3种中成药中西红花苷-1和栀子苷的UPLC含量测定

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一种快速同时测定西红花苷-1、西红花苷-2、西红花苷-3和西红花苷-4含量的方法[发明专利]

专利名称：一种快速同时测定西红花苷-1、西红花苷-2、西红花苷-3和西红花苷-4含量的方法
专利类型：发明专利
发明人：王建武,李天娇,匡梦雅,邝鼎
申请号：CN202111570585.7
申请日：20211221
公开号：CN114324701A
公开日：
20220412
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种快速同时测定西红花苷‑1、西红花苷‑2、西红花苷‑3和西红花苷‑4含量的方法，包括以下步骤：1）对照品溶液的制备；2）供试品溶液的制备；3）上色谱柱，色谱柱使用AgilentPoroshell120EC‑C18（2.7um，3*150mm）；流动相以乙腈为流动相A，以0.1%乙酸水为流动相B，梯度洗脱：0~9min，24%~25.5%A，76%~74.5%B；
9~15min，25.5%~30%A，74.5%~70%B；15~18min，30%~35%A，70%~65%B；
18~26min，35%~40%A，65%~60%B；26~28min，40%~24%A，60%~76%B；流速
0.4ml/min；紫外检测器，检测波长440nm；柱温30℃；进样量5ul；4）定性检测；5）定量检测。

该方法实现了西红花苷‑1、西红花苷‑2、西红花苷‑3和西红花苷‑4的同时测定，其方法简单、准确度高，大大缩短了检测时间，提高了西红花不同组分的分离鉴定效率。

申请人：中南大学
地址：410006 湖南省长沙市岳麓区岳麓山左家垅
国籍：CN
代理机构：长沙市标致专利代理事务所(普通合伙)
代理人：胡吟
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虫草保元胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ含量测定

虫草保元胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ含量测定李兰茹;马慧萍;何蕾;董志臣;贾正平【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2014(033)003【摘要】目的采用高效液相色谱法测定虫草保元胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量.方法色谱柱为Hypersil ODS2 C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇:水(48:52),检测波长:440 nm;柱温室温,流速:1.0 mL·min-1.结果西红花苷-Ⅰ在6～45 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,r＝1.000 0,平均回收率98.73%,RSD为1.24%(n＝6);西红花苷-Ⅱ在3.2～24.0 μg·mL-1浓度范围内线性关系良好,r＝1.000 0,平均回收率98.01 %,RSD为1.53 %(n＝6).结论该方法操作简便,测定结果准确,重复性好,可用于虫草保元胶囊的质量控制.【总页数】3页(P370-372)【作者】李兰茹;马慧萍;何蕾;董志臣;贾正平【作者单位】兰州军区兰州总医院药材科,全军高原环境损伤防治重点实验室,兰州,730050;兰州军区兰州总医院药材科,全军高原环境损伤防治重点实验室,兰州,730050;兰州军区兰州总医院药材科,全军高原环境损伤防治重点实验室,兰州,730050;兰州军区兰州总医院药材科,全军高原环境损伤防治重点实验室,兰州,730050;兰州军区兰州总医院药材科,全军高原环境损伤防治重点实验室,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】R286;R978.1【相关文献】1.西红花的真伪鉴别及主要成分西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量测定 [J], 金春女;李云峰2.HPLC 法测定藏药仁青芒觉胶囊中西红花苷－I 和西红花苷－Ⅱ的含量 [J], 杨博涵;朱旭江3.HPLC法测定红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量 [J], 马慧萍;李兰茹;董志臣;何蕾;贾正平4.3种中成药中西红花苷-1和栀子苷的UPLC含量测定 [J], 国佳莹;陈阳;邓亮;郝顺;蔡仕宁;王雅溶5.一测多评法测定通滞苏润江胶囊中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的含量 [J], 徐鸿;周洋;孙磊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

UPLC快速测定清开灵注射液中栀子苷的含量

·药品质量及检验·UPLC快速测定清开灵注射液中栀子苷的含量汤丹1周小琴2李锦坤2梁洁雯2（1.广东药科大学中药学院广州510006；2.广州白云山明兴制药有限公司广州510250）摘要：目的：建立UPLC快速测定清开灵注射液中栀子苷含量的方法。

方法：采用Waters ACQUITY UPLC R BEH Shield RP18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm），乙腈-水（10∶90）溶液为流动相，检测波长238nm。

结果：栀子苷在6.112~152.80μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.9999），仪器精密度、稳定性、重复性试验中RSD均小于3%，平均加样回收率为100.29%，RSD均小于2%。

结论：该方法简便、快速、准确、重复性好，可为高效检测清开灵注射液中栀子苷含量提供依据。

关键词：清开灵注射液栀子苷UPLC快速分析中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1672-8351（2019）02-0001-02Rapid Determination of Geniposide in Qingkailing Injection By Ultra Performance Liquid ChromatographyTang Dan1Zhou Xiaoqin2Li Jinkun2Liang Jiewen2（1.School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou510006,China；2.Guangzhou BaiyunShanMingXing Pharmaceutical Co.,Ltd.,Guangzhou510250,China）Abstract：Objective：To establish a rapid method for simultaneous determination of geniposide and crocin-1in Gardeniae Fructus. Methods：Waters ACQUITY UPLC R BEH Shield RP18（2.1mm×100mm，1.7μm）was used with the acetonitrile water（10:90）solution as the mobile phase.Detection wavelength was238nm.Results：The calibration curves of geniposide was in good linearity among the ranges of6.112~152.80μg/mL.For the precision test,stability test,repeatability test,the RSD was less than3%.The average recoveries were 100.29%,and all the RSD were less than2%.Conclusion：The developed method is simple,rapid,accurate and can be used for the detection of Geniposide in Qingkailing injection.Key words:Qingkailing injection Geniposide UPLC Rapid quantitative analysis清开灵注射液由胆酸、猪去氧胆酸、水牛角（粉）、黄芩苷、珍珠母、栀子、板蓝根、金银花组成[1]，中国药典一部采用高效液相色谱法（HPLC）测定栀子苷等指标成分的含量，生产企业产品批次较多，为节省企业检验时间，本文以栀子苷为例探索超高效液相色谱法（UPLC）测定指标成分含量，为制定高效可行的内控标准提供依据。

高效液相色谱法测定栀子中栀子甙的含量

的含量测定。关键词：栀子；含量；测定
栀子别名黄栀子、黄果树、山栀子、红枝子、山栀、白蟾，是茜草称取同一批的栀子样品６份，按测定方法项下的方法制备供试科植物栀子的果实。栀子具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等品溶液，测定含量，并计算样品的ＲＳＤ值，结果ＲＳＤ为０．６３％，结果作用㈣。栀子的果实是传统中药，属卫生部颁布的第ｌ批药食两用表明此方法的重现性良好。资源。栀子常用于治疗黄疸型肝炎、扭挫伤、高血压、糖尿病等症［３－６］。２．７准确度试验《本草通玄》记载： “ 仲景多用枝子茵陈，取其利小便而蠲湿热也。古取对照品适量，分别添加供试品中，含量分别相当于标示量的方治心痛，每用枝子，此为火气上逆，不得下降者设也。（若）泥丹溪之１２０％、１５０％、１８０％。取模拟样品照“ 含量测定”项下方法试验，计说，不分寒热，通用枝子，属寒者何以堪之。 ” 栀子含有去羟栀子甙泊算回收率为９９．８％，ＲＳＤ为０．５２％。素一１一葡萄糖甙、栀子素、藏红花素、格尼泊素一１一Ｂ— Ｄ一龙胆二糖２．８样品稳定性试验甙等。现代药理研究表明栀子具有镇静、降压、凝血、抑制胃酸、泻下取同一批栀子样品，按２＿３项下的供试品制备方法制备供试品，等作用。本实验采用高效液相色谱法对栀子中的栀子甙的进行了含将供试品置室温下放置，分别于第０、１、２、３、４、５、６小时，精密吸取量测定。供试品溶液ｌＯ注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定栀子中栀子１仪器与试药甙的ＲＳＤ＝Ｏ．６３％。结果表明供试品６小时内稳定。１．１仪器：ＳＰＥＣＯＲＤ２５０ＰＬＵＳ紫外可见分光光度计（德国耶拿２．９样品含量测定分析仪器股份公司）；ＦＡ１００４万分之一分析天平（上海书培实验设依照上述含量测定方法，测定栀子三批样品中栀子甙的含量，备有限公司）；赛多利斯ＰＢ一１０酸度计（北京晨曦勇创科技有限公结果三批样品的含量分别为１．９％、２．Ｏ％、１．９％。３讨论司）；博翔兴旺８０ＫＨＺ高频超声波清洗机（北京博宇宝威实验设备有限公司）；莱伯泰科ＬＣ６００高效液相色谱仪（北京莱伯泰科仪器股３．１流动相的选择份有限公司）；Ｒ一２１０瑞士ＢＵＣＨＩ旋转蒸发仪ｆＪ一州尚准仪器有限公分别考察水一甲醇一磷酸（４０：６０：０．０１），水一甲醇一乙腈一磷酸（５０：１０：４０：０．０１），０．１％醋酸铵溶液一甲醇（８０：２０），水一甲醇一乙司）；ＨＱ一５０高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）。５０：１０：４０），甲醇一水一三乙胺（７０：３０：０．２），水一乙腈（８５：１５）不１．２色谱柱：奥泰公司ｃ色谱柱（２２０ｍｍ× ４．６ｍｍ，５ＸＩｍ）。腈（１．３对照品：栀子甙同比例的流动相，结果以水一乙腈（８５：１５）为流动相为流动相，供试１．４试剂：甲醇（金坛市金冠化工厂）、乙腈（天津市顺呈化工有品各峰分离效果最好，故选用水一乙腈（８５：１５）为流动相为流动相。限公司）、三乙胺（济南鸿鑫化工有限公司）、磷酸（金坛市金冠化工３．２检测波长的选择厂）、醋酸铵（济南润尔特化工有限公司）。制备栀子甙对照品稀释液照紫外一可见分光光度法（中国药典１．５试药：栀子２０１０版一部附录ＶＡ），于１９０～９００ｎｍ波长范围内进行全波长光２测定方法确定谱扫描，记录吸收光谱。在２３８ｎｍ处有最大吸收峰，故选用２３８ｎｍ为检测波长【１１。２．１色谱条件本实验表明此方法分离效果好、方法简便、快捷、准确，、专属性依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：水一可用于栀子中栀子甙的含量测定。乙腈（８５：１５）为流动相，检测波长：２３８ｎｍ，流速：１．０ｍｌ・ｍｉｎ～。柱温：好，参考文献３０￣Ｃ。理论板数按栀子甙峰计算应不得低于２０００。２．２对照品溶液的制备【１】李利娟，李宏霞，吴欣桐，鄢波，周东．栀子甙对血管性痴呆大鼠行为Ｊ】．四川大学学报（医学版），２００９（４）．精密称取栀子甙对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每学和脑组织病理改变的影响『ｌｍＬ含２０ｇ的溶液，即得。【２】杨奎，闵志强，石娅萍，向靓，蒙亚江，邬春久，黄薇，唐波．栀予总环烯醚萜苷对脑出血大鼠炎症反应与神经元凋亡的影响［Ｊ］．中药新药与２．３供试品溶液的制备取供试品粉碎，精密称取（相当于栀子甙２００ｇ），置具塞锥形临床药理。２００９（１）．瓶中，精密加入流动相１０ｍＬ，密塞，精密称定重量，超声处理２０分【３］任强，孙丽华，刘新民，刘春雨，权丽辉，谢忱，廖永红．栀子的化学成Ｊ１．广东药学院学报，２００９（２）．钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即分及抗白血病活性研究『得。『４】刘益华，李晶，林曼婷，周海虹，陈少东．栀子有效成分栀子苷的现代２．４精密度试验研究进展『Ｊ１．中国药学杂志，２０１２（６）．精密称取栀子甙对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为【５】丁嵩涛，刘洪涛，李文明，李秀英，于超．栀子苷对氧化应激损伤血管２Ｏｇ・ｍＬ－的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取１Ｏｌ，连续内皮细胞的保护作用『Ｊ］．中国药理学通报，２００９（￣．６】李宝莉腾雅慧，杨暄＇古月锐，方志远，袁秉祥．栀子油的提取和对中枢进样６次，记录峰面积。结果，ＲＳＤ＝０．５５％，表明本方法精密度良好。【２．５对照品的线性考察神经系统的作用『Ｊ］．第四军医大学学报，２００８（２３）．精密称取适量栀子甙对照品，加人流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０微克的溶液。分别精密上述溶液吸取ｌ０Ｌ，注人液相色谱仪，依照２．１项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积）为纵坐标，对照品进样量㈤为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，栀子甙在５～５０ｇ・ｍＬ－范围内呈良好的线性关系。

栀子中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的高效液相色谱法测定

栀子中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的高效液相色谱法测定梁华正;丁武辉;袁东香;廖晓峰;刘成佐【期刊名称】《时珍国医国药》【年(卷),期】2012(23)10【摘要】目的建立了HPLC同时测定西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的方法。

方法采用C8(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇水冰醋酸(75∶24.5∶0.5),流速为0.6 ml·min-1,检测波长为440 nm。

结果在该色谱条件下,西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ得到较好的分离,西红花苷Ⅰ浓度在0.312μg·ml-1到10.000μg·ml-1范围内、西红花苷Ⅱ浓度在0.156μg·ml-1到5.000μg·ml-1范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,方法平均回收率为102.13%。

结论该方法具有重复性好、准确、快速等优点,适用于西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的同时测定。

【总页数】3页(P2386-2388)【关键词】栀子西红花苷Ⅰ;西红花苷Ⅱ;高效液相色谱法【作者】梁华正;丁武辉;袁东香;廖晓峰;刘成佐【作者单位】东华理工大学;临川之信生物科技有限公司【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.基于核壳色谱柱快速测定栀子中栀子苷和西红花苷-1含量 [J], 周小琴;卢瑞芯;司徒少金;汤丹2.10种含栀子中药制剂中栀子苷与西红花苷-Ⅰ的同时测定 [J], 张小琴;汤晟凌;吕伟旗3.高效液相色谱法测定闽产栀子果与栀子壳中西红花苷Ⅰ含量 [J], 官检发;许鲁宁;陈应4.RP-HPLC法同时测定不同产地栀子中栀子苷、西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量 [J], 张留记;刘钦松;屠万倩;刘怡5.HPLC法同时测定水栀子中栀子苷和西红花苷-Ⅰ的含量 [J], 赵江平; 牛忻; 杨群; 李淑娟; 韦凤爽; 郝丽莉; 刘江云因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法测定红花益气养血胶囊中西红花苷-Ⅰ和西红花苷-Ⅱ的含量

马慧萍，李兰茹，董志臣，何蕾，贾正平
［摘要］目的建立ＨＰＬＣ法测定红花益气养血胶囊中西红花苷一Ｉ和西红花苷． Ⅱ 的含量。方法色谱柱：ＨｙｐｅｍｉｌＯＤＳ２
西红花苷－ＩＣ柱（１５０ｍｍＸ４．６ｉｎｌｎ，５ｍ），流动相：甲醇．水（４８：５２），检测波长：４４０Ｂｉｌｌ；流速：１．０ｍｌ・ｖａｉｎ～；柱温：室温。结果
ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｃｌａｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｓｏｆｃｒｏｃｉｎ．Ｉａｎｄｃｒｏｃｉｎ．１１ｗｅｒｅｌｉｎｅａｒｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ１２— ４５ｇ・ＩＩ１ｌ（ｒ＝１．００００）
ａｎｄ６．４— ２４ｇ・ｍｌ（ｒ＝０．９９９９），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ｈｅＴａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｙｒｗａｓ９９．４４％（ＲＳＤ＝１．１９％，ｎ＝６）ｆｏｒｃｒｏｃｉｎ－Ｉａｎｄ９８．７９％（ＲＳＤ＝１．３８％，凡＝６）ｆｏｒｃｒｏｃｉｎ－Ｉ１．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＨＰＬＣｃａｎｄｅｔｅｍｉｒｎｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｃｒｏｃｉｎ－Ｉ

栀子饮片及栀子配方颗粒的指纹图谱建立、含量测定及化学模式识别

China Pharmacy 2022V ol.33No.14中国药房2022年第33卷第14期栀子饮片及栀子配方颗粒的指纹图谱建立、含量测定及化学模式识别Δ梁朝锋1＊，韩晓珂1，秦亚东2，徐斌1，祁俊1，周娟娟1（1.芜湖市中医医院药检室，安徽芜湖241000；2.安徽中医药高等专科学校药学系，安徽芜湖241002）中图分类号R 917文献标志码A 文章编号1001-0408（2022）14-1718-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.14.10摘要目的建立栀子饮片及栀子配方颗粒的指纹图谱，测定其中6个成分的含量，并结合化学模式识别分析评价其质量。

方法采用高效液相色谱法。

以栀子苷为参照，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》绘制20批栀子饮片及10批栀子配方颗粒的指纹图谱，并进行相似度评价，确定共有峰；同法测定去乙酰车叶草酸甲酯、栀子苷、苦番红花素、芦丁、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ的含量；采用ORIGIN 9.1软件进行聚类分析，采用SIMCA 16.0软件进行主成分分析、偏最小二乘法-判别分析，以变量投影重要性（VIP ）值大于1为标准筛选影响栀子饮片及栀子配方颗粒质量的差异性成分。

结果20批栀子饮片及10批栀子配方颗粒均有24个共有峰，30批样品共有22个共有峰，相似度均不低于0.96；共指认了6个共有峰，分别为去乙酰车叶草酸甲酯（2号峰）、栀子苷（6号峰）、苦番红花素（9号峰）、芦丁（11号峰）、西红花苷Ⅰ（15号峰）、西红花苷Ⅱ（17号峰）。

栀子饮片中上述6个成分的平均含量分别为1.04、57.00、1.30、1.03、9.63、0.99mg/g ，栀子配方颗粒中的平均含量分别为0.96、17.04、0.37、0.27、0.73、0.04mg/g 。

主成分分析结果显示，栀子饮片和栀子配方颗粒各分为一类，与聚类分析结果一致；有9个共有峰的VIP 值＞1，分别为16号峰、14号峰、3号峰、17号峰（西红花苷Ⅱ）、15号峰（西红花苷Ⅰ）、18号峰、22号峰、2号峰（去乙酰车叶草酸甲酯）、21号峰。

栀子黄色素抗脂质过氧化能力与主成分含量的相关性研究

栀子黄色素抗脂质过氧化能力与主成分含量的相关性研究杨沮勤;夏媛媛;陈英杰;朱伊婷;万丽【摘要】目的揭示栀子黄色素的抗脂质过氧化能力与多酚、栀子苷和西红花苷-Ⅰ含量的关系,明确栀子黄色素中主要的抗脂质过氧化成分.方法采用大孔树脂HPD100和乙酸乙酯纯化栀子黄色素,用福林-酚法测定多酚含量,HPLC法测定栀子苷含量,UV法测定西红花苷-Ⅰ含量,并采用硫氰酸铁法评价抗脂质过氧化能力.结果抗脂质过氧化能力随绿原酸(0.001~0.006 7 mg·mL-1)、栀子苷(0.002 5~0.013 mg·mL-1)和西红花苷-Ⅰ(0.001 5~0.004 mg·mL-1)质量浓度的增大而增强,质量浓度为0.002 mg·mL-1时,抗脂质过氧化能力绿原酸>西红花苷-Ⅰ>栀子苷.结论栀子黄色素中多酚、栀子苷和西红花苷-Ⅰ都具有抗脂质过氧化的能力.%Objective To reveal the relationship between the contents of gardenia yellow pigment,polyphenols,geniposide, crocin and the activity of anti-lipid peroxidation, and finger out the main composition in gardenia yellow pigments.Methods HPD100 and ethyl acetate were used to purify gardenia yellow pigments.The total phenol contents in gardenia yellow pigments were determined by Folin-Ciocalteu method, the geniposid content was determined by HPLC, and the crocin-Ⅰ content was determined by UV.The anti-lipid peroxidation activity was evaluated by thiocyanate assay.Results The anti-lipid peroxidation activity was increased with the mass concentration of chlorogenic acid (0.001-0.006 7 mg·mL-1), geniposide (0.002 5-0.013 mg·mL-1) and crocin-Ⅰ(0.001 5-0.004 mg·mL-1).At 0.002 mg·mL-1 mass concentration, the anti-lipid peroxidation activity of chlorogenic acid was stronger than that of crocin-Ⅰ andgeniposide.Conclusion Gardenia yellow pigments in the three main components have the activity of anti-lipid peroxidation.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2017(032)003【总页数】4页(P253-256)【关键词】栀子黄色素;抗脂质过氧化;多酚;栀子苷;西红花苷-Ⅰ【作者】杨沮勤;夏媛媛;陈英杰;朱伊婷;万丽【作者单位】成都中医药大学药学院,成都 611137;成都中医药大学药学院,成都611137;成都中医药大学药学院,成都 611137;成都中医药大学药学院,成都611137;成都中医药大学药学院,成都 611137【正文语种】中文【中图分类】R284桅子具有解热镇静和保肝利胆等功效[1]，其显著的胆囊收缩作用接近高脂餐效应[2-3]，临床上用于治疗急性黄疸性肝炎、止痛、扭挫伤和冠心病等[4]。

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3种中成药中西红花苷-1和栀子苷的UPLC含量测定国佳莹;陈阳;邓亮;郝顺;蔡仕宁;王雅溶【摘要】目的分别测定妇科分清丸、黄连上清丸和芎菊上清片中栀子苷和西红花苷-1的含量.方法以前期分离的栀子苷和西红花苷-1为对照品,采用超高效液相色谱法(UPLC)对3家中药厂生产的含栀子的中成药中栀子苷和西红花苷-1的含量进行测定.结果 UPLC法准确度和精密度高,方法稳定,3种中成药中栀子苷含量为0.19％～0.47％,而西红花苷-1含量在0.014％～0.56％.结论所建方法准确、简便、快速,可用于以上3种中成药中栀子苷和西红花苷-1的含量控制方法.【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2014(037)006【总页数】3页(P650-652)【关键词】栀子苷;红花苷-1;妇科分清丸;黄连上清丸;芎菊上清片;超高效液相色谱【作者】国佳莹;陈阳;邓亮;郝顺;蔡仕宁;王雅溶【作者单位】遵义医学院珠海校区药剂学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区药剂学教研室,广东珠海519041;昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室,云南昆明650500;遵义医学院珠海校区药剂学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区药剂学教研室,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区药剂学教研室,广东珠海519041【正文语种】中文【中图分类】R927.2妇科分清丸、黄连上清丸和芎菊上清片均含有栀子药材。

妇科分清丸由包括栀子、当归和川芎在内的11味中药组成，栀子占比8.9%。

黄连上清丸由黄连和栀子等17味中药组成，栀子占比6.1%。

芎菊上清片由川芎、黄芩和栀子等15味中药组成，栀子占比7.2%。

2010版国家药典对后两种中成药的品质评价是分别采用HPLC测定药品中的黄芩和黄连的有效成分 [1-2]，而妇科分清丸则没有含量测定项。

药典记载以上3种中成药都属于清热药，而栀子的主要功效就是泻火除烦、清热利湿，因此有必要对该三味中成药中栀子进行质量控制。

前期，本课题组对栀子有效成分栀子苷和西红花苷有效成分进行了深入研究 [3-4]。

本论文则采用UPLC来测定以上3种中成药中栀子的主要成分栀子苷和西红花苷-1的含量，结果显示，方法操作简便快速、准确度高、重复性好，可作为这几类制剂测定栀子有效成分含量的方法。

1 实验仪器、试剂和方法1.1 实验仪器、试剂 ACQUITY UPLC(美国waters公司，配有Waters Acquity UPLC BEH Shield RP C18(包2.1 μm x 50 mm)色谱柱，四元高压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Empower 3色谱工作站)，XS205 1/100000电子天平(METTLER TOLEDO仪器有限公司)。

KQ3200超声波清洗器。

UPLC用乙腈为色谱纯(Merck)，水为屈臣氏蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

西红花苷-1(crocin-1)的分离见作者前期发表文献[5]，简述如下：栀子药材(20 kg)粉碎成粗粉，加入40%乙醇渗漉(4×40 L)，渗漉液浓缩至无醇味，然后加水溶解，采用大孔吸附树脂HPD-100分离，洗脱剂分别为水，25%乙醇和60%乙醇。

25%部分重结晶获得栀子苷2 g，60%乙醇部分浓缩得栀子黄，采用硅胶柱层析分离，洗脱剂为乙酸乙酯-(甲醇-水(16∶13))(5%, 10%, 15%, 20%)，20%部分得到西红花苷-1 (3 g)。

妇科分清丸、黄连上清丸和芎菊上清片均为国内厂家生产，购于珠海源春林药房。

1. 2 方法1.2.1 供试品溶液和对照品溶液的制备成药分别研碎，精密称定0.2 g，置10 mL 容量瓶中，加入浓度为50%的乙醇溶液，超声提取20 min，取出定容至刻度。

振摇均匀，取液层离心(8 000 r·min-1，10 min)，上清液用0.2 μm的滤膜过滤后作为供试品溶液。

精密称取栀子苷适量，分别加甲醇配制成对照品溶液：1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 μg/mL的栀子苷对照品溶液。

另精密称取西红花苷-1适量，分别加甲醇配制成对照品溶液：2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/mL的西红花苷-1对照品溶液。

1.2.2 色谱条件流动相为水(A)一乙腈(B)梯度洗脱(0～5 min，90%A～82%A；5～13.3 min，82%A～62%A; 13.3～16.7 min，62%A～50%A; 16.7～19 min，50%A～90%A;)。

流速为0.28 mL/min。

检测波长：0～6 min: 238 nm, 6～18 min: 440 nm，进样量3 μL。

1.2.3 加样回收率实验、精密度实验和稳定性实验分别取成药粉末3份，每份约1.0g，精密称定。

分别加入不同量的栀子苷和西红花苷-1对照品溶液，加甲醇-水(50∶50)定容至50 mL，按“1.2.2”色谱条件测定含量，计算加样回收率。

按“1.2.2”色谱条件分别测定栀子苷和西红花苷-1对照品溶液6次，记录峰面积，计算RSD。

按“1.2.2”色谱条件分别于0.5、1、3、6、12、24 h测定栀子苷和西红花苷-1，记录峰面积，计算RSD。

1.2.4 线性考察试验取各浓度栀子苷和西红花苷对照品按“1.2.3”色谱条件测定含量，数据进行回归并计算相关系数。

1.2.5 含量测定供试品的含量测定在“1.2.2”项的色谱条件下，取“1.2.1”项的制备的供试品溶液分析，测定含量。

2 结果2.1 加样回收率实验、精密度实验和稳定性实验栀子苷和红花苷-1超高效液相色谱实验结果分别见图1、图2。

加样回收率实验数据经计算，栀子苷回收率分别为99.1%、98.2%和98.9%，而西红花苷-1回收率分别为97.6%、98.4%和98.5%，表明方法准确。

紧密度实验数据经计算，栀子苷对照品峰面积的RSD=1.55%，西红花苷-1对照品峰面积的RSD=2.25%，表明仪器精密度良好。

此外，稳定性试验的RSD分别为1.49%和2.01%。

表明样品在24 h内稳定。

图1 栀子苷超高效液相色谱图图2 西红花苷-1超高效液相色谱图2.2 线性考察试验线性考察试验显示，栀子苷在1.5～24.0 μg/mL线性关系良好，西红花苷-1在2.5～40.0 μg/mL线性关系良好。

2.3 含量测定实验妇科分清丸、黄连上清丸和芎菊上清片的UPLC含量测定图谱见图3～5。

经计算，3种制剂中栀子苷含量分别是0.22%、0.19%和0.47%，而西红花苷-1含量分别是0.014%、0.252%和0.56%。

图3 妇科分清丸超高效液相色谱图图4 黄连上清丸超高效液相色谱图图5 芎菊上清片超高效液相色谱图3 讨论实验对比乙腈和甲醇分离效果，结果显示，乙腈作为流动相，色谱分离度和峰形均较好。

由于栀子苷和西红花苷-1极性均比较强，所以流动相从10%乙腈开始洗脱，并逐渐增加乙腈比例。

实验结果显示，50%乙腈能洗脱3个制剂中所有成分，并使两个成分和样品中其它成分获得基线分离。

同时，检测波长分别采用栀子苷和西红花苷-1的最大吸收波长，增加方法灵敏度，减小误差。

现行标准对含有栀子药材的各种中药复方一般都没有栀子主要成分栀子苷和西红花苷-1含量测定的规定，考虑到含栀子的中成药大多属于清热药，而栀子的主要功效就是泻火除烦、清热利湿。

因此，对栀子中主要指标成分的定性和定量在客观上有一定的必要。

因此，以上中成药中栀子苷和西红花苷含量的高低可能会对相应中成药的药理疗效存在一定影响。

故本文在文献的基础上，增加了以上3种中成药中栀子苷和含量约为栀子药材中总西红花苷的87%的西红花苷-1含量的测定，有利于更全面反映以上几类中成药的内在品质。

考虑到栀子化学成分对这一类含栀子中成药药理疗效的发挥可能具有潜在的影响，本课题组最近对3个含栀子药材的中成药中西红花苷-1进行含量测定 [6]。

而本课题组前期采用的HPLC测定栀子药材西红花苷每次测定耗时60 min [7]，而本实验建立了20 min 内快速鉴定并测定3种含栀子成药中栀子苷和西红花苷-1的方法。

本方法准确、简便、快速，可用于以上3种中成药中栀子苷和西红花苷-1的含量测定方法。

[参考文献][1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部) [M].北京：中国医药科技出版社，2010：1066.[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部) [M].北京：中国医药科技出版社，2010：676.[3] 陈阳，赵璨，张浩，等. 不同浓度乙醇提取栀子有效成分效果的研究 [J]. 遵义医学院学报，2009，32 (5)：439-444.[4] Chen Y,Cai L,Zhao C, et al. Spectroscopic, stability and radical-scavenging properties of a novel pigment from gardenia [J]. Food Chem,2008,109(2)：269-277.[5] Chen Y,Zhang H,Tian X,et al. Antioxidant potential of crocins and ethanol extracts of Gardenia jasminoides ELLIS and Crocus sativus L:A relationship investigation between antioxidant activity and crocin contents[J].Food Chem,2008,109 (3)：484-492.[6] 陈阳，张浩，蔡乐，等. UPLC测定3种中药制剂中的西红花苷-1 [J]. 华西药学杂志, 2014,29(3)：321-322.[7] Chen Y, Hao Z, Yi-Xin L, et al. Crocin and geniposide profiles and radical scavenging activity of gardenia fruits (Gardenia jasminoides Ellis.) from different cultivars and during fruit maturation [J]. Fitoterapia, 2010, 81(4)：269-273.。