苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液
（精选）保护酶活性测定方法一、过氧化物酶（pod）活性测定1、酶液的制备...
保护酶活性测定方法一、过氧化物酶（POD）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。
2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05 mol/L 愈创木酚溶液（2-甲基酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、过氧化物酶活性测定：（1）加入反应混合液2.9 ml磷酸缓冲液1 ml愈创木酚溶液（2-甲基酚）1 ml H2O20.1ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并加入2ml三氯乙酸溶液终止反应（3）过滤，适当稀释。
在470nm处测OD470。
5、结果计算：以每分钟内OD变化0.01为1个酶活力单位。
即酶活力=OD×D / 0.01t酶的比活力= OD×D /（0.01tw）其中：OD为反应时间内吸光度的变化W为材料鲜重t为反应时间D为稀释倍数。
即提取的总酶液为反应系统内酶的倍数二、多酚氧化酶（PPO）活性测定1、酶液的制备：称取样品3 g，加入预冷的0.05 mol/L pH7.8的磷酸缓冲液少量，用粗纱布过滤，定容至10ml，低温离心（12×104r/min,0~4℃）15min,取上清夜置于低温冰箱备用。
2、试剂：0.05 mol/L pH 5.5磷酸缓冲液0.05mol/L儿茶酚溶液（邻苯二酚）20%三氯乙酸溶液2%H2O23、仪器：分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸量管4、多酚氧化酶活性测定：（1）加入反应混合液3.9 ml磷酸缓冲液1 ml 儿茶酚溶液0.1 ml酶液（2）37℃水浴锅中保温15min,迅速转入冰浴，并立即加入2ml三氯乙酸溶液终止反应。
（3）过滤，适当稀释。
几种抗氧化酶的作用
一.超氧化物歧化酶(SOD):超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。
SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。
SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。
它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。
由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。
SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。
超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。
它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。
SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。
尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。
这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。
目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。
所谓的自由基就是当机体进行代谢时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。
自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推陈出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。
几种抗氧化酶的作用
一.超氧化物歧化酶(SOD):超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。
SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。
SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。
它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。
由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。
SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。
超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。
它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。
SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。
尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。
这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。
目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。
所谓的自由基就是当机体进行代谢时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。
自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推陈出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。
苯丙氨酸脱氨酶实验报告
一、实验目的1. 了解苯丙氨酸脱氨酶（Phenylalanine Dehydrogenase，简称PAH）的基本性质和作用。
2. 掌握苯丙氨酸脱氨酶活性的测定方法。
3. 通过实验验证不同条件下苯丙氨酸脱氨酶活性的变化。
二、实验原理苯丙氨酸脱氨酶是一种参与生物体内氨基酸代谢的酶，其活性对于许多生物学过程至关重要。
本实验采用邻苯二胺法测定苯丙氨酸脱氨酶活性。
该方法原理是：苯丙氨酸脱氨酶将苯丙氨酸脱氨后，产生苯丙酮酸，苯丙酮酸在反应中与邻苯二胺反应，生成深蓝色化合物。
该化合物的蓝色深浅与苯丙酮酸的浓度成正比，可以通过分光光度计测量吸光度来测定苯丙酮酸的生成速率，从而计算苯丙氨酸脱氨酶的活性。
三、实验材料1. 实验试剂：苯丙氨酸、邻苯二胺、氢氧化钠、三氯化铁、蒸馏水等。
2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 配制苯丙氨酸溶液：称取苯丙氨酸0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的苯丙氨酸溶液。
2. 配制邻苯二胺溶液：称取邻苯二胺0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1mg/ml的邻苯二胺溶液。
3. 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠0.5g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成5%的氢氧化钠溶液。
4. 三氯化铁溶液：称取三氯化铁0.1g，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成1%的三氯化铁溶液。
5. 样品处理：取适量样品，用蒸馏水溶解，定容至100ml，配制成一定浓度的样品溶液。
6. 实验步骤：a. 取试管一支，加入苯丙氨酸溶液2ml。
b. 加入样品溶液2ml。
c. 加入邻苯二胺溶液2ml。
d. 加入氢氧化钠溶液2ml。
e. 混匀，置于恒温水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
f. 取出试管，加入三氯化铁溶液1ml。
g. 混匀，用分光光度计在特定波长下测定吸光度。
h. 根据吸光度计算苯丙氨酸脱氨酶活性。
五、实验结果与分析1. 苯丙氨酸脱氨酶活性随温度升高而升高，在50℃时达到峰值，随后随温度升高而降低。
植物花青素合成代谢途径及其分子调控
植物花青素合成代谢途径及其分子调控一、本文概述植物花青素是一类广泛存在于自然界中的天然色素，它们以其丰富的色彩和独特的生物活性，在植物的生长、发育以及适应环境过程中发挥着重要作用。
花青素的合成代谢途径是一个复杂而精细的网络，涉及到多个酶的催化作用和各种调控机制的协同作用。
本文将对植物花青素合成代谢途径及其分子调控进行系统的阐述，旨在深入理解花青素生物合成的分子机制，挖掘其在植物生物学中的应用潜力，为植物遗传改良和农业生产提供理论依据。
本文将详细介绍植物花青素合成代谢途径的基本框架和关键步骤，包括前体物质的合成、花色苷合成酶系的催化作用以及最终产物的形成等。
通过对这些基本过程的分析，我们可以清晰地了解花青素如何从简单的无机物质逐步转化为复杂的有机色素。
本文将深入探讨花青素合成代谢途径中的分子调控机制。
这包括转录水平、翻译水平和翻译后水平等多个层次的调控，涉及多种转录因子、miRNA、激素信号转导通路以及蛋白质相互作用等。
通过对这些调控机制的研究，我们可以揭示花青素合成代谢途径的复杂性和灵活性，了解植物如何根据环境条件的变化调整花青素的合成量和种类。
本文将总结花青素合成代谢途径及其分子调控在植物生物学中的应用前景。
随着对花青素生物合成机制的深入理解，我们可以利用基因工程、代谢工程等现代生物技术手段，对植物进行遗传改良，提高花青素的含量和品质，进而开发出更具营养价值和观赏价值的植物新品种。
花青素作为一种天然色素和生物活性物质，在食品、医药和化妆品等领域也具有广阔的应用前景。
因此，对植物花青素合成代谢途径及其分子调控的研究具有重要的理论和实践意义。
二、植物花青素合成代谢途径植物花青素（Anthocyanins）是一类重要的次生代谢产物，广泛存在于各类植物的花、果实、叶片和茎干中，赋予植物丰富多彩的色泽。
这些色素不仅影响植物的观赏价值，而且在植物应对环境胁迫（如紫外线、低温、干旱等）和防御病虫害方面发挥重要作用。
植物生理指标
植物生理指标1、植物酶液提取：1)PVPP(固体,PVP单体与金属元素结合) 酚类吸附剂，酚的羟基与蛋白质的羰基形成氢键，醌导致蛋白质聚合。
或polyclarAT（Polyclar-AT is insoluble PVP, also called as PVPP (PolyVinyl PolyPyrrolidine).It binds phenols etc more efficiently than PVP and is easilyremovable by filtration or a low speed spin）去除酚的毒害防止醌颜色干扰。
PVP的肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固结合，防止酚与酶中肽键结合，保护了酶。
2)母液制备：0.1mol/L二硫苏糖醇DTT: 100mg至微量离心管，+650ul 水0.5mo/L EDTA : 93gEDTANa,10g NaOH,定容到500ml10mg/ml BSA：100mgBSA于9.5ml 水中2、可溶性总糖测定（蒽酮比色法）（1）原理：糖+硫酸—糠醛，其与蒽酮形成绿色络合物，620nm下显色。
本实验采用浓硫酸，倒入水中产生大量热，促进反应发生。
（2）标准曲线绘制：取略大于0.01g的葡萄糖，105度烘干至恒重，取0.01g 定容至100ml，配成100ug/ml的溶液。
取200mg蒽酮，溶于100ml 浓硫酸，冷却，保存于棕色瓶。
（注意：不需定容，量取100ml硫酸倒入烧杯即可，定容混匀时产气热溅出。
注意硫酸中是否存在杂质。
蒽酮非常敏感，不能用勺等挖取，只能直接倒，否则就会污染。
溶液配后呈亮黄色，放置620nm.实验结果：实际上并不理想，因abs均偏低，可试将标糖浓度适当升高。
葡萄糖含量ug 20 40 60 80 100abs 0.09 0.169 0.259 0.332 0.4273、电导率（DDS-11A）1)接通电源前观否指零，若有偏差调节表头下方凹孔，使其恰指零。
酶活性测定方法
体系一酶和蛋白质提取消过毒的打孔器进行伤口处理后，在每个伤口处添加50μL以下处理：（1）无菌水，对照；（2）浓度为1000μg/mlGA3；（3）浓度为1 ×104 spores/ml P. expansum孢子悬浮液；（4）浓度为1000μg/mlGA3+浓度为1 ×104 spores/ml P. expansum孢子悬浮液。
处理后湿纱布覆盖并用PE塑料膜密封作保湿处理。
贮藏于常温（20-25℃）下。
分别在0、12、24、36和48小时取样进行测定酶活性。
取样时沿伤口用刀小心切下1g果实组织，加入10 mL冷(4℃)的50 mmol/L磷酸缓冲液（PBS）内含1.33 mmol/L EDTA和1% PVPP缓冲液(pH 7.8)。
研钵加入少量液氮预冷后，在冰浴中碾磨，破碎组织，然后在冷冻离心机12000rpm离心15分钟。
取上清液供酶活性和蛋白质含量用。
蛋白质含量测定试验材料和试剂：牛血清白蛋白标准溶液：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL的原液。
8.1.2 蛋白试剂考马斯亮蓝G-250：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。
8.1.3 乙醇；磷酸（85％）。
试验方法：分别取牛血清白蛋白标准溶液（1000μg／mL）0,、10μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL，无菌水补至100μL，加入考马斯亮蓝G-250试剂5mL，作为标准溶液；分别取标准溶液和上清液（试验7中得到）400μL加到酶标板，以无菌水置零，测定OD595；酶活的测定9.1 试验材料和试剂9.1.1 氮蓝四唑；甲硫氨酸；核黄素；过氧化氢；愈创木酚；邻苯二酚。
9.1.2 Na2HPO4-12H2O；NaH2PO4-2H2O。
9.1.3 磷酸缓冲液PBS配制母液：0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水；0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水。
生物化学实习报告
生物化学实验报告生物化学综合实验摘要：本次实验包括苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定和大米粉中营养成分的测定两个实验。
关键词：苯丙氨酸解氨酶、Sephadex G—25层析、DEAE纤维素层析、活力、比活力、大米粉、凯式定氮法、索式提取法、3，5—二硝基水杨酸比色法。
实验一苯丙氨酸解氨酶的纯化及其活性测定一、实验目的1.学习掌握分离纯化生物大分子的方法；2.学习掌握酶活性的测定方法；3.了解在分离纯化过程中酶活性的变化；4.了解高速冷冻离心机及蛋白质检测仪的操作步骤。
二、实验原理苯丙氨酸解氨酶（L—phenylalanine: ammonia lyase,简称PAL；EC4.3.1.5）是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物生长发育和抵制病菌侵害过程中起重要作用。
PAL催化L—苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值。
规定1h 内增加0.01为PAL的一个活力单位。
酶的比活力是指样品中每毫克蛋白质所含的酶活力单位数。
在实验中将会看到随着PAL的逐步被纯化，其比活力也在逐步增加。
在蛋白质溶液中加入一定量的中性盐（如硫酸铵、硫酸钠等）使蛋白质沉淀析出称为盐析。
溶液的盐浓度通常以盐溶液的饱和度表示，饱和溶液称100%饱和度。
沉淀一种酶所需的具体浓度需要经实验确定。
Sephadex(交联葡萄糖凝胶)是有细菌葡聚糖长连，用交联剂1—氯2—，3—环氯丙烷交联而成。
凝胶商品名后面的G值表示每克干胶吸水量（毫升数）的10倍。
交联度大，网孔小；交联度小，网孔大。
交联度的大小还与凝胶颗粒的机械强度有关，交联度大，机械强度也大（硬胶），在柱层析中流速快。
根据需要，选用一定型号的的凝胶柱做柱层析介质（蛋白脱盐一般用G—25或G—50，G—100~G—200分离不同分子质量的蛋白组分）。
由于被分离物质的分子大小和形状不同，分子质量大的进入凝胶网孔中被阻滞，从而后流出层析住，达到分离的目的。
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苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液
简介：
苯丙氨酸解氨酶(L－phenylalanine ammonia-lyase ，PAL)是催化直接脱掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶。
该酶多存在于高等植物、酵母、菌类可溶性部分物质，是1961年J.Koukol 在大麦中发现的，推测其分子量约为30万，这是一个可把苯丙氨酸用于酚类化合物合成的酶。
在组织中的活性可随外界因素而发生显著变化，用光照、病伤害、植物激素处理等会使活性显著增加。
在多数情况下，在组织中活性增加时，酶发生失活作用，这时组织中具有活性酶的量很快就会减少，据认为这种失活是与类蛋白质物质作用有关。
Leagene 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的苯丙氨酸解氨酶。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、蒸馏水
2、离心管或试管
3、匀浆器或研钵
4、低温离心机
操作步骤(仅供参考)：
1、取植物组织清洗干净，切碎。
2、加入苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液，冰浴情况下充分捣碎或研磨。
3、离心，留取上清液。
4、冻存，用于苯丙氨酸解氨酶的检测或其他用途。
计算：
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：编号
名称CS0366
Storage 苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液
500ml 4℃避光使用说明书1份
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用苯丙氨酸解氨酶(PAL)提取液稀释样品后重新
测定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：
编号名称
CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)
DC0032Masson三色染色液
DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)
NR0001DEPC处理水(0.1%)
PS0013RIPA裂解液(强)
TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。