马铃薯组织培养中的污染原因及控制措施

［］ 向华 ， 张秀珊等． ５柴 李军， 植物组织 培养中污染 的控制叨． 热带农业科学， ０ ， ２ ３３ ０ ２
（１ ０ ４ ． ６： — ４ ４
工厂化 育苗生产中一个重要 环节 ． 一套贯穿整个组培过程 的技 术。 也是
【 词】 物组织培养 ； 关键 植 无茵操作 ； 污染
净’ 防止灭菌不彻底 ， 再关 闭放汽 阀， 然后 使压力稳定 。 １污染的症状和原因 ． ③在压力 １ ｋ ｃ 温度为 １０ １１ 下持续灭菌 １～ ５ ｉ， ． ￣ｍ、 １ ２ ～２ｏ Ｃ ５ ２ ｍ ｎ 灭 真菌性污染 主要指霉菌 引起 的污染 。一般接种 后 ３ ８ 可在培养 ～ｄ ０ ｉ． 基 中发 现各种颜色 的菌斑 。真菌性污染， 一般是 由空气 污染和瓶 口边 菌时间不宜超过 ３ ｍｎ 以免引起 培养基成分变化 。 据报道 ． 对于一些内生细菌可在 培养基 中加入一定浓度的抗菌素 缘 的灰尘 和真菌孢子落入器皿 中造成 的。另外 ， 在湿度太大 的季节 和 （ 青霉素 Ｎ ２ｍ ／ 链霉素 ４ｍ，） ａ１０ ｇ Ｌ＋ ０ ｇ ， 污染可起到一定程度 的抑 ／ 对其 Ｌ 培养室 内． 棉塞也会 长出真菌孢子 引起大量污染 。
③ 接种器械应及 时在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌 ， 每接 一瓶 所用 组织或器官 。 在继 代培养 中 ． 一定要严 格筛选无 污染 的外植体 。 对于某 使操作 区空气不 些存在 于接种材料 内部 的内生细菌 ． 由于它潜伏 的较深 。 在外植 体 的 器械 消毒一 次。台面上尽量少放瓶子保证 气流畅通 。 初级培养 中不易被发现随着继代次 数的增加， 菌量慢慢 累积发 展才在 断净化 。 注 ： 长时间使用一种消毒药剂 。 若 空气 中散落 的真 、 细菌孢子就会 培养基 上显现出来 ． 一般 的表面消毒 方法无法将其 消除 ． 随着材料 会 产生抵抗不利 环境 的抗性 ． 以应该每 隔一段 时间就更换一种 消毒 所 带入培养过程引起污染
３防治措施 ．
３１ ．培养基 的灭 菌
１９ ． ９ ２
［ ］ 清萍． ２李 降低马铃薯 组培苗工厂 化生产 中污 染率 的有关措 施咖中国马铃薯 ， ２０， （： ０２ １ ０ ２１ ４ ２ － ３ ． ６ ）３ ［］ 萍， 童安毕， 马铃 薯茎尖培养及快 速繁殖抗污染 的效 果研究【． ３黄 颜谦， 等． Ｊ贵州 ］ 农业科学， ０ ．１ ） ４ ４ ． ２ ３３ （ ： － ５ ０ ３４ ［］ 萍， 马 铃薯脱毒试管 苗接种 污染原 因及 防除技巧叨内 蒙古农业科技 ， ４杨 张涛
◇ 农林科技◇
科技 圈向导
２１年第３ 期 ０２ ３源自马铃薯组织培养中的污染原 因及控制措施
张海 静 （ 安县农业技术推广 中心植保站 黑龙江 庆
庆安
１２ ０ ） ５ ４ ０
【 要】 摘 组织培 养是通过 无菌操作 分 离 植物体 的一部 分， 接种到 培养基 上， 工控制 的条件 下进行培养 ， 在人 使其产 生完整植株的过程 。在 整个组织培养过 程中 ， 污染是一个普遍存 在的现 象， 污染率高使 组培的成本相 应增加 ， 甚至造成毁 灭性损 失。 因此 ， 控制污染是组织培养研 究及
理。在植物病害中 ． 真菌所引起 的病害尤其严 重 ， 因会产生孢 子 。 且 随 毁，消灭污染源。 以 ● 着空气飘散 ． 一旦 落人适 当的环境下 。 粒小小 的孢 子便会扩 大成 一 一 个 菌落 ． 污染整个 组织培养瓶。 因此一旦有真菌污染的组培苗 ． 就要用 【 参考文献】 高压灭菌器彻底消灭 。 以防扩散。 ［］ １ 曹孜义， 国民． 刘 实用植 物组织培养技术教程 ［ ］ Ｍ． 兰州： 甘肃科 学技术 出版社 ，
细菌性污染是指在 培养过程 中 ． 工作人员使 用了未经充分消毒 的 制作用 。 ３ 基 础苗的表面消毒 ． ２ 工具 ． 在培养基表 面或 材料表 面出现黏液状物体 、 菌落或浑 浊的水渍 ①在接种之前 ， 基础苗需经严格 的挑选 ， 细观察待转基础苗 ， 仔 清 状 ， 时呈现泡沫发酵状 。一般在接种后 １ ２ 即可发现。细菌污染 有 ｄ 确认无污染才能取用 又 以芽孢杆菌最普遍 、 最严重 这种芽孢杆菌能 耐一 定高温 、 高压 ， 对 除已被污染 的基础 苗 ． ②对于一些初期感染 的基础 苗 ， 由于菌源太小， 肉眼不易发现， 不 消毒剂 和紫外线也有一定抗性 。 由于高压灭菌不彻底造成的。 常 因此 ， 每次培养基灭菌后 ． 应放在 培养室 ２ ３ 。 — ｄ 看培养基表 面和内部无任何 确定是否被污染的基础苗也应果 断清除。 ③用 ７％酒精擦拭 培养瓶 的外壁 （ ５ 及瓶盖） 除附着在瓶外 壁上 ， 消 细菌痕迹 ． 能使用 。 才
２ ０ ， ） １ ２ ０ ５（ ： － ２ ７２
培养 基封 口后应尽快进行 高温高压灭菌 。灭菌不及 时’ Ａ造成 杂 菌大量 繁殖， 使培养基失去效用 。为了保证 培养基 灭菌彻 底， 污染 ， 降低 在灭菌过程 中需 注意 以下几个 环节 ： ①锅 内灭 菌物不能堆放过 满 ．否则将阻碍蒸汽 的流通和热交换 ， 使容器 内升温减慢 ， 造成物体 内部 杀菌不完全 。 ②压 力升到 ０ ｋ／ ￣ ． ｇ ｍ 时打 开放汽 阀， 锅 内冷空气彻 底排放干 Ｓ ｃ 将
液 。如 ： 过氧 乙酸 。 ３ 组培苗 的生长环境的调控 ． ４ 植物组织培养包 括无菌 操作和无 菌培养 技术． 好无 菌操作 室 做 培养室是 组培苗生长 的室 内环境。 除保持 培养物适宜的生长环 境 的 消毒是 至关 重要 的 。污染 的主要 来 源是 空气 中的 细菌 和真菌 孢 （ 相对 温度 ２ ℃～ ４ 相对湿度 ７ ％～ ０ 光照强 度 １ ０１一 ５ ０ ） Ｏ ２ ℃、 ０ ８％、 ８０ｘ ２ ０ １ ｘ 子 。接种 室 内不干 净 ． 接种 工具一 镊子 、 刀 以及培养 瓶等 落有 灰 剪 组 尘 ， 可引起真菌 生长。一般定 期开窗换气 ． 都 以免造成 细菌周期性大 外。 培室的清洁消毒和污染 防控 是组 培实施 工厂化生产不可忽视 的 问题 。因此， 每隔 ２ ３ 用甲醛溶液或百菌清洒地消毒一次 ， 隔 ４ ５ ～ｄ 每 ～ｄ 面积发生 。 用 甲醛熏蒸ｆ ５ ｍ 将 ０ Ｌ甲醛倒 人 １ｇ 右高锰 酸钾 中 ５左 使 甲醛蒸汽 散 ２４培 养 条 件 ． 密闭接种 室门窗 ２ ｈ 杀死 空气 中的污染菌源 ． ４） ． 同时结 合 ７ ％ ５ 在培养室内的培养条件中 ， 温度和湿度与污染率密切相关 。组 培 发 出来 ． 喷雾） ０ ％的新洁尔灭溶液擦洗培养架 。 。用 ． ５ 另外要 苗在高温 、 高湿环境 下有利于 杂菌滋长 ， 以污染率就 高 ； 所 温度冷 、 凉 酒精作降尘处理（ 集 培养时 ， 污染率就相对低 一些。 当发现污染 的组培苗时 ， 一定要及时清 及时清 除组 培室中的污染菌和污染苗。 中进行 高温灭菌或远距离销 ２３接种室与接种器械 －
２影响污染的因素 ．
的杂菌后放在超净 工作台中 ， 紫外灯 消毒 ２—０ ｉ备用 。 用 ０ ３ｍｎ
３３接种过程 的注 意事项 ． ２１ ．培养基消毒 接种的基本技术环节是 降低 污染率 的关键措施。在接种 中， 了 为 培养基 的污染 以细菌污染为 主． 主要表现为 ： 培养基表 面出现黏 液状物 质、 菌落或呈浑 浊的水渍状甚 至泡沫发酵 状 ． 中芽孢 杆菌发 降低 污染应 注意 以下几项事宜： 其 ① 接种室保持干净整 洁． 应定期对 接种室用 ７ ％ ５ 酒精 进行喷雾降 生最为普遍和严重 ， 呈乳 白色 。可 随培养材料 、 用具 等传播 ， 也可 出现 尘和熏蒸（ 甲醛： 酸钾＝ ： 灭菌 ［并定 期对接 种室进行 ２ ～ ５ ｉ 高锰 ２） １ ４ ］ ， Ｏ ２ｍｎ 在培养基表面 ， 或呈滴形云雾状存在于培养基 内。 这种菌外包有夹膜 ， 用紫外灯光 照射 、 杀菌 ３ ５ ｉ。 ０３ｍｎ 能耐一定 的高温 、 高压 ， 对紫外线有一定 的抗性 ， 消毒剂也难 以杀 的紫外灭菌。在每次接种前 ， 一般 ②接种过程 中操 作人员应及 时用 ７ ％ ５ 酒精 擦拭双手和超净 工作 死 ＿ ２ ］ 。 台台面及台壁。接 种过程 中 ， 瓶子呈斜角 ， 口 在酒精 灯火 焰上方 ， 瓶 放 ２ 外植体 ． ２ 利用气 流上 升的原理 。 以阻止空气 中飘扬 的孢子落人瓶内。 接种后 ， 再 植物组织培养 的成败除与培养基 的组分有关外 ． 一个 重要因素 另 瓶盖要拧 紧、 拧严 。 就是外植 体本 身 ． 即由植 物上切取下来 ． 以进 行离体培养 的那部分 烧瓶 口一次 。 用