血清尿素测定
血清尿素氮的测定[方案]
![血清尿素氮的测定[方案]](https://img.taocdn.com/s3/m/90f2e958ff4733687e21af45b307e87100f6f855.png)
血清尿素氮的测定【目的要求】1.了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。
2.复习尿素的生成机理及其意义。
【实验原理】血清（或血浆）中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟（DAM）共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。
其颜色的深浅与血清（或血浆）中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清（或血浆）中尿素氮的含量。
【实验材料】1.器材刻度吸管（0.1ml、2ml、10ml）恒温水浴箱分光光度计2.试剂（1）待测血浆（2）尿素氮试剂（3）二乙酰-肟试剂（4）尿素氮标准液【操作步骤】取试管三支按下表操作1：4稀释血清（或0.1血浆）尿素氮标准液0.1（0.02mg/ml）蒸馏水0.1二乙酰-肟0.5 0.5 0.5尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。
分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。
计算及结果分析尿素（mg%）×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml；mg/100ml)【注意事项】1. 此法灵敏度高，用量极微（一般只需0.02ml血清即可）。
本实验是先将血清用生理水以1：4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5”2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象（小于5%/h）。
3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。
4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。
5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。
由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。
如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。
【思考题】。
测定血清尿素的实验报告
一、实验目的1. 掌握血清尿素测定的原理和方法。
2. 熟悉二乙酰-肟法测定血清尿素氮的实验操作。
3. 了解实验中可能出现的误差及其处理方法。
二、实验原理血清尿素氮（Blood Urea Nitrogen，BUN）是血液中尿素氮的浓度，是反映肾功能的重要指标。
尿素氮是蛋白质代谢的终产物，主要由肝脏产生，通过肾脏排泄。
二乙酰-肟法是一种常用的测定血清尿素氮的方法，其原理如下：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合，生成色素原二嗪，称为Feorin反应。
因为二乙酰不稳定，所以通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用，产生二乙酰，二乙酰与尿素反应，综合生成红色的二嗪。
其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。
三、实验材料1. 试剂：- 碱性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升，置棕色瓶放冰箱保存，可稳定半年。
- 二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml溶解后，再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中，贮存放于冰箱内可保存半年不变。
- 尿素标准贮存液（100mmol/L）：称取干燥纯尿素（MW60.06）0.6g，溶解于水中并稀释至100毫升，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内稳定六个月。
- 尿素标准应用液（5mmol/L）：取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。
2. 仪器：- 分光光度计- 离心机- 实验室试管四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 取5支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
- 向每支试管中加入2.0ml碱性试剂，混匀。
- 将试管置于沸水中加热5分钟，取出冷却至室温。
- 以540nm波长，1cm光程，测定各管吸光度。
- 以尿素浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 取2支试管，分别加入0.5ml血清和0.5ml尿素标准应用液，用去氨蒸馏水稀释至5.0ml。
血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮测定的原理方法及临床意义
血清尿素氮（BUN）是反映肾脏排泄功能的一个重要指标，也是评价肾脏疾病和代谢紊乱的标准检查之一。
BUN的原理方法：
BUN是指血液中尿素的浓度，它的检测是通过测定血液中尿素的含量来完成的。
尿素
是蛋白质代谢的末端产物，经由肝脏转化生成后再经过肾脏排泄。
正常情况下，尿素在肾
小球滤过后主要在肾小管内被再吸收，防止其大量丢失。
血中尿素的浓度，受到肝脏合成、尿素的经肾脏的再吸收、肾脏排泄和肾脏灌注量的影响。
BUN的测定方法包括酶法、光度法、电化学法、液体色谱法等，其中光度法是目前应用最广泛的方法之一。
临床意义：
BUN的高低可以反映肾脏功能是否受到影响。
一般来说，BUN增高是肾功能受损的重要指标，包括急性肾损伤、肾衰竭、肾小球肾炎、肾盂肾炎、泌尿系梗阻等病态情况。
此外，由于肝脏是尿素生成最重要的器官，肝脏疾病如肝炎、肝硬化等也会影响BUN的测定结果。
对于临床医生而言，BUN的测定结果可以作为诊断和治疗的重要线索，也可以用来监测肾
脏疾病和代谢紊乱的治疗效果。
需要注意的是，BUN的测定结果还应考虑个体差异、摄入蛋白质的数量和质量等因素
的影响。
在诊断或监测疾病的过程中，应结合临床病史、身体检查和其他相关检查结果，
综合分析判断。
十三血清尿素的测定二乙酰一肟法
实验十七 血清尿素的测定（二乙酰一肟法）【目的】1. 掌握血清尿素的测定原理和方法。
2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。
【原理】尿素（urea ）在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon 反应），其颜色深浅与尿素含量成正比。
与同样处理的标准液在540nm 处比色，求得尿素含量。
由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸作用产生。
其反应式如下：CH 3CH 3O O +H 2OH +CH 3CH 3O N OH +NH 2OH二乙酰一肟二乙酰羟胺CH 3CH 3O O 二乙酰+C ON H 2NH 2尿素H +CH 3C C 3N N C O+H 2O2二嗪衍生物【器材】试管、试管架、微量加样器及吸量管、沸水浴、分光光度计。
【试剂】 1．酸性试剂在三角烧瓶中加去离子水约100ml ，然后缓慢加入浓硫酸44ml 、85%磷酸66ml ，冷至室温，加入氨基硫脲50mg 及硫酸镉(CdSO4·8H 2O)2g ，溶解后移入1L 容量瓶中，加去离子水至1L 。
置棕色瓶中，4℃可保存半年。
2．二乙酰一肟溶液称二乙酰一肟20g 溶于去离子水中并定容至1L 。
置棕色瓶中，4℃可保存半年。
3．尿素标准贮存液(100mmol/L)精确称取于60～65℃干燥恒重的尿素(MW 为 60.06)0.6g ，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml ，加0.1g 叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。
4．尿素标准应用液(5mmol/L)取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。
【操作】取试管3支，按下表操作：表3-19 血清尿素测定加入物 (ml) 空白管标准管测定管血清－－0.02尿素标准应用液－0.02 －去离子水0.02 －－二乙酰一肟溶液0.5 0.5 0.5酸性试剂 5.0 5.0 5.0混匀，置沸水浴加热 12分钟，取出置冷水中冷却 5分钟，以空白管调零，在 540nm 波长处读取各管吸光度。
测血清尿素含量实验报告
一、实验目的1. 掌握血清尿素含量测定的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清尿素在临床医学中的意义。
二、实验原理血清尿素含量测定采用二乙酰-肟法，其原理如下：在强酸条件下，二乙酰与尿素发生缩合反应，生成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物。
该化合物的颜色深浅与尿素的含量成正比。
通过比色法，可以计算出血清中尿素的含量。
三、实验材料1. 试剂：二乙酰-肟试剂、血清、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水等；2. 仪器：紫外可见分光光度计、移液器、试管、试管架等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的标准尿素溶液；（2）向各试管加入2ml的二乙酰-肟试剂，充分混匀；（3）将试管置于60℃水浴中反应30分钟；（4）取出试管，用蒸馏水定容至5ml；（5）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（6）以尿素浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清尿素含量测定：（1）取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml的血清样本；（2）按照标准曲线绘制步骤中的操作，进行反应和测定；（3）以蒸馏水为空白，在波长540nm处测定各管的光密度（OD）；（4）根据标准曲线，计算血清中尿素的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，结果显示尿素浓度与光密度呈线性关系，相关系数R²=0.998。
2. 血清尿素含量测定：根据标准曲线，计算各血清样本中尿素的含量，结果如下：样本1：尿素含量为5.2mmol/L；样本2：尿素含量为6.8mmol/L；样本3：尿素含量为7.4mmol/L；样本4：尿素含量为8.2mmol/L；样本5：尿素含量为9.0mmol/L；样本6：尿素含量为10.0mmol/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，二乙酰-肟试剂的浓度、反应时间、温度等因素对实验结果有较大影响，应严格控制实验条件，以保证结果的准确性。
血清尿素氮测定的原理
血清尿素氮测定的原理嘿，朋友们！今天咱们来聊一聊血清尿素氮测定这个事儿。
你可能会想，这血清尿素氮测定是啥玩意儿啊？为啥要测定它呢？先别急，听我慢慢给你说。
你看啊，咱们人体就像一个超级复杂又神奇的小宇宙。
身体里的各种物质就像小宇宙里的各个星球，都有着自己独特的作用和运行轨迹。
血清尿素氮呢，它就是这个小宇宙里比较重要的一个“小星球”。
那血清尿素氮是怎么来的呢？这就和咱们吃的东西有关啦。
咱们吃进去蛋白质，就像给身体这个大工厂送进去了原材料。
这些蛋白质经过身体里各种“小工人”（酶啊之类的物质）的加工，在肝脏这个大车间里就会产生尿素。
这尿素啊，就像是加工后的产品，会随着血液循环这个“运输大道”跑到肾脏那里去。
肾脏呢，就像一个超级精密的过滤器，它会把尿素过滤出来，然后排出体外。
这血清尿素氮其实就是血液里尿素所含的氮元素的量。
现在咱们就来说说这血清尿素氮测定的原理。
这就好比你要数清楚一个仓库里某种货物的数量一样。
不过，这个仓库就是咱们的血液，货物就是尿素氮。
目前啊，测定血清尿素氮有好几种方法呢。
有一种方法叫二乙酰一肟法。
这个方法可有趣了。
你可以把它想象成一场化学反应的小聚会。
在这个聚会里，二乙酰一肟就像一个超级活跃的小嘉宾，它会和尿素氮来一场特殊的“互动”。
在酸性的环境下，就像给这个聚会提供了一个特定的氛围一样，二乙酰一肟和尿素氮会发生反应，生成一种红色的化合物。
这红色的化合物就像聚会后出现的一个新标志一样。
然后呢，我们就可以通过比色的方法，就像比较颜色的深浅来判断这个红色化合物的多少，从而得出血清尿素氮的含量。
我给你打个比方啊，就像你看颜料混合后的颜色深浅来判断颜料量的多少一样。
这时候你可能会问，那这个方法准不准呢？其实啊，只要按照正确的操作流程来，这个方法还是挺靠谱的呢。
还有一种方法叫脲酶法。
这个脲酶啊，它可是尿素的“克星”。
脲酶就像一把专门开尿素这个锁的钥匙。
当脲酶遇到尿素的时候，就会把尿素分解掉。
这个过程就像拆积木一样，脲酶把尿素这个“大积木”拆成了氨和二氧化碳。
测定血清尿素的方法
测定血清尿素的方法
测定血清尿素的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：
1. 色谱法：使用气相色谱法或者液相色谱法，将血清中的尿素分离出来，并通过检测其峰值的面积或者浓度来确定尿素的含量。
2. 尿素酶法：利用尿素酶催化尿素水解产生氨和二氧化碳，并采用测定氨的方法来间接测定尿素的含量。
3. 尿素氮法：使用气体分析仪测定氨气，通过转化为尿素以后，测量尿素的氮含量来计算尿素的含量。
4. 尿素代谢率法：通过给予标记有碳14或者氢2的尿素，然后测定排出的二氧化碳或者水的放射性活性，从而测定尿素的代谢率。
这些方法各有优缺点，选择合适的方法取决于实验条件、设备以及研究需求。
在实际应用中，一般会根据实验目的和实验条件选择最适合的测定方法。
血清尿素测定方法
血清尿素测定方法
血清尿素测定是一种常用的临床实验室检测方法，用于评估肾功能和测定血氨水平。
以下是一种常用的血清尿素测定方法：
1. 准备样本：从患者的静脉或指尖采集血液样本，并将其放入干燥的试管或离心管中。
2. 离心：将采集到的血液样本离心，以分离血浆或血清。
3. 取样：使用移液器或微量吸管，将所需量的血浆或血清转移到清洁的试管中。
4. 加试剂：添加尿素试剂到试管中。
尿素试剂通常是一种含有酶的溶液，可以将尿素转化为氨气。
5. 反应：将试管放入恒温水浴或试剂盒中，进行反应。
在此过程中，尿素与试剂中的酶发生反应，产生氨气。
6. 检测：使用光度计或其他光学方法，测量反应后产生的氨气的吸光度。
吸光度的程度与血清中尿素的浓度成正比。
7. 计算：通过比较待测样本的吸光度与标准曲线上的吸光度，确定样本中尿素的浓度。
需要注意的是，每个实验室可能有自己的具体操作步骤和试剂，因此在进行血清尿素测定时，还应该参考相应的实验室方法手册。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
【目的】学习血清尿素(Urea)测定方法，了解其意义。
【原理】血清尿素（Urea）是蛋白质的正常代谢产物。
它的测定是常用的衡量肾小球功能的指标之一。
肾性血清尿素含量增加，提示肾小球损伤。
是研究药物肾毒性的重要指标之一。
【器材】兔固定架、注射器、烧杯、可见分光光度计、试管、水浴
【药品】0.5%氯化高汞溶液、生理盐水
【动物】家兔2只
【方法】取家兔2只，1只注射氯化高汞5ml/kg（0.5%氯化高汞溶液1.0ml/kg)，另
1只注射等量的生理盐水。
48小时后，从家兔耳静脉取血1ml，制取血清，按血清尿素测定方法测定血清尿素含量。
【结果】记录2只家兔血清尿素含量，比较并分析其差别。
附血清尿素(Urea)测定方法
【原理】尿素与二乙酰在酸性反应环境中加热，缩合生成色素原二嗪化合物。
因二乙酰不稳定，不宜直接加入，可由化学反应生成。
通常由反应系统中二乙酰一肟与强酸作用，产生乙二酰。
二乙酰和尿素反应，缩合生成红色的二嗪。
根据颜色深浅确定尿素含量的多少。
【试剂】
(1)酸性试剂：在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml。
冷至室温，加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g。
溶解后用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中冰箱保存，可稳定6个月。
(2)二乙酰-肟溶液：称取二乙酰-肟20g，加蒸馏水约900ml，溶解后，再用蒸馏水稀释至1L，置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年。
(3)尿素标准贮存液（100mmol/L）:称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g，溶解于蒸馏水中，并稀释至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，置冰箱内可稳定半年。
(4)尿素标准液应用液(5mmol/L)：取5.0ml贮存液用无氨蒸馏水稀释至100ml.
【操作】按表T4-1进行
混匀后，置沸水中加热12分钟，置冷水中冷却5分钟后，用分光光度计在波长540nm，
以空白管调至零点。
比色读取标准管及测定管的吸光度。
【计算】
【正常参考值】
2.86~8.20mmol/L 尿素
【注意事项】
1．本法线性范围达14 mmol/L 尿素，如遇高于此浓度的标本必须用生理盐水作适当的稀释后重测，然后乘以稀释倍数报告之。
2．试剂中加入硫氨脲和镉离子，增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度退色现象(每小时小于5%)。
加热显色冷却后应及时比色。
3．吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。
4．世界卫生组织推荐用mmol/L尿素表示浓度，不再使用尿素氮一词。
5．血清尿素增高的病理因素常见于肾脏原因，肾脏原因又可分为肾性、肾前或肾后：①肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎都可见血液中尿素含量增高。
②肾前或肾后：引起尿量显著减少或尿闭，如脱水、水肿、腹水、循环功能衰
竭、尿路结石或前列腺肿大引起的尿路梗阻等均可引起血清尿素含量升高。
此外，生理因素也可导致血清尿素增高。
如体内蛋白质分解过多：急性传染病、上消化道出血、大面积烧伤、大手术后和甲状腺功能抗进等。
虽然血清尿素增高，此时其它肾功能试验结果一般均正常。
（注：本法引自中华人民共和国卫生部医政司编著的《全国临床检验操作规程》）
尿素的测定方法可分为两大类：一类直接法，尿素直接和某试剂作用，测定其产物，最常见的为二乙酰一肟法；另一类是尿素酶法，用尿素酶将尿素变成氨，然后用不同的方法测定氨。
1)尿素酶法（直接法）：尿素酶法利用尿素酶催化尿素水解生成铵盐，铵盐可用纳氏试剂直接显色、酚-次氯酸盐显色或酶偶联反应显色。
尿素测定目前多采用尿素酶偶联法：用尿素酶分解尿素产生氨，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下使NADH氧化为NAD+时，通过34 0nm吸光度的降低值可计算出尿素含量。
此反应是目前自动生化分析仪上常用的测定原理。
此外，尿素酶水解尿素产生氨的速率，也可用电导的方法进行测定，其电导的增加与氨离子浓度有关，反应只需要很短的时间，适用于自动分析仪。
2）酚-次氯酸盐显色法：尿素酶水解尿素生成氨和酚及次氯酸盐，在碱性环境中作用形成对-醌氯亚胺，亚硝基铁氰化钠催化此反应：对-醌氯亚胺同另一分子的酚作用，形成吲哚酚，它在碱性溶液中产生蓝色的解离型吲哚酚：此反应敏感，血清用量少（10μl），无需蛋白沉淀，一般用于手工操作测定中。
3)纳氏试剂显色法：尿素经尿素酶作用后生成氨，氨可与纳氏试剂（HgI2.2KI的强碱溶液）作用，生成棕黄色的碘化双汞铵。
尿素酶法的优点是反应专一，特异性强，不受尿素类似物的影响，缺点是操作费时，且受体液中氨的影响。
⑵二乙酰一肟法（直接法）：尿素可与二乙酰作用，在强酸加热的条件下，生成粉红色的二嗪化合物（Fearom反应），在54 0nm比色，其颜色强度与尿素含量成正比。
二乙酰不稳定，用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。
试剂中加入Fe3+或Cd2+及硫氨脲，可提高灵敏度，增加显色稳定性，其中Fe3+和Cd2+有氧化作用，还能消除羟胺的干扰作用。
提高酸的浓度可增加灵敏度。
二乙酰一肟与尿素的反应不是专一的，与瓜氨酸也有显色。
本法灵敏、简单，产生的颜色稳定，缺点是加热时有异味释放，一般临床已很少使用此方法。
尿素测定用血清或血浆，体液中尿素的浓度常用尿素中含有的氮来表示，称为尿素氮。
如欲换算成尿素，可根据60g 尿素含有28g氮计算，即1g尿素相当于0.467g尿素氮，或是1g尿素氮相当于2.14g尿素。
正常参考值：血清尿素氮为2.8-7.1mmol/L，相当于尿素1.8-6.8mmol/L。