多糖的分离纯化及性质表征
多糖的分离纯化及生理作用
多糖的分离纯化及生理作用多糖包括植物多糖、动物多糖和微生物多糖。
人们已发现多糖不仅是机体的能量来源和骨架成分，而月还具有多糖具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成作用等多种生物活性。
多糖的提取和纯化1. 多糖的提取1.1 热水浸提法：其步骤为：原料→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或0.1－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）,干燥后可得粉末状的粗多糖。
1.2 微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（28.46％）。
多糖的分离纯化及分析
多糖的分离纯化及分析一、多糖的提取方法（一）溶剂提取法1、水提法水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法.多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂.用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗滤，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置5h，多糖的质量分数和得率均较高.2、酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
3、超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术.（二）生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
（三）超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。
（四）微波提取微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。
二、多糖的分离纯化（一）多糖的分离采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．1、按溶解性不同分离（1）分步沉淀法分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．（2）盐析法盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。
多糖的提纯化技术
多糖的提纯化技术
溶剂提取法
(1) 水提法：以水为溶剂，可采用热水浸提或冷水浸提（植物多糖多采用热水浸提，可直接或离心去除杂质），由于多糖不溶于乙醇，可通过沉淀将多糖提纯出来。
水提法的确缺点在于温度高、耗时长、提取率低。
(2) 酸提法：有些含酸性基团的多糖在酸性条件下不易溶解，可用盐酸或乙酸处理后，再用乙醇或不溶性络合物将多糖沉淀出来。
酸提法容易破坏多糖的空间结构，一般较少使用。
(3) 碱提法：一些含有糖醛酸的多糖和酸性多糖在碱性条件下都比较稳定，可提高多糖的提取率，一般用硼氢化钠或硼氢化钾作为溶剂。
碱提法的不足之处在于某些多糖在碱性较强时会降解，而且容易影响成品的色泽和风味。
多糖分离纯化
多糖分离纯化简介多糖又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物。
多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质。
凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均称为多糖。
多糖在自然界分布极广，亦很重要。
其广泛分布于自然界高等植物、藻类、微生物与动物体内。
多糖是细胞中一类非常重要的大分子物质。
糖类是细胞膜上受体分子的重要组成成分，是细胞识别和信息传递等功能的参与者，是一类非特异性广谱免疫调节剂和重要的生命物质材料，广泛参与各项生命活动。
近年来的研究表明，多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面显示出良好的应用前景，是现代医学和食品功能化学共同关注的焦点。
天然多糖来源广泛且化学成分复杂，粗多糖中通常伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等物质，不利于多糖的结构鉴定及后续活性分析，因此需要进行分离纯化：即除杂和组分分离。
多糖类物质结构复杂，由不同分子质量的中性或酸性糖混合组成，具有微观不均一性，其分析和结构解析一直是糖组学和糖生物学研究的重点。
多糖分离纯化的核心是获得低分散性、电荷均一的多糖，以适宜后续结构解析和活性功能的深入分析，故多糖需分离纯化才能得到均一性多糖。
百欧泰经过多年技术积累，建立了完善的多糖提取和纯化平台。
样本经研磨粉碎后、热水提取、醇沉、除蛋白、脱色、脱脂等一系列成熟的工艺后得到粗多糖，粗多糖经离子交换色谱及凝胶色谱分离纯化后可获得对应单一、均一的多糖组分。
此外根据原料中多糖特性，针对性地选择预处理和分离纯化方法（柱层析、膜分离法或者分级沉淀法等），可高效分离纯化各种中性多糖、酸性多糖和黏多糖以及糖复合物等。
多糖分离纯化服务多种方法1 柱色谱法纤维素柱层析法：实现分级解离；但流量小、耗时长阴离子交换柱层析法：可用于中性和酸性多糖的分离，以及不同中性多糖的分离凝胶柱层析法:实现连续进样、在线监测、重复性好，样品收集和纯化效率高2 分级沉淀法操作原理：不同的多糖组分在低醇或酮中有不同的溶解度3 盐析法操作原理：不同分子量的多糖组分在一定浓度的盐溶液中其溶解度不同4 超声波辅助提取法利用超声波的机械效应和空化作用破坏细胞壁、细胞膜等生物组织。
天然产物中多糖的提取、纯化与鉴定
实验三、天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定第一部分多糖的提取、纯化1、目的要求了解多糖提取和纯化的一般方法。
2、实验原理多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类重要的生物大分子。
早在60年代，人们就发现多糖复杂的生物活性和功能。
它可以调节免疫功能，促进蛋白质和核酸的生物合成，调节细胞的生长，提高生物体的免疫力，具有抗肿瘤、抗疡和抗爱滋病(AIDS)等功效。
由于高等真菌多糖主要是细胞壁多糖，多糖组分主要存在于其形成的小纤维网状结构交织的基质中，利用多糖溶于水而不溶于醇等有机溶剂的特点，通常采用热水浸提后用酒精沉淀的方法，对多糖进行提取。
影响多糖提取率的因素很多，如：浸提温度、时间、加水量以及脱除杂质的方法等都会影响多糖的得率。
多糖的纯化，就是将存在于粗多糖中的杂质去除而获得单一的多糖组分。
一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级。
常用的去除多糖中蛋白质的方法有：Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法，这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀，其中Sevag方法脱蛋白效果较好，它是用氯仿：戊醇或丁醇，以4：1比例混合，加到样品中振摇，使样品中的蛋白质变性成不溶状态，用离心法除去。
本实验采用Sevag法(氯仿：正丁醇＝4：1混合摇匀)进行脱蛋白，用DEAE Sepharose 层析柱进行纯化，然后合并多糖高峰部分，浓缩后透析，冻干，得多糖级分。
3、试剂和器材一、试剂平衡缓冲溶液：0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.2。
洗脱液：A: 0.1mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2; B: 0.5mol NaCl, 0.01 mol Tris-HCl PH=7.2。
氯仿、正丁醇、乙醇(95％)等，均为分析纯。
二、材料灰树花子实体。
三、器材DEAE Sepharose Fast Flow，旋转真空蒸发仪，摇床，离心机，层析柱：26×10。
4、操作方法一、粗多糖的提取将多糖子实体切碎烘干后称量，采用热水浸提法，每次原料和水之比均为1：5，浸提温度为70℃－80℃，浸提时间3－5h，共提取4次，合并4次浸提液。
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究
多糖的提取分离纯化及分析鉴定方法研究多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的高分子化合物。
多糖具有广泛的应用价值，包括食品、医药、化妆品和生物材料等领域。
因此，对多糖的提取、分离纯化以及分析鉴定方法的研究具有重要意义。
一、多糖的提取方法1.物理法物理法主要包括热水提取法、酸碱提取法和微波提取法等。
热水提取法是最常用的提取方法之一，通过加热使细胞壁破烂，有利于多糖的溶出。
酸碱提取法则是利用酸碱反应将多糖从细胞壁中释放出来。
微波提取法则是利用微波辐射对样品进行加热，加速多糖的溶解和释放。
2.化学法化学法主要包括酶解法、酶解分离法和酸碱水解法等。
酶解法是利用特定的酶对样品进行处理，将多糖分解为单糖，然后进行分离和纯化。
酸碱水解法则是通过酸碱反应将多糖水解为低聚糖和单糖。
3.生物法生物法是利用微生物或植物产生的酶对多糖进行酶解和分离。
生物法具有选择性强、工艺简单等优点，在多糖提取中得到了广泛的应用。
二、多糖的分离纯化方法多糖的分离纯化方法主要包括离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法和亲和色谱法等。
1.离子交换色谱法离子交换色谱法是利用离子交换树脂对多糖进行分离的方法。
通过控制溶液pH值和离子强度等条件，使不同电荷的多糖在树脂上发生吸附反应，实现多糖的分离纯化。
2.凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法是根据多糖分子量的大小来进行分离的方法。
多糖分子量越大，越容易在凝胶渗透色谱柱的孔隙中滞留，分离得到纯度较高的多糖。
3.亲和色谱法亲和色谱法是利用多糖与一些特定配体之间的相互作用进行分离的方法。
例如，可以利用亲和色谱柱上的特定配体与多糖的特定结构之间的结合作用，实现多糖的分离和纯化。
三、多糖的分析鉴定方法多糖的分析鉴定方法主要包括红外光谱法、紫外光谱法、核磁共振波谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等。
1.红外光谱法红外光谱法能够通过检测样品吸收、散射或透射特定波长的红外光来分析多糖的结构和功能。
2.紫外光谱法紫外光谱法是利用多糖分子在紫外可见光区域的吸收特性进行分析。
分离纯化多糖实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习多糖的提取、分离和纯化方法。
2. 掌握多糖的鉴定技术。
3. 了解多糖的化学性质和生物活性。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的生物大分子，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。
本实验以某植物为原料，通过水提醇沉法提取多糖，采用离子交换层析和凝胶色谱法对多糖进行分离纯化，并对其结构进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：某植物、无水乙醇、蒸馏水、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠、硫酸铜、苯酚、硫酸、考马斯亮蓝G-250、氯化钡、明胶等。
2. 仪器：分析天平、电热恒温水浴锅、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、凝胶色谱仪、紫外-可见分光光度计、磁力搅拌器、离心机、层析柱等。
四、实验方法1. 多糖提取（1）将某植物样品干燥、粉碎，过60目筛。
（2）称取2g样品，加入50mL蒸馏水，在80℃水浴中提取2h。
（3）将提取液过滤，滤液浓缩至一定体积。
（4）加入无水乙醇，使溶液中多糖沉淀。
（5）离心分离，收集多糖沉淀。
2. 多糖分离纯化（1）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，加入一定量的氯化钠溶液，调节pH值至7.0。
（2）将溶液通过DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（3）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（4）离心分离，收集多糖沉淀。
（5）将多糖沉淀溶解于蒸馏水中，通过Sephadex G-100凝胶色谱柱，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液。
（6）将洗脱液浓缩，加入一定量的无水乙醇，使多糖沉淀。
（7）离心分离，收集多糖沉淀。
3. 多糖鉴定（1）采用苯酚-硫酸法测定多糖的糖含量。
（2）采用考马斯亮蓝G-250法测定多糖的蛋白质含量。
（3）采用硫酸-咔唑法和氯化钡-明胶法测定多糖中的糖醛酸和硫酸基含量。
（4）采用高效液相色谱法测定多糖的分子量。
五、实验结果与分析1. 多糖提取提取得到的粗多糖得率为5%。
多糖分离纯化的基本原则和方法
多糖分离纯化的基本原则和方法多聚糖(polysaccharide)，简称多糖，常由一百个以上甚至几千个单糖基通过糖苷键连接而成的，其性质已大不同于单糖，如甜味和强的还原性已经消失，广泛存在于动物细胞膜和植物、微生物的细胞壁中，是构成生命的四大基本物质之一，与生命功能的维持密切相关。
近年来，大量研究表明多糖除了有增强免疫功能、抗肿瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系统保护作用的生物学效应外，还有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗辐射、抗凝血等作用。
1、基本原则在不破坏多糖活性的前提下进行多糖的分离纯化。
尽量不引入新的杂质，或引入的新杂志易于除去，如小分子盐类可经过透析作用除去，铵根离子可通过加热挥发除去等[1]。
2、分离纯化方法多糖的生物活性倍受关注，但不少多糖的提取方法和工艺尚未成熟，基于效率、成本多方面的考虑，各种方法的开发、比较、分析是研究工作的焦点之一。
目前多糖提取方法主要有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声法、微波法、超临界流体萃取法。
首先要根据多糖的存在形式及提取部位不同，决定在提取之前是否做预处理：提取时需注意对一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在用水提取前，应先加入甲醇或l：l的乙醇乙醚混合溶液或石油醚进行脱脂，而对含色素较高的根、茎、叶、果实类，需进行脱色处理。
2.1多糖的提取与分离方法由于各类多糖的性质及来源不同，所以提取方法也各有所异，主要归纳为以下几类：第一类难溶于水，可溶于稀碱液的主要是胶类，如木聚糖及半乳糖等。
原料粉碎后用0.5mol/L NaOH水溶液提取，提取液经中和及浓缩等步骤，最后加入乙醇，即得粗糖沉淀物。
第二类易溶于温水，难溶于冷水的多糖，可用70~80℃热水提取，提取液用氯仿：正丁醇（4:1）混合除去蛋白质，经透析、浓缩后再加入乙醇即得粗多糖产物[2]。
第三类粘多糖的提取。
在组织中，粘多糖与蛋白质以共价键结合，故提取时需设法破坏粘多糖与蛋白质之间的结合键。
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2.3多糖的沉淀
沉淀法是分离生物活性物质的传统方法，在生物活性 物质提取中常用于初步分离。
有机溶剂沉淀法
在提取液中加入与水互溶的有机溶剂，使系统介电常 数减小，多糖溶解度减小而发生沉淀。
常用的有机溶剂有乙醇、甲醇、丙酮等。
2.5脱蛋白
粗多糖中往往混杂着蛋白质、色素、低聚糖等杂质， 必须分别除去。
多糖
2.1材料的预处理
根据不同原料性质，对一些样品进行粉碎处理，含脂 高应先脱脂，含色素高需进行脱色，通常采用丙酮、 乙醚、乙醇进行预处理以达到脱脂或脱色的目的。 对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇 处理。
2.2多糖的提取方法
多糖为非极性大分子化合物，大多采用不同温度的水、 稀碱溶液或氯化钠水溶液做提取溶剂。
2.5脱蛋白
盐酸法
取样品浓缩液，用2mol/L盐酸调节其pH至3，放置过 夜，在3000r/min条件下离心，弃去沉淀，即脱去蛋白 质。
2.5脱蛋白
脱蛋白效果的检测方法 1.除去蛋白质的样品用紫外分光光度计检验，观察在 280mm处是否有吸收，如果无吸收则表明蛋白质已经 除尽。 2.茚三酮反应检测，结果呈阴性表明蛋白基本除去。
多糖的表征
1. 无还原性。
2. 大多难溶于水，溶于水后形成胶体溶液。
3. 有旋光性，但没有变旋现象。 4. 无甜味。 5. 在酸或酶的作用下水解成单糖和寡糖。 6. 分子量在数万到数百万之间
1、多糖的基本概述
多糖广泛分布于自然界高等植物、微生物（细菌和真 菌）、地衣、海藻和动物体内。
1、多糖的基本概述
常用的络合剂有氯化铜、氢氧化钡和醋酸铅等。得到 的络合物沉淀经水充分洗涤后,用酸分解, 得到游离 的多糖。
多糖的纯化
盐析法
根据分子量不同的多糖在一定浓度的盐溶液中具有不 同溶解度的性质分离各种多糖。
在多糖中加入中性盐( 如NaCl、KCl、(NH4)2SO4 等) 至一定浓度, 则在该盐浓度时溶解度最小的多糖便沉 淀析出,然后上清液继续加盐至更高浓度,则另一多糖 又沉淀析出。
2.2多糖的提取方法 稀碱提取法
0.1-1M氢氧化钠（钾），如几丁质提取用5%氢氧化 钠去杂质。
碱提多糖时易发生美拉德反应，可通过前处理去除小 分子糖、避免pH值处在8-10范围、避免提取温度在 60-80℃。 通氮气或加入硼氢化钠（钾）
2.2多糖的提取方法
微波辅助提取法
利用不同极性的介质对微波 能的不同吸收程度，使基体 物质中的某些区域和萃取体 系中的某些组分被选择性加 热，从而使萃取物质从基体 或体系中分离出来，进入到 介电常数小，微波吸收能力 较差的萃取剂中。
2.6脱色
活性炭脱色
活性炭属于非极性吸附剂，有着较强的吸附能力，特 别适合于水溶性物质的分离。
活性炭脱色效果同活性炭类型、活性炭用量、脱色温 度及pH值等相关。
2.6脱色
弱碱性离子交换树脂
植物来源的多糖，常含有酚型化合物而颜色较 深，这类色素大多呈负性离子，不能用活性炭 吸收剂脱色，可用弱碱性树脂DEAE纤维素或 DuoliteA-7来吸附色素。
干燥
将已透析的多糖溶液依次用无水乙醇、丙酮、乙醚进 行洗涤，洗涤后的多糖60℃真空干燥或冷冻干燥得精 制多糖。
多糖的纯化
由于提取的精制多糖为含有多种组分的多糖混合物， 因此需要进一步纯化。用于大分子多糖及多糖类复合 物的分离纯化方法有分步沉淀法、金属络合物法、离 子交换法、柱层析法等。
多糖的纯化
2.6脱色
大孔吸附树脂柱层析
2.6脱色
氧化脱色
对于与糖结合型的色素，易被DEAE纤维素修复，不 能被水洗脱，可进行氧化脱色。
以浓氨水或NaOH液调至pH8.0左右，50℃以下滴加 H2O2至浅黄色，保温2小时。（氧化色素同时，造成 多糖的降解）
2.6脱色
脱色方法的选择
活性炭脱色：适用于大量制备性分离，同时吸附一定 的多糖，造成多糖的损失。 树脂脱色：适用于植物来源的多糖 发酵来源的多糖颜色一般较浅，色素含量较少，一般 可不除色素
多糖的分离纯化及结构表征
员工培训 2012-7-31
1、多糖的基本概述 多糖，又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过 苷键连接而成的链状聚合物。 (C6H10O5)n， n>10
1、多糖的基本概述
组成分类
同多糖：由一种单糖组成（淀粉、半纤维素、几丁质等） 杂多糖：由两种或两种以上单糖组成（透明质酸、硫 酸软骨素、硫酸皮肤素等）
多糖的纯度鉴定
电泳法（Electrophoresis）
多糖在电场作用下，按其分子大小、形状和所带电荷 的不同而移动不同的距离。若为纯品，电泳后会得单 一斑点。 较常用，目前主要有醋酸纤维薄膜电泳、高压电泳法、 聚丙烯凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、玻璃纤维纸电泳 等
多糖的纯度鉴定
比旋光度测定法
不同的多糖具有不同的比旋度，同时在不同的低级醇 中有不同的溶解度。在一定浓度的低级醇中，分子量 大的较分子量小的溶解度小。因此，不同浓度的低级 醇中得到的多糖沉淀的比旋度相同，则证明该多糖为 均一组分。 受溶液的温度、浓度特别是微量成分的改变而影响较 大。
愈来愈多的研究发现, 人的生命过程几乎都与糖链有 关:
细胞间通讯、识别和相互作用
细胞的运动和粘附
病原与宿主细胞的作用 糖链携带着生物信息. 它在细胞表面的分子识别过程 中起着决定性作用. 大量研究证明许多多糖具有免疫调节、降血糖、降血 脂、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗病毒和保护胃肠系 统等多种生物活性
2.3多糖提取液浓缩
超滤法 在一定压力下，小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的薄 膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而 使大分子物质得到部分的纯化。
2.3多糖提取液浓缩
透析法 把装有提取液的透析袋埋在吸水力强的聚乙二醇或甘 油中，提取液中水分通过透析袋到吸水剂中，从而达 到浓缩效果。
真空浓缩 通过真空泵抽真空，使水的沸点降低而 从提取液中蒸发出来，而多糖成分不受 破坏。
2.7除去小分子杂质 透析
利用溶液浓度扩散效应，将分 子量小的物质如无机盐、低聚 糖、氨基酸等从透析袋渗透到 袋外的蒸馏水中，不断换水即 可保持浓度差，从而除尽小分 子杂质。
2.7除去小分子杂质 超滤
以特殊的超滤膜为分离介质，以膜两侧的压力差为推 动力，将不同分子量的物质进行选择性分离。
2.8干燥
多糖的结构表征
组成单糖种类与数目不相同，多糖的结构非常复杂多糖 结构复杂，其研究主要包括以下内容： 1.相对分子质量 2.单糖的种类与物质的量比 3.各糖环的构象( 呋喃型或吡喃型)与异头碳构型
4.糖残基间的连接方式
5.二级结构及空间构象
多糖的结构表征
1.多糖相对分子质量测定 常用的方法有凝胶色谱法、蒸汽压渗透计法、端基法、 粘度法、光散射法、渗透压法和超滤法等。 凝胶色谱法是比较常用的方法，用已知分子量样品作标 准，建立标准曲线，求得待测多糖的相对分子质量。 多糖相对分子质量只代表相似链长的平均而不是确切的 分子大小。往往用不同的方法会得到不同的相对分子质 量。
多糖的分离纯化主要包括脱蛋白、脱色、脱盐和除去 小分子杂质
2.5脱蛋白
采用醇沉或其它溶剂沉淀所获得的多糖，常混有较多 的蛋白质，脱去蛋白质的方法有多种：如选择能使蛋 白质沉淀而不使多糖沉淀的酚、三氯甲烷、鞣质等试 剂来处理，但用酸性试剂宜短，温度宜低，以免多糖 降解。
2.5脱蛋白
沙维积法（Savage法）
多糖的纯化
柱层析法
柱层析方法是目前多糖中应用最多的方法, 原因是效 果好, 操作简单。主要包括：纤维素柱层析、阴离子 交换柱层析、凝胶柱层析、亲和层析法等。
多糖的纯化
多糖的纯化
多糖的纯化
季胺盐沉淀法
根据长链季胺盐能与酸性多糖或长链高分子量多糖形 成络合物, 在低离子强度的水溶液中不溶解的特性, 使 其沉淀析出, 然后增加溶液的离子强度到一定范围, 络 合物则逐渐离解, 最终溶解。
2.2多糖的提取方法
酶法
酶解反应较温和将组织分解，增加多糖的溶出，可较 大幅度提高产率。
常用于除去各种与多糖结合的结合蛋白质。
2.3多糖提取液浓缩
多糖提取液浓缩应尽量在低温下进行，并防止提取物 与氧气接触，防止多糖被氧化，保持原有结构及生物 活性。 吸附法
干葡聚糖凝胶加入提取液中，两者比例为1:5.由于凝 胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右，多糖回收率 达80%。
易挥发，需在低温条件下进行
2.5脱蛋白
三氯醋酸法
在多糖水溶液中滴加5％-30％三氯醋酸，直至溶液不 再继续混浊为止，在5-10℃放置过夜，离心除去沉淀 即得无蛋白质的多糖溶液。 反应较为剧烈，易引起糖降解
2.5脱蛋白
酶解法
在样品溶液中加入蛋白质水解酶，如胃蛋白酶、胰蛋 白酶、木瓜蛋白酶、链霉菌蛋白酶等，使样品中的蛋 白质降解，经透析后得到基本无蛋白和小分子的多糖。 通常将其与Savage法综合使用除蛋白质效果较好。
多糖的纯度鉴定
多糖纯度鉴定方法
超速离心法、电泳法、比旋光度法及凝胶色谱法。
多糖的纯度鉴定
超速离心法（Ultra-centrifugal method）
微粒在离心力场中的移动速度与微粒的密度、大小与 形状有关。分子密度、大小和形状的微粒在离心力场 作用下形成单一区带。 不能完全将溶液中相对分子质量不同的分子分开，使 用具有一定的局限性
2多糖的提取分离
多糖存在形式： 细胞壁外-胞外多糖 细胞壁内-胞内多糖（大多数多糖） 细胞壁多糖 动植物的细胞大多由脂质包围，用机械粉碎后还必须 脱脂（沙氏提取器，乙醇回流）。 对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇 处理。
2多糖的提取分离
原料 前处理 提取 滤渣 过滤或离心
滤液
醇沉 沉淀 脱蛋白 脱色 透析 柱层析