2013流式细胞术临床应用的建议
流式细胞术临床应用
流式细胞术得临床应用一、在肿瘤学中得应用这就是FCM在临床医学中应用最早得一个领域。
首先需要把实体瘤组织解聚、分散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化吡啶PI)染色后对细胞得DNA含量进行分析，PI可以与细胞内DNA与RNA结合，采用RNA抑制剂将RNA消化后，通过流式细胞术检测到得与DNA结合得PI得荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量得多少。
由于细胞周期各时相得DNA含量不同，通常正常细胞得G1 / GO 期具有二倍体细胞得DNA含量((2 N)，而G2/ M期具有四倍体细胞得DNA含量((4 N)，而S期得DNA含量介于二倍体与四倍体之间。
因此，通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1 / GO 期，S期与G2/ M期，并可通过特殊软件计算各时相得百分率，DNA含量直接代表细胞得倍体状态，非倍体细胞与肿瘤恶性程度有关。
1、发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断人体正常组织发生癌变要经过一个由量变到质变得漫长过程，而癌前细胞即处于量变过程中向癌细胞转化阶段。
人体正常得体细胞均具有比较稳定得DNA二倍体含量。
当人体发生癌变或具有恶性潜能得癌前病变时，在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量得异常改变，FCM可精确定量DNA含量得改变，作为诊断癌前病变发展至癌变中得一个有价值得标志，能对癌前病变得性质及发展趋势作出估价，有助于癌变得早期诊断。
有资料证实，癌前病变得癌变发生率与细胞不典型增生程度有密切关系，增生程度越重，癌变发生率越高。
随着细胞不典型增生程度得加重，DNA非整倍体出现率增高，这就是癌变得一个重要标志。
2、在肿瘤得诊断、预后判断与治疗中得作用FCM在肿瘤诊断中得重要作用已经被认可，DNA非整倍体细胞峰得存在可为肿瘤诊断提供有力得依据，FCM分析病理细胞具有速度快、信息量大，敏感度高等优点，已被用在常规工作中。
肿瘤细胞DNA倍体分析对病人预后得判断有重要作用，异倍体肿瘤恶性病变得复发率高、转移率高、死亡率也高，而二倍体及近二倍体肿瘤得预后则较好。
流式细胞仪在临床检验中的应用
移植病人免疫抑制剂治疗指导
A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天 69例（50例没有排斥，19例发生排斥） CD4在移植后有一个缓慢的下降过程 CD4如果升高，预示发生排斥反应，需要调整免疫抑制药的治疗方案
22
老年人身体状况评估
（ Neuroimmunomodulation. 2014, 214:206-12.）
可以预计未来流式细胞仪在临床上的应用一定会有更大的发展！
9
目 录
10
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
流式细胞术在临床检验中的应用
∞ 淋巴细胞亚群分析
∞ HLA-B27检测
∞ 白血病免疫分型和MRD
急性白血病、
慢性淋巴增生性疾病（CLD)
淋巴瘤
∞ 造血干细胞分析
流式细胞术+抗原抗体反 应
百分比或绝对计数 （如 %、**个/uL）； 物质的量或定性判定 （L、UI/L、 阴性、阳 pmol/m性）
测量宏观对象（细胞）上 的微观物质（抗原、看不 见、摸不到）
血球仪
生化分析仪
细胞(测量设置全部固定化） 血清
物理或化学性质（如细胞 大小、内部复杂程度、DNA 含量）
26
TBNK淋巴细胞亚群检测
CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC
27
HLA-B27检测与脊柱关节病
脊柱关节病（Spondyloarthritis, SpA）
疾病 强直性脊椎炎 Reiter’s综合症 银屑病性关节炎 急性前葡萄膜炎 溃疡性结肠炎伴关节病
流式细胞术在临床检验中的应用
流式细胞术在临床检验中的应用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种可对单细胞悬液进行快速定性、定量分析和分选的技术。
它不仅可以对细胞表面抗原进行检测，也能对细胞内部的生物大分子进行检测，能够在细胞水平上对相关疾病进行诊断和病程监测。
因此在临床医学及科学研究中发挥着非常重要的作用。
随着技术水平的不断提高及完善，FCM得到了更为广泛的应用。
目前，FCM在临床检验方面主要应用于血液学、免疫学、肿瘤、等临床医学和基础医学研究领域，具有检测样品快速、准确以及灵敏度性高等特点，为临床检验提供了一种强有力的手段和全新的医学视角，是临床检验工作中重要的一种研究工具。
FCM主要由液流系统、光学系统、电子系统组成。
其主要基本原理是将待测样本染色后制成单细胞悬液放入样品管中，通过气体的压力使样品进入鞘液，鞘液与样品之间会形成一定的压力，当压力达到一定程度后，在鞘液的带动下，单细胞悬浮样品会形成单细胞柱状经过激光聚焦区，样品柱与激光束垂直，由于样品经特异性染料处理，因此在激光激发下会产生特定波长的荧光。
流式细胞仪中的光学系统收集到荧光信号后进行信号处理，再经过计算机系统对这些数字信号收集、储存，以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来，然后做出统计分析从而获得所需要的检测结果。
1．FCM在血液学中的应用FCM主要通过对外周血细胞和骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析对各种血液病如白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的分型、诊断、治疗及预后判断均有重要作用。
血细胞在白细胞系、红细胞系、巨核细胞系、血小板及非造血细胞均有不同的分化抗原表达，分布在细胞质、细胞膜中。
血液肿瘤细胞的特征是丧失了正常细胞的系类专一性和分化阶段的规律性，运用FCM将具有系列特异性并涵盖不同分化阶段的单克隆体作为分子探针来检测血液肿瘤细胞的内外抗原，可以反映其本质上与正常造血细胞的差异。
由于不同的血细胞系统都有其特有的表面抗原，FCM通过采用各种血细胞表面分化抗原特异的单克隆抗体，借助于各种不同的荧光染料（FITC、PE）可同时检测一个单细胞的不同参数，根据所测的参数结果来判断出该血细胞的属性。
流式细胞术临床应用
流式细胞术的临床应用一、在肿瘤学中的应用这是FCM在临床医学中应用最早的一个领域。
首先需要把实体瘤组织解聚、分散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化吡啶PI)染色后对细胞的DNA含量进行分析，PI可以与细胞内DNA和RNA结合，采用RNA抑制剂将RNA消化后，通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。
由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1 / GO期具有二倍体细胞的DNA含量((2 N)，而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量((4 N)，而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
因此，通过流式细胞术PI 染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1 / GO 期，S期和G2/ M期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率，DNA含量直接代表细胞的倍体状态，非倍体细胞与肿瘤恶性程度有关。
1、发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断人体正常组织发生癌变要经过一个由量变到质变的漫长过程，而癌前细胞即处于量变过程中向癌细胞转化阶段。
人体正常的体细胞均具有比较稳定的DNA二倍体含量。
当人体发生癌变或具有恶性潜能的癌前病变时，在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量的异常改变，FCM可精确定量DNA含量的改变，作为诊断癌前病变发展至癌变中的一个有价值的标志，能对癌前病变的性质及发展趋势作出估价，有助于癌变的早期诊断。
有资料证实，癌前病变的癌变发生率与细胞不典型增生程度有密切关系，增生程度越重，癌变发生率越高。
随着细胞不典型增生程度的加重，DNA非整倍体出现率增高，这是癌变的一个重要标志。
2、在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用FCM在肿瘤诊断中的重要作用已经被认可，DNA非整倍体细胞峰的存在可为肿瘤诊断提供有力的依据，FCM分析病理细胞具有速度快、信息量大，敏感度高等优点，已被用在常规工作中。
肿瘤细胞DNA倍体分析对病人预后的判断有重要作用，异倍体肿瘤恶性病变的复发率高、转移率高、死亡率也高，而二倍体及近二倍体肿瘤的预后则较好。
流式细胞术临床应用范围
流式细胞术临床应用范围流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的高端技术，通过流式细胞仪可以对细胞进行高通量单细胞分析。
随着技术的不断创新和发展，流式细胞术在临床应用中的范围也逐渐扩大，为疾病的诊断、治疗和预防提供了重要的支持和帮助。
一、疾病诊断流式细胞术在临床诊断中的应用范围非常广泛，可以用于各种类型的疾病的确诊和分型。
例如，在血液学领域，流式细胞术可以用于白血病和淋巴瘤等血液系统疾病的诊断与鉴别诊断；在免疫学领域，流式细胞术可以用于自身免疫性疾病的诊断和病情监测。
二、免疫细胞治疗随着免疫细胞治疗技术的不断成熟，流式细胞术在该领域的应用也越来越广泛。
通过流式细胞术可以对患者的免疫细胞进行分选、激活和扩增，用于治疗各种肿瘤和疾病。
例如，CAR-T细胞治疗就是基于流式细胞术的原理开发而来，已经在临床上取得了较好的疗效。
三、药物筛选在药物研发领域，流式细胞术被广泛应用于药物的筛选和评估。
通过流式细胞术可以快速、准确地评估药物对细胞的毒性和活性，为药物研发提供重要的数据支持。
同时，流式细胞术还可以用于研究药物的作用机制和药效评价。
四、疾病预防与流行病学研究流式细胞术在疾病预防和流行病学研究中也发挥着重要作用。
通过流式细胞术可以对疫情中的病原体进行快速检测和鉴定，为疾病的早期诊断和防控提供重要的支持。
此外，流式细胞术还可以用于研究疾病的发病机制和流行规律，为疾病的预防和控制提供科学依据。
综上所述，流式细胞术在临床应用中的范围十分广泛，涉及到疾病诊断、治疗、药物研发、疾病预防和流行病学研究等多个领域。
随着技术的不断进步和应用的深化，相信流式细胞术将在未来发挥更加重要的作用，为人类健康事业作出更大的贡献。
流式细胞术的工作原理及临床应用
流式细胞术的工作原理及临床应用引言流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，其工作原理基于细胞在液体流动环境中的特定性质。
该技术广泛用于细胞表型分析、细胞计数、细胞分类和细胞排序等领域，为研究人员和医生提供了重要的工具。
一、流式细胞术的工作原理流式细胞术利用细胞在液体中的流动来实现细胞的分析和排序。
其工作原理可以分为三个主要步骤：细胞的悬浮、细胞的单独通过和细胞的检测。
1. 细胞的悬浮：首先，需要将待分析的细胞样本进行处理，使其转化为单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液处理等方法获得。
继续使用细胞培养基、酶消化或机械碎解等方法，将细胞组织分散成单个细胞，并获得细胞悬浮液。
2. 细胞的单独通过：接下来，将细胞悬浮液通过微小通道，通常是称为流式细胞仪的仪器。
在流速适中的条件下，细胞会单个通过通道，并在通过过程中因其特定特征而会发生特别的反应。
3. 细胞的检测：在细胞通过过程中，流式细胞仪能够感应细胞的数量、大小、形状和表面标记物等特征。
通过使用激光器的激光束照射细胞，并测量其散射光、荧光光谱等信息，流式细胞仪能够对细胞的特征进行定量分析。
二、流式细胞术的临床应用流式细胞术作为一种高效、灵敏和准确的细胞分析方法，在临床上有着广泛的应用，以下是一些常见的临床应用：1. 免疫学研究：流式细胞术在免疫学领域的应用非常广泛。
通过对细胞表面的抗原和抗体的特异性结合，可以对免疫细胞进行表型分析，了解不同亚群细胞的比例和功能状态。
这对于研究免疫相关疾病的发生机制、免疫细胞治疗的效果评估等方面非常重要。
2. 癌症诊断和监测：流式细胞术在癌症的诊断和监测中也起着关键作用。
通过检测癌细胞的特定标记物，可以对肿瘤进行识别、分类和判断其恶性程度。
此外，流式细胞术还可以监测肿瘤的治疗反应，评估抗癌药物的疗效，并预测患者的预后。
3. 血液学检测：流式细胞术在血液学检测中也占据重要地位。
通过检测血液中的各种细胞类型和亚群细胞的比例，可以帮助诊断和监测临床上的血液疾病，如白血病、淋巴瘤等。
流式细胞术的临床应用
一、诊断性指标如图1所示，图（左）白血病细胞成为一个单一的群体，很难区分原始或病态的白血病细胞和成熟的细胞。
但是通过CD45和（SSC）设门法之后（图右），看到图（左）无法区分细胞被分成了五群。
在这五群中，成熟细胞CD45表达的荧光比较强。
A门里是淋巴细胞，B门里是单核细胞，C门里就是粒细胞群，D门里是原始细胞，一般CD45表达较弱。
一些细胞碎片、红细胞和转移来的瘤细胞，由于不表达CD45，可能位于D门、D门偏下或者E门的位置。
CD45结合侧向散射光之后能把白血病细胞找出来，减少了其它细胞的干扰。
对D门里的白血病细胞做进一步的分型，就能准确看到白血病细胞群免疫分型的表达情况。
图13.白血病的特异性标志免疫表型分析主要是根据细胞的特异表面标志，把白细胞分成T细胞、B细胞和原始细胞。
T淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD3、抗TCRαβ、抗TCRγδ、CD2、CD5、CD8、CD10和CD7；B淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD79a、CD22、CD19 、CD10和CD20；髓系白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cMPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15和CD64；NK淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有CD16、CD56和CD57；红白血病一般表达的分化抗原有GlyA和CD36；巨核细胞白血病一般表达的分化抗原有CD41、CD42和CD61；一系列非特异标志在不同的白血病中可能都有表达，尤其是表达在早期的造血干组细胞上，一般表达的分化抗原有CD34和HLA-DR。
其中，对T淋巴细胞白血病来讲比较特异的是胞浆内的CD3，当胞浆内CD3出现阳性的时候，高度怀疑是T淋巴细胞白血病。
对于B淋巴细胞白血病来讲，胞浆内的CD79a和CD19是比较特异的，cCD79a最具特异性。
cCD3和cCD79a分别表达于早期T细胞和B细胞。
cMPO是髓系特异标志。
如图2所示为B-ALL的表达图。
流式细胞术在临床中应用
过敏性疾病（嗜酸性粒细胞炎症反应-哮喘）
√
妇科-流产 GVHD
慢性 急性
√ √
√
天然TREG细胞在免疫系统中的作用
平衡状态：
既可有效清除外来病原体， 又可避免过度的炎症反应。
缺乏调节性T细胞：
免疫反应过度，造成自身免疫病、 哮喘、过敏反应、移植排斥、流产等。
过多的调节性T细胞：
免疫反应低下，无法有效清除病 原体及肿瘤，造成感染及癌症。
CD45
SS/CD45
SS
R2 R3
R4
Fil e: Wang Yanqi ang 04.11.2.001
Regi on R1 R2 R3 R4
% Gated 100.00 6.33 86.99 1.74
APL
Thank you !
良性肿瘤
√
感染
寄生虫病（利什曼病、蠕虫病、丝虫病和血吸虫病
√
等）
真菌
√
病毒感染-丙肝
√
病毒感染-HIV
√
细菌感染-结核
√
细菌感染-麻风
√
自身免疫 克隆氏病、胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、自身免疫 √
病
性甲状腺炎、多发性硬化
系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性淋巴细胞增殖综
√
合征(ALPS)、自身免疫性心脏病
临床意义： • 用于临床特发性血小板减少性紫癜（ITP）的
筛查与诊断
流式在强直性脊柱炎鉴别诊断中的应用
• 14、JY强直性脊柱炎相关抗原HLA-B27检测 标本类型：静脉血（2~3ml） 原理：HLA-B27是脊柱关节病病因及发病机制的
关键已经被广泛认同，各种假说均支持患者由 于存在HLA-B27的高表达引起了体内异常的免 疫应答，从而导致了脊柱关节病的发生。 临床意义： • 用于强直性脊柱炎的辅助诊断与鉴别诊断 • 用于临床强制性脊柱炎高危人群的筛查
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2013流式细胞术临床应用的建议2013年流式细胞术（flow cytometry）在临床应用中发挥着越来越重要的作用。
流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，通过激光器束照射细胞悬液，利用免疫荧光标记物对细胞进行快速、准确的分析和分类。
它不仅可以用于细胞分型、表面标记物检测和定量分析，还可以用于DNA含量测定、细胞周期分析和细胞凋亡等许多细胞生物学实验。
在医学领域，流式细胞术已经广泛应用于恶性肿瘤诊断和疗效监测、免疫学分析、血液疾病筛查等方面。
以下是关于2013年流式细胞术临床应用的一些建议。
1.提高流式细胞术的操作技术
流式细胞术是一项复杂的实验技术，需要操作者具备专业的知识和技能。
建议临床实验室加强对操作者的培训和质量控制，确保流式细胞术的准确性和可靠性。
此外，鼓励实验室与相关学科领域开展合作，促进多学科融合和交流，从而提高流式细胞术的应用水平。
2.加强流式细胞术在临床诊断中的应用
流式细胞术在肿瘤诊断和治疗方面具有很大的潜力。
建议医务人员积极推广并依托流式细胞术在肿瘤早期诊断、预后评估和治疗监测中的应用。
此外，还可以探索流式细胞术在其他疾病诊断、临床分型和病理分析中的应用，为患者提供更准确和个体化的医疗服务。
3.引入新的标记物和技术进一步丰富流式细胞术应用
流式细胞术的应用受限于标记物的选择和技术的局限性。
建议临床实验室引入新的标记物和技术，如多色流式细胞术、质谱流式细胞术等，进一步提高流式细胞术的分辨率和检测灵敏度。
同时，开展相关研究，探索新的流式细胞术应用领域，如循环肿瘤细胞检测、微小残留病灶鉴定等，为临床诊断和治疗提供更多选择和可能性。
4.优化流式细胞术数据分析和结果解读
流式细胞术生成的数据量大，分析复杂，结果解读需要结合临床病情和临床判断。
建议建立标准化的数据分析和结果解读流程，并加强质量控制和质量保证。
此外，推动多中心数据共享和多中心交叉验证，提高流式细胞术的可重复性和可靠性。
5.加强与其他技术的结合和协同应用
流式细胞术与其他分子生物学和细胞生物学技术的结合，可以进一步拓展其临床应用领域。
建议临床实验室与其他技术领域开展协作研究，如基因测序技术、单细胞测序技术等，发掘新的疾病标记物和治疗靶点，为临床诊断和治疗提供更多有效和个体化的策略。
总之，2013年的流式细胞术在临床应用方面具有广阔的前景和潜力。
通过加强操作技术、扩大临床应用、引入新技术和标记物、优化数据分析和结果解读、加强与其他技术的结合，可以进一步提高流式细胞术的应用水平，为患者提供更精准、个体化的医疗服务。