实验四不规则抗体筛选与鉴定、效价测定
不规则抗体筛查流程步骤
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不规则抗体筛查试验操作规程
不规则抗体筛查试验操作规程(共3页)-本页仅作为预览文档封面，使用时请删除本页-XXX医院不规则抗体筛查试验操作规程1.目的为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作，保证检查结果准确和临床输血安全、有效，依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。
2.适用范围本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。
3.职责输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定，但只对所筛选或鉴定的标本负责。
4.相关文件试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序5.相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录6.实验原理采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清（血浆）与筛选红细胞反应，检测受检者血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体，红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应，根据反应格局鉴定抗体特异性。
7.仪器设备和检测环境.仪器设备等：玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
. 检测环境：室温应控制在18~27℃，湿度应保持在30~70%。
8.试剂①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂（抗IgG,C3d），均为有合格证件的正品。
②市售O型筛选红细胞：为三支以上不同人份的3%筛选红细胞，均为有合格证件的正品。
或自制O型筛选红细胞：选择已确认ABO血型为O型的健康者，采集EDTAK抗凝血2标本离心，取少许红细胞置于试管中，用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/分钟（1000g），每次离心1分钟，离心后将上清液全部倒出]，再取30µl游离红细胞加入到标记为Ⅰ号的试管中，然后加入1ml生理盐水混匀，即得Ⅰ号O型3%的筛选红细胞；依同样方法分别制备不同人份的Ⅱ号和Ⅲ号O型3%的筛选红细胞。
不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响
不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响1. 引言1.1 背景新生儿溶血病是一种常见的新生儿疾病，主要是由于母体产生的不规则抗体与胎儿红细胞表面抗原结合引起的。
胎儿红细胞与母体不相容的抗原结合后，会引发免疫反应，导致红细胞破裂溶解，造成溶血现象。
此病若不及时诊断和治疗，可导致严重的贫血、黄疸甚至死亡。
随着医学技术的进步，不规则抗体筛查及效价检测方法得到了不断的完善和提升。
通过对孕妇进行不规则抗体筛查，可以及时发现母体携带的不规则抗体，采取相应的措施进行干预，从而避免新生儿溶血病的发生。
对不规则抗体的效价检测也能帮助医生更准确地评估患儿的病情，指导治疗方案的制定。
深入研究不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响，对提高疾病的诊断率和治疗效果具有重要意义。
本文将从不规则抗体筛查方法、不规则抗体效价检测方法、不规则抗体筛查与新生儿溶血病的关联等方面展开讨论，旨在为临床实践提供更为科学的依据。
1.2 目的目的：本文旨在探讨不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响，通过详细分析不规则抗体筛查方法和不规则抗体效价检测方法，揭示不规则抗体与新生儿溶血病之间的关联。
进一步探讨不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响，以期为临床医学提供更为准确、快速、有效的诊断和治疗方法。
通过本文的研究，我们希望能够增进对不规则抗体筛查及效价的了解，深入探讨其在新生儿溶血病中的作用机制，为临床实践提供科学依据，促进新生儿溶血病的预防和治疗，从而减少新生儿患者的发病率和提高其生存质量。
通过本文的研究，我们希望能够为不规则抗体筛查及效价在新生儿溶血病中的应用提供重要的参考依据，并为相关研究和临床实践提供新的思路和途径。
1.3 意义在新生儿溶血病的预防和治疗中，不规则抗体筛查及效价的重要性不可忽视。
不规则抗体筛查是指通过检测母体血清中是否存在针对胎儿红细胞的不规则抗体，从而及时发现患有不规则抗体的孕妇，采取相应的预防措施，避免新生儿溶血病的发生。
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4.致敏红细胞（质控细胞）。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
实验四不规则抗体筛选与鉴定、效价测定
2.鉴定 2.鉴定
标管： ⑴标管：11支1-10、自c 加样： ⑵加样：Ps2滴+谱细胞1滴 离心、观察结果： ⑶离心、观察结果： ①直接观察 ②4℃10min观察 ③恢复室温观察，有格局为IgM ④37℃观察有无凝集 ⑤凝聚胺法或抗人球法（上谱细胞），观 察格局可判断有无IgG抗体 测效价： ⑷测效价：若有抗体，测效价
操 作
1.筛选 1.筛选
(聚凝胺法 聚凝胺法) 聚凝胺法 (抗人球法 抗人球法) 抗人球法
⑴标管8支:S1、S2、S3、S1’、S2’、S3’、K、自c 标管8 ⑵加样：受检血清2滴+上述细胞1滴检测 加样 ⑶观察结果:阳性进行不规则抗体鉴定 观察结果: ⑷测抗体效价（室温、4℃10min、恢复室温 测抗体效价 10min、37℃3min ）
注意事项 1.更换滴管， 1.更换滴管，防止干扰 更换滴管 2.防止前带现象， 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 防止前带现象 3.试剂细胞 3.试剂细胞 4.稀释液体积越小， 4.稀释液体积越小，产生误差越大 稀释液体积越小
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
思考题
1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水 聚凝胺、抗人球介质中进行。 聚凝胺、抗人球介质中进行。 2.抗体效价检测的临床应用 2.抗体效价检测的临床应用
目的 掌握抗体效价的测定方法 原理 Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可 见“±”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材 试剂 小试管、记号笔、滴管、离心机 悬浮红细胞、血清、生理盐水
实验步骤 1.标记管号 标记管号：1、2、4、8、16、32…… 标记管号 2.从2号开始各管分别加生理盐水50ul 从 号开始各管分别加生理盐水50ul 3.加血清 加血清：1、2管各加血清 加血清 4.倍比稀释 倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出50ul移入 倍比稀释 第3管，混匀；再从第3管吸出50ul移入第4 管，以此类推，至最后一管，吸出50ul弃去。 5.加悬红 加悬红：每管各加50ul ，混匀。 加悬红 6.3000r／min离心 离心15秒，直接观察结果 观察结果、 离心 观察结果 4℃10min、室温10min、37℃3min观察结果。
不规则抗体筛选操作规程
不规则抗体筛选操作规程一．试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。
2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二．标本收集与处理1．血清或血浆都可以使用。
2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。
三．操作步骤1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。
2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。
3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。
注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。
4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。
5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。
7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
8. 从微柱正反两面判读并记录结果。
四．结果判读阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。
阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。
溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。
如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。
4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。
3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。
2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。
1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。
阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。
五.注意事项1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。
不规则抗体筛查与血型抗体效价
不规则抗体筛查与血型抗体效价不规则抗体筛查? 申请单项目：不规则抗体筛查 ? 标本要求：EDTA抗凝管抽取2ml，标本不得有溶血、脂血及凝块，否则视为不合格标本给予退回。
? 检测时间：每次收取标本，当天发出报告。
? 费用：50元/次? 临床意义：不规则抗体是指抗-A、抗-B或抗AB以外的其他抗体。
目前不规则抗体的筛查方法是采用O型试剂红细胞检测被检者的血清中的不规则抗体。
由于有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，轻则影响治疗效果，重则危及病人生命；此外，对孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。
因此，抗筛选择是很必要而且必须的。
? 其筛选的意义主要在三个方面:1.献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血液中的不规则抗体引起病人红细胞的破坏二引起的溶血性输血反应，同时可以减少血液浪费，可将有不规则抗体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。
2.对需要输血治疗的患者，进行不规则抗体筛查，可以有助于血液的选择，从而有充分的时间来选择不含有针对某抗体的影响抗原的血液，从而防止因为输注含有某种抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证输血安全。
3.孕妇进行不规则抗体筛查，可以尽早发现不规则抗体，可以在孕期进行新生儿溶血病的预防和防治，减少不规则抗体对胎儿或新生儿带来的伤害，减少新生儿溶血病的程度，提高胎儿或新生儿的身体素质。
反复输血或多次妊娠可以使患者受到免疫刺激而产生不规则抗体。
因此，输血前对有输血史，人生史的患者进行不规则抗体筛查非常必要，有利于早起发现和确认具体有临床意义的抗体并可以在配血前鉴定此抗体，已获得充足的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的供者，确保输血安全。
? 临床意义：1.孕妇及产妇必查此项目。
2.有输血史者（血制品），输血前必查此项目。
不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响
不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响随着医学技术的不断发展，对于新生儿溶血病的防治工作也日益得到加强。
而不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响尤为重要。
本文将从不规则抗体的概念和筛查方法、新生儿溶血病的相关知识以及不规则抗体筛查及效价对新生儿溶血病的影响等方面进行论述。
一、不规则抗体的概念和筛查方法不规则抗体是指存在于个体血清中的一种特异性抗体，其抗原通常不是细菌、病毒或真菌，而是体内产生的抗原。
不规则抗体可以引起机体免疫反应，导致溶血性贫血等疾病。
不规则抗体的筛查方法通常包括直接抗人球蛋白试验和间接抗人球蛋白试验。
直接抗人球蛋白试验用于筛查已知的抗体，而间接抗人球蛋白试验则用于筛查不明确的抗体。
二、新生儿溶血病的相关知识新生儿溶血病是由于母亲产生的免疫球蛋白G（IgG）类不规则抗体通过胎盘进入胎儿体内，攻击胎儿红细胞而引起的溶血病。
新生儿溶血病可分为两种类型：Rh血型不合（Rh 阴性母亲和Rh阳性父亲所生的Rh阳性胎儿）和非Rh血型不合（其他不同的血型不合）。
新生儿溶血病的临床表现主要包括贫血、黄疸、肝脾肿大等症状，严重者可导致脑损伤甚至死亡。
及时发现和有效防治新生儿溶血病对保护婴儿的生命和健康至关重要。
1. 提前发现和诊断新生儿溶血病通过对孕期母亲进行不规则抗体的筛查，能够及早发现母体血清中的不规则抗体，通过监测抗体效价变化来判断新生儿是否会患有溶血病。
一旦发现存在不规则抗体，可以及时采取针对性的治疗措施，减少新生儿溶血病的发生率。
2. 预防新生儿溶血病的发生对于筛查出存在不规则抗体的孕妇，可以采取积极的预防措施，如输注相关免疫球蛋白、手术干预等，以减少胎儿受到不规则抗体的影响。
对于已知存在风险的孕妇可以采用产前诊断技术，如羊水穿刺或绒毛取样等进行胎儿Rh血型鉴定，从而采取精准的治疗措施。
3. 提高新生儿溶血病的治疗效果对于患有溶血病的新生儿，通过检测母体不规则抗体的效价，可以更加精确地了解抗体的影响程度，从而制定更加有效的治疗方案。
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临检教研室
一、不规则抗体筛选与鉴定
目的： 目的： 检测有临床意义的不规则抗体 原理：受检血清+筛选细胞 一组3人份） 筛选细胞（ 原理：受检血清 筛选细胞（一组3人份）
受检血清+谱细胞 一组10人份） 10人份 受检血清 谱细胞 （一组10人份） 筛选 鉴定
方法:①盐水法②聚凝胺法③抗人球法 方法: 盐水法②聚凝胺法③ 器材: 小试管、滴管、试管架、记号笔、冰箱、离心机、 器材: 小试管、滴管、试管架、记号笔、冰箱、离心机、
2.鉴定 2.鉴定
标管： ⑴标管：11支1-10、自c 加样： ⑵加样：Ps2滴+谱细胞1滴 离心、观察结果： ⑶离心、观察结果： ①直接观察 ②4℃10min观察 ③恢复室温观察，有格局为IgM ④37℃观察有无凝集 ⑤凝聚胺法或抗人球法（上谱细胞），观 察格局可判断有无IgG抗体 测效价： ⑷测效价：若有抗体，测效价
注意事项
1.筛选细胞凝集（盐水法、聚凝胺法、抗人球 法），要鉴定抗体特异性。 2.谱细胞凝集程度试管集中对比观察1+w、1+、 1+s。 3.自身凝集与否要进行观察。 4.盐水中有凝集可能为：有格局（抗-M、抗P）；无格局（抗-I、抗-HI）。无凝集用凝聚 胺法或抗人球法，以检查有无IgG抗体。
二、血型抗体效价测定（IgM、IgG） 二、血型抗体效价测定（IgM、IgG）
目的 掌握抗体效价的测定方法 原理 Ab经过倍比稀释加入悬浮红细胞，以肉眼可 见“±”凝集的最高稀释倍数为抗体效价。 器材 试剂 小试管、记号笔、滴管、离心机 悬浮红细胞、血清、生理盐水
实验步骤 1.标记管号 标记管号：1、2、4、8、16、32…… 标记管号 2.从2号开始各管分别加生理盐水50ul 从 号开始各管分别加生理盐水50ul 3.加血清 加血清：1、2管各加血清 加血清 4.倍比稀释 倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出50ul移入 倍比稀释 第3管，混匀；再从第3管吸出50ul移入第4 管，以此类推，至最后一管，吸出50ul弃去。 5.加悬红 加悬红：每管各离心15秒，直接观察结果 观察结果、 离心 观察结果 4℃10min、室温10min、37℃3min观察结果。
37℃水浴箱 37℃水浴箱
试剂:筛选细胞、 试剂:筛选细胞、谱细胞 标本: 标本:血清或血浆
操 作
1.筛选 1.筛选
(聚凝胺法 聚凝胺法) 聚凝胺法 (抗人球法 抗人球法) 抗人球法
⑴标管8支:S1、S2、S3、S1’、S2’、S3’、K、自c 标管8 ⑵加样：受检血清2滴+上述细胞1滴检测 加样 ⑶观察结果:阳性进行不规则抗体鉴定 观察结果: ⑷测抗体效价（室温、4℃10min、恢复室温 测抗体效价 10min、37℃3min ）
注意事项 1.更换滴管， 1.更换滴管，防止干扰 更换滴管 2.防止前带现象， 2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始 防止前带现象 3.试剂细胞 3.试剂细胞 4.稀释液体积越小， 4.稀释液体积越小，产生误差越大 稀释液体积越小
思考题
1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 1.为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水、 为何不规则抗体筛选与鉴定要在盐水 聚凝胺、抗人球介质中进行。 聚凝胺、抗人球介质中进行。 2.抗体效价检测的临床应用 2.抗体效价检测的临床应用