药品中大肠埃希菌的检验
大肠埃希菌的鉴定流程及相应试验结果
大肠埃希菌的鉴定流程及相应试验结果下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!一、引言随着生活水平的提高，食品安全问题备受关注。
20版药典大肠埃希菌检查操作规程
20版药典大肠埃希菌检查操作规程以下是一份20版药典大肠埃希菌检查操作规程的示例：1. 实验室准备a. 确保实验室设备、试剂和培养基的准备充足。
b. 检查培养基的质量和有效期限。
c. 清洗和消毒实验台面和工具。
2. 样品准备a. 收集待检样品，如食品、水源等。
b. 如果样品体积较大，将样品切割成适当大小的块。
c. 样品处理前，使用无菌容器收集样品。
3. 样品处理a. 杀菌样品以杀灭大肠埃希菌以外的其他微生物。
可以使用高温杀菌、化学杀菌等方法。
b. 对于液体样品，使用无菌技术将样品转移到含有适当培养基的试管中。
c. 对于固体样品，将一定重量的样品转移到含有适当培养基的培养皿中。
4. 培养与孵育a. 在适当温度下，将培养皿或试管放入培养箱孵育。
大肠埃希菌通常在37℃下生长。
b. 确保培养基含有抑菌物质（如抗生素），以防止其他非大肠埃希菌的生长。
5. 结果解读a. 在孵育一定时间后，观察培养基上是否有典型的大肠埃希菌菌落。
b. 大肠埃希菌菌落通常呈现金黄色、粘液状，有时也可能呈现其他形态。
c. 使用适当的显微镜技术，观察和鉴定菌落形态，并进行进一步的确认。
6. 结果记录和报告a. 记录培养结果和菌落形态的详细描述。
b. 如需要，进一步进行相关确认试验。
c. 根据操作结果，撰写实验报告，并将结果报告给相关人员或部门。
注意事项：- 确保操作过程中的无菌技术和消毒措施。
- 操作过程中遵循安全操作规范，注意个人防护。
- 严格遵守实验室操作流程，减少污染和误差的可能性。
- 如发现培养出大肠埃希菌，及时采取相应的措施，以避免传播和扩散。
大肠埃希菌检查法
大肠埃希菌检查法Escherichia Coli Test Method1.目的建立大肠埃希菌检查法的标准操作程序。
2.范围适用于大肠埃希菌检查的操作。
3.责任者QC化验员。
4.程序：4.1.简述4.1.1. 大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠埃希菌，为肠埃希菌科埃希菌属的模式种。
埃希菌属除大肠埃希菌外，新近发现有非脱羧埃希氏菌等5个种。
大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。
在药品中检出大肠埃希菌，表明该样品受到人和温血动物的粪便污染，即可能污染肠道病原体。
大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。
为保证人体健康，口服药品必须检查大肠埃希菌。
4.1.2. 用4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide，MUG)和靛基质(Indole)试验检查大肠埃希菌是一项新技术，其检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole试验为阳性或阴性即可报告结果。
4.1.3. 原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。
实验证明，96％的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase，GUD)，约10％的沙门菌属一些菌种也含有此酶。
MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强千万倍，易于观察，没有主观性，因而用MUG 鉴定大肠埃希菌已被广泛应用于临床、食品、饮水、污水等的检测。
单一的MUG 鉴别大肠埃希菌其漏检率达6％，鉴于98％的大肠埃希菌其靛基质试验为阳性，故将MUG与靛基质试验结合，比单用MUG可提高大肠埃希菌的检出率。
如MUG与Indole试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。
该法理论上可使大肠埃希菌的检出率达98％。
药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究
药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究
药品控制菌检查法中，常常需要对大肠杆菌进行检测和贮藏。
本研究旨在探究不同大
肠杆菌贮藏方法对其生存能力的影响，并为药品控制菌检查提供实用的参考方法。
方法:
1.选择5个大肠杆菌标准品种进行实验，分别为ATCC25922, ATCC8739, ATCC13706, ATCC23256和ATCC8099。
2.分别将这5种大肠杆菌接种于肉汤培养基中，经过孵育后，采用过滤膜法将细菌分
别按不同浓度制成冻干菌粉：10^6CFU/g, 10^7CFU/g, 10^8CFU/g。
3.将制成的冻干菌粉分别保存在常温、冰箱和低温冰箱内，并在保存0、30、60、90、120、150和180天时分别取出1份进行活菌数的检测和分析。
结果:
1.不同浓度的大肠杆菌冻干菌粉在不同贮藏条件下的存活率有所不同，其中随着存储
时间的延长，存活率显著下降。
2.长时间耐受除冰后，低温冰箱存储的大肠杆菌贮藏状态较好，存活率较高。
3.ATCC23256和ATCC8099两种大肠杆菌在低温冰箱中的存活率较高。
结论:
1.大肠杆菌在冻干状态下对贮藏温度较为敏感。
2.长时间耐受除冰后，低温冰箱是一种可靠的大肠杆菌存储方法。
3.对不同种类的大肠杆菌，选择适合它们生存的温度和储存方式是保证其贮藏状态和
活力的关键。
总之，本研究提供了一种科学、实用的大肠杆菌贮藏方法，并为药品控制菌检查提供
了参考建议。
大肠埃希菌的检验原理
大肠埃希菌的检验原理
大肠埃希菌的检验原理主要是基于大肠埃希菌能够产生酶、产生特定代谢产物以及具有一定生理特征等方面进行检测。
1. 酶的检测：大肠埃希菌能够产生β-半乳糖苷酶和大肠埃希菌酶等酶。
常用方法是利用含有染色底物的培养基，如培养基中加入苔藓素和半乳糖时，大肠埃希菌能够分解底物产生酶，使底物变色。
这样可以通过颜色变化来判断培养基中是否存在大肠埃希菌。
2. 代谢产物的检测：大肠埃希菌在产酸过程中会产生大量的氢离子，降低培养基的pH值，可以使用酚红指示剂来检测pH值的变化。
另外，大肠埃希菌还会产生气体，如二氧化碳和氢气，在含有较少营养物质的培养基上可以形成气泡。
这些变化可以作为大肠埃希菌存在的判断依据。
3. 生理特征的检测：大肠埃希菌有一些特有的生理特征，如能够产生胆红素，对产酸、反应pH等均有一定特殊性。
对大肠埃希菌进行生理生化反应、鉴定和分析可以通过不同试剂和培养基来进行。
综合上述三个方面的检测方法，能够较准确地鉴定出是否存在大肠埃希菌。
当然，最常用的方法是利用尿液或食物中的大肠埃希菌进行培养，并在培养基上观察酶活性、产酸、产气等特征变化。
大肠埃希菌
Shandong Liaocheng Ehua Medicine CO., LTD大肠埃希菌(Escherichia coli)即大肠杆菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。
用4-甲基伞形酮葡糖苷酸（MUG）和靛基质（Indole）试验检查大肠埃希菌，检验步骤为：增菌培养后，转种MUG-蛋白胨培养基培养，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌，如MUG、Indole 试验为阳性或阴性即可报告结果。
原理：利用目标菌限定酶作用的底物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。
实验证明，96%的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶（GUD）。
MUG被GUD水解，产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色的反应强，易于观察。
通常将MUG与靛基质试验结合，来检测大肠杆菌。
如MUG与Indole试验的反应不一致时，则需将供试液的增菌培养物用EMB琼脂平板分离培养、革兰染色、镜检及生化试验鉴别。
2．仪器、设备及用具2.1无菌室微生物检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统。
2.2 净化工作台2.3 培养箱（36℃±1℃）。
2.4 高压蒸汽灭菌器。
2.5 显微镜（1500×）。
2.6 恒温水浴（45℃±1℃）。
2.8 离心机（500~4000r/min）。
2.9 电冰箱。
2.10 匀浆仪。
2.11 366nm紫外灯。
2.12 玻璃器皿、器具[参照细菌、霉菌和酵母菌计数2.2.2]。
3．试液、指示液。
3.1 0.9%无菌氯化钠溶液。
3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
3.3 pH7.2无菌磷酸盐缓冲液。
3.4 靛基质（Kovacs）试液。
3.5甲基红试液。
3.6 V-P试液。
3.7 革兰染色液。
3.8 中性红指示液。
3.9 亚甲蓝指示液。
3.10 溴麝香草酚蓝指示液。
3.11 酸性品红指示液。
3.12 曙红钠指示液。
4．培养基4.1 营养肉汤4.2 营养琼脂4.3 胆盐乳糖(BL)培养基。
大肠埃希菌的检测
35℃。
精品PPT
实训器材(qìcái)：
蒸汽灭菌物品： 1.乳糖胆盐发酵(fā jiào)培养基试管10
支 干热灭菌物体： 5mL移液管1支 1mL移液管5支
精品PPT
流程图：
精品PPT
甲基伞形酮葡糖苷(tánggān)酸(MUG)
EMB培养18-24h后，检查有无疑似 大肠埃希菌菌落（大肠埃希菌落形 态特征见表），若无，判供试品未 检出大肠埃希菌；若有，进一步做 培以养下基试验大肠埃希菌落菌形落态形态特征
呈紫黑色、浅紫色、篮紫色或粉红
色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色
EMB
中心，圆形，微突起，边缘整齐，表 面光滑，湿润，常有金属光泽。
成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现 出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合， 形成玫瑰吲哚，为红色化合物。
精品PPT
伊红美蓝培养基（EMB培养基）
蛋白胨水琼脂培养基100ml，20%乳
糖溶液2ml，2%伊红水溶液2ml，0.5%
美蓝水溶液1ml，将已灭菌的蛋白胨水
琼脂培养基（pH7.6）加热溶化
(rónghuà)，冷却至60℃左右时，再把已
培养基
胨10.0g
硫酸锰0.5mg
硫酸锌0.5mg 硫酸镁0.1g
氯化钠5.0g 氯化钙50.0mg
磷酸二氢钾0.9g 磷酸氢二钠6.2g
亚硫酸钠40.0mg 去氧胆酸钠1.0g
MUG 75mg
水1000mL
除MUG外，取上述成分，混合。微温溶
解，调节(tiáojié)PH7.2-7.4，加入MUG，溶
精品PPT
检测(jiǎn cè)原理：
控制菌(大肠埃希菌)检查操作规程
控制菌（大肠埃希菌）检查操作规程1.目的建立一个控制菌大肠埃希菌控制菌大肠埃希菌检查标准工作程序，规范QC控制菌大肠埃希菌检查人员的控制菌大肠埃希菌检查的操作。
2.范围适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的控制菌大肠埃希菌的检测。
3.责任者QC控制菌大肠埃希菌检查人员；质量管理部4.内容4.1检测准备4.1.1 QC人员接到控制菌大肠埃希菌检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定控制菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培养基等项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行控制菌大肠埃希菌检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗→干燥→包裹）、培养基和稀释剂等（配制→分装→包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100m，混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g，置PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1：10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g(5m1)，加入含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45℃pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
药品中大肠埃希菌的检验
(1)按细菌总数测定方法制备供试液。
(2)取供试品l：10稀释液10mL，接种在制好的100mL胆盐乳糖培养基中,在37℃恒温箱中培养18～24 h，进行增菌培养。
(3)用接种环挑取上述培养物接种在麦康凯琼脂平板(MacC)或伊红美蓝琼脂平板(EMB)上，置37℃培养18～24 h，进行分离培养。
观察有无鲜桃红色或微红色、中心深桃红色、圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑、湿润的菌落形成。
(4)挑取2～3个疑似大肠埃希菌菌落，分别接种在营养琼脂斜面培养基上，在37℃下培养18～24 h，进行纯培养。
(5)将疑似大肠杆菌的培养物涂片进行革兰染色，经镜检证明为G－无芽孢短杆菌的，应继续做生化试验。
(6)生化试验
①乳糖发酵试验。
将上述纯培养物接种在乳糖发酵管中，在37℃下培养24～
48 h。
凡大肠埃希菌，可发酵乳糖产酸产气。
②靛基质试验。
将上述纯培养物接种在蛋白胨水培养基中，在37℃下培养(48±2)h．加入0 .3～0 .5 mL靛基质试液(对二甲基氨基苯甲醛)，观察液面。
液面呈玫瑰红色为阳性反应，呈试剂本色为阴性反应。
③甲基红试验将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内，在37℃下培养(48±2)h，在1 rnL培养液中加入l滴甲基红试剂，立即观察结果。
呈鲜红色或橘红色为阳性反应。
呈黄色为阴性反应。
④乙酰甲基甲醇生成试验(VP试验)。
将纯培养物接种在磷酸盐葡萄糖胨水培养基内，在37℃下培养(48±2)h，在2mL培养液中加入α一萘酚乙醇液1 mL_，混匀，再加入质量分数为40％的氢氧化钾溶液0.4mL后观察结果。
培养液应在加入试剂后的4 h内呈红色为阳性反应，无红色为阴性反应。
⑤枸橼酸盐利用试验。
将纯培养物接种在枸橼酸盐斜面培养基上,在37℃下培养(48±2)h,观察结果。
斜面有菌生长，培养基由绿色变为蓝色为阳性反应，斜面无菌生长培养基仍呈绿色为阴性反应。
(7)判断结果。
经染色镜检证实为G–无芽孢短杆菌，乳糖发酵试验产酸产气，IMVC试验结果为++––或–+––的，可确认供试品中含有大肠埃希菌。