马铃薯组织培养技术要点
马铃薯组培生产流程
马铃薯组培生产流程介绍马铃薯组培是一种无性繁殖技术，通过将马铃薯的离体培养提供适宜的营养条件和激素刺激，使其快速增殖。
组培技术被广泛应用于马铃薯种苗生产、病毒清除和基因转化等领域。
下面将详细介绍马铃薯组培的生产流程。
步骤一：材料准备与消毒1.选择适宜的母本马铃薯作为组培的起始材料。
母本应选取无病虫害、无病毒污染、形状规则的健康马铃薯。
2.将选取的母本进行消毒处理。
首先用水清洗去除表面的土壤和杂质，然后将马铃薯浸泡在10%含氯消毒液中，保持30分钟。
之后，用去离子水反复冲洗3-4次，确保彻底去除消毒剂。
步骤二：组织切割1.将消毒后的马铃薯切割成5mm×5mm的组织块，每块含有一个芽眼。
切割时要确保刀具和工作台的消毒，避免污染。
2.切割好的组织块放入含有抗生素的高浓度杀菌剂中，进行再次消毒处理，时间为30分钟。
步骤三：愈伤组织诱导1.将消毒后的组织块放置在含有适宜激素的培养基上，培养基中添加有机植物激素，如生长素（NAA）和维生素B6（PA）等，以促进愈伤组织的形成。
2.将培养瓶或培养皿密封，放置在光照适宜、温度适宜、湿度适宜的培养箱中。
通常，培养温度为20-25摄氏度，光照强度为3000-5000勒克斯，湿度控制在60-70%。
步骤四：愈伤组织块增殖1.经过适当时间的培养（通常为4-6周），愈伤组织块开始增殖。
此时，可以将它们转移到新的含有低浓度激素的培养基中，以促进增殖。
常用的增殖培养基包括MS培养基、SH培养基等。
2.愈伤组织块的增殖可分为两个阶段，即缩小增殖和快速增殖。
在缩小增殖阶段，愈伤组织块的增殖速度较慢，所需时间较长。
而在快速增殖阶段，增殖速度显著加快，愈伤组织块数量迅速增加。
步骤五：愈伤组织分化1.当愈伤组织块增殖至一定数量时，可以进行愈伤组织的分化。
将增殖后的组织块转移到含有适宜激素的培养基中，培养出新的植株。
2.分化培养基的选择要根据所要培养的植株部位而定。
例如，若要培养出根系，可选择含有较高浓度生长素（IBA）的培养基；若要培养出茎叶，可选择含有较高浓度细胞分裂素（KT）的培养基。
马铃薯组织培养技术
Zhongfeinongyao
马铃薯组织培养技术
刘志强
一、马铃薯的组织培养
1、种薯的茎尖脱毒 植 物 组 织 培 养 也 叫 PlantTissueCul－ ture，广义指在特定条件下，植物生长过程
灯火焰下 10cm 以内接入到三角瓶内，每 遍，要求认真细心，避免折断薯苗，清洗后 瓶接种 10 段左右，火焰封口后，贴上标签， 的薯苗再置于一定浓度的杀菌剂溶液中浸 标签上要标注接种时间、品种及接种人。重 泡 5min 后，立即移栽。按 6～8cm 的株距移
接种人员先换上拖鞋、剪掉手指甲、用
香皂洗净双手后，进入到缓冲间内。换上拖 鞋及工作服后，进入接种室，用 75%的酒精 对双手、套袖进行喷雾消毒，然后就座于超
移栽前一天揭开封口膜。移栽时，小心
的用手洗去根部附着的培养基，水温在 22℃左右，去掉培养基的苗再用清水洗两
活。因此要采取防治手段，主要有下面几 点：①使用固体培养方法，提升琼脂浓度，
品，每次接种前需将超净工作台用紫外灯 改变了人为的条件，短时间中组培苗适应 组织结构发生变化，生理功能产生异常，主
进行杀菌半小时左右，20min 后工作人员 不能适应。因此，组培苗必须移出培养室， 要体现为分化能力下降，不能独立增殖成
方可进入。
在室温下炼苗 3-5 天。
芽或者生根，移栽到自然界中更是很难成
管斜面上，每个试管内接种一块愈伤组织， 生长出浓密而粗壮的不定根，以提高组培 操作环境方法减少真菌产生。另外植物组
在 25℃左右的培养室进行培养。脱毒培养 苗对外界环境的适应力及驯化移栽的成果 织培养过程中，内源菌污染的处理工作比
基一般为 MS 培养基中加入 0.5mg·L-16- 率，获得更多高质量的商品苗。马铃薯组培 较复杂。该污染指外植体材料内部中微生
马铃薯组织培养
马铃薯组织培养1、繁殖瓶苗将待繁脱毒苗在无菌条件下每叶节切一段，接种在仅含大量元素、微量元素和铁盐的无激素M S固体或液体（可用纸桥）培养基的组培瓶中，置培养室内培养。
培养条件为：光照1000-3000lx,光周期13-16h/d,培养温度（25±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。
叶节段接种30-50d后长成3-5片叶的幼苗。
记录苗芽发生时间，生长状况，污染率。
再按照上述方法重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。
2、繁殖微型薯将上述具有3-5片叶幼苗，加入液体培养基（MS+BA2-10mg/L)或（MS+BA2-10mg/L+IAA1m g/L+CCC100-500mg/L+糖80-100g/L),放入培养室，遮光全黑暗或光照时数少于8h/d，温度（20±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。
经40-70d后，在植株叶腋处长出微型薯。
记录微型薯发生时间，生长状况，污染率。
马铃薯组织培养及原原种生产技术摘要：本文作者根据自己多年的工作经验，详细地介绍了马铃薯组织培养方法和原原种生产技术。
关键词：马铃薯组织培养原原种生产技术病毒和类病毒的累积性感染是引起马铃薯种性退化的重要因素，而通过组织培养获取无病毒种薯来恢复种性的方法已被马铃薯生产地区广泛采用。
现将马铃薯组织培养方法和原原种生产技术介绍如下：1 马铃薯组织培养1.1外植体培养从已催出芽（芽长一般2—4cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到MS＋6－BA1.5mg/L （毫克/升）＋GA30.5mg/L＋IBA0.5mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种1—5个外植体。
1.2茎尖剥离及初代培养外植体培养20天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点0.1——0. 5mm部分剥离出来，转接到MS＋肌醇100mg/L+6－BA1.5mg/L＋GA30.5mg/L＋泛酸钙1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂8g/L＋活性炭0.17g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种4—5个生长点。
马铃薯细胞培养实验报告
一、实验目的1. 学习植物细胞培养的基本原理和方法。
2. 掌握马铃薯细胞培养的实验操作技能。
3. 熟悉植物组织培养过程中的无菌操作和注意事项。
二、实验原理马铃薯细胞培养是利用植物组织培养技术，将马铃薯的愈伤组织或胚性细胞在体外培养条件下，使其生长发育成为完整的植株。
实验过程中，通过添加适当的植物激素和营养物质，调控细胞分裂和分化，实现马铃薯的再生。
三、实验材料1. 马铃薯：选用新鲜、无病虫害的马铃薯块茎。
2. 试剂：MS培养基、活性炭、琼脂、蔗糖、氮源、磷源、微量元素、植物激素等。
3. 仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、培养皿、剪刀、镊子等。
四、实验步骤1. 马铃薯块茎表面消毒：用75%乙醇对马铃薯块茎进行消毒，然后用无菌水冲洗3次。
2. 块茎切块：将消毒后的马铃薯块茎切成1cm×1cm的小块，去除芽眼。
3. 外植体表面消毒：用75%乙醇对切块的马铃薯进行消毒，然后用无菌水冲洗3次。
4. 培养基制备：配制MS培养基，加入适量的活性炭、蔗糖、氮源、磷源、微量元素和植物激素。
5. 培养基灭菌：将配制好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中，121℃灭菌20分钟。
6. 培养基冷却：待培养基冷却至50℃左右，加入琼脂，搅拌均匀。
7. 培养基倒平板：将冷却后的培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌镊子将外植体接种于培养基表面。
8. 培养条件：将接种好的培养皿放入培养箱中，保持25℃、光照强度为2000lx、光照时间12小时。
9. 观察记录：每隔一定时间观察马铃薯细胞培养的生长情况，记录细胞分裂、分化、生根、发芽等过程。
五、实验结果与分析1. 马铃薯细胞培养初期，外植体表面出现少量愈伤组织，细胞分裂旺盛。
2. 经过一段时间培养，愈伤组织逐渐增多，细胞分裂速度加快，形成愈伤组织块。
3. 随着培养时间的延长，愈伤组织块逐渐分化出芽和根。
4. 芽分化过程中，细胞分裂速度减慢，芽长出叶和茎。
5. 根分化过程中，细胞分裂速度加快，根逐渐伸长。
y第十二章1马铃薯的组织培养
★ 培养条件：21～25℃、2000～3000lx、12h/d。
★ 生长情况: 2～3周愈伤，4-5周绿点，3～6月长
成2～3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。
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（2）继代和生根
★ 培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒）鉴定后（检 测:1次/3月，4次/年）鉴定后，采用固体、液体培养基相结合 方法扩繁。 ★ 取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体培养基上培养， 长成5～10cm高，继续切段繁殖，每月可繁殖5～8倍；试管苗 也可采用浅层静止液体培养。
第十二章
(1)
马铃薯的组织培养
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本章内容提要与要求:
★ 掌握马铃薯的生物学习性 ★ 掌握马铃薯脱毒培养的大致过程 ★ 了解马铃薯脱毒苗的鉴定方法 ★ 熟悉微型薯的生产过程
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ห้องสมุดไป่ตู้
一、马铃薯生物学特性
1、形态特性
(1) 根：根系由出生根和匍匐根两部分组成。 (2) 茎：地上部分茎和地下茎，地下茎分匍匐茎和块茎。 (3) 叶：初生叶，全缘，心形；后期叶奇数、羽状全裂单叶 (4) 花：单生，为聚伞花序 (5) 果实：为球形或椭圆形浆果。 (6) 种子：小，扁平肾形；可用来繁殖，但后代性状分离大。
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1.马铃薯脱毒技术市场前景:
★ 我国单产为13.60吨/公顷，是世界单产的1/4。最主要因素
是种薯差，品种布局不合理。
★ 全国现有播种面积300多万公顷，且有逐步增加趋势，年
需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿公斤，脱毒小薯或微型薯 45亿粒。因此，脱毒马铃薯推广具有广阔的市场前景。
1、指示植物鉴定
在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法， Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接 种。
马铃薯组织培养简化脱毒技术
马铃薯组织培养简化脱毒技术
马铃薯是我国重要的蔬菜作物之一，具有高蛋白、高淀粉、高营养价值，是人们必不
可少的食品之一。
然而，在种植和生产过程中，马铃薯会遭受各种病害和虫害的侵害，如
果不进行科学有效的防治，将会严重影响马铃薯的生产和收成。
其中，病毒病是马铃薯种
植中主要的一种病害，如果不及时控制，将对马铃薯产生较大的危害。
为了解决这个问题，科学家们开发了一种名为“组织培养简化脱毒技术”的方法，该
技术可以有效地使马铃薯保持无病毒状态，同时提高其种植质量和产量。
组织培养简化脱毒技术是一种采用组织培养和简化脱毒技术相结合的马铃薯繁殖方法。
该方法要先从健康的母株中取出组织，再将其在营养剂和生长抑制剂的作用下进行培养，
使其形成小植株，再进行脱毒处理，最后将其移栽到田间进行种植，达到规模化繁殖的目的。
这种技术的主要优点在于其快速、高效、节约的特点。
与传统的马铃薯种植方法相比，组织培养简化脱毒技术可以迅速获得种植质量稳定、无病毒、高产的马铃薯，并且可以大
大降低种植成本。
但是，组织培养简化脱毒技术也具有一定的局限性。
首先，它需要高水平的技术人员
操作，普通农民应用难度较大；其次，它的操作过程需要比较严格的环境和设备控制，对
研究条件提出了较高的要求；再者，该技术的成功率也与所选用的材料有关，在选材上也
需要有比较严格的要求。
总之，组织培养简化脱毒技术是一种非常有效的马铃薯繁殖方法。
它可以为农民提供
更为优质的马铃薯种苗，并且可以大大提高马铃薯的种植效益，但是该技术在操作和选材
上都存在一定的难度，需要科学家们进一步研究和优化。
马铃薯组织培养脱毒快繁
马铃薯组织培养脱毒快繁植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
由于培养物是脱离植物母体，在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离体培养。
在有些情况下，再分化也可不经愈伤组织阶段，而直接发生于脱分化的细胞。
[1]植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分，在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物，脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。
脱毒及离体快繁，这是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。
主要是进行茎尖培养脱除病毒。
对于脱毒苗、新育成、新引进、稀缺良种、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可通过离体快速繁殖，同时可不受地区和气候的影响，比传统的繁殖方法快数万倍。
植物组织培养已发展成为一门富有生命力的学科。
[2]植物组织技术在农业上的应用有很多方面，其中植物脱毒和离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一个领域。
通过植物生物技术改良作物是以后农业科学领域最重要的发展之一。
首先用茎尖脱毒获得无病毒植株成功的是法国人莫勒尔,他们用大丽花为原料,在1952 年试验产生了无病毒植株。
在1955 年以马铃薯为材料产生了无病毒植株。
农业生产中，许多农作物都带有病毒，无性繁殖方式植物如马铃薯、甘薯、大蒜等尤为严重，但是感病植株并非每个部位都带有病毒。
[3]一、国内外研究动态（一）研究背景栽培种的马铃薯(Solanurn tuberosurn)是双子叶种子植物, 属茄科(Solanceae)茄属(Solanum)的一年生草本植物,生产上绝大多数是利用块茎进行无性繁殖。
[4]马铃薯用块茎繁殖，植株长势逐年削弱、矮化，分枝变小，结薯变小，产量逐年下降，甚至绝产，这种现象叫做种性退化。
马铃薯茎尖组织培养脱毒技术要点
灵、 绿亨一号等杀菌剂及时 涂抹防治 ， 阻止病菌 浸入危害 。将 去掉的老叶清出棚外深埋 ， 防止病菌的传染 。 ２ 采 用吊秧栽培 管理 吊秧是调节长势 、增加 生长空间 、 ． ３ 合理利用光能 、 增产增效 的一 种新 的栽培措施 。在吊秧栽培中 应注意 以下 几点 ： 吊绳 要选择抗老化 的聚乙烯高 密度塑料线 ； 铁丝架设高 度控 制在距离棚膜 ３ｃ ０ｍ左右 ， 如果架设过矮会 影 响棚室空 间利用率 ；吊绳 的方法是下端用 一活扣固定在植株 上或用死扣 系在 叶柄上 ，上端 用活扣 系在 铁丝上并应 多余一 部分 ， 以便后期落秧时随 秧一起下落 ； 吊绳调节瓜秧 的长 利用 势 。如果瓜秧长势过 旺或出现徒长 ， 要将 生长 点向下弯 曲 ， 如 果 瓜秧 长势较弱 ， 要把生长点夹在吊绳缝中让 其直立 生长 。通 过 吊秧 ，还可以控制 瓜秧的生长 点由南到北成为一 稍微倾斜 的斜线 ， 达到北高南低 ， 以使受光均匀 ， 产量一致 。
技 术版 块
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１法 国 冬 玉 西 葫 芦 的 经 济效 益 ．
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冬玉西葫芦 是从法国 引进 的极 耐寒越冬 １光 温室栽培 的 ９ 优 良品 种 ，并在 公主 岭 大 岭 乡温 室 试 种成 功 。每 栋 温 室 （０ ｍ２平均产西葫芦 ２ ０ｋ ， ６０ ） ５ ０ ｇ 在市 场上平均批 发价是 ０ ． ９元 ／ｇ每栋温室收入 ９０ 元 。 ｋ， ００ 每栋温室年产值 ６ 万元 ， 扣除每栋 费用 １ ． ５万元 ， 每栋年纯收入 ４５ ．万元 。
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马铃薯脱毒种苗组织培养技术要点班级：园艺112 姓名：马寅学号：201101070202摘要：各种病毒、真菌、细菌等对马铃薯的侵染是导致我国马铃薯单产较低的主要原因，马铃薯脱毒种苗有巨大应用前景。
本文综合介绍了茎尖培养脱毒法组织培养的各技术要点，收集前沿技术信息。
论述了马铃薯脱毒种苗组织培养过程中以及移栽处理。
关键词：马铃薯脱毒种苗组织培养移栽1、马铃薯产业现状及危害其生产的主要因素栽培种的马铃薯(SolanumtuberosumL．，2n=48)是双子叶种子植物．属茄科(Solanaceae)茄属(Solanum)一年生喜凉草本植物【l】。
又名洋芋、土豆，原产南美洲，在我国已有300多年的栽培历史。
马铃薯生育期短，产量高，营养丰富，是典型的粮菜两用型作物，是我国四大栽培作物之一。
【2】世界马铃薯面积分布的最大特点是以欧、亚两洲种植为主，两者种植面积占世界马铃薯总面积的78％，其中中国、俄罗斯、乌克兰、印度四大生产国占世界种植面积的1／2 。
而马铃薯的发源地南美洲种植面积只占世界马铃薯总面积的5％。
除整个美洲大陆保持相对稳定外，欧洲的种植面积在持续减少，而亚洲、非洲的种植面积在不断增加。
马铃薯在生产上绝大多数是利用块茎进行无性繁殖。
国际马铃薯中心(CIP)和国际食品政策中心(IFPRI)合作研究表明，到2020年为止，全世界对马铃薯的需求将有望增长40％。
超过水稻、小麦和玉米的增长。
特别是亚洲和非洲对马铃薯的需求将增长更快。
[1]2、马铃薯组织培养的理论体系及研究现状2.1组织培养及马铃薯组织培养的发展史19世纪30年代，德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活；1902年，德国植物学家哈伯兰特细胞全能性的理论是植物组培的理论基础。
1958年，一个振奋人心的消息从美国传向世界各地，美国植物学家斯蒂瓦特等人，用胡萝卜韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整植株，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。
植物组培的简单过程如下：剪接植物器官或组织——经过脱分化（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过再分化形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。
1955年法国人莫勒尔和他的同事们以马铃薯茎尖为外植体成功地产生无病毒植株，以马铃薯茎尖为外植体成功地产生无病毒植株，20世纪60年代以后由于组织培养技术日趋成熟和完善，世界各地的植物组织培养研究和产业化应用进入迅速发展阶段，几乎所有的马铃薯生产国都使用这项技术进行脱毒快繁，并部分地进行育种研究。
2.2脱毒种苗马铃薯系无性繁殖作物，在生长期间容易受病毒侵染造成退化。
一旦感染病毒，无有效药治，病毒在薯块内的积累是导致马铃薯品质、产量下降的主要原因。
为了解决这一问题，我国于20世纪70 年代初引进了马铃薯茎尖脱毒技术，1976年于内蒙古建立了第 1 个马铃薯脱毒原种场，80 年代逐渐普及到各省、市、自治区。
目前，马铃薯脱病毒的方法主要有 5 种: 茎尖培养脱毒法、热处理脱毒法、热处理结合茎尖培养脱毒法、化学处理脱毒法、愈伤组织培养脱毒法，其中应用最广泛的是茎尖培养脱毒法及其与热处理法相结合的方法。
脱毒种苗可以显著减少马铃薯生长期间的病虫害，进而提高马铃薯产量和品质。
[4]相关实验及研究已表明，马铃薯脱毒试管苗生长较其他植物组培容易，是组织培养中的模式植物。
2.3微型种薯马铃薯试管薯是指在培养瓶内通过诱导，于试管苗叶腋间形成的直径为2 ～10 mm 大小的块茎。
微型薯良种繁育体系减少了种薯繁殖周期和有关环节，能够有效保证质量，提高生产水平，加快推广，减少用种量。
目前，美国、荷兰等许多国家都在应用微型种薯繁育体系，有的国家已实行了法制化的良种繁育制度。
我国在微型种薯方面的研究也取得了一定进展，毛碧增等成功建立了东农303 的高效脱毒微型薯诱导及繁育体系；刘华等用B9结合光照处理诱导试管薯，结果发现所有的黑暗处理都比光周期处理的结薯率高。
[3]将脱毒苗定植在网棚，或原原种大田，生产原原种，或定植在温室或网室内诱导脱毒微型薯形成。
目前微型薯生产主要采取两种方式：一是试管诱导培养生产微型薯；二是培养试管苗，然后通过扦插繁殖，并移栽于无土介质中生产微型薯。
[4]2.4茎尖培养脱毒法及其与热处理法马铃薯在栽培过程中，植株逐年变小．叶片皱缩卷曲，叶色浓淡不均，茎杆矮小细弱，块茎变形龟裂，产量逐年下降，这些都表明马铃薯已经发生退化。
种薯退化是弓1起产量降低和商品性状变差的主要原因聊。
据此，科学家从植物生理学、生物化学、栽培技术、栽培环境、种薯贮藏条件、病虫害侵染等方面对马铃薯“退化”进行了深入的研究。
研究表明：各种病毒、真菌、细菌等对马铃薯的侵染是导致我国马铃薯单产较低的主要原因。
目前，已知的马铃薯侵染病毒约有30种，由于马铃薯育种体系尚不健全，农民自留种现象普遍致使病毒感染面积占到栽培总面积的80％以上。
在我国广大马铃薯产区，危害马铃薯的5种主要病毒为马铃薯x病毒(PVX)、马铃薯A病毒和Y病毒(PVA，PVY)、马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯卷叶病毒(PLILV)，以及马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVD)。
其中PVY、PLRV是危害最为严重的2类病毒。
[5] 3、马铃薯茎尖脱毒技术的操作规程3.1材料的选择实践证明，同一个品种个体之间在产量上或病毒感染程度上都有很大的差异。
进行茎尖分生组织培养之前．应于生育期对准备进行脱毒复壮的马铃薯品种或材料，进行田间株选和薯块选择，选择具有该品种典型特性、生长健壮的单株(或无性系)，结合产量情况，选择高产、大薯率高、无病斑的单株作为茎尖脱毒的基础材料，以提高脱毒效果。
由于马铃薯纺锤块茎类病毒病(PSTV)在目前用植物茎尖分生组织方法很难脱掉，在进行茎尖剥离脱毒前，应先对人选的块茎进行PSTV检测，淘汰带有PSTV的薯块。
[5][6]3.2材料处理为提高脱毒效果，脱毒材料在进行茎尖组织剥取前，应进行材料的热处理，以钝化病毒的活性，消除马铃薯卷叶病毒，提高脱毒效果。
把入选的马铃薯块茎进行打破休眠和催芽处理，当薯块顶芽生长至lcm后，转入光照培养箱内，以每天12h光照，照度3()()()lx，37℃的高温处理6—8周。
3.3取材和消毒剪取经过热处理后发芽块茎上2～3cm长的芽若干个．用软毛刷轻轻逐个刷洗后放于烧杯中，用纱布封口。
放于自来水下冲洗30min，然后在超净工作台进行严格消毒：先用75％的酒精浸15s，无菌水冲洗2次；再用0．1％的升汞浸泡8-10min(或用5％次氯酸钠浸泡5—20min)，无菌水冲洗5～8次，每次3～5min(用无菌水冲洗过程中要不断的晃动放置材料的容器，以保证漂洗更彻底)，冲洗完后放在灭过菌的培养瓶内待用。
3.4剥离茎尖和接种在超净T作台上，将消毒过的芽置于40x的解剖镜下，一手用一把眼科镊子将芽按住．一手用灭过菌的解剖针将叶片一层一层仔细剥掉，直至露出圆亮的生长点，用锋利的无菌解剖针小心切取0．3mm以下的带l，2个叶原基的茎尖．随即将茎尖接种于已准备好的马铃薯茎尖培养基上，以切面接触琼脂。
要注意确保所切下的茎尖不能与已剥去部分、解剖镜台或持芽的镊子接触。
另外，在剥离过程中，必须注意使茎尖暴露的时间越短越好，因为超净台的气流和酒精灯发出的热都会使茎尖迅速变干。
所以在选择解剖镜的灯源时，尽量以冷光灯为好．同时在材料下垫一张灭过菌的湿滤纸保湿，每剥一个茎尖后．换一张无菌湿滤纸。
由于块摹萌发的芽的数量有限。
加上剥离过程中难免损伤到茎尖，导致可剥离的茎尖最少、成苗的机率小．易造成优良品种和材料的丢失。
[7]经过多年的实践，我们总结出一种行之有效的方法：取经严格消毒过的块茎芽(1cm长)接种在不含任何激素的马铃薯快繁培养基上，于25cc每天光照12h 的培养室培养，3～4周后．待芽长成含4、5片叶子的小苗时，剪切成单节段，转接于同样的无激素MS培养基上，培养成苗。
同样方法扩繁l-2个周期，等苗达一定数量后，再直接用这些苗来剥离茎尖，既能保证材料不丢失，又能增加茎尖的数量，从而能增加成活的机率。
4、茎尖培养与病毒检测4.1培养基选择合适的培养基是茎尖培养成功与否的关键，根据我们的经验，以Ms+GA2mg/L+BA0．5mg/L+NAA0．05+肌醇100mg/L+D-泛酸钙0．2mg/L+食用白糖3％+琼脂0．6％，pH5．8，为比较好的培养基组合。
4.2培养茎尖培养对培养器皿无特殊要求，一般以150ml三角瓶或250ml罐头瓶，每瓶装40ml培养基，为节约培养基，每瓶接种2—3个茎尖，均匀分布于培养基表面。
接种好的茎尖放在培养室内培养，温度18-25℃，光照2 000～3 000lx，每天光照12h。
培养2周后，培养瓶内的茎尖生长点便明显变大变绿，30—40d即看到明显伸长的小茎，叶原基形成可见的小叶，这时可转入无激素的Ms培养基中。
小苗继续生长，并形成根系，4～5个月后即可发育成3—4个叶片的小植株，将其按单节切段，进行扩繁，成苗后，用于病毒检测。
采用离体培养方法，研究了不同浓度多效处理对马铃薯试管苗生长和块茎形成的影响。
结果表明，在试管薯诱导条件下，0．1 mg／L多效唑处理促进了‘夏波蒂’提早结薯，使单瓶试管薯鲜重、平均直径和单薯鲜重都显著增加，同时降低了畸形薯率；而单瓶试管薯的结薯数量低于BA+CCC处理，但接近对照。
这些结果表明：与广泛应用的矮壮素相比，在马铃薯试管薯生产中使用多效唑能提高试管薯产量和质量，且其使用浓度仅为矮壮素的1／5000，有利于降低残留并节约成本，是矮壮素较好的替代物之一。
[6]适宜的环境条件同样重要。
培养室必须清洁、无菌。
马铃薯脱毒试管苗在2 000 LX的光照下，每天照16 h。
试管苗生长最适宜的温度是白天25-27℃，夜间16-2O℃，一定的昼夜温差有利于试管苗壮苗，培养室的相对湿度为7O-8O ，湿度过高过低都不利于试管苗的健壮生长。
在阴雨的夏天，要除湿，使湿度降到5O 下，防止真菌，细菌污染。
4.3病毒检测由茎尖分生组织培养获得的小苗，经第一次扩繁后要对其进行严格的病毒检测，以确定材料的脱毒情况。
一般采用指示植物鉴定法、电镜检测法或抗血清鉴定法，经病毒检测后，确认是不带病毒的株系，才能进一步利用，对继续带病毒的株系应淘汰或进行再次脱毒。
5、主要存在问题目前这种离体无性繁殖方法也还存在一些问题，严重制约着马铃薯脱毒推广技术的进一步扩大遗传上的不稳定性。
例如：组织培养条件再生植株器官形成时，可能有许多愈伤组织参与，而这些细胞的遗传成分有的是变异的，有的是小变异的。
而通过一个植物器管或一个节段直接长出芽用在具有遗传嵌合性的品种上时，会产生一个严重的问题：不定芽的形成会招致嵌合体裂解出现纯型植株风险。