瘦肉精的检测步骤
瘦肉精ELISA法
2、分析
微孔板编号， 如1-6号标准品，8号样品等
加标准品/样品：微孔中加入20ul样品或标准品+50ul克伦特 罗酶标物+80ul克伦特罗抗试剂，轻轻振荡混匀，盖板膜盖 板后，25℃避光30min
洗板：孔内液体甩干，用洗涤工作液300ul/孔，充分洗涤5次， 每次间隔30s，用吸水纸拍干（若有未拍干的气泡用枪头戳 破）
二、仪器、耗材、试剂
仪器：微孔板酶标仪450/630nm、电子称、漩涡混 合振荡器、离心机（15ml管和1.5ml ep管）、恒温 培养箱
耗材：小号研钵、15ml离心管、1.5ml ep管、（1050ul、50-250ul）微量移液器及配套枪头、3ml一次 性吸管、酶标板架、滤纸
试剂：
1M NaOH、组织样本提取液（80ml 25%甲醇 +20ml 0.1M盐酸）
显色：每孔加入50ul底物A+50ul底物B，轻轻振荡混匀，盖 板膜盖板后，25℃避光15-20min（蓝色）
测定：加入50ul终止液（黄色），轻轻振荡混匀。酶标仪 450/630nm双波长检测（可在加入终止液前目测含量）
克伦特罗酶标物、克伦特罗抗试剂、洗涤液（1:9体 积稀释）
底物A、底物B、终止液 标准品：浓度为0、0.1、0.3、0.9、2.7、1ppb（十
亿分之、10-9） 对照品：浓度为100ppb
三、操作过程
1、样品前处理
2g肉，剪刀剪碎， 研钵内研成匀浆
6ml组织样本提取液， 振荡器混匀
4000r/min，10min；
1ml上清+20ul 1M NaOH,混匀，
4000r/min，5min，
20ul上清液用于分析
瘦肉精检测方法
目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC －MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。
而我国结合自己的实际情况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。
该标准选择确定了两种：即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）。
其中将HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为0．05μg/kg，优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。
而GC一MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。
GC－MS 法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，已将GC－MS法定为检测瘦肉精的确证性方法。
GC－MS法的缺点同HPLC相似。
(1)试剂和材料以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。
①盐酸克伦特罗对照品：含盐酸克伦特罗不得少于98．5％②盐酸③无水甲醇④氢氧化钠⑤磷酸二氢钾⑥磷酸⑦盐酸溶液取盐酸4．2ml，加水至1000ml，即得。
⑧o．5mol／L磷酸二氢钾溶液取磷酸二氢钾68g，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．O，用水稀释至1000ml，即得。
⑨0．05mol几磷酸二氢钾溶液取磷酸二氢钾6．88，加水800ml溶解并用磷酸调pH 值至3．0，用水稀释至1000mi，即得。
a．氢氧化钠溶液取氢氧化钠48，加水使溶解成100mi，即得。
b．盐酸克伦特罗对照品储备液(1mg／mi) 准确称取28．3mg盐酸克伦特罗对照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。
⑩盐酸克伦特罗对照品工作液(10ttg／mi) 取lmg／mi储备液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。
⑾盐酸克伦特罗对照溶液(100ng／m1) 取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。
瘦肉精的检测
优点：
不需要昂贵的仪器与试剂，也无复杂的 样品前处理，操作简单，但由于具有杂质 干扰、灵敏度低、重现性差等缺点，只能 作为初筛盐酸克伦特罗的方法；
谢谢聆听
THANK YOU
酶标克伦 特罗结合物 、标准溶液或
者样液
3.酶联免疫法
酶底物
终止剂
吸附在固相 载体表面的 克伦特罗特
异性抗体
洗涤
结合的酶标
克伦特罗的 结合酶的催化 蓝色物质
结合物 （无色底物）
酶标检测仪
黄色物质
操作简便、准确、投资小、成本低、速 度快、仪器设备简单，适合对活体动物做 大批量样品的快速分析，但不能实现现场 检测。
4.色谱检测技术
色谱技术包括高效液相 色谱法（HPLC）、气相色 谱-质谱联用法（GC-MS）、 气相色谱-傅里叶红外联用 法（GC-FTIR）及薄层色谱 法（TLC）等。目前，应用 最多的是高效液相色谱法和 气相色谱-质谱联用法。为 了更准确的检测出瘦肉精， 在这里我们主要介绍气相色 谱-质谱联用法。
HPLC适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代 谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍 生化反应和质谱(MS)等系统联用，容易实现分析过程的自 动化。黄士新等(2019)应用紫外检测器，在λ=243nm，色 谱柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱 温：室温30℃的条件下检测猪肝脏和猪肉中的CLB残留， 最低检测限可达2ng/g。国外有人应用HPLC (二极管阵列 检测器)测定动物性食品中CLB残留，测得最低检测限为 1.26ng/g，回收率达98.9%。
瘦肉精的检测步骤
瘦肉精快速检测卡操作步骤一、【检测原理】本试纸采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。
试剂含有被预先固定于膜上检测带（T）的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。
检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。
检测限为3ng/ml（3ppb）。
二、【样品制备】肉：装入大约4克碎的肉样本（肉泥）于离心管中（酱猪牛肉加2ml水或PBS），盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。
如有明显黄色浑浊请离心（3000rpm,5min），取上清检测。
如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min)，取上清检测。
三、【操作步骤】1.在进行测试前先仔细阅读使用说明书，使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。
2.从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。
3.吸取待检样品溶液，缓慢滴加80~100μl(约2~3滴）于加样孔中，加样后开始计时。
4.在5分钟内读取结果，超过5分钟的结果判读无效。
四、【结果判定】阳性：位置C显示出红色条带，位置T无条带或颜色非常模糊时判为阳性。
阴性：位置C显示出红色条带，位置T同时出现红色条带时，判为阴性。
无效：位置C不显示出红色条带，则无论位置T显示出红色条带与否，该试纸卡均判为无效。
【贮存及有效期】冷藏，忌冷冻，有效期12个月。
【注意事项】1.请按照操作步骤进行测试，操作时请勿触摸试纸显示区。
2.如购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请到购买处更换。
3.本品为一次性产品，请勿重复使用。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
5.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
6.由于样品（尿和饲料）的差异，有的检测线可能偏淡或偏暗，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
7.若需直接检测标准品，请用PBS或阴性样品配制。
饲料中“瘦肉精”的检测方法
原理 是抗 原抗 体 反应 单 克 隆抗 体 既能 与 Ｃ Ｌ Ｂ结 合， 又 能与 酶标 记 物相 结 合 。 当样 品 中含 有 盐 酸克 仑 特 罗时 ， 它 会 与酶 标 记物 竞 争性 地 结 合单 抗 上 的结 合 位点 ， 经过 洗 涤后 没 有与 单抗 结 合 的酶标 记 物 则被 洗 去 。待 加 入基 质 和发 色 剂后 ， 结 合 的酶标 记 物 把无 色 的 发色 剂转 化 为蓝 色 的产 物 。 颜 色 的 深浅 和 样 品 中盐
衍 生 反应 ３ ０分 钟 。 用 氮气 吹干 ， 加 入 甲苯 １ ０ ０ ￣ Ｌ混 匀 于气 质联用 仪 进行 测定 。
３ 液 相 色 谱 一 串 联 质 谱 法
品 到 指 定微 孑 Ｌ 中， 再加入酶标记物 ， 用 酶 标 板 密 封 胶
纸 盖住酶 标 板 ， 涡旋 混匀 ． 在 室温 下孵 育 １小时 。倾 倒
威 殖 朱禽 畜
该 方 法 的 主 要 原 理 是 用 加
饲 料 中“ 瘦 肉精 ＂ 的检 测 方 法
杨金 凤 杨小 燕 黑龙 江省 大庆 市绿 色农 产 品监 测 中心 １ ６ ３ ３ １ ６
有 甲醇 的稀 酸溶 液 将 饲 料 中 的 盐 酸 克 仑 特 罗 盐 酸 盐 溶 ， 溶 液 被 碱化 ，经液 相 萃 取 和 固相
晕、 呕吐 、 腹痛 、 腹泄 、 肌 肉震 颤 、 心跳过速 、 呼 吸 困难 和 神经 紊 乱等 症 状 ， 严重 的会 危 及 生命 。下 面 将介 绍 几 种饲料 中盐酸 克仑 特 罗 （ Ｃ Ｌ Ｂ） 的检测 方法 。
１ 酶 联免 疫 吸 附法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ）
调ｐ Ｈ至 １ １ ～ １ ２ 。溶液 分别 用 ３ ０ ｍ Ｌ、 ２ ５ ｍＬ乙 醚萃 取 ２
气相色谱检测瘦肉精的方法及危害
气相色谱检测瘦肉精的方法及危害瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺及克伦特罗等。
将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。
瘦肉精的危害：瘦肉精，指的是一类动物用药，包括盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和硫酸特布他林等，属于肾上腺类神经兴奋剂。
把“瘦肉精”添加到饲料中，的确可以增加动物的瘦肉量。
但国内外的相关科学研究表明，食用含有“瘦肉精”的肉会对人体产生危害，常见有恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，特别是对心脏病、高血压患者危害更大。
长期食用则有可能导致染色体畸变，会诱发恶性肿瘤，至于究竟摄入多大量，如何导致恶性肿瘤，有关病例研究国内外尚无定论。
但是，近几年，各地“瘦肉精”致人中毒甚至死亡的案例时有发生。
检测方法：感官识别法--饲喂盐酸克伦特罗比较严重的猪宰后肉色特别鲜红、后臀肌肉饱满突出，脂肪非常薄，而一般健康肉淡红色，肉质弹性好。
化学分析法--正常新鲜肉用试纸测试其酸碱度多呈中性或弱碱性，而含有盐酸克伦特罗的猪肉则偏酸性，pH值明显小于正常范围，所以酸碱度法也能测。
(杂质干扰不准确)酶联免疫法--适合对活体动物做大批量样品的快速分析，但不能实现现场检测，不做介绍。
色谱检测技术--色谱技术包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、气相色谱-傅里叶红外联用法(GC-FTIR)及薄层色谱法(TLC)等。
目前，应用最多的是高效液相色谱法和气相色谱-质谱联用法。
为了更准确的检测出瘦肉精，在这里我们主要介绍气相色谱-质谱联用法。
对样品(动物尿液)在pH=5.2的缓冲溶液中进行提取。
萃取的样液用C18和SCX小柱，固相萃取净化，分离的药物残留经过双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后用带有质量选择检测器的灵华气相色谱仪测定。
优点：检测精确度高，准确度高，效率较高，重现性好，较高的灵敏度，假阳性率低本文由广州深华实验室仪器设备整合发布。
生猪宰前瘦肉精检测方案
生猪宰前瘦肉精检测方案一、引言瘦肉精（瘦肉加速素）是一种用于促进猪体育肉瘦肉率的药物。
然而，过量使用瘦肉精可能对人体健康造成威胁。
为了保证消费者的食品安全，对生猪宰前进行瘦肉精检测是非常必要的。
本文将介绍一种适用于生猪宰前瘦肉精检测的方案。
二、样品采集1. 样品来源：样品来自于养殖场的生猪。
在选择样品时，应根据养殖场的规模和猪群数量确定样品数量和采样方法。
2. 采样方法：采样人员应戴好口罩和手套，以避免样品的污染。
选择新鲜的猪肉样品，通过剖腹解剖的方式采集肌肉组织，并将样品放入密封袋中。
根据实际需要，可以采集多个部位的样品，以增加检测的准确性。
3. 样品保存：样品应立即送往实验室，并在运输过程中保持冷藏状态，以保证样品的稳定性。
三、瘦肉精检测方法1. 瘦肉精检测方法的选择：（1）免疫试剂法：利用瘦肉精的免疫原性质，通过相应的抗原抗体反应来检测瘦肉精的含量。
此方法简便快捷，适用于大量样品的快速筛查。
（2）液相色谱-质谱联用法：利用液相色谱将瘦肉精从样品中分离出来，然后通过质谱的检测来确定瘦肉精的含量。
此方法准确度高，适用于瘦肉精含量的精确测定。
（3）其他方法：如快速检测试纸法、核酸适体酶联免疫吸附测定法等，都可以根据实际需要进行选择。
2. 检测操作流程：（1）样品制备：将采集的样品进行样品提取，根据实际检测方法的要求进行样品的预处理。
（2）试剂配置：根据具体的检测方法，配制相应的试剂和缓冲液。
（3）实验操作：按照检测方法的要求，将样品和试剂按照一定比例混合，进行相应的反应与测定。
（4）数据处理：根据检测结果，采用相应的统计学方法进行数据处理，得出瘦肉精的含量。
四、质量控制1. 样品质量控制：在检测过程中，应选取一定数量的样品进行复测或者与其他实验室进行对比，以保证检测结果的准确性和可靠性。
2. 实验室质量控制：实验室应建立完善的质控制度，包括实验设备的校准、试剂的质量控制和实验操作的规范化等。
并且应定期进行内外质量评价，确保实验室的检测能力和水平。
瘦肉精检测原理及操作步骤[5篇范文]
瘦肉精检测原理及操作步骤[5篇范文]第一篇：瘦肉精检测原理及操作步骤瘦肉精检测原理及操作步骤？时间：2011-03-22 来源：作者：一、测定原理“瘦肉精”克仑特罗竞争酶标免疫检测方法快速测定的基础是抗原抗体反应。
酶联板的微孔包被有针对兔抗克仑特罗特异性抗体的羊抗体（第二抗体）。
加入兔抗克仑特罗特异性抗体（第一抗体）与第二抗体结合而被固定，洗涤后加入标准液或样品溶液与酶结合物（酶标记抗原），标准液或样品中的游离抗原与酶标抗原竞争兔抗克仑特罗特异性抗体上有限的结合位点。
通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标抗原，加入酶基质（过氧化脲）和发色剂（四甲基联苯胺）并孵育，结合到板上的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的底物。
加酸终止反应后，颜色由蓝色转变为黄色。
在单波长450 nm处测吸光度，吸收光强度与样品中的克仑特罗浓度成反比。
二、试剂盒的组成每个盒中（包括标准分析孔）材料如下：（1）1×96孔板（12排×8孔），包被有第二抗体（兔IgG抗体）；（2）6个标准液（300ul/瓶）为克仑特罗水溶液。
浓度分别为0 ng/kg、100 ng/kg、300 ng/kg、900 ng/kg、2700 ng/kg、8100 ng/kg；（3）1个克仑特罗过氧物酶标记物浓缩液12 ml（红色帽）；（4）1个克仑特罗抗体浓缩液12 ml（黑色帽）；（5）1个酶基质/发色剂11 ml（蓝色帽）；（6）1个反应停止液，1 mol/L硫酸14 ml（黄色帽）；（7）1个缓冲液25 ml，酶标记物及抗体浓缩液稀释用。
三、试验材料1、设备微孔板酶标仪（450 nm）、均质器、冷冻离心机、离心管（50 ml）、微量可调移液器（单道、八道）、RIDAC18柱、滤纸（0.45μm）。
2、试剂甲醇（分析纯、100%）、50 mmol/LHCL、10 mmol/LHCL、50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、500 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）、1 mol/LNaOH。
瘦肉精检测原理
瘦肉精检测原理瘦肉精，又称瘦肉素，是一种用于促进猪、牛等家畜生长的禁用药物，长期食用含有瘦肉精的肉制品对人体健康造成严重危害。
因此，对肉制品中是否含有瘦肉精进行有效的检测是非常重要的。
下面我们就来了解一下瘦肉精检测的原理。
瘦肉精检测的原理主要是通过高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）进行检测。
首先，将待测样品进行提取和净化处理，然后使用高效液相色谱（HPLC）进行分离，最后通过质谱（MS/MS）进行检测和定量分析。
在样品提取和净化处理过程中，首先将待测样品进行粉碎和均质处理，然后使用适当的溶剂进行提取，将目标成分从样品基质中分离出来。
接下来，通过净化柱进行净化处理，去除干扰物质，使得待测物质得到有效富集。
在经过提取和净化处理后，样品中的目标成分已经得到了有效的富集，接下来就是通过高效液相色谱进行分离。
高效液相色谱是一种高效、灵敏的色谱分离技术，可以有效地将目标成分与干扰物质进行分离，从而得到高纯度的目标成分。
最后，通过质谱进行检测和定量分析。
质谱是一种高灵敏度的分析技术，可以对待测物质进行快速、准确的分析。
在瘦肉精检测中，通常使用质谱-质谱联用技术（MS/MS），通过两级质谱进行目标成分的检测和定量分析，可以提高检测的准确性和灵敏度。
通过以上的步骤，就可以对肉制品中是否含有瘦肉精进行快速、准确的检测。
瘦肉精检测的原理主要是通过高效液相色谱-质谱联用技术进行检测，通过样品提取和净化处理、高效液相色谱分离、质谱检测和定量分析，可以实现对肉制品中瘦肉精的快速、准确检测。
总的来说，瘦肉精检测原理是一种高效、准确的检测技术，对于保障肉制品的质量和食品安全起着至关重要的作用。
希望通过对瘦肉精检测原理的了解，可以增加大家对食品安全的认识，提高对含有瘦肉精肉制品的警惕性，从而保障自身健康。
猪肉中瘦肉精的检测
猪肉中瘦肉精的检测猪肉中瘦肉精的检测高峰101279012摘要鉴于盐酸克伦特罗(瘦肉精)在动物性食品中的残留对人体和国民经济造成了巨大的危害，本文介绍了动物肌肉组织中残留盐酸克伦特罗(瘦肉精) 的几种分析检测方法，并对未来的发展方向作了展望。
关键词：瘦肉精GC-MS HPLC ELISA1 引言瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗(Clenbuterol，CLB)，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5—10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此，β—受体激动剂被大量非法用于畜牧生产，其中最常用的有克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。
长期食用含有β—受体激动剂残留的食品将对人体健康产生极大的危害，可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤；另外还能引起代谢紊乱，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。
[1] 盐酸克伦特罗(Clenbuteerol，CLB) ，又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，俗名瘦肉精，化学名为α—[ (叔丁氨基) 甲基]—4—氨基—3，5—二氯苯甲醇盐酸盐，分子式为C12 H18Cl12N2O?HCl ，相对分子质量为313.65。
目前，检测瘦肉精残留常用的色谱技术有高效液相色谱(HPLC)、气相色谱—质谱联用法(GC—MS)、高效液相色谱—质谱联用法(HPLC—MS) 、毛细管电泳法(CE)等。
中国已将高效液相色谱法（HPLC）作为检测饲料中盐酸克伦特罗残留的半确证法，将GC—MS 法定为确证性方法，主要用于最后确认和仲裁。
对于动物性食品，GB/T 5009.192—2003 “动物性食品中克伦特罗残留量的测定”规定的第一法为气相色谱—质谱法，第二法为高效液相色谱法，第三法为酶联免疫法。
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瘦肉精快速检测卡操作步骤
一、【检测原理】
本试纸采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。
试剂含有被预先固定于膜上检测带（T）的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。
检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。
检测限为3ng/ml（3ppb）。
二、【样品制备】
肉：装入大约4克碎的肉样本（肉泥）于离心管中（酱猪牛肉加2ml水或PBS），盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。
如有明显黄色浑浊请离心（3000rpm,5min），取上清检测。
如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min)，取上清检测。
三、【操作步骤】
1.在进行测试前先仔细阅读使用说明书，使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。
2.从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。
3.吸取待检样品溶液，缓慢滴加80~100μl(约2~3滴）于加样孔中，加样后开始计时。
4.在5分钟内读取结果，超过5分钟的结果判读无效。
四、【结果判定】
阳性：位置C显示出红色条带，位置T无条带或颜色非常模糊时判为阳性。
阴性：位置C显示出红色条带，位置T同时出现红色条带时，判为阴性。
无效：位置C不显示出红色条带，则无论位置T显示出红色条带与否，该试纸卡均判为无效。
【贮存及有效期】
冷藏，忌冷冻，有效期12个月。
【注意事项】
1.请按照操作步骤进行测试，操作时请勿触摸试纸显示区。
2.如购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请到购买处更换。
3.本品为一次性产品，请勿重复使用。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
5.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
6.由于样品（尿和饲料）的差异，有的检测线可能偏淡或偏暗，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
7.若需直接检测标准品，请用PBS或阴性样品配制。