HPLC法同时测定山豆根中4种生物碱及其含量
苦参、山豆根植物中主要生物碱药学研究进展
苦参、山豆根植物中主要生物碱药学研究进展戴五好;钱利武;杨士友;周国勤【摘要】该文综述了药用植物苦参、山豆根主要生物碱分离纯化及含量测定研究进展.对近年来国内外发表的相关文献进行收集、分析整理及归纳.现有文献多为苦参总碱的纯化,而涉及单体生物碱的分离较少;在含量测定方面多以苦参碱、氧化苦参碱等为质控指标,不尽合理.应加强对苦参、山豆根中生物碱的结构多样性、毒理及构效关系等研究,以扩大这类植物活性成分的开发利用,确保临床用药安全可靠有效.%Many extracted purification and determination methods of main alkaloids in S.flavescens and S. tonkinensis medical plants have been summarized. The relevant articles published in recent years were collected , analyzed , arranged and concluded. The existing literature are mostly purification of total Sophora alkaloids. however, the separation of monomer alkaloids are less. The determination of matrine , oxymatrine as quality control indicators is not reasonable in S.flavescens and S. tonkinensis plants. The structure diversity , toxicology and structure-activity relationship of those alkaloids should be strengthened in order to utilize resources and ensure safety and validity of clinical using forS.flavescens and S. tonkinensis plants.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)009【总页数】4页(P1057-1060)【关键词】苦参;山豆根;生物碱【作者】戴五好;钱利武;杨士友;周国勤【作者单位】安徽中医学院,安徽,合肥,230031;安徽省药物研究所,安徽,合肥,230022;安徽省药品评审中心,安徽,合肥,230022;安徽省药物研究所,安徽,合肥,230022【正文语种】中文苦参为双子叶植物纲豆科槐属植物(S.flavescens Ait.)的干燥根［1］。
高效液相色谱法测定山豆根中苦参碱的含量
医学院学报 , 2001, 11( 1) : 59 61 [ 2] [ 3] 祁彦 , 汪 宝其 , 等 [ J] 李淑芬 , 等 苦参 碱和 氧化 苦参 碱的 研究 概 况 西北药学杂志 , 1996, ( 11) : 62 64 超临界 CO2 萃取天然产品的特性研究 [ J]
。
化工进展 , 1997, ( 2) : 10 14
序号 时间 / min 苦参碱 / % 1 60 0 412 2 120 0 398 3 180 0 403 4 240 0 413
表 2 稳定性 实验 5 300 0 389 6 360 0 405 0 403 1 82% 平均值 RSD
表 3 精密度 实验 序号 峰面积 1 321 2682 2 324 5636 3 330 0121 4 326 1383 5 326 1418 平均值 325 1326 RSD 1 31%
表5 样品 序号 1 2 3 苦参碱测定值 /% 0 407 0 413 0 405 加样回收率实验 加样值 /% 0 423 0 438 0 419 回收率 /% 97 1 97 3 96 2 96 9 1 82 平 均值 /% RSD /%
表 6 样品的测定 样品序号 苦参碱 / % 1 0 373 2 0 403 3 0 361 4 0 387 5 0 329
Abstract: T he m at rine in t he radix spphorae t onkinensis w as ext ract ed by carbon diox ide supercritical ext rac t ion. T he content of matrine in t he ex tract ion product w as determined by HPL C. T he opt imum ext ract ion con dit ions of mat rine from the radix spphorae tonkinensis were obtained. Key words: supercritical ex traction; H PL C; radix spphorae tonkinensis; mat rine
关于4种山豆根的鉴别和质量分析
论文关键词：山豆根；木蓝根；北豆根；滇豆根论文摘要：本文重点介绍了4种“山豆根”的性状、显微鉴别和山豆根与木蓝根的薄层色谱鉴别，并对四种“山豆根”的质量进行了初步的分析。
《中国药典》2005年版一部收载的山豆根为豆科槐属植物越南槐(Sophora tonkinensis Gagnep)的干燥根及根茎，但是这种正品山豆根的中药饮片近几年越来越少，现在运用最多的“山豆根”是豆科木蓝属(Indigofera)多种植物的根(简称木蓝根，下同)。
除此之外，《中国药典》2005年版一部收载的北豆根和《云南省中药饮片标准》2005年版第一册收载的滇豆根，在医疗单位均作“山豆根”使用。
笔者现对这4种山豆根的鉴别及质量分析简述如下。
1 4种山豆根的性状鉴别 1.1山豆根根呈长圆柱形，直径0.5～1.5cm。
表面棕色至棕褐色，有不规则的纵皱纹和横长皮孔样突起。
根茎呈不规则结节状。
质硬，难折断，断面皮部浅棕色，木部淡黄色。
有豆腥气，味极苦。
1.2木蓝根根呈圆柱形，常有分枝，直径0.2～O.7(～1.2)cm。
表面灰色、灰黄色或灰棕色，有时栓皮呈鳞片状剥落，有横长皮孔。
质坚硬，难折断，断面皮部灰棕色，木部黄白色。
气微，味微苦。
1.3北豆根根茎呈细长圆柱形，有分枝，长可达50cm，直径0.3～0.5(～0.8em)。
表面黄棕色至暗棕色，无明显的节，常有须状细根，外皮易剥落。
质韧，不易折断，断面纤维性，木部淡黄色，中心有髓。
气微，味苦。
1.4滇豆根根茎呈圆柱形，常有分枝，长2～7em，直径0.3～0.8cm。
表面棕褐色，具数个明显的节和节间，节间长0.5～2era。
质硬脆，易折断，断面绿黄色至暗黄色，角质样，有光泽。
气微，味苦。
2 显微鉴别2.1山豆根根横切面：木栓层为数列细胞。
皮层外侧薄壁细胞有的含草酸钙方晶，继续形成含晶细胞环，含晶细胞的壁木化增厚。
皮层和韧皮部均有纤维束散在。
木射线宽1～8列细胞，木纤维成束，多与导管相间排列。
山豆根配方颗粒中苦参碱含量测定
山豆根配方颗粒中苦参碱含量测定作者：谢丽莎闫守霞金钊江海燕来源：《中国保健营养·中旬刊》2012年第10期【摘要】目的：建立山豆根配方颗粒中苦参碱的含量方法。
方法：采用HPLC法，色谱柱：Phenomenex kinetex HILIC（2.6μm 100×4.6mm），流动相：乙腈:10mM乙酸铵（90:10），pH=4.1，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长为215nm。
结果：苦参碱线性范围为53.6～536μg•ml-1(r＝0.9997)，平均加样回收率为99.16%，RSD为1.96%。
结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于山豆根配方颗粒的质量控制。
【中图分类号】R283.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）10-0035-02山豆根配方颗粒是以山豆根药材为原料经现代工艺提取、浓缩、精制而的单味产品，其性味、归经、功效与原饮片保持基本一致，保留了中医辨证施治的特色，而且携带、服用方便。
目前采用HPLC法测定原药材中苦参碱含量多多选择氨基柱、苯基柱、C18柱进行试验[1-3]，本实验选择亲水柱HILIC柱，建立了HPLC法测定山豆根配方颗粒苦参碱含量测定方法。
1仪器及材料1.1仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），FA2004电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)，KQ5200DE型数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2材料：山豆根配方颗粒（广西培力（南宁）药业有限公司，批号：A061024-01、A081082-01、A090706-01），苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110805-200508），其它试剂均为分析纯。
2方法与结果2.1色谱条件：Phenomenex kinetex HILIC（2.6μm 100×4.6mm）色谱柱，流动相为乙腈:10mM乙酸铵（90:10），pH=4.1，使用用前以微孔滤膜滤过并经超声脱气处理，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长为215nm。
HPLC同时测定山豆根中7种生物碱及3种黄酮的含量
ｉ ｎ Ｓ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ａ ｅ Ｔｏ ｎ ｋ ｉ ｎ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ Ｒａ ｄ ｉ ｘ ｅ ｔ Ｒｈ ｉ ｚ ｏ ｍａ ｂ ｙ ＨＰ ＬＣ
ＨＡ Ｎ Ｆ ｕ — ｍａ ｎ，Ｗ Ａ ＮＧ Ｌ ｉ — ｘ ｉ ｎ，Ｃ ＨＥ Ｎ Ｙｉ ｎ ｇ ，ＣＨＥ Ｎ Ｌ ｉ ａ ｎ ｇ — ｍｉ ａ ｎ ，Ｆ Ｅ ＮＧ Ｗｅ ｉ － ｈ ｏ ｎ ｇ，Ｗ ＡＮＧ Ｊ ｉ ｎ － ｙ ｕ ，
Ｎ － ｏ ｘ ｙ ｓ ｏ ｐ ｈ ｏ ｃ ａ ｒ ｐ ｉ ｎ ｅ ， Ｎ — ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ｃ ｙ ｔ ｉ ｓ ｉ ｎ ｅ ， ｓ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ａ ｎ ｏ ｌ ，ｍ ａ ｔ ｒ ｉ ｎ ｅ ，ａ ｎ ｄ ｓ ｏ ｐ ｈ ｏ ｃ ａ ｒ ｐ ｉ ｎ ｅ ）ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｒ ｅ ｅ ｌ ｆ ａ ｖ ｏ ｎ ｏ ｉ ｄ ｓ（ ｔ ｒ ｉ ｆ ｏ ｌ ｉ ｒ ｈ ｉ ｚ ｉ ｎ ， ｆ ｅ ｒ ｍｏ ｎ ｏ ｎ ｅ ｔ ｉ ｎ ， ａ ｎ ｄ
（ 中国中医科学院 中药研 究所， 北京 １ ０ ０ ７ ０ ０ ）
［ 摘要 ］ 建立 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ同时测定 山豆根中 ７种生物碱 （ 金雀花碱 、 氧化苦参碱 、 氧化槐果碱 、 Ⅳ ＿ 甲基金 雀花碱 、 槐醇、 苦参 碱和槐 果碱 ） 及 ３种黄酮 （ 三 叶豆紫檀苷 、 芒柄花素和马卡因 ） 含量 的方法 。采用 Ｗｅ ｌ ｃ ｈ Ｘ ｔ ｉ ｍ ａ ｔ ｅ Ｃ （ ４ ． ６ ｍｍ ×２ ５ ０ ｍｍ， ５ ｍ） 色谱 柱； 流动相为 乙腈 （ Ａ） 一 ０ ． ０ １ ｏｏ ｔ ｌ ・ Ｌ 醋酸铵 （ 氨水调 ｐ Ｈ ８ ． ０ ） 溶液（ Ｂ ） 进行 梯度洗脱 ： ０～２ ０ ｍ ｉ ｎ ， ４ ％ ～１ ４ ％ Ａ； ２ ０—３ ０ ｍ ｉ ｎ ，
一测多评法测定三颗针中4种生物碱类成分的含量
程和专 业实验课 程分散 独立 的状况 ，转变 为实验教 学体系 完 整、 内容紧 凑连贯 、 符合 高职高专 实际教学需 求的实 践教学课 程， 是 高职 高专药学专 业实验教 学改革 的一项重要措 施 ， 也是
三颗针为常用 中药 ， 是小檗科植物拟獠猪刺 、 小黄连刺 、 细 叶小檗或匙 叶小檗 等同属 数种植物的干燥根 ， 主要用于湿热泻 痢、 黄疸 、 湿疹 、 咽痛 目赤 等症 ， 小檗碱 的含量是 目前对 三颗针 药材 、 饮片质量 控制 的主要依据【 １ 】 。 但 随着对三颗针生物活性及 化学成分 的深入研究 ， 发现 巴马汀 、 小檗胺 、 尖刺 碱均具有较为 显著的生物活性 ， 且含量较高口 ～， 在多个品种中均有分 布 ， 亦可 纳入三颗针药材质量控制体系。目前虽有用高效液相色谱法测
【 ２ １ 李新 霞． 药物化学隋 机化学实践教学现状分 析及 改革思路册． 新疆医
科大学学报 ， ２ ０ ０ ６ ， ２ ９ （ １ ） ： ８ ３ — ８ ４ ．
实验 项 目整合 ， 可使 药学 专业 实践教学从原来基 础实验课
【 ３ 】 赵大伟 制 药 工程专业药 物化学实验 与有机化学 实验教 学存在 问题
范地学 习 了基本 实验技 能 ； ９ ６ ． ２ ％的学生认 为整合后 的实验对
【 １ １ 方苗利 ． 基ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ于问卷调查 的药学“ 基础 化学实验整 合” 教学 改革效 果探
山豆根配方颗粒中总生物碱含量的分析
同产地间的成分差异，并且对其选种，野生变家种进行系统研究。
参 考 文献
［ ９ 】 黄其春， 涂 文 升， 龙俊 青 ， 等． 广 西各 地 岩 黄连 药 材 中脱氢 卡 维 丁 含 量 考察 ［ Ｊ ］ ． 药物 研究 ， ２ ０ ０ ９ ， １ ８ （ ２ ３ ） ： ９ — １ ０ ．
［ ７ ］ 韦 记青 ， 蒋伟哲， 蒋水 元 ， 等． 反 相 高 效液 相 色谱 法 测定 岩 黄连 药 材 中岩 黄连碱 的含 量 ［ Ｊ ］ ． 时珍 国 医国 药， ２ ０ ０ ７ ， １ ８ （ ９ ） ： ２ ０ ７ ７ ． ［ ８ ］ 胡 芳， 陆兔林 ， 毛春 芹 ， 等． Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 法 测定 岩黄 连生 物总 碱 中脱氢 卡 维丁 、盐酸 巴马 汀和 盐酸 小 檗碱 的含 量 ［ Ｊ ］ 中国实 验方 剂 学
１ ９ ９ ５ ， １ １ （ ４） ： ２ ３ ８ ． ［ ６ ］ 黄燮陶， 刘 国雄 ， 张毅 ． 岩 黄 连 总 生物 碱 的安 定 作 ［ Ｊ ］ 中国 药理 学
报， １ ９ ８ １ ， ２ （ ３ ） ： １ ５ ６ ．
乙胺水溶液 （ 磷酸调Ｐ Ｈ ＝ ３ ）． 乙腈 （ ７ ５： ２ ５ ），色谱出峰时间，峰形等 都较好。野生岩黄连种脱氢卡维丁的含量以广西那坡为最高，但是本 实验只采集到４ 个不同产地样品，而且４ 个产地样品脱氢卡维丁含量相 差较大 ，与文献 报道相一致。岩黄连作为广西濒危药材，如何有效 对其进行科学研究和保护，应该大范围地考查岩黄连的资源分布及不
版社 ， １ ９ ９ ３ ： ４ １ ０ ．
［ ３ 】 程华， 余龙江， 胡 琼月 ， 等． 分 光 光度 法 测 定岩 黄 连不 同部位 总 生
HPLC法测定广西产山豆根氧化苦参碱的含量
主 。《 中国药典） ０ ５版一部规定 采用薄层 色谱扫描 法对 ２０
山豆根的氧化苦参碱进行含量测定 ， 本文参考文献方法 ， 对广 西 主产的山豆根药材 ， 采用高效液相色谱法 （ 用纯水柱 ） 测定
其 中氧 化苦 参 碱 的含 量 ， 法 快 速 ， 复 性 好 ， 用 于 山 豆 根 该 重 可
药材及其制剂 的质量分析。
１ 材 料 和密 吸取供试品溶液 ， ０ 、ｈ ６ 、２ 、 在 ｈ ３ 、ｈ １ｈ
１１ 材料 ．
山豆根药材分别采 自广西靖西、 德保 等县 ， 采集
２ １ 色谱 条件 ．
６ ｍｍ） 柱温 ： ０ ； 室温 ； 流动相 ： 甲醇 一水 （ ．％磷酸 ＋ ．２ ０２ ０ ３ ％三 乙胺） ３ ：９ ） 流速 ：ｍＬ ｍ ｎ 检测波长 ：１ ｎ 理论 塔板 （ ７ ， １ ／ ｉ； ２ ５ ｍ； 数按氧化苦参碱计算应 不少 于 ２０ ， ０ ０ 分离度大于 １５ ．。 ２ ２ 对 照 品溶 液 的制 备 ． 匀， 制成储备液 。 ２ ３ 供试 品溶液的制备 ． 密称定 ， 加入无水 乙醇 一氨水 （ ：２ ｌ ， ３ ） ｍＬ 放置 ０ ５ 后 加入 ．ｈ 精 密 取 氧化 苦 参碱 对 照 品 ３ ． ４ｒ ， ５ ｌ ６ ｇ 置 ｍ 容量瓶 中， 甲醇适量 使溶解并定 容至刻度 ， ａ 加 摇
Ｈ Ｌ 法 测 定 广 西 产 山豆 根 氧 化 苦 参 碱 的含 量 Ｃ Ｐ
黄 颖 蔡 乐 欧 敏 江海 燕 陈 勇
（ 广西中医学 院药学院 ， 南宁 ，３０ １ ５０ ０ ）
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HPLC法同时测定山豆根中4种生物碱及其含量何超然;李哲;李任;王丽丽;沈素;余俊先【摘要】Objective: To establish the HPLC method to simultaneously determinate the content of 4 kinds of matrine alkaloids in subprostrate sophora samples from different sources. Methods: HPLC method was adopted to simultaneously determinate 4 kinds of alkaloids (matrine, oxymatrine, sophocarpine, and N-methylcytisine) from different samples of subprostrate sophora. Chromatographic conditions was as follows: Agilent C18column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm); mobile phase: me thanol-phosphate buffer solution [pH 6.3] (20 : 80); UV detection wavelength: 220 nm; flow rate: 1.0 mL·min-1; column temperature: 37 ℃. Results: Results showed that four compounds had good resolution and linear relation (r ≥ 0.999 1) in the tested concentration ranges. The mean recoveries were in the range of 99.17% to 100.78% and the RSD (n = 6) was in the range of 1.61% to 2.20% (n = 6). The quantitative results showed that there were significant differences in the contents of four alkaloids from different samples. The content of matrine alkaloids in four samples from Guangxi province were 39.375, 59.247, 40.398 and 53.13 mg·g-1respectively, which were higher than those from other provinces. The content of alkaloids in samples from Sichuan is relatively low. Conclusion: The quality of subprostrate sophora from different province varied widely. HPLC method could be used for the simultaneous determination of the multi-ingredients from subprostrate sophora, this method was simple, accurate and repeatable, which couldprovide evidences for quality evaluation and control of subprostrate sophora.%目的:对不同来源的山豆根提取物中苦参碱类生物碱成分进行定量测定.方法:采用HPLC法对山豆根提取物中苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱和N-甲基野靛碱4种成分含量进行测定.色谱柱:Agilent C18柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm);流动相:甲醇-磷酸盐缓冲液[pH = 6.3] (20 : 80);检测波长:220 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:37 ℃.结果:方法学验证结果显示,4种成分分离度良好,在各自浓度范围内呈现出良好的线性关系,r ≥ 0.9991,平均回收率在99.17% ~ 100.78%,RSD为1.61% ~ 2.20%(n = 6).含量测定结果显示,不同样品中生物碱成分含量具有显著性差异.广西省的4份山豆根样品中苦参碱类生物碱成分含量分别为39.375、59.247、40.398、53.13 mg·g-1,高于其他省份,四川省的山豆根样品中苦参碱类生物碱成分含量较低.结论:不同批次山豆根药材,内在质量存在较大差异,HPLC法可用于山豆根药材的多种成分同步测定,该方法简便、快捷、准确、重复性好,为山豆根质量评价和控制提供科学依据.【期刊名称】《中国药物应用与监测》【年(卷),期】2018(015)002【总页数】5页(P77-81)【关键词】山豆根;苦参碱;氧化苦参碱;槐果碱;N-甲基野靛碱;高效液相色谱法【作者】何超然;李哲;李任;王丽丽;沈素;余俊先【作者单位】首都医科大学附属北京友谊医院药学部,北京 100050;首都医科大学附属北京友谊医院药学部,北京 100050;首都医科大学附属北京友谊医院药学部,北京 100050;首都医科大学附属北京友谊医院药学部,北京 100050;首都医科大学附属北京友谊医院药学部,北京 100050;首都医科大学附属北京友谊医院药学部,北京100050【正文语种】中文【中图分类】R917山豆根为豆科植物越南槐（Sophora tonkinensis Gagnep.）的干燥根及根茎, 具有清热解毒、消肿利咽的功效，内含多种苦参碱类生物碱成分[1-2]。
苦参碱类生物碱是以苦参碱为代表、化学结构相似的一类生物碱，主要包括苦参碱（matrine，MT）、氧化苦参碱（oxymatrine，OMT）、槐果碱（sophocarpine，SC）及N-甲基野靛碱（N-methylcytisine）等[3]。
随着人们对苦参碱抗肿瘤作用分子机制研究的不断深入，苦参碱在抗肿瘤方面的独特作用和广泛应用前景已引起人们的重视。
苦参碱可通过诱导肿瘤细胞凋亡，干扰细胞周期等不同作用机制，针对多类型多部位的癌症发挥作用[4-5]。
本研究采用高效液相色谱法对广西等省份的山豆根提取物中苦参碱类生物碱成分进行测定，分析出不同产地、批次样品中成分的含量，为中药种植的规范化质量控制提供参考依据。
1 仪器和试药Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），包括G1314A可变波长紫外检测器，G1322A脱气装置，G1310A Iso泵，G1313A自动进样器，Agilent chemStation色谱工作站；3-18K低温离心机（德国Sigma公司）；MS3 basic 旋涡混合器（德国IKA公司）；SHZ-D（Ⅲ）循环水真空泵（河南巩义市英峪予华仪器厂）；PHS-3E型pH计（上海雷磁仪器厂）；BS 124S电子天平（北京赛多利斯仪器公司）。
苦参碱（批号：17061508，纯度HPLC≥98%）、氧化苦参碱（批号：17061501，纯度HPLC≥98%）、槐果碱（批号：161013，纯度HPLC≥98%）、N-甲基野靛碱（批号：161115，纯度HPLC≥98%），以上标准品购自成都普菲德生物技术有限公司。
甲醇为色谱纯（Merck医药生物科技公司），磷酸（国药集团化学试剂有限公司）、三乙胺（天津市福晨化学试剂厂）、磷酸二氢钾（北京市红星化工厂）均为分析纯。
2 方法与结果2.1 溶液的制备2.1.1 对照品溶液的制备精密称取适量苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱及N-甲基野靛碱对照品，加甲醇分别配成含浓度为1 mg·L-1氧化苦参碱、1 mg·L-1 N-甲基野靛碱、1 mg·L-1苦参碱、1 mg·L-1槐果碱的对照品储备液。
精密吸取苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱及N-甲基野靛碱对照品储备液，加流动相配成浓度为0.1 mg·L-1氧化苦参碱、0.1 mg·L-1 N-甲基野靛碱、0.1 mg·L-1苦参碱、0.1 mg·L-1槐果碱的混合对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备[6] 将来自不同省份的山豆根样品进行编号，分别为广西（G1、G2、G3、G4），四川（S1、S2、S3、S4）和江西（J1、J2、J3、J4）。
进行洗药、润药、切药、干燥、粉碎等步骤，称量适量，煎煮、浓缩、醇沉，静置后取上清液，在沉淀中再加入45%乙醇，静置后再次取上清液，并与之前得到的上清液合并，回收乙醇，消毒后加入适量原辅料，静置吹干，得到样品粉末。
分别取样品粉末5 mg溶于3 mL甲醇中，震荡3次，每次3 min，间隔10 min，使其充分溶解，使用低温离心机18 000 r·min-1离心10 min，取上清液，用氮气吹干，加300 mL甲醇进行复溶，得到待测样品溶液。
2.2 色谱条件和方法学验证2.2.1 色谱条件[7-15] 采用Agilent C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（20 : 80，缓冲液调pH 6.3，每1 L磷酸盐缓冲液中包含8.0 g磷酸二氢钾和1%三乙胺）；流速：1.0 mL·min-1；柱温：37 ℃；紫外检测波长：220 nm；进样量：20 μL。
该色谱条件下，样品中氧化苦参碱、槐果碱、N-甲基野靛碱、苦参碱色谱峰保留时间与对照品保持一致，4种成分的色谱峰能达到较好的分离，样品中其它成分对待测成分的测定无干扰，详见图1。
2.2.2 线性范围精密吸取各对照品储备溶液配成浓度为1、2、5、10、100、200、500、1000 μg·mL-1的对照品溶液，进样量20 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，分别以苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、N-甲基野靛碱等碱类成分峰面积积分值为纵坐标（Y），进样浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，计算回归方程及相关系数（r）；各对照品的回归方程见表1，结果表明，各待测物在各自浓度范围内具有良好的线性关系。
2.2.3 精密度实验精密吸取同一浓度的混合对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积积分值并计算RSD。