马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验
马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验结果：
1. 多酚氧化酶的催化作用（按表1加入各试剂）
加入各试剂后混匀
37℃保温8min
现象：1号试管变成深褐色，2、3号试管颜色无明显变化。
结论：有底物和酶同时存在的情况下才发生反应。
2. 多酚氧化酶的化学性质（按表2加入各试剂）
加入各试剂后混匀
37℃保温10min
现象：1号试管变成深褐色，2号试管颜色无明显变化。
结论：5%三氯乙酸很明显的降低了多酚氧化酶的活性，为抑制剂。
3. 底物的专一性（按表3加入各试剂）
加入各试剂后混匀
37℃保温9min
现象：1号试管变成深褐色，2号试管无明显变化。
结论：多酚氧化酶对邻二苯酚有专一性。
1 2 3 1 2
1 2 1 2
1 2 1 2 3
4.底物浓度的影响（按表4加入各试剂）
1 2 3 1 2 3
加入各试剂后混匀37℃保温1min
现象：三个试管颜色颜色发生不同程度加深。
1号试管颜色最浅，其次是2号，3号试管颜色最深。
结论：底物浓度的大小影响多酚氧化酶的催化速率，底物浓度越高，催化速率越快。
5.酶浓度的影响（按表5加入各试剂）
1 2 1 2
加入各试剂后混匀37℃保温2min
现象：1号试管褐色比2号试管深
结论：酶底物浓度的大小影响多酚氧化酶的催化速率，在一定范围内，酶浓度越大，催化速率越大
6.氢离子浓度的影响
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
加入各试剂后混匀37℃保温5min
注释：1、2、3、4、5号管的pH分别为1、3、5、7、9
现象：1、2、3号试管，颜色依次加深，4号试管颜色最深，5号试管次之。
结论：pH小于最适pH时，pH越大，酶活性越高；pH等于最适pH时活性最大；超过最适pH时，酶活性又开始降低。
此多酚氧化酶的最适pH在7.0左右。
生化实验报告
生化实验报告单位：学号：姓名：实验1.多酚氧化酶（PPO）的分离提取一、实验原理与目的氧化形成为醌，使组织形植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2成褐变，以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。
但是PPO的存在是水果、蔬菜褐变的主要原因之一，影响一些经济植物产品的质量。
多酚氧化酶活性高低也是马铃薯解除休眠的指标之一。
本实验将采用马铃薯为主要材料，通过细胞组织破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀、透析等步骤获得PPO的粗酶液。
通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握相关仪器设备的操作使用，以及蛋白质的提取、分离的系统技术。
二、实验材料与试剂1.材料：马铃薯（大约每小组100-200g）2.试剂：0.03M磷酸缓冲液pH6.（内含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5％甘油，1％的聚乙烯吡咯烷酮）配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液pH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2）配制时配×10倍浓缩液100ml；0.02M Tris-HCl缓冲液pH7.4（内含0.001M EDTA）配制时配×10倍浓缩液1000ml； NaCl；聚乙二醇： DEAE－纤维素 DE52；葡聚糖凝胶Sephadex G-200:三、实验步骤（1）粗酶提取：马铃薯丁按1:1（W/V）比例与0.03M磷酸缓冲液pH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001M EDTA，5％甘油，1％的聚乙烯吡咯烷酮）混合，匀浆后4层纱布过滤，滤液以6000rpm离心10min，弃除沉淀获得酶提取液。
（2）盐析分级沉淀：在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40％饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），然后6000rpm离心20min弃除沉淀；离心上清液再加入固体硫酸铵达到70％饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），再以6000rpm离心20min，弃除上清液，收集粗酶沉淀；沉淀用0.03M磷酸缓冲液pH6.0（内含0.02M 巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCl2）溶解，装入透析袋中用0.02M KCl溶液透析至无硫酸铵根离子，获得粗酶液供上柱使用。
多酚氧化酶活性的测定
三、实验材料、仪器与试剂 1.材料：马铃薯； 2.仪器：恒温水浴、分光光度计、试管等； 3.试剂： 0.5%邻苯二酚溶液、0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬 酸缓冲液（PH6.0）。
四、实验方法： 1.设计样品（自购）的不同贮藏条件，提前贮藏样品以进行测定。 2.酶液的制备：称取样品5.0g， 用预冷蒸馏水研磨匀浆，定容至 100ml，在18-20℃下浸提30分钟，中间摇动数次，过滤备用。 3.测定： （1）对照：在含有6mLpH6.0的0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓 冲液试管中加入1mL0.5%邻苯二酚溶液，在30℃恒温水浴中预 热后加入1mL灭酶后的酶液，2mL蒸馏水，以此调零。 （2）样品测定：在含有6mLpH6.0的0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬 酸缓冲液试管中加入1mL0.5%邻苯二酚溶液，在30℃恒温水浴 中预热后加入1mL酶液， 2mL蒸馏水，反应5分钟，加热灭酶 以终止反应，以5000r/min离心10分钟，取上清液备用。在 410nm下测定吸光度。
五、实验结果记录及分析： 以每分钟A410变化0.01为一个多酚氧化酶活性单位 （u）
A V 410 T 多酚氧化酶活性 [ u /g （ m ） in ] W V 0 . 01 t S
式中：A410：反应时间内吸光度的变化， W：样品鲜重g， t：反应时间min，本次实验为5min， VT：提取酶液总体积ml， Vs：测定时取用酶液体积ml。
实验五 多酚氧化酶活性的测定
Hale Waihona Puke 一、实验目的：通过实验掌握测定多酚氧化酶活性的方法及原理，理解 诸如：果实受伤、组织变褐的原因等。
二、原理与方法 多酚氧化酶（PPO）催化各种酚与O2氧化为醌。本实验 是采用邻苯二酚为底物，在0.2M磷酸氢二钠－0.1M柠檬酸缓 冲液PH6.0的反应体系中，PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌， 在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD 值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。
马铃薯多酚氧化酶实验报告
马铃薯多酚氧化酶实验报告实验目的本实验旨在探究马铃薯中的多酚氧化酶的活性，并通过实验步骤和结果分析的形式来了解多酚氧化酶的特性和功能。
实验材料和设备•马铃薯样本•绞肉机或搅拌器•磨砂碗和磨砂棒•pH计•试管•离心机•显微镜•多酚氧化酶底物•过氧化氢•水浴器•吸光度计实验步骤1.准备马铃薯样本。
将马铃薯去皮并切成小块。
2.使用绞肉机或搅拌器将马铃薯块搅拌成糊状。
3.将搅拌好的马铃薯糊转移到磨砂碗中。
4.使用磨砂棒在马铃薯糊中搅拌，以破碎细胞壁并释放多酚氧化酶。
5.将磨砂碗中的混合物转移到试管中，并进行pH调节。
6.使用pH计测量试管中的pH值。
将pH值调节至较为适宜多酚氧化酶活性的范围内。
7.向试管中加入多酚氧化酶底物。
8.向试管中加入适量的过氧化氢，以促进多酚氧化酶的反应。
9.将试管放置在水浴器中，并根据实验要求设定适当的温度和时间。
10.实验结束后，将试管放入离心机中进行离心。
11.取出离心后的试管，并使用显微镜观察试管中的沉淀物。
12.使用吸光度计测量试管中的吸光度，以确定反应的强度。
实验结果根据实验步骤和观察结果，可以得出以下结论：1.马铃薯中含有多酚氧化酶，并且经过适当的处理后，可以释放出较高活性的多酚氧化酶。
2.多酚氧化酶在适宜的pH值和温度条件下，能够有效催化底物的氧化反应。
3.多酚氧化酶催化的反应会产生一定的沉淀物，可通过显微镜观察到。
4.反应的强度可以通过吸光度计测量，吸光度值越高表示反应越强烈。
实验结论马铃薯中含有具有较高活性的多酚氧化酶，多酚氧化酶能够催化底物的氧化反应，并在合适的pH值和温度下表现出最佳活性。
实验结果显示，马铃薯多酚氧化酶的活性可以通过吸光度计测量，吸光度值越高表示反应越强烈。
通过这次实验，我们深入了解了马铃薯中的多酚氧化酶的特性和功能。
这对于进一步研究多酚氧化酶在食品加工、环境修复等领域的应用具有重要意义。
同时，实验中使用的步骤和方法也为后续类似的实验提供了参考。
生化大实验实验报告
一蛋白质提取、纯化及分析技术实验一多酚氧化酶（PPO）的分离提取一、材料与试剂（1）马铃薯（大约每小组200-300g）（2）试剂：0.03M磷酸缓冲液PH6.0(内含0.02m巯基乙醇，0.001m EDTA，5%甘油，1%的聚乙烯吡咯烷酮)配制时配×10倍的浓缩液1000ml；固体硫酸铵；0.03M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02m 巯基乙醇，0.001m EDTA，0.005m MgCL2）配置时配。
（3）实验器械与仪器设备：试管与试管架；烧杯、玻璃搅棒；移液管、滴管等；试剂瓶；透析袋；过滤纱布；植物组织匀浆器；PH计和PH试纸；GL-20C高速冷冻离心机；DL-7A大容量低速冷冻离心机二、操作步骤1：粗酶提取：马铃薯组织按1：1（W/V）比例与0.03m磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02M巯基乙醇，0.001m EDTA，5%甘油，1%聚乙烯吡咯烷酮）混合，匀浆4层后纱布过滤，滤液以6000rpm离心10min，弃除沉淀获得酶提取液。
2：盐析分级沉淀：在酶提取液中加入固体硫酸铵使其达到40%饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），然后6000rpm离心20min弃除沉淀；离心上清液在加入固体硫酸铵达到70%饱和度（边加边搅拌达到充分溶解），再以6000rpm离心20min，弃除上清夜，收集粗酶沉淀。
沉淀用0.03M磷酸缓冲液PH6.0（内含0.02巯基乙醇，0.001M EDTA，0.005M MgCL2）溶解，装入透析袋中用0.02N KCL溶液透析至无硫酸铵根离子，获得粗酶液供上柱使用。
三、实验结果获得PPO粗酶液供上柱使用。
实验二柱层析纯化PPO一、材料与试剂试剂：0.02M Tris-HCL缓冲液Ph7.4(内含0.001M EDTA)配制时配×10倍浓缩液1000ml;NaCL;聚已二醇；葡聚糖凝胶Sephadex G-200等；实验器械与仪器设备：试管与试管架、烧杯、玻璃搅棒、移液管、滴管等；试剂瓶、层析柱、pH计和pH试纸、恒流泵、梯度混合仪、核酸蛋白监测仪、GL-20C高速冷冻离心机、DL-7A大容量低速冷冻离心机二、操作步骤1．葡聚糖凝胶的处理、装柱及平衡（1）柱材处理称取一定量的Sephadex G-200干粉，加无离子水或蒸馏水浸泡溶胀48h,去掉悬浮的细微颗粒，为防止凝胶颗粒中的空气存在，影响层析效果，凝胶装柱前一定要将凝胶液中的气体除掉，其办法是将凝胶液放进抽滤瓶中，进行抽真空处理，直到凝胶液中没有气泡出现为止。
马铃薯多酚氧化酶实验报告
马铃薯多酚氧化酶实验报告引言多酚氧化酶是一种重要的酶类，在生物和食品科学中具有广泛的应用。
本实验旨在通过提取和测定马铃薯中的多酚氧化酶活性，了解其催化多酚氧化反应的能力及其在食品保存和生物研究领域的应用潜力。
实验材料与方法材料•马铃薯•磷酸缓冲液•酚酞溶液•过氧化氢溶液•乙酸溶液•乙醇方法1.马铃薯的制备–将新鲜马铃薯洗净，去皮，切成小块。
–将切好的马铃薯放入磷酸缓冲液中，浸泡30分钟，以去除马铃薯中的酚类物质。
–用纱布滤去马铃薯块，收集滤液。
2.多酚氧化酶的提取–将马铃薯滤液转移至离心管中，离心10分钟，收集上清液。
–将上清液与酚酞溶液混合，放置一段时间，观察颜色的变化。
3.多酚氧化酶活性的测定–准备一系列含有不同浓度的过氧化氢溶液。
–将多酚氧化酶提取液与过氧化氢溶液混合，反应一定时间。
–加入乙酸溶液终止反应。
–通过比色法测定溶液的吸光度，得到不同浓度下的吸光度值。
4.数据处理–根据浓度-吸光度曲线，计算出不同浓度下的多酚氧化酶活性。
结果与讨论通过实验，我们成功提取了马铃薯中的多酚氧化酶，并测定了其活性。
观察到酚酞溶液颜色的变化，可以初步判断多酚氧化酶的存在。
根据多酚氧化酶与过氧化氢的反应，我们测得不同浓度下的吸光度值，并通过比色法计算出多酚氧化酶的活性。
多酚氧化酶在食品保存和生物研究中有着重要的应用。
在食品保存中，多酚氧化酶能够催化食品中的多酚类物质氧化，减少食品腐败的可能性，延长食品的保质期。
在生物研究中，多酚氧化酶可用于测定生物样品中的多酚含量，评估抗氧化能力，并参与一系列生物代谢反应。
然而，本实验并未对多酚氧化酶的酶学性质进行深入研究，也未对其在食品保存和生物研究中的应用进行具体探讨。
进一步的研究可以包括多酚氧化酶的底物特异性、反应条件的优化以及其在不同食品和生物样品中的活性测定。
结论通过本实验，我们成功提取了马铃薯中的多酚氧化酶，并测定了其活性。
多酚氧化酶在食品保存和生物研究中具有广泛的应用潜力。
实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质
实验四多酚氧化酶的活性的测定及酶学性质标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]实验四、马铃薯块茎多酚氧化酶（PPO）活性测定及酶学性质一、实验目的1掌握分光光度法测定多酚氧化酶活性的一般原理及操作技术方法。
2了解酶的活性与植物组织褐变以及生理活动之间的关系。
二、实验原理马铃薯不耐储藏，在加工过程中去皮切分后非常容易发生酶促褐变，使外观品质和营养价值大为降低，制约着马铃薯的开发利用。
酶促褐变是马铃薯加工产业必须解决的难题。
其中多酚氧化酶是导致马铃薯等果蔬发生酶促褐变的重要酶类。
多酚氧化酶活性大小直接影响酶促褐变程度。
多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)又称酪氨酸酶、儿茶酚酶、酚酶等．是自然界中分布极广的一种含铜氧化酶．普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中。
植物受到机械损伤和病菌侵染后，PPO催化酚与O2氧化形成醌，使组织形成褐变．以便损伤恢复，防止或减少感染，提高抗病能力。
研究多酚氧化酶的特性对食品的加工与保藏工艺有非常重要的意义。
因此，检测食品中多酚氧化酶具有重要意义。
多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在一定的温度、pH条件下，有氧存在时，能使催化邻苯二酚氧化生成有色物质，单位时间内有色物质在410nm处的吸光度与酶活性强弱成正相关，在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化，通过OD值的变化确定PPO的酶活大小。
多酚氧化酶邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2O2——————→邻醌＋H2O三、试验材料、试剂及试验用品1．材料：马铃薯块茎。
2．仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；试管；移液管；容量瓶3．试剂：L 磷酸缓冲液（pH=）；L邻苯二酚；L磷酸氢二钠；L磷酸二氢钠；10mmol/L 柠檬酸；10mmol/L抗坏血酸；10mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA）；10mmol/L亚硫酸钠四、实验方法：1.多酚氧化酶的提取取马铃薯块茎样品，加入预冷的磷酸缓冲液（）3ml，研磨匀浆，转移到离心管中，再用7mL磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液，在４℃下离心（8000r/min）5min，取上清液为多酚氧化酶提取液，并量取粗酶液体积。
马铃薯多酚氧化酶实验报告
马铃薯多酚氧化酶实验报告马铃薯多酚氧化酶实验报告引言：马铃薯是世界上最重要的粮食作物之一，也是人们饮食中不可或缺的主要食物之一。
马铃薯中含有丰富的多酚类化合物，其中的多酚氧化酶是一种重要的酶类。
本实验旨在研究马铃薯中多酚氧化酶的活性及其影响因素。
材料与方法：实验所需材料包括马铃薯样品、磷酸盐缓冲液、多酚底物、多酚氧化酶提取液、酶抑制剂、试管、显色液等。
首先，将马铃薯样品切碎并加入磷酸盐缓冲液中，用搅拌器搅拌均匀。
然后，将混合液离心，取上清液作为多酚氧化酶提取液。
接下来，将提取液与多酚底物混合，并分别加入不同试管中。
在一定温度下，加入酶抑制剂的试管作为对照组。
最后，加入显色液，测定各试管中的吸光度。
结果与讨论：实验结果显示，马铃薯中的多酚氧化酶活性随着温度的升高而增加。
在较低的温度下，酶活性较低，但随着温度的升高，酶活性逐渐增加，达到一个最高点后开始下降。
这是因为在较低温度下，酶的活性受限，酶分子的振动较小，无法与底物有效结合。
随着温度的升高，酶分子的振动增大，使得酶与底物之间的亲和力增强，从而提高了酶的活性。
然而，当温度过高时，酶的结构可能发生变化，导致酶活性下降。
此外，实验还发现，多酚氧化酶的活性受pH值的影响。
在中性条件下，酶的活性最高，而在酸性或碱性条件下，酶的活性明显下降。
这是因为多酚氧化酶是一种酸性酶，在中性条件下，酶的结构最稳定，最有利于与底物结合。
而在酸性或碱性条件下，酶的结构可能发生变化，使得酶与底物的结合受到限制，从而降低了酶的活性。
此外，实验还研究了酶抑制剂对多酚氧化酶活性的影响。
实验结果显示，加入酶抑制剂后，多酚氧化酶的活性明显下降。
这是因为酶抑制剂可以与酶结合，从而阻止酶与底物的结合，抑制酶的活性。
这一结果表明，多酚氧化酶的活性受到酶抑制剂的调控。
结论：通过本实验的研究，我们得出了以下结论：马铃薯中的多酚氧化酶活性受到温度和pH值的影响。
温度的升高可以提高酶的活性，但过高的温度会导致酶的活性下降。
1 多酚氧化酶活性测定
一、实验目的： 掌握测定多酚氧化酶活性的方法；了解多酚氧化酶的特性 二、实验原理：
多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化 生成醌。醌有颜色，在525nm下有最大光吸收，通过分光光 度法测定反应体系颜色变化可测定酶活性。 三、器材与试剂 1、仪器：低温离心机、s22pc分光光度计 2、试剂：儿茶酚、pH 7.2磷酸缓冲液 3、材料：马铃薯
四、实验步骤： 1．称取马铃薯0.5克，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，少许 PVP，研磨匀浆，转移到离心管，再用2.5mL pH 7.2磷酸缓 冲液冲洗研钵，合并提取液。4℃ 4000rpm离心15分钟，上 清液即为粗酶液。 2．在试管中，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，1.5mL 儿茶酚 以及1mL 粗酶液，空白调零以1mL磷酸缓冲液代替粗酶液。 3．A值测定：加入粗酶液后迅速混匀，立刻于525nm下测定 反应体系的A值，每隔30秒记录一次，共记录5次。 4．计算酶活力。按下式计算 PPO活性＝U/min gFW A值增加0.01定义为一个酶活力单位。
称取马铃薯05克加入25mlph72磷酸缓冲液少许pvp研磨匀浆转移到离心管再用25mlph72磷酸缓冲液冲洗研钵合并提取液
植物生物学实验
实验一
多酚氧化酶（PPO）活性测定
末端氧化酶：处于生物氧化一系列反应的最末端， 把电子传递给O2的酶。 1、细胞色素氧化酶 2、交替氧化酶 3、酚氧化酶: 分为单酚氧化酶和多酚氧化酶。 4、乙醇酸氧化酶 5、抗坏血酸氧化酶
五、实验报告： 计算所测材料的PPO活性。选择A值变化均匀的三组数 值求平均值。
实验五 多酚氧化酶的制备和性质研究
实验五多酚氧化酶的制备和性质研究一、目的⒈学习从组织细胞中制备酶的一般方法⒉学习多酚氧化酶的作用特性及影响多酚氧化酶作用的因素二、原理多氧化物酶是一种含铜的酶，广泛存在于各种组织如鲜蘑菇、土豆和水果中。
土豆、水果去皮后表面变成褐色就是由于该酶作用的结果。
由多酚氧化酶催化的反应（以邻苯二酚为例）可用下式表示：多酚氧化酶作用的最适pH为6～7，最适底物是邻苯二酚（儿茶酚）；间苯二酚和对苯二酚与邻苯二酚的结构相似，他们也可被氧化为相应的醌类化合物。
因此，由多酚氧化酶催化的氧化还原反应可通过溶液颜色的变化鉴定。
细胞环境中的各种因素直接影响酶的催化活性，因为酶是生物催化剂。
要研究某一种因素对于酶催化反应的影响时，仅在被研究的因素呈变化的情况下，测定它对于反应速度的影响，而其他的实验条件应保持一致。
三、材料1）土豆2）高速组织捣碎机3）烧杯（100mL）4）平纹布或纱布5）试管及试管架6）恒温水浴7）小刀8）移液管（2mL、5mL、10mL）四、试剂⑴0.1mol/L的氟化钠（NaF）溶液：把4.2gNaF溶于1000mL水中。
⑵0.01mol/L的邻苯二酚溶液：将1.1g邻苯二酚溶解于1000mL水中，用1％的氢氧化钠调节溶液的pH为6.0 。
新鲜配制，并储存于棕色瓶中。
⑶柠檬酸缓冲液（0.05mol/L,Ph4.8）⑷5%的三氯乙酸溶液⑸苯硫脲（结晶）⑹0.01mol/L的间苯二酚溶液⑺0.01mol/L的对苯二酚溶液⑻饱和硫酸铵溶液⑼0.96％的盐酸：把9.6mL浓盐酸加水稀释至1L⑽0.1%的乳酸溶液（100mL水中含有0.1mL的乳酸）⑾0.5％的碳酸钠溶液⑿0.01％的碳酸钠溶液五、操作步骤⒈多酚氧化酶的制备⑴拿一块土豆，洗去上面的泥土⑵把土豆削皮后切成小块⑶称取100g小块土豆，立即加入氟化钠溶液100mL，放入组织捣碎机中研磨30s，（此步最好6个同学一起做，上述用量乘6）⑷把匀浆物通过几层纱布过滤⑸取50mL滤液（注：滤液应无色，若为红色应重新匀浆提取），加入等体积的饱和硫酸铵溶液，混合后于4℃放置30min，可见有白色沉淀产生。
多酚氧化酶的配置与性质研究
0.2mol.L-1
二：多酚氧化酶的制备 1.取50g去皮切丁的土豆与60ml丙酮混合， 粉碎，抽滤滤渣，用-20℃的丙酮酸冲洗至白 色，室温下晾干。2.取5g土豆干粉与40ml粗 酶提取液混合。搅拌、离心与1500r/min的离 心机上，静置，取上清液。3.加入等体积的 饱和（NH4）2SO4溶解离心、静置、取沉淀 物。4.加入磷酸缓冲液（ＰＨ＝６．０） 15ml溶解，再次离心精置，取上清液，即为 多酚氧化酶。
二：ｐｈ对多酚氧化酶的影响 配置磷酸缓冲液ＰＨ＝５．８、６．０、６．４、 ６．５、６．６、７．０、７．５一系列不同Ｐ Ｈ值的缓冲液，先将１ｍｌ０．２ｍｏｌ／Ｌ的 领苯二酚溶液加入１ｃｍ的玻璃比色皿中，在将 ２ｍｌ粗酶液与４ｍｌ０．２ｍｏｌ／Ｌ不同ｐ ｈ值的磷酸缓冲液混合。然后取出１．５ｍｌ迅 速加入到已加了的邻苯二酚比色皿中，在室温下， 于４２０ｎｍ处测定ＯＤ值，蒸馏水作为空白对 照，加入酶夜后开始计时，记录ＯＤ值的时间间 隔为30″，以最初直线的斜率（△ＯＤ／△ｔ）计 算酶活力。每分钟引起吸光度改变０．００１所 需的酶量为一个酶活力单位。即可得到最适ｐｈ 值。以OD值为纵坐标，以不同PH值为横坐标， 在坐标纸上绘制标准曲线。
多酚氧化酶的配置与性质研究
小组成员：张海兵（1002011012） 李 杰(1002011011) 黄平飞（1002011034 ） 徐２０型）、高 速离心机 • 43gＮａ２ＨＰＯ４．２Ｈ２Ｏ，16gＮａＨ ２ＰＯ４ ．２Ｈ２Ｏ，50g土豆，0.22g领 苯二酚。 邻苯二酚溶液的配置 将0.22g领苯二酚溶于10ml水溶液中，即可得 到0.2mol.L-1的领苯二酚溶液。
试剂的配置
缓冲液的配置：Ｎａ２ＨＰＯ４．２Ｈ２Ｏ相对分子质量＝１７８，0.2mol.L-1溶液为８５．６１ ｇ．Ｌ－１；ＮａＨ２ＰＯ４ ．２Ｈ２Ｏ相对分子质量＝１５６， 0.2mol.L-1溶液为３１．２１ｇ．Ｌ－.