蜜环菌多糖分离纯化及性质的研究
蜜环菌的化学成分研究
蜜环菌的化学成分研究对蜜环菌Armillaria mellea 发酵培养物的化学成分进行研究。
采用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化，根据波谱数据及与对照品对照鉴定化合物结构。
从蜜环菌发酵培养物中分离鉴定了10个化合物，分别为2-羟基-4-甲氧基-6-甲基苯甲酸（1），苔藓酸（2），蜜环菌戊素（3），麦角甾醇（4），染料木素（5），大豆素（6），胡萝卜苷（7），染料木苷（8），尿嘧啶（9）和甘露醇（10）。
化合物1～10均为首次从蜜环菌发酵培养物中分离得到，其中，化合物1～4，6，10在蜜环菌菌丝体或菌索中已有报道。
通过二维核磁波谱确证，首次报道化合物3以DMSO为溶剂的氢、碳谱数据，是对该类成分波谱数据的补充。
标签：蜜环菌；口蘑科；化学成分关于蜜环菌化学成分的报道集中于20世纪80年代初至90年代初，此后仅有少量研究[4-7]。
实验材料集中在菌丝体，对子实体[5-6 ]、菌索[7]和发酵液[8-9 ]的成分报道很少。
目前已知蜜环菌含有原伊鲁烷型倍半萜、二萜、甾醇、黄酮、有机酸、嘌呤、多糖等类成分[1]。
但其药效物质基础仍不明确，也导致了蜜环菌及其制剂长期缺乏合理的质量控制指标。
为了明确蜜环菌的主要药效物质，全面控制原料及其制剂的质量，确保临床用药的有效性、安全性，本实验对蜜环菌发酵培养物开展系统的化学成分研究，以期为蜜环菌及其制剂的质量控制与临床合理用药提供可资借鉴的依据。
本文报道从蜜环菌发酵培养物中分离鉴定的10个化合物，分别为2-羟基-4-甲氧基-6-甲基苯甲酸（1），苔藓酸（2），蜜环菌戊素（3），麦角甾醇（4），染料木素（5），大豆素（6），胡萝卜苷（7），染料木苷（8），尿嘧啶（9）和甘露醇（10）。
1 材料SGW X-4显微熔点仪（上海精密科学仪器有限公司），Reveleris 快速色谱系统（美国Grace公司），中压制备色谱仪（瑞士BUCHI公司），Bruker Avance 600核磁共振波谱仪（德国Bruker公司），Agilent 6130 SQ-MSD质谱仪（美国Agilent 公司）。
蜜环菌化学成分研究
蜜环菌化学成分研究蜜环菌[Armillaria mellea(Vahl.Ex.Fr)Quel.],别名榛蘑,蜜环蕈,属担子菌纲,口蘑科,蜜环菌属,是一种与传统名贵中药天麻共生的药食两用真菌。
蜜环菌的子实体具有与天麻相似的功效,临床上可用于治疗肢体麻木、眩晕、神经衰弱等症。
研究表明,蜜环菌的菌丝体和发酵液也具有与天麻相似的药理作用和临床疗效。
蜜环菌菌丝体中的化学成分主要为原伊鲁烷倍半萜芳香酸酯类,嘌呤类,有机酸类,其中原伊鲁烷倍半萜芳香酸酯类成分为其特征成分,具有抗菌,抗肿瘤等生物活性。
为了进一步开发利用蜜环菌的药用价值,亟待明确其药效物质基础。
本研究在借鉴前人研究工作的基础上,对液体发酵蜜环菌菌丝体的化学成分开展了系统研究,为其深入开发利用奠定了基础。
本文采用硅胶真空柱色谱(VLC),SephadexLH-20凝胶柱色谱,ODS柱色谱,制备薄层色谱,制备液相色谱及重结晶等分离纯化手段,从蜜环菌的石油醚和乙酸乙酯提取物中共分离出36个化合物,通过理化性质和各种光谱数据(1H-NMR,13C-NMR,1H-1HCOSY,HMBC,HSQC,NOESY 和 CD)鉴定出 34 个化合物,包括原伊鲁烷倍半萜芳香酸酯类化合物32个,黄酮类化合物2个,其中 16 个为新化合物。
化合物分别为:10α,13α-dihydroxyarmillaridin(MHJ1*)、蜜环菌子素(MHJ 2)、蜜环菌丑素(MHJ 3)、mellolide B(MHJ 4)、4’-methoxyarmilane(MHJ5*)、4’-methoxy-5’-chloroarmillane(MHJ6)、蜜环菌辛素(MHJ 7)、蜜环菌壬素(MHJ 8)、蜜环菌己素(MHJ 9)、蜜环菌戊素(MHJ 10)、蜜环菌癸素(MHJ 11)、10-dehydroxymelleoloede(MHJ 12)、4’-demethoxyarmillaribin(MHJ 13*)、armillaridine(MHJ 14*)、2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillaridiene(MHJ 15*)、(4R,5S,7R,9S,13R)-2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin(MHJ16*)、5’-chloroarmillaridine(MHJ 17*)、(4R,5R,7R,9S,13R)-2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin(MHJ18*)、蜜环菌甲素(MHJ 19)、蜜环菌乙素(MHJ 20)、蜜环菌丁素(MHJ 23)、1-dehydroxyarmily everninate(MHJ 24*)、(4R,5R,7R,9R,1 S)-2‘,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin(MHJ 25*)、蜜环菌寅素(MHJ26)、4-dehydroxyarmillarin(MHJ 27*)、4-dehydroxyarmillaridin(MHJ 28*)、4’-methoxyarmillasin(MHJ 29*)、4’-methoxy-4-dehydroxyarmillasin(MHJ 30*)、大豆素(MHJ 31)、4’-methoxy-8-hydroxymelledonal(MHJ 32*)、染料木素(MHJ 33)、10β,13α-dihydroxymelleolide(MHJ34*)、蜜环菌卯素(MHJ35)、蜜环菌丙素(MHJ36);其中 MHJ1、MHJ 5、MHJ13-18、MHJ24-25、MHJ 27-30、MHJ 32和MHJ 34为新化合物。
蜜环菌菌种选育及多糖药理活性的研究进展
蜜环菌菌种选育及多糖药理活性的研究进展
张鹏;王延锋;史磊;闫水华;王金贺;刘姿彤;葛欣然;赵静
【期刊名称】《食药用菌》
【年(卷),期】2024(32)2
【摘要】蜜环菌是我国珍稀食药用菌,也是天麻生长发育必不可少的伴生菌,蜜环菌优良菌种的培育关系到天麻产业的健康可持续发展。
综述蜜环菌育种研究进展,指出其优良菌种“易退化、难复壮”问题一直困扰着生产,解决这一问题须结合生产实践进行大量研究,创制优异种质资源,加强种源管理和维护;综述蜜环菌重要生物活性物质蜜环菌多糖在降血糖、抗氧化、抗衰老、免疫增强、机体保护和其他药理活性方面的研究进展,展望应用前景。
【总页数】6页(P104-108)
【作者】张鹏;王延锋;史磊;闫水华;王金贺;刘姿彤;葛欣然;赵静
【作者单位】黑龙江省农业科学院牡丹江分院;牡丹江医科大学;牡丹江大学
【正文语种】中文
【中图分类】S646
【相关文献】
1.野生和人工培养蜜环菌菌索多糖含量及免疫活性的比较
2.蜜环菌多糖免疫调节活性的实验研究
3.培养方式对蜜环菌胞内多糖合成与抗眩晕症活性影响的研究
4.黄绿蜜环菌硒多糖抗氧化活性及抑菌活性研究
5.耐高温蜜环菌胞外多糖含量及抗氧化活性
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多糖的纯化实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖纯化的基本原理和方法。
2. 学习并运用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
3. 通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
二、实验原理多糖是一类重要的生物大分子，具有广泛的生物活性。
然而，天然多糖往往伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等杂质，这些杂质会干扰多糖的结构鉴定和活性分析。
因此，对多糖进行纯化是研究多糖生物活性的关键步骤。
多糖的纯化主要包括以下步骤：1. 提取：采用热水浸提法或超声波辅助提取法等从植物、动物或微生物中提取多糖。
2. 净化：去除提取液中的蛋白质、脂肪和色素等杂质。
3. 纯化：利用DEAE-Sephadex A-50柱层析技术对多糖进行纯化。
4. 测定：通过比色法测定纯化前后多糖的浓度，评价纯化效果。
三、实验材料1. 实验药品：DEAE-Sephadex A-50柱层析材料、氨水、盐酸、无水乙醇、葡萄糖标准品等。
2. 实验仪器：层析柱、紫外可见分光光度计、离心机、移液器、容量瓶等。
四、实验方法1. 提取：称取一定量的多糖样品，加入适量蒸馏水，用超声波辅助提取法提取多糖。
提取液离心分离，取上清液作为待纯化样品。
2. 净化：将待纯化样品加入适量的氨水，调节pH值至7.0，静置一段时间。
离心分离，取上清液作为待纯化样品。
3. 纯化：将DEAE-Sephadex A-50柱层析材料预处理后，装入层析柱。
将待纯化样品上柱，用蒸馏水进行梯度洗脱。
收集洗脱液，利用紫外可见分光光度计检测洗脱液中的多糖含量。
4. 测定：配制葡萄糖标准溶液，绘制标准曲线。
将纯化后的多糖样品按照比色法进行测定，计算纯化前后多糖的浓度。
五、实验结果1. 提取：超声波辅助提取法提取多糖，提取率约为70%。
2. 净化：氨水处理去除蛋白质、脂肪和色素等杂质，纯化率约为90%。
3. 纯化：DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化，纯化率约为95%。
4. 测定：纯化前后多糖浓度分别为1.5 mg/mL和0.7 mg/mL，纯化效果良好。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
黄绿蜜环菌的研究概述
。刘 葳 等 用 80℃ 热 水 浸 提， Sevag 法 脱 蛋 白，
H2 O2 脱色， 95% 乙醇沉淀得到粗多 糖， 通 过 SerharoseCL 一 6B 凝胶层析拄分离纯化粗多糖得到两种多糖纯品。 黄 绿蜜环菌水溶性多糖由 α 一 D 一木吡喃糖和 β—D 一阿 拉伯吡喃糖组成， 其连接方式主要以 1 —4 连接为主链， 1 —6 连接为 支 链
Review on the Research of Armillarialuteo viren
Zhou Lianyu （ College of Biology and Geography， Qinghai Normal University， Qinghai 810008 ， China） Abstract：The research progress of biological characteristics， artificial cultivation and chemical components were reviewed in the paper and developing prospect were also discussed briefly here. It would provide the basis for the further development and utilization of Armillarialuteo － viren in the future. Key words：Armillarialuteo － viren；Artifical cultivation；Chemical component；Developing prospect
等作用， 黄绿蜜环菌的研
生黄蘑菇子实体中经组织分离后得到原始菌丝， 并经提纯 复壮后得到供试菌株。 野生黄蘑菇菌丝生长温度范围为 15 ～ 30℃ ， 最适温度范围为 20 ～ 25℃ 。菌丝适宜在偏酸性 pH 值适宜范围为 5. 5 ～ 6. 5 。 覆土培养出菇 环境中生长， 性状出现两种情况， 一种为菇柄长、 盖小、 呈黄色， 出菇不 久后， 先变黑后自溶；另一种为覆土层表面出现黄色米粒 状颗粒， 后逐渐变大表面有黄色小凸体， 几 d 后， 从顶部开 一小孔， 后逐渐变成耳状， 且有香味
蜜环菌论文：蜜环菌 多糖 分离 抗氧化
蜜环菌论文：蜜环菌子实体多糖抗氧化活性的研究及其速溶剂的研制【中文摘要】蜜环菌(Armillaria spp.)属于真菌界、担子菌门、担子菌纲、伞菌目、白蘑科、蜜环菌属,又名榛蘑。
蜜环菌是一种食药用菌,含有多种化学成分,其中最主要的是多糖。
多年来,经大量的试验研究表明,蜜环菌多糖具有多种生物活性,并且开发生产出多种蜜环菌制剂,但产品大多属于保健产品的第二代。
蜜环菌各种功能的有效成份到底是什么、主要的活性部位究竟有哪里等问题并没有研究透彻。
本论文对人工栽培的蜜环菌子实体水溶性多糖进行了分离纯化及抗氧化活性的系统研究,相信能为其药理作用方面提供理论基础,对蜜环菌多糖的应用前景和开发现状有重要价值。
主要研究内容与结论如下：1.将三种提取技术应用于蜜环菌多糖的提取研究。
以蜜环菌粉为材料,利用正交试验方法分别考察了热水浸提法、超声波浸提法、酶提取法三种提取方法,优化了提取工艺。
研究表明：热水浸提得到的蜜环菌多糖得率为5.96%；超声波浸提方法得到的蜜环菌多糖得率为5.38%；酶法提取得到的蜜环菌多糖得率为6.25%。
和热水浸提法相比,超声提取具有提取时间短、能耗低、效率高等特点,而酶提取法能显著提高多糖得率。
因此,酶法提取是一种较理想的多糖提取方法。
2.对蜜环菌子实...【英文摘要】Armillaria(Armillaria spp.) isEukaryota,Basidiomycota,Basidiomycetae,Hymenomycetes,Tricholomataceae,Armillaria (Fr.:Fr.) Staude.It was also known as Hazel mushroom Armillaria was a kind of edible and medicinal fungi.It contained a lot of chemical components. The chief chemical component of it was the polysaccharides. Over the years, the number of experimental studied had shown that Armillaria polysaccharides had a variety of biological activities.And many kinds of Armillaria preparations had been produced...【关键词】蜜环菌多糖分离抗氧化【英文关键词】Armillaria polysaccharide separation antioxidant【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848【目录】蜜环菌子实体多糖抗氧化活性的研究及其速溶剂的研制摘要4-5Abstract5第一章前言8-17 1.1 国内外研究现状8-15 1.2 本研究的目的意义及内容15-17第二章试验材料与方法17-27 2.1 材料与设备17 2.2 方法17-27第三章结果与分析27-46 3.1 葡萄糖标准曲线27 3.2 热水浸提蜜环菌多糖的研究27-30 3.3 超声波浸提蜜环菌多糖的研究30-34 3.4 酶法提取蜜环菌多糖的研究34-39 3.5 乙醇分级得到的蜜环菌粗多糖39 3.6 粗多糖的凝胶柱层析39-40 3.7 蜜环菌多糖体外抗氧化40-44 3.8 蜜环菌速溶冲剂配方优化44-45 3.9 蜜环菌速溶冲剂产品分析结果45-46第四章结论46-47第五章讨论47-48参考文献48-51致谢51-52作者简介52。
分离纯化多糖实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习多糖的提取、分离和纯化方法。
2. 掌握多糖的鉴定技术。
3. 了解多糖的化学性质和生物活性。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
本实验以某植物为原料，通过水提醇沉法提取多糖，采用离子交换层析和凝胶色谱法对多糖进行分离纯化，并对其结构进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：某植物、无水乙醇、蒸馏水、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠、硫酸铜、苯酚、硫酸、考马斯亮蓝G-250、氯化钡、明胶等。
2. 仪器：分析天平、电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、凝胶色谱仪、紫外-可见分光光度计、磁力搅拌器、离心机、层析柱等。
四、实验方法1. 多糖提取（1）将某植物样品干燥、粉碎，过60目筛。
（2）称取2g样品，加入50mL蒸馏水，在80℃水浴中提取2h。
（3）将提取液过滤，滤液浓缩至一定体积。
（4）加入无水乙醇，使溶液中多糖沉淀。
（5）离心分离，收集多糖沉淀。
2. 多糖分离纯化（1）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，加入一定量的氯化钠溶液，调节pH值至7.0。
（2）将溶液通过DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（3）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（4）离心分离，收集多糖沉淀。
（5）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，通过Sephadex G-100凝胶色谱柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（6）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（7）离心分离，收集多糖沉淀。
3. 多糖鉴定（1）采用苯酚-硫酸法测定多糖的糖含量。
（2）采用考马斯亮蓝G-250法测定多糖的蛋白质含量。
（3）采用硫酸-咔唑法和氯化钡-明胶法测定多糖中的糖醛酸和硫酸基含量。
（4）采用高效液相色谱法测定多糖的分子量。
五、实验结果与分析1. 多糖提取提取得到的粗多糖得率为5%。
多糖的分离纯化及性质表征
一、多糖的提取方法
生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖和动物多糖3大类。
多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在 提取之前是否做预处理。
动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般需要先加入丙酮 乙醚乙醇或乙醇乙醚的混合液进行回流脱脂，释放多糖；植 物多糖提取时需注意一些含脂较高的根茎叶花果及种子类， 在提取前，应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理 目前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化 提取法等
（2）超声波辅助提取法
超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生 物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中； 空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有 利于有效成分的溶出； 热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的， 可使被提取成分的生物活性尽量保持不变。
（2） 酸提法
为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提 取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下 难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多 糖沉淀析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到 的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中 糖苷键的断裂，因此，只在一些特定的多糖提取中占有优势 。且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
二、多糖的分离纯化
粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质，必须分别 除去。多糖的分离纯化主要包括脱蛋白、脱色、脱盐和除去小
分子杂质。
1.脱蛋白
常用方法：Sevage法、三氟三氯乙烷法 、三氯乙酸法和酶解法 Sevage法：根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用 Sevage 试剂（氯仿∶正丁醇=4∶1的混合液），与多糖提取液5 ：1的比例，置于分液漏斗中剧烈振摇20～30min ，静置。蛋白 质变性生成凝胶，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。 此种只能除去少量蛋白质，效率不高，须反复多次，多糖有损 失 。但此方法比较温和，在避免多糖降解上效果较好，如配合 加入一些蛋白质水解酶，用Sevage法效果更佳。
蜜环菌的化学成分及药理作用研究_宋成芝
蜜环菌的化学成分及药理作用研究宋成芝1,徐燕2 (1.昭通师范高等专科学校化学系,云南昭通657000;2.广西海洋研究所海洋生物技术重点实验室,广西北海536000)摘要 蜜环菌是一种十分重要的药食兼用真菌,又是中药天麻的共生菌,具有很高的研究与开发价值。
笔者对蜜环菌的化学成分、药理作用及产品开发情况进行了综述。
关键词 蜜环菌;化学成分;药理作用;产品开发中图分类号 R 284.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2010)10-05119-02C h e m i c a l C o n s t i t u e n t s a n dP h a r m a c o l o g i c a l F u n c t i o n o f A r m i l l a r i a m e l l e a S O N GC h e n g -z h i e t a l (D e p a r t m e n t o f C h e m i s t r y ,Z h a o t o n g T e a c h e r 's C o l l e g e ,Z h a o t o n g ,Y u n n a n 657000)A b s t r a c t A r m i l l a r i a m e l l e a i s a k i n d o f f a m o u s m e d i c i n a l f u n g u s s y m b i o t i c w i t h C h i n e s e m e d i c i n a l h e r b G a s t r o d i a e l a t a B l u m e .T h e c h e m i c a l c o n s t i t u e n t s ,p h a r m a c o l o g i c a l f u n c t i o n a n d p r o d u c t d e v e l o p m e n t o f A r m i l l a r i a m e l l e a w e r e r e v i e w e di n t h i s p a p e r .K e y w o r d s A r m i l l a r i a m e l l e a ;C h e m i c a l c o n s t i t u e n t s ;P h a r m a c o l o g i c a l f u n c t i o n ;P r o d u c t d e v e l o p m e n t作者简介 宋成芝(1978-),女,安徽霍邱人,硕士,助教,从事天然产物和药用植物研究。
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涤、 得到的粗多糖上 7898 : 纤维素 （ 柱层析， 用蒸馏水、 012341 法除蛋白、 !"/ 5! 6! 脱色， 65 : ） "& ". ; "& . <$% = > 的 可以得到中性多糖和几种酸性多糖。中性多糖上 01@A3B1C D : +." 柱层析， 用蒸馏水洗脱， 得到一种多 (3?% 梯度洗脱， 糖 9， 多糖 9 为纯多糖。 在 *"" ; *"""E< : + 范围内摄得多糖 9 的红外光谱表明其含有 ! : 糖苷键。 多糖 9 的完全酸水 解液用硅胶 DF!.* 薄层层析， 氯仿 : 甲醇 G H"I *" J 与丙酮 : 水 G )HI * J 展层， 以及纸层析， 丙酮 : 水 G )HI * J 展层， 苯胺 : 二 苯胺显色， 证明其组成单糖为葡萄糖。 考马斯亮兰 D : !." 反应阴性、 茚三酮反应阴性、 双缩脲反应阴性， 聚丙烯酰胺凝 胶电泳后、 考马斯亮兰 K : !." 染色无蛋白质带， 都证明其不含蛋白质。 关键词 蜜环菌 深层发酵 胞外多糖 分离纯化 多糖性质
它们二者形成菌根 + # , 。我国古代 柱，用蒸馏水洗脱，流速 "’ /;!A& @ ABC0 1’ !A& @ 管收 $%5%:$0"1 . 的共生菌， 收集洗脱峰部位洗脱液， 医药学家均认为天麻有广泛的治疗效果， 是镇痉息风、 集， 苯酚 K 硫酸法检测， !"D 治疗痫搦惊悸的重要药物。近年来的研究还发现天麻 鼓风浓缩， 干燥， 得多糖 4。 具增智、 健脑、 延缓衰老的作用， 对老年性痴呆症有一 定疗效 + ( , 。 有大量的资料证明， 蜜环菌的菌丝和发酵液 都具有与天麻相类似的药理作用和临床疗效 + 1 , 。综上 所述， 蜜环菌的药用价值是相当高的， 同时， 蜜环菌的 化学成分也很丰富，但对于每一种成分的具体功能还 不是很清楚， 蜜环菌多糖的研究报道很少， 胞外多糖的 研究还未见报道。为了找到一条高效快速利用蜜环菌 的药用价值的途径， 完善产业化生产的工艺， 以及进一 步搞清楚蜜环菌的有效成分， 挖掘真菌多糖资源， 为利 用蜜环菌提供更多的依据， 进行了有关蜜环菌胞外多糖 的研究， 本文报道蜜环菌胞外多糖的分离纯化及性质。 / /’ / /’ /’ / /’ /’ # 材料与方法 材料 菌种： 由华中农业大学真菌室提供。 菌种保存斜面培养基： 234 斜面。 多糖生产培养基： 蔗糖 #5 ， 葡萄糖 /5 ， 蛋白胨 /’ #’ 1 多糖的红外光谱分析 + I , M 将干燥的多糖 4 用 =U? 压片法做红外光谱分析。 以 /’ #’ ! 糖的薄层层析 + * , M 多糖 4 完全酸水解 + /" , ， 用毛细管在距离薄层板下端 /’ ! 硅胶 TV#!1 制板活化， 每隔 # OA 点葡萄糖标样、 木糖标样、 木糖与葡 OA 处， 萄糖的混合液、多糖 4 的完全酸水解液，取点好样的 薄层板置于盛有展开剂的层析缸中， 密闭展层。展开 展层 /!"ABC。#） 剂为： 氯仿： 甲醇 W L"： 丙酮： 水 /） 1"， 展开 /""ABC， 将显色剂喷雾在展开过的薄板 W *L： 1， 上， 于 I!D 显色 ("ABC， 观察斑点的颜色， 同时用直尺 量糖移动的距离和前沿线距离， 以计算糖的 XY 值。显 色剂为苯胺 K 二苯胺显色剂。 /’ #’ L 糖的纸层析 M 取新华一号滤纸，剪成 /# N 先后经过 "’ /) <Q& 浸泡 #1E、 蒸馏水洗涤 #(OA 大小， K （ ） 至无 Q& 时为止 用 "’ /5 47)9( 检验 、*!5 酒精漂 洗 /"ABC、 无水酒精漂洗 /"ABC、 乙醚漂洗 /"ABC， 然后 在 (" Z 1"D 烘干。用前在展层系统中平衡 #1E， 用毛
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食品科学
!基础研究
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溶解试验： 试验多糖在丙酮、 乙醚、 冷水中 *!5 乙醇、 试验多糖 4 与碘 K 碘化钾液的显色反 的溶解性。 - #） - (） - 1） 糖的还原性试验： 多糖 4 与斐林试剂反应。 应。 多糖 4 中糖醛酸的检出：用 3B[EH 反应 （ 硫酸 K 咔唑
+ // , /## 法） 检测。 - !） 蛋白质成分的检测$! ， ： !与考马斯
!基础研究
结论与讨论
食品科学
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有直接的、 较强的蛋白质降解作用， 在产品的贮藏、 销 售过程中进一步导致一部分氨基酸脱羧、脱氨，生成
尽管保加利亚杆菌 G >W J 不 胺及胺类物质，造成腐败现象，降低了产品的货架期 ’& + 由以上研究试验可知， 脱氨， 这种菌种可适于短货架 直接分解蛋白质和脂肪， 乳酸链球菌 G 0N J 不分解脂肪， 和微生物安全性 G 当羧、 但它们的耐盐性和耐亚硝酸盐性很差， 不适宜作为制品 是一种理想的肉用乳酸菌种。 嗜酸乳杆菌 G >3 J 对食盐和 亚硝酸盐有一定的耐受性，可做为低盐肉制品发酵菌 种， 或和植物乳杆菌配合作为混合肉制品发酵剂使用。 ’& ! 关于肉制品发酵菌种对蛋白质降解能力的要 求，目前国内一研究者选用对蛋白质有直接分解能力 菌种， 如啤洒片球菌、 乳酸链球菌等， 其目的是在发酵 过程中通过蛋白质的分解，促进肉制品风味物质的形 成。而我们认为， 发酵类肉制品风味物质的形成， 主要 是由于在原料肉自身内源性蛋白酶作用下，蛋白质降 解产生氨基酸、多肽等风味物质的，并且这种变化更 多的是在后发酵 G 贮藏 J 过程形成的。若加入的发酵剂