天狼星红染色
天狼猩红染色实验报告
天狼猩红染色实验报告
一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称厂家型号
脱水机武汉俊杰电子有限公司JJ-12J
包埋机武汉俊杰电子有限公司JB-P5
病理切片机上海徕卡仪器有限公司RM2016
冻台武汉俊杰电子有限公司JB-L5
组织摊片机浙江省金华市科迪仪器设备有限公司KD-P
烤箱天津市莱玻瑞仪器设备有限公司GFL-230
载玻片及盖玻片江苏世泰实验器材有限公司10127105P-G
正置光学显微镜日本尼康NIKON ECLIPSE E100成像系统日本尼康NIKON DS-U3
2、主要实验试剂
试剂名称厂家货号
无水乙醇国药集团化学试剂有限公司100092683
二甲苯国药集团化学试剂有限公司10023418
天狼猩红染液四川赛因斯特生物科技有限公司
中性树胶国药集团化学试剂有限公司10004160
二、实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无
水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。
2、天狼猩红染色：切片入天狼猩红染液中染色8-10min，两缸或三缸无水乙醇脱水；
3、脱水封片：切片放入再放入干净的二甲苯透明5min，中性树胶封片。
4、显微镜镜检，图像采集分析。
三、结果判读：
光学显微镜下胶原纤维红色，背景黄色；偏振光下，Ⅰ型胶原呈橘黄色或亮红色的粗纤维，Ⅲ型胶原呈绿色的细纤维。
四、注意事项：
1、无水乙醇脱水时应控制程度，片子不能残留多余的染液，也不能影响黄色的背景。
天狼星红染色原理
天狼星红染色原理天狼星红是一种常用的组织染色剂，它在生物学和医学领域有着广泛的应用。
天狼星红染色原理是指天狼星红在染色过程中的作用机制和原理。
下面我们将详细介绍天狼星红染色原理的相关知识。
首先，天狼星红是一种亲水性染料，它能够与细胞内的蛋白质结合形成稳定的复合物。
在染色过程中，天狼星红以阳离子形式存在，它能够与细胞内的阴离子基团结合，从而在细胞内形成可见的染色效果。
这种染色效果能够帮助科研人员观察细胞的形态、结构和功能，为细胞学和组织学研究提供了重要的技术手段。
其次，天狼星红染色原理还涉及到染色剂与细胞结构的亲和性。
天狼星红能够与细胞内的特定结构发生亲和作用，如细胞核、细胞质、细胞器等，从而在染色过程中呈现出不同的染色效果。
这种亲和作用是天狼星红染色原理的重要组成部分，也是其在细胞学和组织学研究中得以广泛应用的重要原因之一。
另外，天狼星红染色原理还与染色剂的渗透性和选择性有关。
天狼星红能够通过细胞膜进入细胞内部，与细胞内的特定结构结合并发生染色反应。
这种渗透性和选择性使得天狼星红在染色过程中能够准确地染色目标结构，为科研人员提供了清晰的观察和分析样本的机会。
总的来说，天狼星红染色原理是一个复杂而又精密的过程，它涉及到染色剂的化学特性、细胞结构的生物学特性以及染色过程的物理化学变化等多个方面的知识。
了解天狼星红染色原理不仅有助于科研人员正确地选择和运用染色剂，还能够帮助他们更好地理解细胞和组织的结构与功能，为生物学和医学研究提供更加准确和可靠的数据支持。
总之，天狼星红染色原理是细胞学和组织学研究中的重要内容，它的深入理解和准确把握对于科研工作具有重要的意义。
希望通过本文的介绍，能够使读者对天狼星红染色原理有一个更加清晰和全面的认识，为相关研究工作提供一定的帮助和指导。
天狼星红染色原理
天狼星红染色原理
原理利用胶原分子与强酸性染料天狼星红结合一起后加强双折光现象，使不同颜色和形态的胶原纤维得以区分。
胶原纤维（collagenousfiber）在三种纤维中数量最多，新鲜时呈白色，有光泽，故又名白纤维。
在HE染色切片中呈嗜酸性，粗细不等，直径0.5~10um，呈波浪形，有分支并交织呈网，胶原纤维的生化成分为I型胶原蛋白。
胶原蛋白（collagen）由纤维细胞分泌，于细胞外聚合成胶原原纤维，经少量黏合成胶原纤维。
胶原纤维是三种纤维中分布最广泛的一种纤维，广泛分布于各脏器内，它在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。
胶原纤维在上述的两种方法中着染不同的颜色，如V.G着染红色，Masson氏着染蓝色或绿色。
这主要取决于染料对组织的渗透、吸附、沉淀和反应，而染料分子量的大小是关键，分子量小的分子移动迅速，行动快，对组织的渗透性较强，能穿透较为致密的组织。
分子量大的染料分子移动较迟缓，渗透力较弱，可作用于组织强求构较疏松的组织，染色时间可适当延长。
在相关的染料中，分子量从小到大依次排列是：苦味酸（黄色）：229.11；桔黄G（黄色）：452；丽春红（红色）：480.42；酸性品红（红色）：585.53；苯胺蓝（蓝色）：737.72；亮绿（绿色）：792.72；甲基蓝（蓝色）>99。
染色是一个较为复杂的化学反应和物理作用的双重过程，在应用这些方法时，根据不同情况，选择不同的方法，认真地操作，方能获得最佳的效果。
天狼猩红染色
已知胶原有四型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）区分并定量这四种胶原纤维，对于研究病变的发生机理和演变过程有一定的意义。
利用胶原蛋白聚合及其缠绕螺旋排列不同的特点，使用天狼星红苦味酸染色法，在偏振光显微镜下，可以根据双折光性和着色的不同，分别显示出四型胶原纤维。
[组织固定与切片]
4%甲醛液固定组织，石蜡切片。
[试剂配制]
（1）天狼星红-饱和苦味酸液：%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液90ml。
（2）天青石蓝液：天青石蓝，铁明矾，蒸馏水250ml。
溶解煮沸，冷却后过滤，加入甘油30ml，然后再加入浓硫酸（注意硫酸一定要后加入）。
[操作步骤]
（1）石蜡切片厚4~6μm，脱蜡至水。
（2）入天青石蓝液5~10min。
（3）蒸馏水冲洗3次。
（4）天狼星红饱和苦味酸液15~30min；（可用Harris苏木素液淡染细胞核）。
（5）直接用无水乙醇分化与脱水。
（6）二甲苯透明、光学树胶封固。
[染色结果]
普通光镜观察：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其他成分呈黄色。
偏振光显微镜下观察：
Ⅰ型胶原纤维：红色或黄色，排列紧密，具强双折光性。
Ⅱ型胶原纤维：多种色彩，疏松网状、弱双折光性。
Ⅲ型胶原纤维：绿色、细纤维、弱双折光性。
Ⅳ型胶原纤维：淡黄色、弱双折光性（基膜成分）。
[注意事项]
为保持色彩鲜艳，应在染色后及时观察并照相。
天狼星红染色液-A液
天狼星红染色液-A 液
简介：
胶原纤维(Collagen Fiber)是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维，广泛分布于各种脏器，其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。
天狼星红染色液-A 液的溶剂为衬染PA 饱和溶液，主要用于各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究中，在普通光学显微镜下心脏血管等组织的胶原纤维被染成红色，在偏振光镜下对各种纤维化病变的分型和分级研究有一定的帮助作用。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。
2、切片厚6μm ，常规脱蜡至水。
3、天狼星红染色液滴染。
4、流水稍微冲洗，去除切片表面染色液。
5、Mayer 苏木素染色液染细胞核。
6、流水冲洗10min 。
7、常规脱水透明，中性树胶封固。
染色结果：
普通光学显微镜:
胶原纤维
红色 细胞核
蓝色
偏振光显微镜:
Ⅰ型胶原纤维
强橙黄色或亮红色 Ⅲ型胶原纤维 绿色
注意事项：
1、为使在偏振光镜下显示清晰，本法的切片厚度以6～7μm 为宜。
编号 名称 DC0040 Storage 天狼星红染色液-A 液 100ml 4℃ 避光 使用说明书 1份
3、本法染色稳定，不易褪色。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
骨骼肌纤维化 检测指标
骨骼肌纤维化检测指标
骨骼肌纤维化是指骨骼肌组织中胶原纤维过度沉积，导致骨骼肌结构和功能的异常。
以下是一些常用的检测骨骼肌纤维化的指标：
1. 胶原蛋白含量测定：通过组织切片染色或生化分析方法，可以
测定骨骼肌组织中胶原蛋白的含量。
胶原蛋白是纤维化的主要成分之一，其含量的增加可以反映纤维化的程度。
2. 天狼星红染色：天狼星红染色是一种常用的组织病理学染色方法，用于检测骨骼肌组织中的胶原纤维。
胶原纤维在天狼星红染色下呈现红色，通过对染色切片的观察和分析，可以评估纤维化的程度和分布。
3. 转化生长因子-β（TGF-β）：TGF-β是一种促进纤维化的细
胞因子。
通过检测骨骼肌组织或血液中TGF-β的水平，可以间接反映纤维化的活性。
4. 金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）：TIMP 是一种抑制金属蛋白
酶活性的蛋白质，金属蛋白酶参与胶原蛋白的降解。
因此，检测TIMP 的水平可以反映纤维化过程中胶原蛋白降解的平衡状态。
5. 磁共振成像（MRI）：MRI 可以提供骨骼肌的形态和结构信息。
一些MRI 技术，如T1 加权成像和弥散张量成像，可以用于检测骨骼肌纤维化的程度和分布。
天狼猩红饱和苦味酸染色在大鼠胰腺纤维化评价中的应用
实用 医学 杂志 ２ ０ 年 第 ２ 卷第 １ 期 ０８ ４ ６
天 狼 猩 红饱 和苦 味酸 染 色 在 大 鼠胰腺 纤 维 化 评 价 中的应 用
崔叶青
摘
Hale Waihona Puke 张 小丽 李非 要 目的 ： 用苦 味 酸 天 狼 猩 红 一 振 光 法 评 价 长 期 高脂 饮 食 导 致 的 胰 腺 纤 维 化 。 方 法 ： 立 ｌ 应 偏 建 ８周 高 脂
饮食 大鼠模 型 ， Ｅ染 色观察胰腺形 态变化 ， Ｈ 苦味酸 天狼猩 红一 偏振光 法对胰腺 纤维化特 点进行评价 。结果 ： 长期 高 脂饮食 可以导致大 鼠胰腺 纤维化 改变 ． 对苦味 酸天狼猩红 染色结果进行 图像 分析显示胶原 纤维含 量较对照组 明显 增加（ Ｐ＜００ ） 偏光镜下观察示 以 Ｉ、 ．１ ， Ⅲ胶原 为主要成 分。结论 ： 苦味 酸天狼猩红一 偏振光 法是评价 胰腺纤维化胶 原沉积的有效方法 。
ｅ ａｕ ｔｄ ｕ ｉ ｇｐ ｃ ｏ ｉ ｕ — ｏａ ｚ ｔ ｎ ｍｅｈ ｄ Ｒｅ ｕ ｔ Ｃ ｒ ｎ ｃＨＦ ｓｉ ｄ ｃ ｄ ｔ ｅ ｆ ｒ ｔ ｈ ｎ ｅ ｉ ｅ ｐ ｎ ｒ ａ ． ｉ ｕ ｖ ｌ ａｅ ｓｎ ｉｒ ｓｒ ｓ ｐ ｌ ｒ ａｉ ｔ ｏ ． ｓ ｌｓ ｉ ｉ ｏ ｈ ｏ ｉ Ｄ ｎ ｕ ｅ ｈ ｂ ｏ ｉ ｃ ａ ｇ ｔ ａ ｃ ｅ ｓ Ｓ ｒ ｓ ｉ ｃ ｎ ｈ ｉ
ｒ ｄ ｓａｎ ｎ ｅ ｅ ｌｄ ｔ ｅ ｃ ｌ ｇ ｎ ｃ ｎ ｅ ｔｗ ｓｓｇ ｉ ｃ ｎ ｙ ｉ ｃｅ ｓ ｄ ｉ ｈ ｒ ｕ ｔ Ｄｓ ａ ｏ ａ ｅ ｔ ｈ ｔ ｎ ｔｅ ｅ ｔｉ ｉ ｇｒ ｖ ａｅ ｈ ｏ ｌ ｅ ｏ ｔｎ ａ ｉｎ ｆ ａ ｔ ｒａ ｅ ｔ ｅｇ ｏ ｐ ｗｉ ＨＦ ， ｓｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗｉ ｔ ａ ａ ｉ ｌ ｎ ｎ ｈ ｈ ｉ ｈ
胶原纤维的天狼猩红染色法与Vangieson染色法的比较
１ ８・ ２
ＳＣ Ａ Ｏ Ｒ Ａ ＦＡ Ａ Ｏ Ｉ ＨＯ Ｎ Ｊ Ｕ Ｎ Ｌ Ｏ Ｎ Ｔ ＭＹ Ｖ Ｌ １ Ｏ．２ ０ ２ Ｏ ． ０ Ｎ ２０
２ 结 果
肝 Ａ组 肝 Ｂ组 肝 Ｃ组 组 织块 可连续切 片 ，镜 下 细胞无 收缩 ，肝索和 肝血窦分 布清 晰可 见 ，肝 小 叶 间无 裂 隙 。 与 Ａ组无 明显 区别 。 可连续 切片 ，镜下 组织结 构完 整 ，细 胞 收缩小 ，无裂 隙 。
１２６ 酸酒精分色，水洗。 ．．
１２７ 分 别人下 液 ３ ，２ ．． ０’ ｈ
天狼猩红染色法 ： ０１ ． ％天狼 猩红 １ｃ 苦 昧酸饱 和液 ９ ｃ ０ｃ＋ ０ｃ
Ｂ Ｖａｇｅｏ ． ｎｉ ｎ染色法 ： ｓ
苦昧酸饱和液 １０ｃ＋ ％酸性复红 ７５ ｅ ０ｃ ２ ．ｃ ＋冰
醋 酸 ０４ 一ｎ ３ｃ ．１ ７ ｃ
社 ．９ ８，２ １９ ２—２ ． ３
［ 北 京 ： 人 民卫 生 出版 杜 Ｍ］
１８ ９０
［ ］杜卓 民、实用组织学技术 ［ 第 二 版 ．北 京 ：人 民卫 生 出 版 ２ Ｍ］
胶 原 纤 维 的天 狼 猩 红染 色法 与 Ｖ ｎｉ ｏ 染 色法 的 比较 ａｇ ｓｎ ｅ
谢 美容 王 玮
１２ １ 取材 ：含胶原纤维多的组织。 ．．
维普资讯
四川解 剖 学杂 志 ２０ ０ ２年 第 １ 卷 第 ２ 期 Ｏ
１２２ 固定 １％福尔马林或 Ｂ ｕ 液。 ．． ０ ｏｉ ｎ １２３ 常规脱水、包埋、切片 。 ．．
１２４ 切片常规脱蜡人水、双蒸水洗。 ．． １２５ 切片入 Ｈ ｎｅ 铁苏木素 ５ ，自 ．． ａｓｎ ’ 来水洗 １ ’ ０。
胶 原纤 维上 色 ，且 色 彩 呈 品 红 色 ，不 够 鲜 艳 ，无 法 将 胶原 纤维 的偏 振 光性 质 显 示 出来 ，而 天狼 猩 红 对 胶原 纤维 染色效 果较 好 ，它既有 Ｖ ｎｉ ｏ ａｇ ｓｎ染色法 的 ｅ
天狼星红染色液使用说明书
天狼星红染色液天狼星红染色液主要由天狼星红染色液、Mayer苏木素染色液组成，主要用于各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究中。
天狼星红与其衬染液都是是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸附牢固。
偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼星红复合染色液结合后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。
在普通光学显微镜下心脏血管等组织的胶原纤维被染成红色，在偏振光镜下对各种纤维化病变的分型和分级研究有一定的帮助作用。
采用免疫组化技术也可显示Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维，但所用抗体昂贵，操作费时，而采用天狼星红染色试剂便宜，操作简单。
产品组成：试剂A：天狼星红染色液50ml 100ml试剂B：Mayer苏木素染色液50ml 100ml自备材料：1、 10%的福尔马林2、偏振光镜操作步骤（仅供参考）：1、组织固定于10%福尔马林中，常规脱水包埋。
2、切片厚6μm，常规脱蜡至水。
3、天狼星红染色液滴染1小时。
4、流水冲洗。
5、Mayer苏木精染胞核8～10分钟。
6、流水冲洗10分钟。
7、常规脱水透明，中性树胶封固。
染色结果：偏振光显微镜观察,Ⅰ型胶原纤维呈橙黄色或红色,Ⅲ型胶原纤维呈绿色。
注意事项：1、在配制实验所用溶液时要用纯水配制，容器使用前需用纯水清洗3次以上。
热书要求的溶液应事先做空白值检测。
2、为达到在偏振光镜下显示清晰，本法的切片厚度以6～7μm为宜。
3、天狼星红染色液配制时，溶解天狼星红的衬染液为过饱和溶液。
4、复染胞核宜用Mayer苏木精液，它不影响Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的数量和双折射强度的显示，如果没有Mayer苏木精液，可以采用其他明矾苏木素，但染色时应缩短时间，否则容易染色过深。
5、天狼星红染色液必须用专用带塞试剂瓶盛放，对于对光线敏感,容易分解的溶液装在棕色容器中。
6、禁止皮肤直接接触溶液以免有毒物质照成身体伤害。
7、避免温度剧烈变化，造成溶液变质，做到随用随取，以免造成分析结果储存条件：4℃，避光保存，12个月有效。
百度文库-天狼猩红染色液说明书
广州市外显子生物技术有限公司Http//
天狼猩红染色液说明书
货号：S-1500
规格：100ml
产品组成：
名称规格保存
天狼猩红染色液100ml 室温避光保存简介：
天狼猩红为阴离子强酸染料，易与胶原纤维中的碱性基团反应，所以苦味酸天狼猩红染液可使胶原纤维特异性地着染为猩红色,非胶原纤维部分不见猩红色背景,这样的染色结果使得胶原纤维的图像识别效果良好。
为心室胶原容积分数测量的准确性提供了保证。
实验前说明：
1、要先做预实验，掌握基本操作。
2、提前准备4%多聚甲醛、95%乙醇、二甲苯、中性树胶。
3、如果要做免疫组化，请在免疫组化结束后、进行该染色。
4、天狼猩红染色后，可用苏木素复染细胞核，以便能看清组织结构（但在胶原纤维的定量分析中请不要复染核），使其在光镜下更有助于确定胶原纤维在组织中的分布及与周围细胞的关系。
操作说明：
1. 样品处理
a) 对于石蜡切片：
依据病理常规至水化步骤。
b) 对于冰冻切片：
蒸馏水5分钟。
c) 对于培养细胞：
用4%多聚甲醛固定15分钟。
蒸馏水洗涤2分钟，再换缸进行第二次洗涤。
2、染色，接以上步骤步骤：
a) 天狼猩红染色液染色30min，具体时间要根据玻片情况调整。
b) 蒸馏水快速冲洗2s。
c) 依次入95％乙醇脱水1min，2次，100％乙醇
2min。
d) 二甲苯透明，中性树胶封片。
染色结果：
瘢痕×200 结果判定：
胶原呈红色。
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染色结果： 普通光学显微镜
胶原纤维 细胞核
红色 蓝色
偏振光显微镜 Ⅰ型胶原纤维 Ⅲ型胶原纤维
强橙黄色或亮红色 绿色
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-3-
天狼星红染色试剂盒
货号：BB-44333
试剂盒储存条件：
2-8℃密封避光保存。
开盖后组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成 规格
组份 A：天狼星红染色液 组份 B：Mayer 苏木素染色液
使用说明书
V1.7.X
BB-4101-1 100 ml 50 ml 50 ml 1
组份编号
4重要事项 ※ ※ ※
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：
贝博 TM 会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行 相应的版本更新。使用产品时，请参照试剂盒中随产品附带的印刷版说明书， 不能参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时 可以在收到产品后发邮件索取。
胶原纤维（Collagen Fiber）是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维，广泛分布于各 种脏器，其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。Ⅰ型胶原纤维主要是骨、皮肤、肌腱纤维；Ⅱ型胶 原纤维主要是软骨胶原；Ⅲ型胶原纤维主要在胚胎组织、成人血管、胃肠道；Ⅳ型胶原纤维 主要在基膜中。天狼星红与其衬染液都是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸 附牢固。偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼星红复合染色液结合 后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。
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们。
知识产权： 贝博 TM BBcellProbeTM 系列试剂盒及其使用方法包含专有技术。
注意事项： 1. 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。 2. 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，
避免开盖时试剂损失。 3. 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。 4. 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。 5. 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器： 普通光学显微镜或偏振光显微镜
试剂： 10%福尔马林固定液
耗材： 玻片 染缸
使用方法：
使用注意事项： 为达到在偏振光镜下显示清晰，本法的切片厚度以 6～7μm 为宜。
1. 组织固定于 10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。
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2. 切片厚 6μm，常规脱蜡至水。 3. 天狼星红染色液滴染 1 小时。 4. 流水稍微冲洗，去除切片表面染色液。 5. 苏木素染色液染细胞核 8-10 分钟。 6. 流水冲洗 10 分钟。 7. 常规脱水透明，中性树胶封固。
彻底清除残留清洁剂。 6. 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
产品简介：
贝博 TM BBcellProbeTM 天狼星红染色试剂盒主要用于各种组织病变时对胶原纤维异常或 纤维增生的研究中，在普通光学显微镜下心脏血管等组织的胶原纤维被染成红色，在偏振光 镜下对各种纤维化病变的分型各分级研究有一定的帮助作用。采用免疫组化技术也可显示 Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维，但所用抗体昂贵，操作费时，而采用天狼星红染色试剂便宜，操作简单。
使用安全： 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。 如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
质量控制： 贝博 TM 对每批产品进行严格测试以确保产品质量一致。
技术支持： 产品技术问题可发邮件至 bestbio@ 咨询。 如果您有任何关于产品性能或者新应用和技术的建议，欢迎您随时联系我