饮用水中大肠埃希氏菌检测方法改进

饮用水中大肠埃希氏菌检测方法改进目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价，以大肠菌群和大肠埃希氏菌或粪大肠菌群（耐热大肠菌群）作为粪便污染的指示菌。

gb/t5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法》微生物指标增加了生活饮用水中大肠埃希氏菌检测方法。

方法是指多管发酵法总大肠菌群阳性者，在含有荧光底物的培养基上44.5℃培养24h产生β—葡萄糖醛酸酶，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光。

在实验中观察结果时发现阴性对照管干扰很大，样品管与阴性对照管很难区别。

故对观察方法作了改进，现报告如下：
1材料与方法
1.1培养基和试剂
乳糖蛋白胨培养液，二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液，ec—mug培养基。

1.2仪器
紫外灯：6w、波长366nm的紫外灯，用于观测荧光反应；培养箱：36℃±1℃；
培养箱：44.5℃±1℃天平；试管；分度吸管：1ml，10ml；小导管；金属接种环；
1.3样品来源
标准菌株：大肠埃希氏菌atcc25922；末梢水，10份；源水，3份；
1.4方法
gb/t5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法》，具体方法如下：
1.4.1ec—mug培养基：将干粉培养基加入水中，充分混匀，加热溶解，在366nm的紫外灯下检查无自发荧光后分装于试管中，115℃，10lb高压灭菌20min，最终ph为7.0。

1.4.2接种：
1.4.
2.1将总大肠菌群多管发酵法初发酵产酸或产气者进行大肠埃希氏菌检测，用烧灼灭菌的金属接种环将上述试管中的液体接种到ec—mug管中。

1.4.
2.2将大肠埃希氏菌atcc25922标准菌株接种到ec—mug管中作阳性对照。

1.4.
2.3同时取不接种菌的ec—mug管中作阴性对照。

1.4.3培养：将已接种样品、标准菌株的ec—mug管及阴性对照管在培养箱中44.5℃培养24h。

1.4.4结果观察：将培养后的ec—mug管在暗处用波长366nm功率6w的紫外灯照射，如有蓝色荧光产生则表示水样中有大肠埃希氏菌。

2结果与讨论
2.1将ec—mug样品管、阳性对照管、阴性对照管在暗处用波长366nm功率6w的紫外灯照射时，均能观察到蓝色荧光，且荧光强度区别不大。

2.2另取一支空试管直接置于波长366nm功率6w的紫外灯照射时，能观察到蓝色荧光，说明普通玻璃试管能自发荧光，产生背景干扰。

2.3通过阴性对照试验发现试管能自发荧光，对结果观察有影响。

因此，观察结果时应保证玻璃试管本身无荧光物质。

2.4紫外—可见分光光度计吸收池有光学玻璃和石英两种材料
制成。

光学玻璃制成的吸收池用于可见光区，石英材料制成的吸收池用于紫外区，也可用于可见光区。

将1.4.3培养液分别转移到石英玻璃管中，在暗处用波长366nm功率6w的紫外灯照射时，很明显地区分出有、无蓝色荧光。

2.5石英玻璃试管价格昂贵，不可能批量使用。

需要解决背景干扰，因食品级包装用纸要求不能含荧光物质，取一张食品级包装用纸，用吸管分别吸取ec—mug样品管、阳性对照管、阴性对照管中培养物，滴一滴于食品级包装用纸上，相互间隔，置于波长366nm 功率6w的紫外灯照射时，能一目了然地区分出有、无蓝色荧光。

或先将普通一次性培养皿置于波长366nm功率6w的紫外灯照射，检查无自发荧光后，也可将培养物滴于上面观察。

结果10份末梢水均未检出大肠埃希氏菌，3份源水有2份检出大肠埃希氏菌。

3小结
通过改变一下培养物的观察背景，能较清楚地判断有、无蓝色荧光产生，水样中是否含有大肠埃希氏菌。

ec—mug样品管阳性者，则计算ec—mug阳性管数，查对应的最可能数（mpn）表得出大肠
埃希氏菌的最可能数，结果以mpn/100ml报告。

参考文献：
[1].生活饮用水标准检验方法gb/t5750.12—2006.
[2].胡曼玲主编，《卫生化学》第五版.人民卫生出版社2003：49。