聚合酶链式反应实验报告
pcr实训报告
pcr实训报告
PCR实训报告
PCR（聚合酶链式反应）是一种分子生物学技术，用于扩增DNA 片段。
在本次实训中，我们学习了PCR的原理和操作方法，并进行了一系列实验，以加深对PCR技术的理解。
实验一：PCR反应体系的构建
在实验一中，我们构建了PCR反应体系，包括DNA模板、引物、dNTP、聚合酶、缓冲液和水。
通过反应体系的构建，我们了解了PCR反应体系中各个组分的作用，并掌握了反应体系的配制方法。
实验二：PCR扩增条件的优化
在实验二中，我们对PCR扩增条件进行了优化。
通过调整温度、引物浓度、模板浓度等参数，我们获得了最佳的PCR扩增效果，并得到了高品质的PCR产物。
在实验中，我们还学习了如何评估PCR 产物的质量和浓度。
实验三：PCR产物的检测和分析
在实验三中，我们对PCR产物进行了检测和分析。
通过凝胶电泳和文库测序技术，我们确定了PCR产物的大小和序列，并进行了序列比对和基因注释。
通过实验，我们深入了解了PCR产物的检测和分析方法，掌握了基本的生物信息学技能。
总结
通过本次实训，我们深入了解了PCR技术的原理和应用，掌握了PCR反应体系的构建和扩增条件的优化方法，学习了PCR产物的检测和分析技术。
本次实训为我们今后从事分子生物学研究奠定了基础，并为我们掌握更多高级技术和开展更深入的研究工作提供了重要的支持。
生化试验教材实验九：聚合酶链式反应
避免使用过期的试剂和仪器，以免影 响实验结果和造成安全隐患。
对于高温、高压、易燃、易爆、有毒 有害等危险品，应严格按照规定进行 管理和操作。
实验操作规范
01
在实验前应仔细阅读实 验步骤和注意事项，确 保对实验过程有充分的四种脱氧核苷酸， 即dATP、dCTP、dGTP和dTTP。
Taq DNA聚合酶
一种热稳定性的DNA聚合酶，负责 催化DNA的合成。
实验设备准备
01
02
03
04
PCR仪
提供PCR反应所需的温度循环 ，包括变性、退火、延伸等步 骤的温度设置和时间控制。
离心机
用于分离和纯化DNA、RNA 等生物分子。
结果验证与结论
结果验证
通过重复实验、使用不同引物或对 PCR产物进行测序等方法，验证结果 的可靠性和准确性。
得出结论
根据实验结果，可以得出关于基因表 达、变异或物种鉴定的结论。同时， 应注意结果的适用范围和局限性，以 及与文献报道的比较。
05 注意事项与安全
实验安全注意事项
实验前应穿戴实验服和防护眼镜，确 保个人防护措施到位。
移液器
精确移取和混合各种试剂。
显微镜
观察细胞和组织样本，以及 PCR扩增产物的大小和形态。
实验试剂准备
01
02
03
Buffer
一种化学试剂，用于维持 溶液的酸碱度和离子浓度， 以稳定酶的活性和促进酶 促反应的进行。
MgCl2
提供PCR反应所需的镁离 子，镁离子是Taq DNA聚 合酶的激活剂。
去离子水
环境和人体造成危害。
聚合酶链式反应pcr实验报告 -回复
聚合酶链式反应pcr实验报告-回复聚合酶链式反应(PCR)实验报告引言：PCR，全称为聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，是一种用于迅速扩增DNA序列的技术，由凯里穆利斯于1983年首次提出，并于1985年由Mullis和Faloona首次报道。
PCR具有高灵敏度、高特异性、高效率等优点，广泛应用于基因组学、医学诊断、法医学鉴定、分子进化等领域。
实验目的：本实验旨在通过PCR技术，对DNA序列进行扩增，并测试PCR反应的影响因素，如模板DNA浓度、引物浓度、反应体系中酶和核苷酸的用量等，以优化PCR反应条件。
实验材料和方法：1.实验材料：1.1 模板DNA：提供两个已知DNA序列的模板，标记为M1和M2。
1.2 引物：两对特异性引物，标记为F1/R1和F2/R2。
1.3 PCR试剂盒：包括酶、缓冲液、dNTPs等。
1.4 ddH2O：去离子水。
1.5 1.5琼脂糖凝胶：用于电泳分析。
2.实验操作：2.1 PCR反应体系的配制：- M1反应：加入4μL M1模板DNA、1μL F1引物（10μM）、1μL R1引物（10μM）、12.5μL PCR Master Mix和6.5μL ddH2O，总体积为25μL。
- M2反应：加入4μL M2模板DNA、1μL F2引物（10μM）、1μL R2引物（10μM）、12.5μL PCR Master Mix和6.5μL ddH2O，总体积为25μL。
2.2 PCR反应条件设置：- 初始变性：94，4分钟。
- 变性：94，30秒。
- 结合：56，30秒。
- 延伸：72，1分钟。
- 延伸终止：72，7分钟。
- 等待：4。
2.3 PCR扩增：连续重复步骤2.2中的变性、结合和延伸步骤30次。
2.4 电泳分析：将PCR产物与DNA量标Marker混合，用1.5琼脂糖凝胶电泳分析。
实验结果：1. PCR扩增结果：在实验过程中，通过PCR成功扩增了M1和M2的DNA序列。
聚合酶链反应实验报告.doc
聚合酶链反应实验报告.doc本实验的目的就是掌握聚合酶链反应（PCR）技术，了解PCR的重要性及应用范围，并能够进行PCR反应。
同时，还需要掌握DNA提取、纯化及定量的方法。
实验步骤如下：1、提取DNA样本。
收集细胞或组织样品，用细胞裂解液将样品细胞溶解后，按照DNA 纯化Kit说明书进行提取。
2、用琼脂糖凝胶电泳分析提取到的DNA。
分离出大小适中的DNA片段，然后进行提取和纯化。
3、用分光光度仪将提取到的DNA测定浓度。
根据文献报道，优选浓度为100ng/μL。
4、用PCR技术扩增目标DNA。
设计引物，设置PCR反应参数。
将PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，分离并图示PCR产物。
结果分析：分析分离出的DNA片段，指出PCR反应是否成功。
如果PCR反应成功，则可以扩增出目标DNA。
如果目标DNA被扩增，就在PCR反应所需时间内，将PCR反应产物进行凝胶电泳分析并使用紫外线摄影拍摄。
通过与标准品对照样品进行比较，可以确定PCR反应产物的大小。
如果PCR反应产物大小与目标DNA大小相符，则可以认为反应成功。
总结：PCR技术是现代生物技术中最具代表性的方法之一，不仅应用广泛，而且其原理简单易懂，容易操作。
在实验过程中，我们能够掌握PCR技术的基本原理及实验方法，并且了解了各种实验步骤的重要性。
在日常科研中，PCR技术被广泛应用于基因修饰、基因克隆、基因表达分析、基因家庭的鉴定等领域中。
由于PCR技术的高效性和可靠性，与其他技术相比，PCR技术具有独特的优势，被广泛认可。
聚合酶链式反应鉴定断裂基因实验报告
聚合酶链式反应鉴定断裂基因实验报告一、实验介绍聚合酶链式反应（PCR）是一种常用的分子生物学技术，能够在体外扩增DNA序列。
本实验旨在利用PCR技术鉴定断裂基因。
二、实验步骤1. DNA提取：从样本中提取DNA。
2. PCR反应：将DNA模板与引物、Taq聚合酶和dNTPs混合，进行PCR反应。
3. 凝胶电泳：将PCR产物进行凝胶电泳，观察结果。
三、实验材料和仪器1. 样本：含有待检测的断裂基因的组织或细胞。
2. DNA提取试剂盒：如TIANamp DNA纯化试剂盒。
3. PCR试剂盒：包含引物、Taq聚合酶和dNTPs等。
4. 凝胶电泳试剂盒：如TBE缓冲液、琼脂糖等。
5. 电泳仪：用于凝胶电泳。
四、实验结果经过PCR反应和凝胶电泳后，可以得到PCR产物带。
如果样品中存在目标基因，则可以在相应位置看到明显的带；如果不存在，则没有明显带出现。
根据带的大小还可以初步判断基因的大小。
五、实验注意事项1. 样品中的DNA应该纯度高，不能有杂质。
2. PCR反应条件要严格控制，包括反应温度、时间和引物浓度等。
3. 凝胶电泳时，电场强度不宜过大，以避免样品损伤。
六、实验意义PCR技术可以快速、准确地鉴定断裂基因，有助于诊断某些疾病。
此外，PCR技术还可以用于基因工程、遗传学研究等领域。
七、实验优化1. 引物设计：引物的选择和设计对PCR反应的成功与否至关重要。
合适的引物能够提高PCR反应的特异性和灵敏性。
2. PCR条件优化：反应温度、时间和引物浓度等条件都会影响PCR反应的结果。
通过不断调整这些条件，可以得到最佳的PCR产物。
3. 凝胶电泳优化：凝胶电泳时，电场强度和琼脂糖浓度也会影响结果。
根据需要进行相应调整即可。
八、总结本实验利用PCR技术鉴定断裂基因，通过DNA提取、PCR反应和凝胶电泳等步骤，得到PCR产物带。
实验过程中需要注意引物设计、PCR条件优化和凝胶电泳优化等方面。
PCR技术在生命科学研究中具有广泛的应用前景。
pcr技术实验报告
pcr技术实验报告PCR技术实验报告引言PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，它能够在短时间内扩增DNA片段，从而使得微量的DNA得以扩增至足够多的量进行进一步的分析和研究。
本实验旨在通过PCR技术扩增目标DNA片段，验证其在实验条件下的可行性和准确性。
实验方法1. 样品准备：从细胞或组织中提取DNA，并进行纯化处理。
2. PCR反应体系的准备：按照所需的PCR反应体系配制反应液。
3. PCR扩增：将DNA模板加入PCR反应管中，进行PCR扩增反应。
4. 扩增产物分析：将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
实验结果通过PCR技术扩增，成功获得了目标DNA片段，并在琼脂糖凝胶电泳中观察到了明显的扩增产物条带。
实验结果表明PCR技术在实验条件下具有较高的可行性和准确性，能够快速、高效地扩增目标DNA片段。
讨论本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的分子生物学研究提供了可靠的技术支持。
同时，本实验还表明PCR技术在分子诊断、基因克隆等领域具有重要的应用前景。
结论通过PCR技术实验，成功扩增了目标DNA片段，并验证了其在实验条件下的可行性和准确性。
PCR技术的高效、快速特点使其在分子生物学研究和临床诊断中具有广阔的应用前景。
总结PCR技术作为一种重要的分子生物学技术，已经成为现代生命科学研究中不可或缺的工具。
本实验结果验证了PCR技术在实验条件下的可行性和准确性，为进一步的研究和应用提供了可靠的技术支持。
PCR技术的不断发展和完善，将为生命科学领域的研究和临床诊断带来更多的可能性和机遇。
pcr检测实验报告
pcr检测实验报告PCR检测实验报告引言：PCR（聚合酶链式反应）是一种在分子生物学中广泛应用的技术，通过扩增目标DNA片段，使其数量增加到可以被检测的水平。
本实验旨在利用PCR技术对特定基因进行检测，并分析其在不同样本中的表达情况。
实验方法：1. 样本收集：从不同来源的细胞或组织中提取DNA。
本实验选择了人体血液样本，采用血液抽取器获取血液样本。
2. DNA提取：使用商业DNA提取试剂盒，按照说明书的步骤进行DNA提取。
通过离心和洗涤等步骤，获得高质量的DNA样本。
3. PCR反应体系准备：根据实验需要，制备PCR反应液。
反应液中包含DNA 模板、引物、酶和缓冲液等成分。
确保反应体系中各组分的浓度和比例正确。
4. PCR扩增：将PCR反应体系加入PCR仪器中，按照设定的温度和时间程序进行扩增。
PCR反应过程包括变性、退火和延伸等阶段，使目标DNA片段得到扩增。
5. PCR产物检测：将PCR产物进行凝胶电泳分析。
将PCR产物与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶上，通过电泳分离，观察PCR产物的大小和带电性。
使用紫外线照射，观察凝胶上的DNA条带。
实验结果：通过PCR反应和凝胶电泳分析，我们成功扩增了目标基因的DNA片段，并观察到了相应的DNA条带。
根据凝胶上的条带大小，我们可以初步判断目标基因在不同样本中的表达情况。
讨论：PCR技术在分子生物学研究中具有广泛的应用前景。
通过PCR扩增，可以快速、高效地获取目标基因的大量DNA片段，为后续的测序、克隆和表达研究提供了基础。
本实验中，我们选择了血液样本作为PCR反应的起始材料，这是因为血液中含有丰富的DNA，且采集较为方便。
然而，不同样本的DNA提取过程会存在一定的差异，可能会对PCR反应的结果产生影响。
因此，在实际应用中，需要根据具体样本的特点和实验目的，进行合适的DNA提取方法选择和优化。
此外，在PCR反应中，引物的选择也是至关重要的。
引物的设计应考虑目标基因的特异性，避免与其他非目标基因发生扩增。
聚合酶链式反应
实验9 聚合酶链式反应（PCR）技术【实验目的】掌握PCR反应的原理及操作技术。
【实验原理】PCR 技术实际上是在模板DNA、引物和4 种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于耐高温DNA 聚合酶的体外酶促合成反应。
PCR 技术的特异性取决于引物和模板DNA 结合的特异性。
反应分为三步：1 热变性：在高温条件下，DNA 双链解离形成单链DNA；2 退火：当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链；3 延伸：在DNA 聚合酶、dNTPs 和Mg2+存在的条件下，聚合酶催化以引物为起始点的DNA 链延伸反应。
以上三步为一个循环，每一循环的产物可以作为下一个循环的模板，几十个循环之后，介于两个引物之间的特异性DNA 片段得到了大量复制，数量可达到10 6~7个拷贝。
【器材与试剂】1．器材DNA 扩增仪（PCR 仪）、台式离心机、微量取液器、硅烷化的PCR 小管、琼脂糖凝胶电泳系统2．材料模板DNA，单、双链DNA均可作为PCR的样品。
3．试剂(1) 10×PCR 缓冲液(2) MgCl2 15mmol/L(3) dNTP 混合物：每种2.5mmol/L(4) Taq DNA 聚合酶：5U/μl(5) 引物1和引物2：2 μmol/L(6) 琼脂糖凝胶电泳试剂【操作步骤】1. 在0.2ml Eppendorf 管内依次混匀下列试剂，配制20μl 反应体系。
ddH2O 7.8 μl10×PCR 缓冲液 2 μlMgCl2（15mmol/L） 2 μldNTP（2.5mmol/L） 2 μl引物1 (2μmol/L) 2 μl引物2 (2μmol/L) 2 μl模板DNA 2 μlTaq DNA 聚合酶（5U/μL）0.2 μl总体积20 μl2．按下述循环程序进行扩增程序阶段程序名称温度时间循环数1 预变性94℃ 3 min 1变性94℃30 sec2 退火52℃30 sec30延伸72℃30 sec3 保温4℃∞ 13．扩增结束后，取10μl 扩增产物进行电泳检测。
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聚合酶链式反应实验报告篇一：PCR实验报告普通生物学实验报告实验名称：用PCR扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉一、特异性目的片段DNA的扩增（一）实验原理聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，其基本原理为DNA的半保留复制。
PCR技术由①高温变性模板；②引物与模板退火；③引物沿模板延伸这3步反应组成一个循环，通过多次循环反应，目的DNA 得以迅速扩增。
其主要步骤是：将模板DNA置于高温下（通常为93℃-94℃），使其变性解成单链；人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因的两条单链互补结合；热稳定DNA聚合酶（Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板按5’→ 3’的方向延伸，合成互补链。
本实验采用物种特异性引物扩增的方法来鉴定3种不同物种来源的肌肉。
以不同物种来源的动物DNA为模板，用物种特异性的引物进行PCR扩增，只有在模板和引物的物种相对应的情况下才会有特异性条带的出现。
应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定DNA成分。
（二）实验步骤按下表将各成分分别加入一做好标记的无菌PCR管中，配制50μl的PCR反应体系，注意酶要最后加，加完后将PCR管放置在冰上。
2.将上述混合液稍加离心，约10s左右。
取下后立即置于PCR仪中，盖紧热盖，定好PCR仪的反应程序，执行扩增程序。
反应程序为：预变性94℃ 5min变性94℃ 5s退火50℃ 5s延伸72℃ 20s后延伸72℃ 5min3.反应结束后，终止程序，将PCR管取出，放置于4℃，待电泳检测。
循环30次二、水平式琼脂糖凝胶电泳法鉴定PCR产物（一）实验原理核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液（pH 8.0-8.3)中，其碱基不解离，而磷酸集团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。
琼脂糖主要是从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子。
使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。
（二）实验步骤称取2.4g琼脂糖，放入250ml的锥形瓶中，加入120ml1×TAE缓冲液，微波炉高火加热约40s直至沸腾，摇动，使琼脂糖分散，在重复煮沸2次，直至溶液澄清透明。
待琼脂糖温度降到60℃左右时，按1:200的浓度加入Golden View,混匀后倒入已插上合适齿孔梳子的模具中，静置，约30-45min后凝胶完全凝固。
轻轻的垂直拔出梳子，将凝胶取出，放入电泳槽中，添加1×TAE缓冲液至刚好没过凝胶（有样品孔的一端靠近负极）。
取15μlPCR产物与3μl的6×上样缓冲液混匀，加入到凝胶样品孔中。
每加完一个样品应更换一个吸头。
加样前，要记下加样的顺序。
在每排样品孔中留出一个位置加入5μl的marker。
加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压100V，样品由负极向正极移动。
当溴酚蓝移动到距离凝胶下缘约1/3时，停止电泳。
电泳完毕后，取出凝胶，采用凝胶成像系统拍照保存。
三、实验小结（一）实验结果PCR 产物电泳结果由上图可以看出，样品1和样品6出现了目的条带（大小约20bp），所以DNA模板1为猪肉DNA，DNA模板3为牛肉DNA,DNA模板2为兔肉DNA。
（二）实验讨论1.在加入Taq酶时，应始终保持酶在冰浴中，不可握在手中。
2.每加完一次酶，都应更换吸头。
因为在加酶时，吸头会插入液面以下，为防止污染，应更换吸头。
3.拔出梳子时，应两端一起用力，垂直，缓慢地拔出，以免破坏胶孔。
4.将样品与上样缓冲液混合时，要反复吸进，挤出溶液。
为防止出现较多气泡，在每次挤出溶液时，可在吸头中残留少量溶液。
5.在加样时，吸头要垂直于凝胶板且不要插入太深，以免破坏样品孔。
6.我们组的电泳图中，条带不是很明显，应该是加样时样品的量不够充足，以后应注意。
篇二：PCR实验报告pcr实验报告7月19日高遄实验目的：了解pcr技术原理，掌握最基础的pcr实验步骤。
实验试剂：模板dna，mg2+，buffer，dntps，taq dna聚合酶，引物，h2o，石蜡油。
实验原理：? pcr全称聚合酶链反应，是体外快速扩增特定基因或dna序列最常用的方法。
? 基本原理：首先将双链dna分子在临近沸点的温度下加热分离成2条单链dna分子，dna聚合酶以单链dna为模板并利用反应混合物中的四种脱氧核苷三磷酸合成新的dna互补链。
pcr反应时，只要在试管内加入模板dna、pcr引物、四种核苷酸及适当浓度的mg2+，dna聚合酶就能在数小时内将目标序列扩增100万倍以上。
（1）双链模板dna分子首先在高温下解开成长的单链，短链引物分子立即与该模板dna两端的特定序列相结合，产生双链区。
（2） dna聚合酶从引物处开始复制其互补链，迅速产生与目标序列完全相同的复制品。
（3）在后续反应中，无论是起始模板dna还是经复制的杂合dna双链，都会在高温下解开成为单链，体系中的引物分子再次与其互补序列相结合，聚合酶也再度复制模板dna。
（4）由于在pcr反应中选用的一对引物，是按照与扩增区域两端序列彼此互补的原则设计的，因此每一条新生链的合成都是从引物的退火结合位点开始并朝反方向延伸的，每一条新合成的dna链上都有新的引物结合位点。
（5）整个pcr的反应全过程，即dna解链（变性）、引物与模板dna结合（退火）、dna合成（链的延伸）三步可以被不断重复。
经多次循环之后，反应混合物中所含有的双链dna分子数，即两条引物结合位点之间的dna区段的拷贝数，理论上的最高值应该是2^n，能进一步满足遗传分析的需要。
? 试剂作用：（1）引物：dna复制的起始点，针对复制dna片段的两端，有5’引物和3’引物（2） taq dna聚合酶：促进dntps与模板结合。
（3） buffer：tris-hcl反应缓冲液，taq dna聚合酶提供一个最适酶催反应条件。
（4） mg2+：对pcr扩增效率影响很大，浓度过高可降低pcr扩增的特异性，浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。
（5） dntps：底物，在引物引导下合成与模板互补的dna新链。
（6）石蜡油：防止pcr加热过程中dna蒸发。
? 试剂配置体积：（1）热启动：94℃，5~10min（2）变性：94℃，45~60s。
（3）退火：50~65℃，1min。
退火温度计算：tm-（5℃~10℃），tm（解链温度）=4（g+c）+2（a+t）。
（4）延伸：72℃，1~1.5min。
（5）步骤（2）~（4）热循环25~30个周期（6）保温：延伸72℃，10min? 产物检测：凝胶电泳。
实验步骤：（1）设计20μl体系各试剂配比：（2）按照预先设计的20μl体积配置6管试管量，实际加入量如下表（3）完成后分6管加入pcr管中，每管15μl体积，标注1-6号码。
（4）在前1-~4号pcr管中加入模板dna，在5号管中加入c3h模板作为阳性参照，6号中不加任何模板dna，作为阴性参照。
（5）在加完模板的6管试剂中各加入20μl石蜡油（6）将pcr管放入 pcr仪，按之前设定的加热温度与时间设置a．热启动：94℃，2min；80℃，1min；此时在各管中加入dntps 4μlb．变性：94℃，30s；c．退火：65℃，1.5min；d．延伸：72℃，2min步骤b~d循环40次e．保温：72℃，10min（7）完成后用3琼脂糖凝胶（60ml）电泳进行检测。
实验结果：pcr目标产物约为295bp琼脂糖凝胶电泳结果如下图所示1 2 3 4 5 6marker1、2号泳道为♂性小鼠dna模板的pcr产物 3、4号泳道为♀性小鼠dna模板的pcr产物 5号泳道为c3h阳性参照6号泳道为阴性参照由marker参照可知，pcr产物大小约为290~300bp篇二：聚合酶链式反应pcr实验报告实验二聚合酶链式反应（pcr）一、实验原理聚合酶链式反应（pcr）是利用dna片段旁侧两个短的单链引物，在体外快速扩增特异dna片段的技术。
它应用热稳定的聚合酶，通过双链dna模板的热变性、引物退火和引物延伸的重复循环，dna片段以指数方式增加了百万倍。
从非常微量的dna甚至单个细胞所含有的dna起始，可产生ug量的pcr产物。
二、器材与试剂1.器材：移液器，ep管，热盖pcr仪，电泳仪，量筒，锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪2.试剂：引物，模板，taq dna聚合酶，原料（dntps），缓冲液与mg2+，h2o, 2pcrmi溶液，dna染料三、实验步骤pcr反应体系的建立取离心管，依次加入试剂混匀1．h2o 12μl2．模板1μl3．引物t7 1μl4．引物sp61μl5．2pcrmi15μlpcr仪的热循环反应把离心管放入pcr仪中，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成1.模板dna的变性：模板dna经加热至94℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2.模板dna与引物的退火(复性)：模板dna经加热变性成单链后，温度降至56℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合；3.引物的延伸：经加热至72℃左右dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。
重复该循环30次，每次需要2-3分钟。
电泳检测结果扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示加入的为1号样，出现在500bp左右条带，而预算结果为扩增出492bp条带，故实验成功。
四、讨论1.mg2+离子浓度对pcr扩增效率影响很大，浓度过高可降低pcr扩增的特异性浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。
2.变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低pcr扩增效率。
3.eb：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖中的dna，可与dna结合，用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号。
4.溴酚蓝：电泳指示剂，相当于300bp的dna的电泳速度。
5.100bp dna markerⅰ是由单独的pcr扩增产物混合而成，已含有1loading buffer,可以直接电泳。
包括11条双链dna片断：100bp、20bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp、1000bp和1500bp。