复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑的含量测定
实验六__双波长分光光度法测定 (1)
三、磺胺甲噁唑的测定 精密量取供试品溶液与对照 品溶液(1)，(2)各2mL，分别置 于100mL量瓶中，各加0.4％氧 化钠溶液稀释至刻度，摇匀。
取对照品溶液(2)的稀释液，以 257nm为测定波长（λ2），在304nm波长 附近(每间隔0.5nm)选择等吸收点波长为 参比波长(λ1)，要求ΔA＝Aλ2－Aλ1＝0。
Ax C x As C s Ax Cx Cs As
每片中含SMZ的毫克数
Ax Cs 100 W As W称 1000
m SMZ
Cs = 0.505mg/ml
W称=0.06960g
W=552.64mg
由于参比波长对测定影响较大， 故采用对照品溶液来确定。此波长 可因仪器不同而异，测定时应仔细 选择。
三、实验内容 1、供试品溶液的制备（教师准备） 取本品10片，精密称定，研细，精密 称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg 与甲氧苄啶10mg)，置于100mL量瓶 中，加乙醇适量，振摇15分钟使磺胺 甲噁唑与氧苄啶溶解，加乙醇至刻度， 摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶 液。
二、对照品溶液的制备（教师准备） 精密称取在105℃干燥至恒重的磺 胺甲噁唑对照品50mg与甲氧苄啶对 照品10mg，分别置于100mL瓶中， 各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 分别作为对照品溶液、b两组分共 存时，若要消除a组分的干扰测定b组 分，可在a组分的吸收光谱上选择两 个吸收度相等的两波长λ1和λ2，测定 混合物的吸光度差值。然后根据ΔA 值计算b的含量。
磺胺甲噁唑（SMZ）在257nm波长 处有最大吸收；甲氧苄啶（TMP）在此 波长吸收最小并在304nm波长附近有一 等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定 波长（λ2），在304nm波长附近选择参 比波长（λ1）。
PPT-双波长分光光度法测定复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑的含量
3. 本法的主要误差来源何在？ 4. 在选择实验条件时，是否应考虑赋形剂等
辅料的影响？如何进行？ 5. 如果只测定磺胺甲恶唑，甲氧苄啶对照品
溶液的浓度是否需要准确配置？
E11c%m
10 M
o 物质在某一波长下的吸光系数 ，是物质对某一特定波长光吸
收能力的衡量；吸光系数越大 ，吸光能力越强，测定时灵敏 度越高。同一吸收物质在不同
。 波长下的E值是不同的
A是波长的函数，当LC=1 时，A＝E，可见吸光系数 也是波长的函数。
A AB 1
AA 1
AB 1
A 2
A 1
)lc
A
可见，在双波长分光光度法中吸光度的差值与干扰组
份B无关。
四 操作步骤
l 1）.对照品溶液的配制 精密称取105℃干燥至恒重的甲氧 苄啶对照品约10mg，用乙醇溶解并定容至100mL，精取 2.00mL置100mL量瓶中，用0.4%NaOH稀释至刻度，摇匀 。取在105℃干燥至恒重的磺胺甲恶唑对照品约50mg，精 密称定，同法配制溶液。
A 1
lc
A
B 1
lc
B
A AB 2
AA 2
AB 2
A 2
lc
A
B 2
lc
B
o 双波长分光光度法(双波长等吸收法)
当光谱重叠时，在其光谱中选择两波长，在选定的 波长处，干扰组分有相同的吸收；被测组分与干扰组 分的吸收有足够大的差别。则两波长处吸光度的差值 与被测组份的浓度成正比。
复方磺胺甲恶唑片
复方磺胺甲噁唑片【药品名称】通用名称：复方磺胺甲噁唑片英文名称：Compound Sulfamethoxazole T ablets【成份】本品每片中含磺胺甲噁唑（C10H11N3O3S）应为0.360-0.440g，含甲氧苄啶（C14H18N4O3）应为72.0-88.0mg【适应症】近年来由于许多临床常见病原菌对本品常呈现耐药，故治疗细菌感染需参考药敏结果，本品的主要适应症为敏感菌株所致的下列感染：1.大肠埃希杆菌、克雷伯菌属、肠...【用法用量】1.成人常用量治疗细菌性感染，一次甲氧苄啶160mg和磺胺甲唑800mg，每12小时服用1次。
治疗卡氏肺孢子虫肺炎一次甲氧苄啶3.75～5mg/kg，磺胺甲唑18.75～25mg/kg，每6小时服用1次。
成人预防用药：初予甲氧苄啶160mg和磺胺甲唑800mg，一日2次，继以相同剂量一日服1次，或一周服3次。
2.小儿常用量2月以下婴儿禁用。
治疗细菌感染，2个月以上体重40kg以下的婴幼儿按体重口服一次SMZ 20～30mg/kg 及TMP 4～6mg/kg，每12小时1次；体重≥40kg的小儿剂量同成人常用量。
治疗寄生虫感染如卡氏肺孢子虫肺炎，按体重一次口服SMZ 18.75～25mg/kg及TMP3.75～5mg/kg，每6小时1次。
慢性支气管炎急性发作的疗程至少10～14日；尿路感染的疗程7～10日；细菌性痢疾的疗程为5～7日；儿童急性中耳炎的疗程为10日；卡氏肺孢子虫肺炎的疗程为14～21日.【不良反应】1.过敏反应较为常见,可表现为药疹,严重者可发生渗出性多形红斑、剥脱性皮炎和大疱表皮松解萎缩性皮炎等；也有表现为光敏反应、药物热、关节及肌肉疼痛、发热等血清病样反应。
偶见过敏性休克。
2.中性粒细胞减少或缺乏症、血小板减少症及再生障碍性贫血。
患者可表现为咽痛、发热、苍白和出血倾向。
3.溶血性贫血及血红蛋白尿。
这在缺乏葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的患者应用磺胺药后易于发生,在新生儿和小儿中较成人为多见。
高效液相色谱法测定复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑和甲氧苄啶的含量_熊久林
续表1序号保留时间t /min化合物名称分子式分子量相对含量(%)79.3213-octadecenoic acid(Z)(Z)-13-十八碳烯酸C 18H 34O 228221.6289.73octadecan oic acid 十八烷酸C 18H 36O 228433.46910.6210,13-octadecadienoic acid 10,13-十八碳二烯酸C 18H 32O 22800.131010.7910-noadecen oic acid 10-十九烯酸C 19H 36O 22960.091111.26noadecanoic caid 十九烷酸C 19H 38O 22980.281212.7211-eicosenoic acid 11-二十碳烯酸C 20H 38O 2310 2.101313.23eicosanoic acid 二十碳烷酸C 20H 40O 2312 1.771417.42docosanoic acid 二十二碳烷酸C 22H 44O 23400.18由表1可以看出,从中药材木鳖子中共鉴定出14种脂肪酸,占脂肪酸总含量的89.23%,其中饱和脂肪酸7种,占总脂肪酸含量的47.32%不饱和脂肪酸7种,占脂肪酸总量的41.91%。
3 讨论木鳖子中不饱和脂肪酸以亚油酸(19.85%)、(Z)-13-十八(碳)烯酸(21.62%)、11-二十(碳)烯酸(2.10%)为主。
近年来的研究表明不饱和脂肪酸对人体有降低血脂、胆固醇和血压,抗血栓、抗动脉硬化,预防心血管疾病,增强记忆力,预防老年痴呆症,防癌等多种作用[3]。
木鳖子是一种常见的中药,对中药木鳖子的研究已较深入,但对其脂肪酸的研究还未见报道。
本实验方法具有简单、准确、脂肪酸检出率高等优点,其结果将对木鳖子的深层次的开发和应用提供科学依据。
参考文献:[1] 宋立人,洪 恂,丁绪亮,等.现代中药大辞典,上册[M ].北京:人民出版社:349-351.[2] S.R..Heller ,G.W.A.M iline.EPA/NIH M ass Spectral date[M ].U .S.Washington D.C.,1978:1-4.[3] 周永红.火麻仁油中脂肪酸的GC-M S 分析[J ].中国油脂,2004,29(3):72-72.收稿日期:2004-11-12; 修订日期:2005-02-12作者简介:熊久林(1956-),男(汉族),湖北黄梅人,现任湖北省黄石市药品检验所副主任药师,主要从事药品检验工作.高效液相色谱法测定复方磺胺甲唑片中磺胺甲唑和甲氧苄啶的含量熊久林,孙仲葆,黎 源,马锦星,运 委,张 晶(湖北省黄石市药品检验所 435000)摘要:目的:建立同时测定复方磺胺甲唑片中磺胺甲唑和甲氧苄啶含量的高效液相色谱法。
复方磺胺甲恶唑的含量测定
高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量［实验目的］1掌握高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片的含量的基本原理2掌握高效液相色谱仪的操作及注意事项［实验原理］结构特点：苯环（紫外吸收）、芳伯胺基（重氮化-偶合反应）、磺酰胺基上的活泼氢有一定酸性，可与碱成盐或与重金属离子反应。
分子式：C10H11N3O3S 分子质量：253.28。
本品为白色结晶性粉末。
熔点167℃，易溶于稀盐酸；氢氧化钠溶液或氨水，几乎不溶于水。
无臭，味微苦。
外标法是以待测组分的纯品作为对照品，以供试品中待测组分的峰面积或峰高进行定量分析，本实验采用峰面积进行定量。
分别精密量取一定量的对照品和供试品配制成溶液，分别进相同的体积的对照品溶液和供试品溶液，在完全相同的色谱条件下进行色谱分析，测定峰面积。
［实验仪器、试剂］仪器：75-4型紫外可见分光光度计 (上海分析仪器厂 )，高效液相色谱仪，色谱柱，超声波清洗仪，紫外吸收检测器，无油隔膜真空泵，抽滤装置，电子分析天枰，称量纸，研钵，容量瓶（100ml,50ml,25ml,10ml），漏斗，滤纸，烧杯，玻璃棒，移液枪试剂：复方磺胺甲噁唑片(山东新华制药股份有限公司 ,批号 0412073 )，甲氧苄啶，磺胺甲噁唑，甲醇（色谱纯）,水（超纯水），乙腈(色谱纯)，三乙胺 (色谱纯)，醋酸溶液（1→100），［实验步骤］1.色谱条件与系统适用性试验：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂流动相：水-乙腈-三乙胺（799∶200∶1）（用醋酸溶液（1→100）调节pH值至5.9±0.1）检测波长：254nm流速：1.0mL/min进样量：20ul理论塔板数：按甲氧苄啶计算应不低于2000，甲氧苄啶与磺胺甲噁唑峰之间的分离度应大于 5.0。
甲氧苄啶峰与磺胺甲噁唑峰的拖尾因子均不得过2.0。
2.测定法2-1溶液的配制2-1-1对照品储备液的配制：取磺胺甲噁唑200mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
二阶导数分光光度法测定复方磺胺甲恶唑片中磺胺甲恶唑的含量
2. 4 样品的测定 取复方磺胺甲卟恶唑片 10 片 ,精
密称定 。研细后 ,精密称取适量 ,以无水乙醇溶解 , 配成浓度约为 100 μg·ml - 1 的溶液 ,过滤 。取续滤 液 ,以无水乙醇制成浓度约为 20 μg·ml - 1 的溶液 。
以无水乙醇为空白 ,在 220～400 nm 波长处绘制二
Determination of sulfamethoxazole in compound sulfamethoxazole tablets by secondary derivative spectrophotometry
Dai Min ( Yijishan Hospital ,Wannan Medical College ,Wuhu 241001)
The test f or bacterial endotoxins of infatmuli injection
Zhong Fuqing ,Zhu J iangxiang ( The Second Hospital of Jianghua ,Jianghua 425500)
ABSTRACT OBJECTIVE: To inspect on t he feasibility of bacterial endotoxin test for infatmuli injection. METHODS : Inhibition and enhancement test & contrast test . RESUL TS : The test was not disturbed by t hese samples ,as was t he same as rabit test . CONCL U2 SIONS : Infatmuli injectio could be tested wit h t he tachypleus amebocyte lysate t hat sentivity was 0. 5 EU·ml - 1 . KEY WORDS infatmuli injection ,tachypleas amebocyte lysate ,bacterial endotoxin
实验六 双波长分光光度法测定
每片中含SMZ的毫克数
∆Ax Cs × ×100 ×W ∆As = W称 ×1000
mSMZ
Cs = 0.505mg/ml W称=0.06960g W=552.64mg
由于参比波长对测定影响较大， 故采用对照品溶液来确定。此波长 可因仪器不同而异，测定时应仔细 选择。
取对照品溶液(2)的稀释液，以 取对照品溶液(2)的稀释液，以 257nm为测定波长（λ ），在304nm波长 257nm为测定波长（λ2），在304nm波长 附近(每间隔0.5nm)选择等吸收点波长为 附近(每间隔0.5nm)选择等吸收点波长为 参比波长( 参比波长(λ1)，要求∆A＝Aλ2－Aλ1＝0。 要求∆
每片含SMZ： 每片含SMZ：360~440mg(Chp 2000)
二、基本原理 当吸收光谱重叠的a、b两组分共 存时，若要消除a组分的干扰测定b组 分，可在a组分的吸收光谱上选择两 个吸收度相等的两波长λ1和λ2，测定 混合物的吸光度差值。然后根据∆A 值计算b的含量。
磺胺甲噁唑（SMZ）在257nm波长 处有最大吸收；甲氧苄啶（TMP）在此 波长吸收最小并在304nm波长附近有一 等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定 波长（λ2），在304nm波长附近选择参 比波长（λ1）。
再在λ 再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品 溶液的稀释液与对照品溶液(1)稀释液 溶液的稀释液与对照品溶液(1)稀释液 的吸收度，求出各自的吸收度差值 (先检查仪器波长是否 准确。
五、思考题 1．双波长分光光度法测定复方制剂有 何优点? 2．应用双波长分光光度法应如何选择 测定波长和参比波长?
三、实验内容 1、供试品溶液的制备（教师准备） 取本品10片，精密称定，研细，精密 称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg 与甲氧苄啶10mg)，置于100mL量瓶 10mg) 100mL 中，加乙醇适量，振摇15分钟使磺胺 甲噁唑与氧苄啶溶解，加乙醇至刻度， 摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶 液。
复方磺胺甲恶唑片中间产品质量标准
依据：《复方磺胺甲噁唑片质量标准》，产品质量的稳定性考察。
内容：
1颗粒
1.1性状：本品为白色颗粒。
1.2检查
水分：应为1.0%～4.0%（快速水分测定法）。
1.3含量测定：本品每克中含磺胺甲噁唑（C10H11N3O3S）应为0.712～0.827g，含甲氧
苄啶（C14H18N4O3）应为140.4～167.3㎎。
2素片
2.1性状：本品为白色片。
2.2检查
2.2.1 重量差异：±4.5%。
2.2.2 崩解时限：不得过13分钟。
3分装
3.1 装量差异：50片/瓶，不允许有误差。
3.2 封口质量：封口处应严密。
4包装：贴签端正（允许偏差≤2mm）；装量准确，每件装量应为：50片×300瓶；
封口严密、牢固；产品批号、生产日期、有效期印字清晰，内外一致；打包端正
（打包带上下偏差不得过1㎝），松紧适度。
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验证性试验
实验十八复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲恶唑的含量测定
一、实验目的
1.掌握双波长法的基本原理。
2.掌握复方制剂不经分离直接测定各组分含量的方法。
3.熟悉紫外分光光度仪的使用。
二、仪器与试药
1.仪器
Mettler AL204电子天平 752型紫外－可见分光光度仪
研钵定量滤纸（直径10cm）胖肚移液管规格：25mL
容量瓶规格：25mL 、100mL 刻度移液管规格：10mL
2.试药
复方磺胺甲噁唑片规格：含磺胺甲噁唑（SMZ） 0.4g、甲氧苄啶（TMP） 0.08ｇ
95%乙醇氢氧化钠硫酸
三、实验原理
1.双波长分光光度法
（1）双波长分光光度法消除干扰吸收的基本原理
在干扰组分的吸收光谱上吸收系数相同的两个波长处，若被测组分的吸收系数有显著差异，则可用于消除干扰吸收，即直接测定混合物在此两波长处的吸收度之差值，该差值与被测物浓度成正比，而与干扰物浓度无关。
用数学式表达如下：ΔA（λ1λ2）=A a+b1-A a+b2=A a1-A a2+A b1-A b2
=ΔE.a C a.L+ΔE b.C b.L
若b为干扰物，所选波长λ1λ2处的E b相等，所以ΔE b=0
则ΔA混=ΔE a.C a.L与干扰物浓度无关。
（2）双波长法测定复方磺胺甲噁唑片中SMZ含量的原理
复方磺胺甲噁唑片是含磺胺甲基异噁唑（SMZ）及甲氧苄啶（TMP）的复方制剂。
在0.1mol/L 氢氧化钠液中，SMZ在257nm波长处有一最大吸收峰，TMP在257nm和304nm波长处为等吸收点，而SMZ在这两波长处的吸收度差异大，见下图。
所以测得样品在257nm和304nm波长处的吸收度差值ΔA与SMZ浓度成正比，与TMP浓度无关。
四、实验内容
1.工作曲线的制备
（1）标准贮备液的配制
分别精密称取磺胺甲基异噁唑对照品0.1g ，置100mL 容量瓶中，加入50m L 95%乙醇溶解后，以0.1mol/L 氢氧化钠液稀释至刻度，吸取10mL 置100mL 容量瓶中，以0.1mol/L 氢氧化钠液稀释至刻度，得标准贮备液（100μg /mL ）。
（2）SMZ 的标准曲线及回归方程制作
双波长法：取SMZ 标准贮备液（100μg/mL ）0，3，6，9，12，15mL 置100mL 容量瓶中，以0.1mol/L 氢氧化钠液稀释至刻度。
以0.1mol/L 氢氧化钠液为空白，257nm 为测定波长，304nm 为参比波长，测得这两个波长处的吸收度之差值（ΔA ），以ΔA 为纵坐标，以浓度C 为横坐标，作标准曲线，并用最小二乘法回归得回归方程。
参考标准方程： ΔA=6.467×10-12
C S +0.002（C ：ug/mL ）
r=0.999，线性范围0—15ug/mL
2.复方磺胺甲噁唑片中SMZ 的含量测定
双波长法： 取本品20片，精密称定，研细，精密称取粉末适量（约相当于0.02gSMZ ），置于100mL 容量瓶中，加入95%乙醇50mL ，振摇10分钟，溶解，以0.1mol/LNaOH 液稀释至刻度。
用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，精密量取5mL 续滤液于100mL 容量瓶中，以0.1mol/LNaOH 液稀释至刻度，即得。
测定在257nm 和304nm 波长处的吸收度差值，按工作曲线回归方程系数计算含量。
计算：SMZ 标示量百分含量的计算
参考回归方程：△A=0.06467C+0.002 ml ug C S S /10467.6002
.02-⨯-∆A =
%100)
()(102510100100250%)(6⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=g W g C g S 标示量称样量标示量平均片重
五、注意事项
测定时应注意，仪器的狭缝应小于1nm ，以保证单色光的纯度。
操作过程中用对照品溶液核对等吸收点波长，且仪器波长的重现性应符合要求。
六、思考题
1.当确定参比溶液时，干扰物如TMP 溶液是否需要精确配制？为什么？
2.在选择实验条件时，是否应考虑赋形剂等辅料的影响？如何进行？
七、参考文献
《药物分析》.杭太俊主编.人民卫生出版社.第七版。