留检测方法
• 中华人民共和国农业部公告 • 第236号 • 根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了
12种动物性食品中兽药残留检测方法，现予发布， 请各地遵照执行。 • 附件：动物性食品中兽药残留检测方法 .doc
数，在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-
解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的
差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测
器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据
以图谱形式打印出来。
兽药残留
HPLC原理
• 1）高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受 样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固 定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥 发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围 的物质。
兽药残留
6）显色和比色 显色的温度和时间应按规定力求准确； 显色必须避光； 使用多道加液器加终止液； 显色完毕后尽快比色测定。
兽药残留
三.兽药残留监控措施
• 遵守最高残留限量和休药期规定是避免兽药残
留超标，确保动物性食品安全的关键。在畜牧业 生产过程中，只要科学、合理地使用兽药，不使 用违禁药物和未被批准的药物，就不会导致动物 性食品中兽药残留超标、危害消费者健康的情况 发生。
兽药残留
2.2.1高效液相色谱仪
•
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、
色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中
的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进
入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由
于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系
二.兽药残留检测
兽药残留
兽药残留检测方法
1.兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。 2.
兽药残留
兽药残留检测方法
• 中华人民共和国农业部公告 • 第236号 • 根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了
12种动物性食品中兽药残留检测方法，现予发布， 请各地遵照执行。 • 附件：动物性食品中兽药残留检测方法 .doc
数，在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-
解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的
差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测
器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据
以图谱形式打印出来。
兽药残留
HPLC原理
• 1）高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受 样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固 定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥 发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围 的物质。
兽药残留
6）显色和比色 显色的温度和时间应按规定力求准确； 显色必须避光； 使用多道加液器加终止液； 显色完毕后尽快比色测定。
兽药残留
三.兽药残留监控措施
• 遵守最高残留限量和休药期规定是避免兽药残
留超标，确保动物性食品安全的关键。在畜牧业 生产过程中，只要科学、合理地使用兽药，不使 用违禁药物和未被批准的药物，就不会导致动物 性食品中兽药残留超标、危害消费者健康的情况 发生。
兽药残留总结
兽药残留总结引言兽药是动物养殖中必不可少的一种药物，用于预防和治疗动物的疾病。
然而，随着兽药的使用，兽药残留问题也越来越严重。
本文将对兽药残留的相关问题进行总结，并探讨对策。
兽药残留的危害兽药残留对人类健康和环境造成了严重的危害。
首先，兽药残留可能会通过动物产品进入人类体内，影响人体健康。
一些兽药残留物具有毒性，长期摄入可能导致慢性中毒甚至致癌。
其次，兽药残留还会对环境产生不良影响，如污染水源和土壤，破坏生态平衡。
兽药残留的来源兽药残留主要来自以下几个方面：1.治疗兽药的使用：农民在动物患病时会使用兽药进行治疗，但可能存在用药过量或滥用药物的情况。
2.饲料添加剂：一些饲料添加剂中含有兽药成分，动物长期摄入会导致兽药残留。
3.兽药残留物的降解不完全：某些兽药残留物在动物体内降解速度较慢，导致残留物在动物产品中仍然存在。
兽药残留监测方法为了解决兽药残留问题，需要对动物产品进行监测。
目前常用的兽药残留监测方法主要包括以下几种：1.高效液相色谱法：该方法可以快速准确地检测动物产品中的兽药残留物，具有灵敏度高、选择性好的优点。
2.气相色谱法：该方法适用于挥发性和半挥发性兽药的检测，可以检测到更低浓度的兽药残留物。
3.酶联免疫法：该方法基于免疫学原理，可以对兽药残留物进行定性和定量分析，但灵敏度略低于色谱法。
兽药残留的监管措施为了保护人类健康和环境，各国都加强了对兽药残留的监管。
目前，常见的监管措施主要包括以下几点：1.制定兽药使用标准：各国制定了兽药使用标准，规定了使用兽药的剂量和疗程，以避免滥用药物导致兽药残留。
2.加强兽药注册管理：加强兽药的注册管理，确保兽药的安全性和有效性。
3.加强兽药残留监测：加强对动物产品中兽药残留的监测，及时发现和处理兽药残留问题。
4.加强法律法规的制定和执行：加强相关的法律法规的制定和执行，对违规行为进行处罚。
兽药残留问题的解决对策针对兽药残留问题，我们可以采取以下几种对策：1.加强宣传教育：加强对兽药残留问题的宣传教育，提高养殖户和消费者的兽药安全意识。
食品中兽药残留分析
（2）用5%高氯酸处理样品时，当PH值低于蛋白质等电点时， 蛋白质以阳离子形式存在，高氯酸可与蛋白质阳离子形成 不溶性盐而沉淀，通过离心除去；
（3）本方法测定四环素类药物的加标回收率分别为：OTC： 82%-93%，TC:80%-90%,CTC:80%-95%; (4）出峰顺序为土霉素（OTC)、四环素（TC)、金霉素（CTC)
曲线。
(4）试样测定
取经0.45μm滤膜过滤的待测液10μL进样，记录峰高，从工 作曲线上查含量。
31
(四)结果计算
式中： X－试样中抗生素含量，单位为mg/kg A－试样溶液测得抗生素质量，单位为μg m－试样质量，单位为g
32
（五）方法说明
（1）流动相中加NaH2PO4及调节pH值目的：改善四环素类药物 在C18柱上的分离度和峰形；
17
（二）常见兽药残留的检测
1.磺胺类兽药残留的检测 2.四环素类兽药残留的检测 3.硝基呋喃类兽药残留的检测 4.盐酸克伦特罗残留的检测 5.激素类兽药的检测
18
磺胺类药物
➢ 磺胺类药物的基本结构为对氨苯磺酰胺，简称磺胺的衍 生物,具有芳氨基和磺酰胺基，多为两性化合物。
➢ 常用的有：磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲氧嘧啶、磺 胺二甲基嘧啶等。
9
（三）兽药残留的危害
毒性作用
急性中毒、慢性中毒、“三致”（致癌、致畸、致突变）
耐药性
动物体内耐药性菌株通过食品传递给人，给治疗带来困难。
过敏反应 激素作用
潜在致癌、儿童性早熟等
污染环境影响生态
兽药排入环境后，仍然有活性，对土壤微生物、水生生物 等造成影响。
10
（四）兽药残留限量标准和检验
兽药最高残留限量(MRLVD)：
（3）本方法测定四环素类药物的加标回收率分别为：OTC： 82%-93%，TC:80%-90%,CTC:80%-95%; (4）出峰顺序为土霉素（OTC)、四环素（TC)、金霉素（CTC)
曲线。
(4）试样测定
取经0.45μm滤膜过滤的待测液10μL进样，记录峰高，从工 作曲线上查含量。
31
(四)结果计算
式中： X－试样中抗生素含量，单位为mg/kg A－试样溶液测得抗生素质量，单位为μg m－试样质量，单位为g
32
（五）方法说明
（1）流动相中加NaH2PO4及调节pH值目的：改善四环素类药物 在C18柱上的分离度和峰形；
17
（二）常见兽药残留的检测
1.磺胺类兽药残留的检测 2.四环素类兽药残留的检测 3.硝基呋喃类兽药残留的检测 4.盐酸克伦特罗残留的检测 5.激素类兽药的检测
18
磺胺类药物
➢ 磺胺类药物的基本结构为对氨苯磺酰胺，简称磺胺的衍 生物,具有芳氨基和磺酰胺基，多为两性化合物。
➢ 常用的有：磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲氧嘧啶、磺 胺二甲基嘧啶等。
9
（三）兽药残留的危害
毒性作用
急性中毒、慢性中毒、“三致”（致癌、致畸、致突变）
耐药性
动物体内耐药性菌株通过食品传递给人，给治疗带来困难。
过敏反应 激素作用
潜在致癌、儿童性早熟等
污染环境影响生态
兽药排入环境后，仍然有活性，对土壤微生物、水生生物 等造成影响。
10
（四）兽药残留限量标准和检验
兽药最高残留限量(MRLVD)：
兽药残留分析及监控措施
适 度规模养殖 场（ 户） 总体 养殖水平 、 科技水 平较低 ， 区域 内
零 星布局 、分散饲养 的格局导致药残 的监督 控制难度增大 ， 加之养 殖者安 全意识淡薄 ， 养殖过程 中习惯 于长期 、 大量使 用某些抗菌素和违禁 品，且不遵守足够 的休 药期 管理规定 ， 这样就会造成动物性产 品（ 肉、 蛋、 奶等 ） 不同程度的药残 ； 实 践 中较为常见 的兽 药残 留包 括给泌乳 高峰期 的奶 牛使用抗 菌素防治产科疾病 、 给出栏期动 物及 产蛋高峰期 的产蛋鸡使
保障畜产品质量安全。
２ ． ５ 强化 法律 支撑
不法商人违规使用 甲醛等毒性 防腐剂延 长水产 品保质期 、 保
作者 简介 ： 马金 成（ １ ９ ８ ９ ￣ ） ， 青海省 门源县人 ， 回族 ， 大专， 技
专项检 测工作的报 告制度 ， 促使兽药 留执法监管工作更加趋于规 范化 。
关键词 ： 兽药残 留； 原 因分 析 ； 控 制 措施
ＤＯｌ ： １ ０． ３ ９ ６ ９ ／ Ｊ ． Ｉ ＳＳＮ． １ ６ ７ １ —６ ０ ２ ７． ２ ０１ ７ ． １ ０． ０ ２ ２
１ 兽药 残留主要成因
速促长 、 短期 出栏 、 增 产增 收的 目的 ， 这是 以牺 牲畜产品质量
特别是要尽量 、 尽 快摆脱 规模 化养殖对抗 生素的严重依
耐性 ， 争 取早期淘 汰“ 磺胺类 、 青霉素类 、 四环 素类 、 沙星类 ”
安全为代价 ， 是监管执法部 门严厉打击 的对象 之一 ； （ ２ ） 现代 规 模化家畜 禽养殖 ， 具有极 高的发病与病死 风险 ， 比如 家禽
用药要在专业人员指导下规范化使用，禁止滥用抗生素和不对 症盲 目用药 ， 切实提高治疗效果和减少兽药残留。 ２ ． ３ 加 快新型生态安全 防治 药物的研 发与推 广应 用
畜产品兽药残留分析及控制对策
目前 ， 畜牧 业 生产 过程 中 在 造 成 兽 药 残 留 超 标 主 要 有 以下
五个 方面 因素。 １１ 饲 料 中滥 用原 料 药 、药物 ．
添 加 剂 造 成 兽 药 残 留 超 标 一
前 在 区县 级 只 有种 植 业 产 品 质
量 监测 检验 建设 项 目， 还没 有 畜 产品质 量 监测检 验 建 设项 目， 区 县对 畜产 品兽 药残 留不 能检 测 ，
使用 ， 由此看 来 禁用 药物 的使用
四川 畜牧兽医 ＇０ ２ ６ ・ ２ １ ・ 期 总第 ２ ０期 ６
细菌 耐药 性 的产 生 ， 早期 的抗 菌
收稿 日期 ：０ ２ ０ — ９ ２１—４２
的建立 ， 科学 的消毒 、 免疫与驱 虫 程 序 的 建 立 三 方面 构 建 动 物
饲养 场 生物 安全体 系。 要做 好 免
主， 日常巡 查 的监 管作 用 非 常 有 限 。 因此 ， 目前 区县 级不 能 对畜 产 品 的 兽 药 残 留 进 行检 测 的现 状 给 不 法 分 子 在饲 料 生 产 环 节
超 标 一 些养 殖 企 业 或 养 猪 户
不按 停 药期 的要 求 ， 在动 物 出栏 前 的 休 药 期 内还 继 续 使 用 含 有
疫 注射 ， 加 强对 免疫 效 果 的监 并
厉 打 击 违 法 行 为 严 格 动 物 饲
利 用媒 体 、 网络 等 媒 介 ，组 织
开展形 式多样 的宣传 活动 ， 加
测和动物疫病的检测。 要增强动
物疫 病预 防、 警 。及 时 沟通 各 预
养 投 入 品的监 督 管理 ， 行 兴奋 进
药在 动 物疫 病 防 治 中 效 果 逐 渐 下降 ， 目前 不 少养 殖场 为提 高疗 效 、 少损 失 ， 剂 量 使 用 抗 菌 减 超
兽药残留的原因及危害
畜牧业经过20多年持续增长，畜产品得到了极大发展，畜牧业的现代化、集约化和规模化生产，兽药及兽药添加剂在降低发病率与死亡率、提高饲料利用率、促生长和改善肉品品质方面起到十分显著的作用，已成为现代畜牧业不可缺少的物质基础。
但是，由于科学知识的缺乏和经济利益的驱使，养殖过程中滥用兽药和超标使用兽药的现象普遍存在。
其后果，一方面是导致动物源性食品中的兽药残留，摄入人体后影响人类的健康；另一方面，各种养殖场大量排泄物(包括粪便、尿等)向周围环境排放，兽药又成为环境污染物，给生态环境带来不利影响。
一、兽药残留的原因分析兽药的应用保证了畜牧业的增产、增效，但是，同时也带来了兽药残留。
尤其是某些人大范围、过量、不正确地使用，有害物质残留超标现象严重，给动物产品安全造成极大隐患。
造成兽药残留主要原因如下。
1 促进生长，提高效益由于兽药具有预防和治疗许多病原微生物感染引起的疾病，有的还能促进动物生长，因此一些生产企业为了追求高额暴利，违反国家规定，在饲料产品中超剂量或滥加兽药和其他违禁药品，如在饲料中添加“瘦肉精”、喹乙醇等禁用兽药，并大量向饲养场或专业户出售；另一方面，一些养殖场或专业户，法制观念淡漠，仅从短期经济利益考虑，为非法兽药生产企业和添加违禁物质的非法添加剂产品提供了“地下市场”。
2 预防疾病，减少损失为了预防阶段性寄生虫病(如球虫病，蛔虫病)和白痢等，在饲料中大量使用各种抗菌(虫)药物，其中有专用药，如氨丙啉、氯羟吡啶、球痢灵，盐霉素等，也有抗生素，如四环素类、呋喃唑酮等，大多具有药物残留。
有的养殖场或专业户，常常盲目大范围用药或大剂量用药，或者在不知情的情况下成为非法产品的使用者。
3 为增加动物性食品的色泽和色相一些企业违法使用阿散酸、洛克沙胂等胂制剂，使色素沉积而增加鸡蛋黄、蛋皮的颜色。
违规使用“苏丹红”增强蛋黄色泽也不乏其例。
特别是近几年一些不法商人为了延长水产品的保质期，保持好的卖相，在运输销售期间违规使用甲醛这种毒性防腐剂，造成水产品的药残污染。
《兽药残留分析》课件
制定和完善兽药残留监管与监测的法律法规，明确监管职责和监 测要求。
监测计划制定
制定兽药残留监测计划，定期对养殖、屠宰和肉品加工环节进行 抽样检测，评估兽药残留状况。
监管执法
加强兽药残留监管执法力度，对发现的违规行为进行严肃处理， 提高违法成本，形成有效震慑。
06
案例分析
某地区鸡肉中兽药残留案例分析
残留种类
主要涉及硝基咪唑类、硝基呋喃类和苯并咪唑类 等兽药。
ABCD
检测方法
采用酶联免疫法（ELISA）和质谱法（MS）进 行检测。
处理措施
对涉事养殖场进行严厉处罚，加强牛肉质量安全 监管，同时对牛肉进行追溯和召回。
某地区水产品中兽药残留案例分析
案例背景
检测方法
某地区水产品中检测出兽药残留超标，引 发消费者恐慌。
兽药残留控制与管理
养殖环节兽药残留控制
兽药使用规范
确保养殖过程中合理使用兽药，遵循用药剂量、给药途径、休药 期等规定，避免滥用和超标使用。
养殖档案建立
建立详细的养殖档案，记录兽药使用情况、动物健康状况等信息， 以便追溯和管理。
养殖环境卫生
保持养殖环境卫生，定期清理和消毒养殖场所，降低动物感染疾病 的风险，从而减少兽药使用和残留。
免疫学检测方法
酶联免疫吸附法（ELISA）
ELISA是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过酶标记抗体与抗原的结合反应，经过洗涤和显色等 步骤，实现对兽药残留的定量或定性检测。该方法具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优点。
荧光免疫分析法（FIA）
FIA是一种基于荧光标记的免疫分析方法，通过荧光信号的强度来判断样品中兽药残留的浓度。该方 法具有高灵敏度、高选择性、操作简便等优点。
监测计划制定
制定兽药残留监测计划，定期对养殖、屠宰和肉品加工环节进行 抽样检测，评估兽药残留状况。
监管执法
加强兽药残留监管执法力度，对发现的违规行为进行严肃处理， 提高违法成本，形成有效震慑。
06
案例分析
某地区鸡肉中兽药残留案例分析
残留种类
主要涉及硝基咪唑类、硝基呋喃类和苯并咪唑类 等兽药。
ABCD
检测方法
采用酶联免疫法（ELISA）和质谱法（MS）进 行检测。
处理措施
对涉事养殖场进行严厉处罚，加强牛肉质量安全 监管，同时对牛肉进行追溯和召回。
某地区水产品中兽药残留案例分析
案例背景
检测方法
某地区水产品中检测出兽药残留超标，引 发消费者恐慌。
兽药残留控制与管理
养殖环节兽药残留控制
兽药使用规范
确保养殖过程中合理使用兽药，遵循用药剂量、给药途径、休药 期等规定，避免滥用和超标使用。
养殖档案建立
建立详细的养殖档案，记录兽药使用情况、动物健康状况等信息， 以便追溯和管理。
养殖环境卫生
保持养殖环境卫生，定期清理和消毒养殖场所，降低动物感染疾病 的风险，从而减少兽药使用和残留。
免疫学检测方法
酶联免疫吸附法（ELISA）
ELISA是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过酶标记抗体与抗原的结合反应，经过洗涤和显色等 步骤，实现对兽药残留的定量或定性检测。该方法具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优点。
荧光免疫分析法（FIA）
FIA是一种基于荧光标记的免疫分析方法，通过荧光信号的强度来判断样品中兽药残留的浓度。该方 法具有高灵敏度、高选择性、操作简便等优点。
第九章 动物性食品中兽药及化学物残留
第九章 动物性食品中兽药及化 学物残留
第一节 兽药残留的现状、危害及防控措施 第二节 残留分析方法
第一节 兽药残留的现状、危害及防控措施
一、现状
1、相关概念 兽药残留： 动物在用药后蓄积或贮存在动物细胞、组织和器官 内的药物或药物原形、代谢产物和杂质。 最高残留限量：对食品动物用药后产生的允许存在于食 品表面或内部的残留药物或其他化学物的最高含量或 最高浓度。 休药期：指食品动物从停药到许可屠宰或它们的产品许 可上市的间隔时间。
（2）养殖户方面 :
低的饲养水平导致动物健康受损，抗病力 下降，各种疾病均可感染，最终依靠药物， 形成无药不能饲养的局面 超量用药:我国饲料及浓缩料等大多加有药 物饲料添加剂。常用药物的耐药性日趋严 重而导致添加量越来越高，甚至比规定高 2～3倍 不遵守休药期的规定，把用药期内肉、蛋、 乳出售。
第二节
残留分析
概述 原理 分类 方法
一、概述
1、筛选方法：定性分析，灵敏度高，分析过程 简单，分析速度快。 常规方法：定量分析。色谱法。 确证方法：具有准确的定性分析和定量分析能力 参比方法：被国家或国际组织验证和接受的法定 性确证方法。 2、准确性----正确性 精密度----重复型、重现性 检测限（定性）、定量限（定量）
2）加强兽药残留监控、完善兽药残留监控体 系： 应加快国家、部以及省地级兽药残留机构的建 立和建设，使之形成自中央至地方完整的兽 药残留检测网络结构。 加大投入开展兽药残留的基础研究和实际监控 工作，初步建立起适合我国国情并与国际接 轨的兽药残留监控体系，实施国家残留监控 计划，力争将残留危害减小到最低程度。
优点: 不需要大量溶剂 可以净化很小体积的样品(50-100μl) 简化样品处理过程, 费用少 既可用于复杂样品中微量或痕量目标化合物的提 取、又可用于净化、浓缩或富集,是目前兽药残 留分析样品前处理中的主流技术。
第一节 兽药残留的现状、危害及防控措施 第二节 残留分析方法
第一节 兽药残留的现状、危害及防控措施
一、现状
1、相关概念 兽药残留： 动物在用药后蓄积或贮存在动物细胞、组织和器官 内的药物或药物原形、代谢产物和杂质。 最高残留限量：对食品动物用药后产生的允许存在于食 品表面或内部的残留药物或其他化学物的最高含量或 最高浓度。 休药期：指食品动物从停药到许可屠宰或它们的产品许 可上市的间隔时间。
（2）养殖户方面 :
低的饲养水平导致动物健康受损，抗病力 下降，各种疾病均可感染，最终依靠药物， 形成无药不能饲养的局面 超量用药:我国饲料及浓缩料等大多加有药 物饲料添加剂。常用药物的耐药性日趋严 重而导致添加量越来越高，甚至比规定高 2～3倍 不遵守休药期的规定，把用药期内肉、蛋、 乳出售。
第二节
残留分析
概述 原理 分类 方法
一、概述
1、筛选方法：定性分析，灵敏度高，分析过程 简单，分析速度快。 常规方法：定量分析。色谱法。 确证方法：具有准确的定性分析和定量分析能力 参比方法：被国家或国际组织验证和接受的法定 性确证方法。 2、准确性----正确性 精密度----重复型、重现性 检测限（定性）、定量限（定量）
2）加强兽药残留监控、完善兽药残留监控体 系： 应加快国家、部以及省地级兽药残留机构的建 立和建设，使之形成自中央至地方完整的兽 药残留检测网络结构。 加大投入开展兽药残留的基础研究和实际监控 工作，初步建立起适合我国国情并与国际接 轨的兽药残留监控体系，实施国家残留监控 计划，力争将残留危害减小到最低程度。
优点: 不需要大量溶剂 可以净化很小体积的样品(50-100μl) 简化样品处理过程, 费用少 既可用于复杂样品中微量或痕量目标化合物的提 取、又可用于净化、浓缩或富集,是目前兽药残 留分析样品前处理中的主流技术。
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阳江职业技术学院 生命科学与技术系
农兽药残留检测
• 在我国，鱼药、蜂药、蚕药也列入兽药管 理。 • 2.兽药残留 • 对食品动物用药后，动物产品的任何食用 部分中的原型药物或/和其代谢产物，包括 与兽药有关的杂质的残留。
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农兽药残留检测
• （二）兽药残留来源 • 现代养殖业日益趋向于规模化、集约化， 不可避免地带来了大量的疫病问题，为了 提高饲料报酬和满足人们对动物性食品的 需要，需要大量使用饲料药物添加剂，这 已成为保障我国畜牧业发展不可少的一环。
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农兽药残留检测
• 反相薄层色谱分析 TCs 时，溶剂系统中通 常加入草酸以消除金属离子的影响．在 RP -TLC 溶剂体系中通常含有磷酸、柠檬酸、 酒石酸、 EDTA 等以获得对TCs好的分离效 果，但脱尾现象比较严重；在 RP-TLC 溶 剂体系中加人草酸后，可以消除 TCs 与金 属离子的鳌合作用，减少脱尾现象。
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农兽药残留检测
• 当采用商业化试剂盒检测蜂蜜中的四环素、 金霉素和土霉素残留时发现其对金霉素具 有强烈的交叉反应活性。试剂盒对四环素 和金霉素的检测限均为 15 ug / kg ，但由于 所用抗体与土霉素的交叉反应活性较低， 对土霉素的检测限为 250 u g / kg ． • 实验表明，空白蜂蜜样品经缓冲液稀释 50 倍已足以系
农兽药残留检测
三、常见兽药的种类
1.抗生素类药物 2.磺胺类药物 3.硝基呋喃类药物 4.抗寄生虫类药物 5.激素类药物
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农兽药残留检测
分析方法主要有微生物分析法、放射化学法、 免疫法（包括放射免疫法、酶联免疫法、 荧光免疫法、化学发光免疫法）、气相色 谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法（包 括柱前和柱后衍生荧光法）、液相色谱-质 谱法和气相色谱-质谱法。
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农兽药残留检测
• 1.固相萃取 • SPE 由于不需要大容量的溶剂，样品基质中的四 环素类抗生素。又省时省力，固相萃取被广泛用 于分离和净化生物样品中的四环素类抗生素。 • TCs 具有苯环、多种活性官能团，因此各种如的 SPE 都能用于 TCs 的净化， SPE 主要包括 C18 柱、阳离子交换柱、苯基 SPE 柱等。 • 应用于分部环素类抗生素的固相萃取剂主要为反 相 C18 吸附剂。由于四环素类抗生素易于和金属 离子鳌合，为避免待测物在过固相萃取柱时的潜 在损失，一般先采用 EDTA 对反相固相萃取柱进 行预处理。
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农兽药残留检测
• 将四环素类抗生素从可食动物产品中分离 出来是一个相当复杂的步骤。 • 主要困难在于这些化合物在被分离时倾向 于与金属离子形成鳌合物或与样品基质成 分键合。 • 为提高提取效率，推荐采用EDTA 、柠檬 酸盐、琥珀酸盐或草酸等四环素类化合物 的竞争性鳌合剂。同时需要考虑采取适当 的提取条件以减少与蛋白质的键合。
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• 2.液-液分配 • 可通过将待测化合物从水相转移到不互溶 的有机相而直接去除基质成分。 • 存在问题：四环素类化合物由于极性太强， 在任何 pH 值都不能被定量转移入不互溶的 有机相。 • 当采用四丁基铵盐作为离子对试剂时，在 pH8.2 条件下采用二氯甲烷提取土霉素和四 环素的回收率超过 85 ％。
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• 由于四环素类药物普遍为低亲脂性，因此 在脂肪中检测不到四环素类药物残留。 • 相反，由于四环素类抗生素对钙具有亲和 性，能在家禽、猪、牛以及鱼类的骨骼组 织中蓄积。
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（二）四环素类抗生素的毒性与最大残留限 量 四环素类抗生素口服吸收良好，分布广泛， 易在骨骼和牙齿中沉积；可在肝脏中富集， 造成肝损害。
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抗生素类药物广泛地应用于各种感染性疾病， 其品种繁多。 市场上有售的常用的品种： 1. 四环素类 2. 大环内酯类 3. β-内酰胺类 4. 氨基糖甙类 5. 氯霉素类
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第一节 四环素类
• 一、四环素类化合物的结构和性质 • 四环素类抗生素（TCs）具有共同的基本母 核（氢化并四苯环），仅取代基有所不同。
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• （三）四环素类兽药的分析 • 四环素类抗生素残留的测定方法主要包括 微生物抑制法、 酶联免疫法、分光光度法、 薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱 一质谱法等。样品经过提取和净化后，四 环素类抗生素可通过薄层色谱或液相色谱 进行分离，再采用分光光度、荧光或质谱 检测系统进行定量浦定。
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三、四环素类兽药残留样品前处理
• （一）样品提取 • 由于四环素类抗生素的强极性性质，在生 物样品中易与蛋白质形成共轭物而提取困 难。稀无机酸可将四环素类化合物与蛋白 质分离，但四环素类化合物一旦进入水相， 由于其在有机相的分配系数较低，再将其 提取入易挥发的有机相进行浓缩和净化就 变得困难了。
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兽药残留
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一、兽药定义及兽药残留来源
• （一）兽药定义 • 1.兽药 • 是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者 有目的地调节动物生理机能的物质（含药 物饲料添加剂），主要包括：血清制品、 疫苗、诊断制品、中药材、中成药，化学 药品、抗生素、生化药品、放射性药品、 外用杀虫剂、消毒剂等。
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• 蜡状芽抱杆菌 ATCC 11778 是一种经典的用于分 析四环素类的微生物，其对金霉素的灵敏度为 0.005mg / L ，对四环素和土霉素的灵敏度为 0.025mg / L ，对二甲胺四环素的灵敏度为 0.001~0.002mg / L 。 • 相对于其他分析方法，微生物抑制法操作简便、 价格低廉、不需要精密仪器和复杂的样品前处理 过程，因而适合大量样品的筛选。 • 微生物抑制法的最大缺点是不能区分具体的四环 素种类，因此也难以进行定量检测。
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• 多数四环素类化合物对光敏感，而且在强 酸或碱性条件下不稳定，在弱酸性 （ pH=3 ）条件下形成差向异构体，在强 酸性（ pH < 2 ）条件下形成脱水产物。
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• 分析液体样品（如牛奶）中的四环素类抗 生素残留时，一般需要一个预离心步骤以 除去脂肪。 • 在净化步骤之前，还需采用乙酸盐缓冲液、 磷酸盐缓冲液对样品进行稀释。对于半固 体样品，如肌肉、肾脏、肝脏，通常需要 更强烈的样品预处理步骤以破碎组织。可 采用切碎机和组织均质器通过机械分散作 用来完成这一步骤。
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• 强酸或酸性脱蛋白剂非常适合用来降低四 环素类化合物与蛋白质的键合作用，但在 强酸性条件下四环素类抗生素易降解为脱 水产物。 • pH4 .0 的琥珀酸盐缓冲液、酸性乙睛和酸 性甲醇都被成功应用于四环素类抗生素的 提取。
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• 3.薄层色谱法 • 薄层色谱法（ TLC ）又分为正相薄层色谱（ NPTLC ）和反相薄层色谱（ RP -TLC ）。 • 正相薄层色谱一般使用纤维素、硅胶、硅藻土等 作为吸附层。总体而言，正相薄层色谱是一种简 单的、不需特殊设备的分离方法，但在制板时却 要花费大量时间消除 TCs 与金属离子的鳌合作用， 故通常在吸附剂和溶剂系统中加入 EDTA 以消除 金属离子的影响。
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• 目前，造成我国兽药残留的原因，大致有 如下； 1.非法使用违禁药物 • 滥用己烯雌酚给鸡催肥 ； • 盐酸克仑特罗（又叫瘦肉精 ）； • 在饲料中添加避孕药、雌性激素养黄鳝、 甲鱼 ；
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• 2.不遵守休药期规定 • 兽药用于防病或治病是有疗程规定的，有 病的动物也不可能无休止地吃药，特别是 药物饲料添加剂，都规定了休药期 。 • 如抗菌促生长的喹乙醇预混剂，体药期是 35天 。
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• （二）样品净化 • 在样品提取步骤获得的水相或有机相样品提取液 中待测四环素类抗生素的浓度可能非常低，而且 还可能含有共提取物。如果样品的最终溶液中含 有共提取物，会增加检测器的背景噪声，难以检 测痕量浓度水平的待测物质。为减少干扰和浓缩 待测化合物，初始样品提取液需要采用进一步的 净化步骤，如液一液分配、固相萃取、超滤、免 疫亲和色谱或在线微量富集技术。
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• 金霉素、土霉素和去甲基金霉素是 3 种由 微生物自然产生的四环素类药物，已经被 成功地从真菌中分离出来； • 其他四环素类药物如强力霉素、甲烯土霉 素、二甲胺四环素、毗甲四环素及四环素 则是通过半合成法制备的
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• 二、四环素类抗生素的毒性及其代谢 • 四环素类药物为广谱抗生素，是相互关系 密切的抑菌性抗生素，抗菌谱和毒性相似， 对多种α-溶血性链球菌、非溶血性链球菌、 革兰阴性杆菌、立克次体、螺旋体、支原 体属和衣原体属均有效。
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• 3、超剂量、超范围（对象）用药
4.不遵守有关标签的规定
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