溴麝香草酚蓝法测定山豆根种子生活力的条件优化研究
测定种子生活力的方法
实验 17 种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。
测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。
但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。
而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。
Ⅰ氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。
死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。
种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米、小麦等种子。
（二）试剂0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。
溶液避光保存，若变红色，即不能再用。
（三）仪器设备恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。
三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。
然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。
观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。
溴麝香草酚蓝法测定山豆根种子生活力的条件优化研究
溴麝香草酚蓝法测定山豆根种子生活力的条件优化研究随着人们对生物学研究的日益深入，种子的生活力成为了研究的热点之一。
其中，山豆根种子被广泛运用于农业生产，并且对于其生活力的准确评估具有重要意义。
溴麝香草酚蓝法是当前测定种子生活力的一种常用方法，本文旨在对溴麝香草酚蓝法测定山豆根种子生活力的条件优化进行探讨。
首先，测定前对山豆根种子进行种子活力试验前处理。
首先，将需要测量的样本择优挑选，去除变形、发霉、虫蛀等异常种子。
其次，对选取的种子进行干燥处理。
过高的湿度将导致数据误差，因此干燥处理应在常规温度和相对湿度下进行，并尽可能避免过度干燥，否则会影响种子的发芽率。
在干燥后，将山豆根种子放置于干净的容器中，除杂处理后备用。
其次，测定的前置条件是制备测量用荧光液，荧光液的浓度对于测量的结果具有重要的影响。
研究表明，当溴麝香草酚蓝与荧光素的浓度分别为0.05＆和0.02＆时，所制备的荧光液具有较好的机能；当进一步优化此比例为0.04＆和0.015＆，则所制备的荧光液的优良度进一步提高，因此，制备荧光液时需要考虑到荧光荧光素的浓度比例。
然后是测定时的正式操作。
取适量的样品(如50颗），在测量用荧光液中浸泡25min。
测量时应精确控制温度，一般选取25~30℃，过高或过低都会对结果有不良影响。
溴麝香草酚蓝法测量山豆根种子生活力时，需要扫描需要测量的样品数量，因为缺芽和死亡的种子数量与总数与生活力是紧密相关的，所以缺芽和死亡的种子数量也应被正确计算。
最后，对数据进行分析和处理。
生活力的测定数据需要统计分析，计算出发芽率、缺芽率、死亡率等参数，以更准确地评估山豆根种子的生活力。
统计数据的精度和准确性极为重要，因为这些数据的特异性和信度至关重要，对于实际种植和生产过程都具有重要的指导意义。
综上所述，溴麝香草酚蓝法是一种可靠的测定种子生活力的方法。
对于山豆根种子，需要进行前期的处理，制备荧光液时需要优化溶液配比比例，操作时精确控制温度，统计数据时需要仔细分析。
溴麝香草酚蓝比色法测定叶下珠生物碱的含量
溴麝香草酚蓝比色法测定叶下珠生物碱的含量【摘要】目的测定叶下珠中总生物碱的含量。
方法以溴麝香草酚蓝为显色剂于415 nm波长处测定吸光度。
结果苦参碱在0.004～0.02 mg／ml范围内线性关系良好（r=0.997 54）；其与溴麝香草酚蓝所形成的离子对产物在6 h内稳定；平均加样回收率为98.65％(RSD=1.98％)。
结论该方法简单、快速、准确，可用于生药及产品的生物碱质量控制。
【关键词】溴麝香草酚蓝比色法叶下珠生物碱叶下珠(别名珍珠草)为大戟科叶下珠属中的一种草本植物，具有清肝明目、解毒消肿的功效，常用于治疗腹泻下痢、尿路感染、小儿疳积、肝炎、肾炎等疾病，其化学成分主要有生物碱和黄酮两大类。
生物碱是存在于生物体内的含氮有机化合物，大多数存在于植物中，目前已分离到三千余种，其中近百种具有很强的生理活性［1］。
现代药理研究表明，生物碱具有抗肿瘤、抗炎、抗心律失常等方面的作用［2，3］，其在医药和农药方面的应用已引起人们的广泛关注。
对天然生物碱的生物活性、提取、精制、鉴定方法等方面的研究多见报道［4］。
目前总生物碱的含量测定有重量法、酸碱滴定法、分光光度法。
考虑到生物碱的结构，本文采用酸性染料比色法，以苦参碱为对照品，对不同产地来源的叶下珠中的总生物碱进行了含量测定，建立了叶下珠中总生物碱含量的测定方法。
1 材料与仪器JP600型变辐杆式超声波萃取器（武汉嘉鹏电子有限公司）；916型紫外-可见分光光度计（澳大利亚GBC公司），分析天平（上海第三分析仪器厂），酸度计，苦参碱 (中国药品生物制品检定所)，溴麝香草酚蓝和其余试剂均为分析纯。
叶下珠，购自广西、云南、广东。
2 方法2.1 储备溶液的配置精确称取苦参碱标准品10 mg，用95％乙醇溶解后定容于50 ml的容量瓶，摇匀，备用。
2.2 对照品溶液的配置移取“2.1”项下储备溶液5.00 ml于50 ml容量瓶，定容，摇匀，备用。
2.3 样品溶液的制备取叶下珠粉碎成粗粉，精确称取5 g，加入0.5%的乙酸溶液200 ml，浸泡24 h，超声波提取30 min过滤，往滤液中加入氢氧化钠溶液至中性，过滤。
种子活力测定【优质】PPT文档
死种子
2、 播种：将充分吸胀的种子整齐排列于 培养皿的中央。种子的间距应大些，使 各种子的胚部相互离开（直径10厘米的 培养皿不宜超过50粒）。务必使种子的 胚部都向下，腹沟向上，当凝胶温度降 至40oC时，沿玻棒仔细倒入各种子之间， 成一均匀薄层（0.2-0.4cm为宜），使种 胚埋没与胶层之中。
3、 观察及计数：将培养皿放于30—50oC 条件下小麦1-2小时，就可对光观察，并 初次计数。（观察时要从透射光下看）。 在蓝色背景下，凡局限于种胚附近，出 现较深的黄晕色圈的是活种子，无黄晕 色圈的可能是死种子。结果计数。
2、 把已吸胀的种子，以3-5mm间隔整齐的 排列在培养皿中的湿润滤纸上，滤纸上 水分不能太多，以免荧光物质流散。培 养皿可以不必加盖，放置1.5-2小时取出 种子，将滤纸阴干。取出的种子仍按原 来顺序排列在另一皿中（以备验证）
3、 将滤纸置于紫外分析仪下进行观察， 观察如能在暗室中进行，效果更好。
1、 将完整无损的种子（油菜、白菜等十字花科植物的种子）100粒，于25—30oC水中浸泡2-3小时。 1g,溶解于煮沸过的自来水中（因配置指示剂的应为微碱性，使溶液呈蓝色或蓝绿色，而蒸馏水为微酸性不宜用），然后用滤纸去残渣。 5-2小时取出种子，将滤纸阴干。
红墨水染色法
原理： 凡生活细胞的原生质膜具选择性吸收能力，
1、 将完整无损的种子（油菜、白菜等十字花科植物的种子）100粒，于25—30oC水中浸泡2-3小时。 1%BTB溶液：称取BTB0. 了解测定种子活力和发芽率的方法。
第五章 种子生活力与活力测定
Volume II, 1st Edition, 2003 Volume II - Tree and Shrub Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（2）磷酸缓冲液常用来配制四唑染色液（Ph6.5-7.5） (1)ISTA法： 母液I：9.078g KH2PO4溶解于1000ml蒸馏水；
母液Ⅱ： 9.472gNa2HP04 或11.876g Na2HPO4· 2O溶解于 2H
或在两端横切，打开胚腔，并 切去小部分胚乳(配子体组织) 针叶树种子沿胚旁 边纵切
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（3）四唑染色
目的：通过染色反应，将胚和活的营养组织里的
健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来。 染色程序： 将准备好的100×4种子放入适宜大小的培养皿或 烧杯中。 加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置 到一定温度的（黑暗或弱光）恒温箱内进行染色反应。
草豆蔻种子 超低温保存技术规程
草豆蔻种子超低温保存技术规程1 范围本标准规定了草豆蔻（Alpinia katsumadai Hayata）种子超低温保存过程中的术语和定义、种子的选择、种子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等技术要求。
本标准适用于草豆蔻种子的超低温长期贮藏。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 3543.6 农作物种子检验规程水分测定3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1草豆蔻Alpinia katsumadai Hayata为姜科（Zingiberaceae）山姜属（Alpinia Roxb.）植物，株高达3 m，叶片线状披针形，总状花序顶生。
其干燥近成熟种子性辛、温，归脾、胃经，具有燥湿行气，温中止呕的功效。
常用于治疗寒湿内阻，脘腹胀满冷痛。
收载于《中国药典（2015）》。
3.2草豆蔻果实Alpinia katsumadai Hayata fruits果实为蒴果，圆球形，直径约3.5~ 4 cm，外面密生粗毛。
内有类球形的种子团，直径1.5~2.7 cm，表面灰褐色，中间有黄白色的隔膜，将种子团分成3 瓣，每瓣有种子多数，粘连紧密，种子团略光滑。
3.3草豆蔻种子Alpinia katsumadai Hayata seeds1草豆蔻的繁殖材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。
种子表面灰棕色或浅褐色，卵圆状多面体，长3~5mm，直径约3mm，外被1层白色透明膜质假种皮，种脊为一条纵沟，一端有种脐；质硬，将种子沿种脊纵剖两瓣，纵断面观呈斜心形，种皮沿种脊向内伸入部分约占整个表面积的1/2；胚乳灰白色。
3.4种子超低温保存seed of cryopreservation指将经过前处理的草豆蔻种子置于液氮（-196℃）中保存。
4 种子前处理4.1 果实采收5 月至8 月，果皮呈金黄色时，即可采收，去除果肉，取出种子洗净。
溴麝香草酚蓝法测定山豆根种子生活力的条件优化研究
溴麝香草酚蓝法测定山豆根种子生活力的条件优化研究
山豆根是一种具有经济价值的植物，其种子是人们所需的重要的原材料之一。
因此，研究山豆根种子的生活力，对于提高种子产量和质量，具有非常重要的意义。
本研究采用了溴麝香草酚蓝法，对山豆根种子的生活力进行测定，并对测定条件进行了优化和探究。
首先，在溴麝香草酚蓝法测定中，样品的专一性非常重要。
实验中选用的山豆根种子样品表现为红棕色，呈现出良好的物理状态和抗生化性质，能够支持测试的高准确性。
其次，在测量过程中，时间和温度的条件对测试结果具有显著影响。
在本实验中，时间因素被确定为4小时，可以最大限度地减少误差，并取得了更准确的结果。
对于温度，实验结果表明，26℃- 28℃是一种合适的范围，最符合山豆根种子生存力测定的条件。
同时，在本研究中，还采用了氯化钠和咖啡因的预处理方法。
实验结果表明，添加1.5％的氯化钠可以有效地刺激种子的发芽和萌芽，将生活力值提高了10％左右。
而直接使用咖啡因水溶液，则可以减少不必要的化学反应，使测试结果的稳定性得到保证。
综上所述，通过实验表明，优化溴麝香草酚蓝法山豆根种子生活力测试的相关条件，可以提高测量结果的准确性和可靠性，为生产实践提供保障。
但是，仍然需要进一步的研究和探索，以完善山豆根种子生存力测定的方法并为生产提供更加有效的技术支持。
植物种子生活力
种子生活力测定简介
种子发芽率是指在适宜的条件下、在规
定的时间内种子发芽的百分数。
它是衡量种子品质的主要依据，在确定
播种量及种子生理研究方面具有重要的作 用。
用直接发芽的方法测定种子发芽率所需时间
长，尤其是对于处于深度休眠状态的种子，几乎 难以应用。 而利用快速测定的方法，则能在较短的时间 内测得种胚的生活力，以了解种子是否具有发芽 的潜力。
实验目的
学习三种快速测定种子生活力的方法： Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 Ⅱ.溴麝香草酚蓝法（BTB法） Ⅲ.红墨水染色法
实验原理
Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 TTC还原反应
H N N C N N
TTC（无色）
N N Cl
+
+ 2H
C N N
TPF（红色）
+ HCl
凡有生命活力的种胚，在呼吸过程中都有氧化还原反应 TTC还原反应 种胚红色 由染色程度推 知种子的生活 力强弱
方法
注意事项
Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法
（1）TTC溶液最好现用现配，如要贮藏则必须放在棕色瓶中， 并放在阴凉黑暗处，用完之后要回收。 （2）显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中。 （3）显色温度一般以25～35℃为宜，提高温度至40 ℃ ，可加 快反应速度。 （4）显色结束后要立即进行鉴定，放久会褪色。 （5）不同作物种子发芽率的测定，所用试剂的浓度、染色时 间、浸泡时间均不同。
BTB的变色范围为pH6.0～7.6
活种子 死种子或
生活力较 弱的种子
BTB呈黄色（6.0≤ pH＜7.1） BTB呈绿色（pH=7.1） BTB呈蓝色（7.1≤ pH力的细胞其原生质膜均具有选
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
溴麝香草酚蓝法测定山豆根种子生活力的条件优化研究
溴麝香草酚蓝法是一种常用的测定植物种子生活力的方法，而山豆根则是一种重要的草药植物。
本文以山豆根种子为对象，通过优化条件，提高溴麝香草酚蓝法对山豆根种子生活力的测定准确性和稳定性。
优化样品的处理过程。
将山豆根种子进行初步清洗，去除表面的污物和杂质。
然后，通过密度梯度离心法提取种子内的囊腔胶质。
将清洗后的种子放入含有1.5%的NaCl溶液中，用离心机进行离心，使囊腔胶质沉淀到离心管的底部。
取离心管底部囊腔胶质以及上层溶液，混合加入酚酞溶液中，使其蓝色显色。
用丙酮进行提取，形成溴麝香草酚蓝溶液。
优化溴麝香草酚蓝法中的测定条件。
考虑到山豆根种子的特点，可进行以下优化。
对于囊腔胶质的提取液进行预处理，加入适量的醋酸进行酸化处理，提高蓝色显色效果。
确定最佳的显色时间。
将溴麝香草酚蓝溶液与样品进行混合后，通过控制显色时间的长短，选择最佳的显色时间点。
确定最佳的浓度测定范围。
根据山豆根种子的特点和浸泡时间，确定溴麝香草酚蓝法测定时的最佳浓度测定范围，以保证测定结果的准确性和可靠性。
对优化条件后的溴麝香草酚蓝法进行验证。
通过对一定量的山豆根种子进行测定，比较测定结果与其他方法的一致性，验证优化后的溴麝香草酚蓝法的准确性和稳定性。
进行重复性和精密度的验证，以确保测定结果的可靠性。