waters色谱柱-XTerra色谱柱
Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择
Waters高效液相色谱柱简单介绍与选择2016-04-25 Bruce Lee生产高效液相色谱柱的厂家有很多，如Waters，Agilent，Phenomenex，Shimadzu，Thermo等，每家供应商又生产多个系列，导致市场上的液相色谱柱的可选择性极强。
目前实验室以及公司，企业使用最多的是Waters以及Agilent所生产的RP液相色谱柱。
Waters主要有Symmetry，Sunfire，XTerra，XBridge，XSelect，CORTECS以及Atlantis系列等，其详细分类以及键合相如下。
Figure 1 Waters Symmetry column familyFigure 2 Waters Sunfire column familySymmetry与Sunfire系列色谱柱使用高纯度硅胶（B型）作为固定相基质，摒除金属离子杂质对固定相Si-O键的促进水解作用，此外由于金属离子含量特别低，在对其表面键合选择性烃基或内嵌极性官能团烃基时，可通过配体添加量控制硅胶表面键合相的多少，因此其最大特点在于批次之间的重现性。
两个系列均采用封端技术，Sunfire C8与C18表面载碳量分别为12%和16%；SymmetryC8与C18载碳量均为12%，因此两个系列的C8色谱柱对于分析物的保留能力上没有本质的区别，而Sunfire C18色谱柱则相比Symmetry C18色谱柱，对于非极性比较大的分析物具有更强一些的保留能力，当然对于有机相的最低比例也相对比较高一些。
Symmetry C8 Prep与C18 Prep色谱柱的填料粒径为7 um，其设计用途为制备；Symmetry300 C18（孔径300埃，载碳量8.5%）与Symmetry300 C4（孔径300埃，载碳量2.8%）则是为生物大分子多肽以及蛋白质的分离，分析而设计。
Symmetry Shield RP 18内嵌极性官能团色谱柱，由于在靠近硅胶表面的极性官能团的存在，增加了硅胶表面的水分子浓度，改善了与水之间的浸润状况;因此可以允许使用极高水相作为分离，分析条件，而不会出现孔隙内去湿现象，对于分析碱性等大极性分析物而言，减少其保留能力，改善峰形，具有很高的方法重现性。
waters液相色谱柱的活化
waters液相色谱柱的活化
Waters液相色谱柱的活化方法如下：
1. 使用新的C18柱时，先用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡10-30柱体积。
2. 若流动相含有缓冲盐，用跟流动相中盐相等比例的超纯水和有机相冲洗过渡，用量为20倍柱体积，再用含缓冲盐的流动相平衡色谱柱，用量为20倍柱体积或以上。
3. 当用HILIC模式时，新柱用50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡20个柱体积。
另外，当出现拖尾或者柱压升高时，可以考虑将正向进口端拆开，并将筛板超声清洗干净，有时候效果很好。
若使用正相色谱柱时，用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积。
以上信息仅供参考，具体操作建议咨询专业人士。
waters 消耗品及色谱柱指南
最佳柱床密度（OBD）制备柱------------------------------------------------------------------------------- 41 径向加压柱 --------------------------------------------------------------------------------------------------------- 48
氨基酸分析 --------------------------------------------------------------------------------------------------------- 57 多肽分析和纯化 -------------------------------------------------------------------------------------------------- 58 蛋白质分离和纯化----------------------------------------------------------------------------------------------- 59 DNA/寡核苷酸分析和纯化------------------------------------------------------------------------------------- 62 MS及LC/MS消耗品-------------------------------------------------------------------------------------------------- 63
Oasis® HLB：用于酸性、碱性与中性化合物的亲水亲脂平衡 反相吸附剂
常见液相色谱柱性能比较
常见液相色谱柱性能比较一、高性能色谱柱特点：柱效高，价格高，通用性好，使用寿命长，pH范围宽1、Waters公司Xbridge2005年waters公司推出，杂化颗粒柱。
优点：pH 1-12,在高pH状态下，没有能与此色谱柱匹敌的，目前市场的宽pH色谱柱在高pH的状态下（9-12）普遍寿命很短，如Gemini，资生堂公司Capcell，YMCPro-C18，包括waters 的第一代杂化柱Xterra都是寿命不长，Zorbax Extend更是不堪。
柱效与一流的硅胶柱相当，甚至有过之无不及，杂化颗粒柱和聚合物色谱柱的问题在于柱效，Xterra和常见的PSDVB的色谱柱都有不错的pH范围，但是柱效低的问题无法解决，这是聚合物填料一般比较软且不耐压的原因造成。
在如此宽的pH范围，最大的好处是可以在化合物的保留平台区去开发方法（pH1-3,pH9-12），这样能得到更稳定更容易重现的方法，对酸性，中性，尤其是碱性化合物都能得到理想的峰形。
注：Waters UPLC色谱柱与Xbridge采用同类型填料，只是颗粒度是1.7um，所以不再重复。
缺点：价格高，平均每支￥7000多的，不是大多数中国客户可以接受的。
2、MerckChromolith整体化色谱柱Merck公司2001年推出。
优点：高流速、低压力，可以快速分析样品，因为压力低，所以可以串联色谱柱以获得更高的柱效而不用担心色谱柱耐压问题，低压力是因为硅胶棒的大量中孔的存在，中孔的存在也让这支色谱柱不怕堵，在处理比较脏的样品的时候会优势很大（如中药），实际的寿命也因此延长。
这个色谱柱最大的特点是柱效高出峰时间快，特别适合之前分析时间超长的实验条件，目前很好的例子就是人参的指纹图谱，因为成分复杂，之前出峰要2个小时，现在用整体化色谱柱30min 就可以分析完了（已有报导），且不影响柱效，类似于UPLC，但不像UPLC那么容易堵。
缺点：规格单一，单价比较高，单价￥7000左右，所以通过串联获得更高柱效的方式显得比较奢侈。
3-HPLC 色谱柱介绍
色谱柱使用保养知识
©2014 Waters Corporation
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内容
色谱柱应用基础 HPLC色谱柱介绍
色谱柱使用保知识
©2014 Waters Corporation
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高效液相色谱柱简介
色谱柱是一根填满填料的管子
柱管的材料(塑料,玻璃,不锈钢…)和尺寸(内径,长短)不尽相同
Waters HPLC色谱柱
©2014 Waters Corporation
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Waters 色谱柱发展历史
ACQUITY UPLC® BEH Amide ACQUITY UPLC® BEH Glycan XBridge Amide XSelect HSS HPLC Columns ACQUITY UPLC® HSS Cyano & PFP columns XSelectTM HSS Cyano & PFP columns XP 2.5 µm Columns
管内的填料更是种类繁多,主要分为三大类 – 硅胶基质 – 聚合物基质 – 无机和有机硅胶杂化基质 色谱柱的性能主要取决于填料的性质和填充技术
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硅胶颗粒的形状
不规则形状 (Irregular)
– 大硅胶颗粒研磨，筛分
– 不粒尺寸和表面积限制
有机基质 (高聚物)
杂化颗粒技术(具硅-碳键机制)
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第一代杂化颗粒的合成过程
Waters 专利技术 荣获2000年全球 R&D 100 大奖
硅甲基嵌入型聚乙氧基 硅烷 (MPEOS)
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色谱柱介绍
精选ppt
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3.色谱柱化学性能
柱规格包括两方面：柱长和柱内径。
柱规格的选择直接影响分析速度、分离能力、检测能力及每次分析的溶剂消耗等。
对相同的分析时间和分离度来说： ❖内径大的柱子比内径小的柱子多消耗溶剂。 ❖较小内径的柱子对相同的检测信号来说所需样品量亦较少。 因此，在样品量有限时，可使用小内径柱。 柱长度增加虽可改善分离效果，但阻力也随之增加，必须提高入口压力。 长柱可以给出高分离度，短柱可提供快速分离，我们可以根据样品情况去选用合适的色谱柱。
2.色谱柱物理性能
定义：是指填料颗粒的孔或腔的平均尺寸，范围80-300Å 大孔的填料颗粒，可以延长溶质大分子在填料表面滞留的时间， 达到充分分离，改善峰形。
❖较小的孔径提供较高的表面积，可用于较大的载荷量， 并保留小的有机化合物，这种填充柱可用于小分子有机物到聚合物的分离
❖样品MW<4000,选择80Å的孔径；样品>4000,选择300Å的孔径
4.常见色谱柱介绍
❖使用氰基柱注意事项：
1.同一根氰基柱最好在同一种体系中使用，交替调换正相、反相 会迅速缩短色谱柱的使用寿命。 2.在不得已情况下要正相、反相调换时，需要用异丙醇过渡。
精选ppt
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4.常见色谱柱介绍
4.4 氨基柱
SiO2
O
O
Si
CH2 NH2
3
O
❖氰基柱的特点： 1.氨基柱是一种不太稳定的柱子，并不是常用柱， 这是因为键合的氨丙基很容易水解。 2.正相、反相都可以使用。
3.在中等 pH 条件下对强碱性物质具有更好的峰形。
缺点：1.孔径结构复杂，孔径不均匀，导致柱效不够高 2.有机溶剂可能导致聚合物基质溶涨或受损。
waters酰胺基色谱柱
waters酰胺基色谱柱
Waters公司是一家知名的分析仪器制造商，其生产的色谱柱在液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）领域中应用广泛。
酰胺基色谱柱是Waters公司提供的一种色谱柱，具有独特的选择性和稳定性，常用于多种化合物的分离和分析。
酰胺基色谱柱通常使用酰胺官能团作为固定相的配体，这种配体能够提供极性和非极性相互作用，适用于多种类型化合物的分离。
与传统的C18色谱柱相比，酰胺基色谱柱在分离一些极性化合物时显示出更优的性能。
在选择和使用酰胺基色谱柱时，需要注意以下几点：
1.样品性质：根据样品的极性、分子大小和样品基质
等因素选择合适的酰胺基色谱柱。
2.流动相：酰胺基色谱柱通常对流动相的pH值和有机
溶剂种类比较敏感，需要仔细选择流动相的组成，
以保证色谱分离的效果和柱子的寿命。
3.温度：温度对酰胺基色谱柱的分离性能和稳定性也
有影响，需要根据实验要求调整色谱柱的工作温
度。
4.保护柱：为了延长色谱柱的使用寿命，建议在色谱
系统中安装保护柱，以防止杂质和颗粒物对色谱柱
的损害。
总的来说，Waters酰胺基色谱柱以其独特的分离性能和稳定性，在液相色谱分析中有着广泛的应用，能够满足不同领域用户的需求。
waters 消耗品及色谱柱指南
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高效液相色谱柱及消耗品简要指南2008-2009
pka<～0 0.6meq/g
［ 样品前处理产品 ］
Oasis® HLB 化学技术
用于酸性、中性和碱性化合物的通用型吸附剂 独特的水可浸润性Oasis® HLB共聚物
Oasis® HLB是一种可满足所有SPE需要的亲水亲脂平衡的 水可浸润性反相吸附剂，它是由两种基本单体：亲水性的N －乙烯吡咯烷酮和亲脂性的二乙烯基苯按特定比例聚合构 成的。它以特别的“极性钩”为增强极性物的保留提供了 优异的反相保留容量。
ACQUITY UPLC®色谱柱及配套消耗品 ---------------------------------------------------------------- 13 高效液相色谱分析柱
XBridgeTM色谱柱----------------------------------------------------------------------------------------------------- 18 SunFireTM色谱柱 ----------------------------------------------------------------------------------------------------- 23 Atlantis®色谱柱 ----------------------------------------------------------------------------------------------------- 26 Symmetry®色谱柱 -------------------------------------------------------------------------------------------------- 28 XTerra®色谱柱 ------------------------------------------------------------------------------------------------------- 31 Spherisorb®色谱柱 -------------------------------------------------------------------------------------------------- 34 Nova-Pak®色谱柱---------------------------------------------------------------------------------------------------- 35 µBondapak®色谱柱-------------------------------------------------------------------------------------------------- 35 专用色谱柱及应用------------------------------------------------------------------------------------● 1～35cc各种规格的Oasis® HLB，MCX，MAX，WCX，WAX， 固相提取小柱
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基于第一代杂化颗粒技术的XTerra®系列高效液相色谱柱, 可以让色谱工作者在药物发现，方法开发和纯化分离领域使用高pH值流动相。
∙XTerra颗粒能耐受二甲基亚砜（DMSO）溶剂，可延长高通量药物发现研究中色谱柱的寿命。
∙宽pH 范围使得方法开发研究人员在所需的pH值条件下操作，以获得最佳选择性。
∙高载荷量使得分离纯化的科学家在高pH值条件下，在纯化碱性化合物时，一次进样量增加六十倍。
XTerra 色谱柱特性
键合相类型颗粒状态孔径(s) (µm)碳载量 (Å)端基(%)是否端基封尾
XTerra MS C18 球形 2.5, 3.5, 5, 10 µm 125 15.5 是
XTerra MS C8 球形 2.5, 3.5, 5, 10 µm 125 12 是
XTerra RP18 球形 3.5, 5, 10 µm 125 15
是
XTerra RP8 球形 3.5, 5, 10 µm 125 13.5 是
XTerra Phenyl 球形 3.5, 5 µm 125 12 是
[ 杂化颗粒技术] 药物发现
方法开发分离和纯化
XTerra®色谱柱将硅胶和聚合物的最优特性与革命性的杂化颗粒专利*技术相结合，在合成中，使用甲基取代了部分硅羟基。
疏水性Si-C基团分布在颗粒骨架结构中，最后获得耐用的杂化（无机/有机）颗粒，可在如下条件操作:
∙高速
∙高温
∙高pH值.
经过键合和封端处理后，填料表面的残留硅羟基减少了33%，因此XTerra色谱柱分析碱性化合物时可得到尖锐对称的色谱峰，从而获得更好的分离。
*美国专利号6,686,035 B2
不同键合相的XTerra色谱柱对分离选择性的影响
不同键合相的XTerra色谱柱是方法开发策略的关键组成部分。
时获得更快的分析速度。
更快的流速和更短的色谱柱允许更短的梯度运行时间，却不会降低峰容量。
为了得到与LC/MS 分析相匹配的流速，请选择小内径的色谱柱。
XTerra色谱柱更宽的pH使用范围是改变可离子化的化合物色谱分离选择性的强有力工具。
XTerra 色谱柱使得pH成为方法开发的的有力工具。
XTerra 色谱柱在高pH值具有卓越的稳定
性，以更高的分辨率和上样量分离碱性化合物。