溃疡性结肠炎中白细胞移动抑制因子免疫荧光抗体染色技术的应用
溃疡性结肠炎患者血清IL-1β、TNF-α和IL-10的表达及其意义
溃疡性结肠炎患者血清IL-1β、TNF-α和IL-10的表达及其意义王觅柱;邬彩虹;陈吉【期刊名称】《国际消化病杂志》【年(卷),期】2009(029)005【摘要】目的通过对溃疡性结肠炎(UC)患者血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)表达水平的检测,探讨它们在UC发生、发展过程中的作用.方法实验组分为UC组(60例)和正常对照组(30例).IL-1β、TNF-α和IL-10表达水平的检测:应用放射免疫法(RIA)检测三者在UC组、正常对照组血清中的表达水平.结果 UC组血清中IL-1β、TNF-α表达水平与正常对照组相比明显增高(P<0.01),并与临床上病情的严重程度相一致.UC组血清中IL-10的含量与正常对照组间的差异没有统计学意义(P>0.05).结论 UC发病过程中,促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α与抑炎性细胞因子IL-10的表达水平不一致,可能存在细胞因子网络的平衡失调.【总页数】3页(P362-364)【作者】王觅柱;邬彩虹;陈吉【作者单位】014030,内蒙古消化病研究所,包头医学院第二附属医院消化科;014030,内蒙古消化病研究所,包头医学院第二附属医院消化科;014030,内蒙古消化病研究所,包头医学院第二附属医院消化科【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.溃疡性结肠炎患者血清IL-1B、TNF-α、IL-10的表达与临床意义 [J], 苗莉2.结核患者血清TNF-α、IL-1、IL-10和HMGB-1动态变化及临床意义 [J], 周安;徐巧玲;李明强;刘清蒙3.溃疡性结肠炎患者血清TNF-α、IL-10表达与肠道菌群分布的相关性 [J], 何赢;张军;张岩4.IL-1,IL-10及TNF-α在活动性幼年特发性关节炎患者的表达及意义 [J], 沈海丽;魏佳熙;朱琴;杜兰生;曹宏;王轶5.溃疡性结肠炎患者血清IL-8、IL-10、TNF-α的水平及临床意义 [J], 贾长河;许泼实;康谊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
白细胞分离法在溃疡性结肠炎中的应用
疗直至 １ １个疗 程 结 束 ， Ｓ Ｐ Ｌ组 予 静 脉 强 的松 ４ ～ ０ ６ ／ ， ５ ０ｄ治疗 ， 根据 病 情 改 用 口服 激 ０ｍｇ ｄ 共 ～１ 后 素治 疗 。第 １ ２周 结 果 显 示 ， 床 缓 解 率 在 Ｌ ＡＰ 临 Ｃ
组 显 著 高 于 Ｐ Ｌ 组 （ ４ 比 ４ ．６４， ＝ Ｓ ７ ．３ ８ Ｐ ， ｏ
剂对 照研究 ＿ 来 自 日本 ， 者 随 机 接受 模 拟装 置 或 ６ 患
Ｃ ｌ ｏｂ 治 疗 （ Ｃ Ｐ组 ） 两 组 均先 予每 周 １次连 ｅ ｓｒ ａ ｌ Ｌ Ａ ， 续 ５周 治 疗 ， 止 治疗 ２周 后 再 予 每周 １ 连 续 ２ 停 次
周 的治疗 ， 结果 显示 ， Ｃ Ｌ ＡＰ组临 床应答 率 显著 高 于
２ １ 提 高 临床 缓解 ， 少激 素用量 ． 减
９ Ｃ ． ４７ ２ ）。 Ｈａ ａ 等 ［ 的 多 中 心 随 机 对 ５ Ｉ１ ９ —． ２ ｎｉ ８
细 胞分 离 装 置 ： 品 名 为 Ｃ ｌ ｏ ｂ ， 吸 附 介 质 是 商 ｅｌ ｒａ 其 ｓ 亲 水性高 分 子微纤 维 无 纺 布 制 备 的滤 过 柱 ， 以吸 附
粒 细胞 和淋 巴细 胞 为 主Ｉ 。基 本疗 程 为 每 周 １次 、 ３ ］ 连 续 ５周 。 （ ）白 细 胞 吸 附 分 离 柱 ： 品 名 为 ２ 商 Ａ ａｏｕ 其吸 附介 质是 由醋 酸纤 维 素珠 状 物浸 泡 ｄ ｃｌｍ，
验进 行 Ｍｅａ分 析 ， 果 显示 ， Ｃ ｔ ］结 Ｌ ＡＰ较 传 统药 物
治疗 可获 得 更 高 的 ６周 临 床 应 答 率 或 缓 解 率 （ Ｒ Ｒ １ ４ ， ． ５１ ７ ） 以及 更 高 的 １ ． ２ ＣＩ１ １ —． ５ ， ２周 后 缓 解 率
溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中IL-10、IL-13表达变化及意义
微镜下问质单核细胞细胞膜和（ 细胞质呈棕褐 或） 色为 Ｉ一Ｏ阳性 细胞 ； 核 巨噬 细胞 胞 膜 和 （ ） Ｌ１ 单 或 胞
质 呈棕黄色 为 Ｉ一３阳性 细胞 。 Ｌ１
１３ 统 计 学 方法 ． 采 用 Ｓ Ｓ １ ５统计 软 件 。数 Ｐ Ｓ１． 据 以 －ｓ表 示 。组 间 比较 采 用 Ｌ Ｄ 检 验 。Ｐ≤ Ｉ － Ｓ． ０ ０ 为差 异有统计 学意义 。 ．５
２ 结果
泌促炎性递质和下调有细胞毒性 的单核细胞功能， 又上调单核 细胞呈 递抗 原 的能 力 。文 献 报道 ，Ｌ１ Ｉ一３
可 抑制脂多糖 （Ｐ ） 导 的人外 周血单 核 细胞 （ Ｂ ＬＳ 诱 Ｐ—
ＭＣ 分 泌 Ｉ－、Ｌ８ Ｉ一 Ｔ Ｆ ， ） Ｌ６ Ｉ一、Ｌ１和 Ｎ － 同时诱导 人单核 Fra bibliotek采用免疫
组化法检测 ３ Ｏ例活动性 Ｕ Ｃ患者（ 轻度 １ ， ３例 中重度 １ ７例 ） １ 及 ５例结肠 息肉患者 （ 正常对照 ） 结肠黏膜 中的 Ｉ・ Ｌ
１ 、 －３ ０ Ｉ １ 水平 。结果 中重度 Ｕ Ｌ Ｃ患者结肠黏膜 中 Ｉ． Ｌ１ Ｏ及 Ｉ一 Ｌ１ ３阳性细胞数均 明显低于轻度 ｕ ｃ患者 和结肠息 肉
山东 医药 ２ １ ０ ０年第 ５ 第 ｌ 期 ０卷 ｌ
溃疡 性结 肠炎 患者 结肠 黏膜 中 Ｉ一０ Ｌ１ 、 Ｉ一３表 达变 化及 意义 Ｌ１
高 伟， 司雁菱 ， 吴 瑜
（ 山工人 医院 ， 唐 河北唐 山 ０ ３ ０ ） ６００
摘要 ： 目的 探讨溃疡性结肠炎 （ Ｃ 患者结肠 黏膜 中 Ｉ １ 、 一３表达及 与病情的相关 性。方法 Ｕ） Ｌ一 Ｉ １ ＯＬ
细胞 和多 形核 细胞 产 生 Ｉ一ｍ。活 动期 Ｕ Ｌ１ Ｃ患者 结 肠黏膜 中 Ｉ．３显著 高 于 非 活 动期 患 者 Ｊ Ｌ１ 。本 研 究 结果 与 之相 符 ， 中重 度 Ｕ 且 Ｃ患者 结 肠 黏膜 组 织
免疫抑制剂在溃疡性结肠炎中的应用及疗效分析
免疫抑制剂在溃疡性结肠炎中的应用及疗效分析王培龙;张俊峰;师水生【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2009(15)21【摘要】目的探讨免疫抑制剂对溃疡性结肠炎(UC)的疗效.方法本研究将2004年6月至2008年6月诊治的73例UC患者分为免疫抑制剂治疗(33例)和常规5-氨基水杨酸类药物及激素治疗(40例)两组,观察两组患者的疗效及不良反应.结果免疫抑制剂组中度及重度患者完全缓解率分别为77.8%和83.3%,而常规治疗组分别为41.7%和50.0%,两组患者疗效间差异有统计学意义( P <0.05).肝、肾功能异常,白细胞减少等不良反应发生率两组间差异均无统计学意义( P >0.05).结论免疫抑制剂对重症、顽固性UC患者有明显的治疗作用,但必须严密监测其不良反应.【总页数】3页(P3332-3334)【作者】王培龙;张俊峰;师水生【作者单位】长治医学院附属和济医院内镜科,山西,长治,046011;长治医学院附属和平医院内镜科,山西,长治046000;山西医科大学第二附属医院消化内科,太原,030001【正文语种】中文【中图分类】R574.62【相关文献】1.英夫利西单抗联合免疫抑制剂维持治疗溃疡性结肠炎的疗效 [J], 黄根;方念;王农荣2.英夫利昔单抗联合不同免疫抑制剂治疗溃疡性结肠炎的疗效比较 [J], 简春宣;舒慧3.益生菌在优化溃疡性结肠炎药物安全性中的应用与疗效分析 [J], 师永芳;张宏伟4.结肠镜联合免疫抑制剂联合治疗溃疡性结肠炎56例回顾性分析 [J], 程开;卓越;王艳凤;杜井峰;赵金涛;张雪梅5.肾移植合并溃疡性结肠炎患者停用免疫抑制剂后原感染的丙肝病毒消失 [J], Nagai H.;Matsumaru K.;Shiozawa K.;廖新华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
白细胞介素-10在溃疡性结肠炎患者结肠粘膜的表达及意义的开题报告
白细胞介素-10在溃疡性结肠炎患者结肠粘膜的表达及意义
的开题报告
标题：白细胞介素-10在溃疡性结肠炎患者结肠粘膜的表达及意义
背景介绍：
溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）是一种以结肠黏膜和粘膜下层的慢性炎
症为主要特征的炎症性肠病，具有周期性复发的特点。
白细胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）作为一种重要的免疫调节因子，能够抑制T细胞和巨噬细胞等免疫细胞的活性，从而减少炎症反应的发生。
因此，IL-10可能在UC的发生和发展中起着重要的作用。
研究目的：
本研究旨在探索IL-10在UC患者结肠粘膜中的表达情况，以及其可能的生物学
意义。
研究方法：
选取40例UC患者和20例健康人作为对照组。
采用组织学方法对UC患者和对
照组的结肠粘膜进行病理检查，并用免疫组化方法检测IL-10在粘膜组织中的表达情况。
同时，收集临床资料和病理数据进行统计学分析。
预期结果：
本研究预期发现IL-10在UC患者结肠粘膜中的表达水平显著降低，同时还可能
发现IL-10表达与UC病变部位、严重程度及复发率等临床病理特征相关，并且IL-10
的缺陷可能与UC疾病的发生和发展有关。
意义与贡献：
通过对IL-10在UC患者结肠粘膜中的表达情况进行探究，可以更深入地了解UC 的病因和发病机制，为UC的临床治疗和预防提供新的思路。
同时，本研究还有助于加深人们对免疫调节因子的认识，为炎症性肠病和其他免疫相关疾病的研究提供参考和
支持。
溃疡性结肠炎患者血清和结肠组织白细胞介素8和白细胞介素10的表达
溃疡性结肠炎患者血清和结肠组织白细胞介素8和白细胞介素10的表达张晓博;杨宪武;党惠娇;吴国斌;李红玉;徐志斌;吴明利【摘要】目的检测溃疡性结肠炎(UC)患者的结肠组织及血清中白细胞介素8(IL-8)和白细胞介素10(IL-10)的含量,探讨IL-8和IL-10在UC发病中的作用及其相关性.方法用放射免疫分析检测70例经内镜检查确诊的UC患者(UC组)结肠组织和血清标本,并与30例正常对照组(健康志愿者)比较.结果 UC组中患者血清和结肠组织中IL-8含量均比正常对照组升高,且随着病变范围的扩大和病变程度的加重逐渐升高(均P<0.01),轻度、中度、重度UC患者血清中IL-8含量分别为(107±11)ng/L、(151±36)ng/L、(201±47)ng/L(均P<0.01),结肠组织中分别是(300±10)ng/g、(777±96)ng/g、(907±185)ng/g,而血清和结肠组织中IL-10含量比对照组降低,且随着病变程度加重逐渐降低.轻度、中度、重度UC患者血清中IL-10含量分别为(41±11)ng/L、(35±14)ng/L、(20±6)ng/L(均P<0.01),结肠组织中分别是(80±12)ng/g、(61±11)ng/g、(20±10)ng/g;IL-8和IL-10表达水平呈负相关.结论促炎因子IL-8含量升高,抑炎因子IL-10含量降低,体内免疫调节失衡,易诱发UC;IL-8、IL-10水平与疾病严重程度显著相关.【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2010(025)003【总页数】3页(P210-212)【关键词】结肠炎;溃疡性;白细胞介素8;白细胞介素10;放射免疫测定【作者】张晓博;杨宪武;党惠娇;吴国斌;李红玉;徐志斌;吴明利【作者单位】石家庄市中心医院消化科,河北,石家庄,050011;石家庄市中心医院消化科,河北,石家庄,050011;石家庄市中心医院消化科,河北,石家庄,050011;石家庄市中心医院消化科,河北,石家庄,050011;石家庄市中心医院消化科,河北,石家庄,050011;河北医科大学第四医院内镜室,河北,石家庄,050011;河北医科大学第四医院内镜室,河北,石家庄,050011【正文语种】中文【中图分类】R574.621溃疡性结肠炎(UC)是一种原因不明的肠道慢性非特异性炎症。
观察奥替溴铵在溃疡性结肠炎治疗中的应用价值
观察奥替溴铵在溃疡性结肠炎治疗中的应用价值一、奥替溴铵的作用机制奥替溴铵是一种抗炎药，其作用机制主要是通过抑制炎症介质的释放和白细胞的迁移，从而减轻炎症反应。
具体来说，奥替溴铵可以抑制巨噬细胞和单核细胞的炎症介质释放，如前列腺素、白细胞介素、肿瘤坏死因子等，阻断炎症信号通路，抑制炎症细胞的活化和迁移，减轻肠道黏膜的炎症反应，从而达到治疗溃疡性结肠炎的效果。
二、奥替溴铵的临床研究针对奥替溴铵在溃疡性结肠炎治疗中的应用价值，已经有一系列的临床研究进行了探索和验证。
这些临床研究多数得出了奥替溴铵对溃疡性结肠炎具有显著的疗效的结论。
一项多中心、随机、双盲、安慰剂对照的研究显示，奥替溴铵治疗溃疡性结肠炎的总有效率达到了70%以上，明显优于安慰剂组；另外一项对照研究发现，奥替溴铵治疗溃疡性结肠炎的有效率达到了80%以上，且安全性良好，副作用较少。
这些研究结果表明，奥替溴铵在溃疡性结肠炎的治疗中具有良好的应用前景和价值。
三、奥替溴铵的临床应用奥替溴铵可以单独使用，也可以与其他药物联合应用，用于溃疡性结肠炎的急性发作和维持治疗。
在急性发作期，奥替溴铵可用于控制症状、缩短疾病持续时间和减轻炎症反应。
在维持治疗期，奥替溴铵可用于预防疾病复发、延长无症状期和改善患者的生活质量。
奥替溴铵在溃疡性结肠炎的治疗中具有较好的临床应用前景。
五、展望在未来，随着对溃疡性结肠炎治疗的研究不断深入，奥替溴铵在该领域的应用价值有望得到更多的验证和确认。
除了在溃疡性结肠炎治疗中的应用外，奥替溴铵在其他炎症性肠道疾病的治疗中也可能发挥重要作用。
未来的研究还需进一步探讨奥替溴铵的作用机制、剂量效应关系、长期疗效及安全性等方面的问题，为该药物在临床上的更广泛应用提供更充分的依据。
免疫抑制剂在炎症性肠病治疗中的应用进展
㊃专题㊃通信作者:钱家鸣,E m a i l :q i a n j i a m i n g1957@126.c o m 免疫抑制剂在炎症性肠病治疗中的应用进展李 玥,钱家鸣(中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院消化科,北京100730) 摘 要:炎症性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,是病因尚不十分明确的肠道慢性反复的非特异性炎症㊂免疫抑制剂是重要的药物治疗方法,维持无激素长期缓解,主要用于克罗恩病和激素依赖或抵抗的溃疡性结肠炎的维持治疗㊂常用的免疫抑制剂包括硫嘌呤类㊁甲氨蝶呤㊁环孢素等药物㊂关键词:炎性肠疾病;免疫抑制剂;硫唑嘌呤;甲氨蝶呤;环孢素中图分类号:R 574 文献标识码:A 文章编号:1004-583X (2016)08-0824-04d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2016.08.004R e c e n t a d v a n c e s o f i m m u n o s u p p r e s s i v e t h e r a p y i n i n f l a m m a t o r y bo w e l d i s e a s e L iY u e ,Q i a n J i a m i n gD e p a r t m e n t o f G a s t r o e n t e r o l o g y ,P e k i n g U n i o n M e d i c a lC o l l e g eH o s p i t a l ,B e i j i n g 100730,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :Q i a nJ i a m i n g ,E m a i l :q i a n j i a m i n g1957@126.c o m A B S T R A C T :I n f l a mm a t o r y b o w e ld i s e a s ec o m p r i s e s u l c e r a t i v ec o l i t i sa n d C r o h n d i s e a s e ,b o t h o f w h i c h a r e c h a r a c t e r i z e db y at e n d e n c y o fc h r o n i co rr e l a p s i n g imm u n ea c t i v a t i o na n di n f l a mm a t i o n w i t h i nt h e g a s t r o i n t e s t i n a l t r a c t .I mm u n o m o d u l a t i n g d r u g s ,i n c l u d i n g a z a t h i o p r i n e ,m e t h o t r e x a t ea n d c y c l o s po r i n ee t c .a r e m o s tu s e f u li n m a n a g i n g s t e r o i d s r e s i s t a n t o r d e p e n d e n t p a t i e n t s t o a c h i e v e s t e r o i d s -f r e e r e m i s s i o n .K E Y W O R D S :i n f l a mm a t o r y b o w e l d i s e a s e s ;i mm u n o s u p p r e s s i v e a g e n t s ;a z a t h i o p r i n e ;m e t h o t r e x a t e ,c y c l o s po r i ne 钱家鸣北京协和医院消化内科主任㊁教授㊁主任医师,医学博士㊁博士生导师;现任中国医师协会消化专业委员会会长和北京消化疾病专业委员会主任委员㊂担任‘中华消化杂志“中英文版㊁‘中华医学“英文版等副主编,‘中华内科杂志“等10余刊物编委㊂炎症性肠病(i n f l a mm a t o r y bo w e l d i s e a s e ,I B D )包括溃疡性结肠炎(u l c e r a t i v e c o l i t i s ,U C )和克罗恩病(C r o h nd i s e a s e ,C D ),是病因仍不十分明确的肠道慢性反复的炎症性疾病㊂在欧美国家常见,我国发病率和患病率逐年升高㊂I B D 的治疗涉及药物㊁营养㊁手术㊁心理治疗等,其中免疫抑制剂在I B D 的治疗,特别是C D 中占有非常重要的位置,是实现激素减停㊁维持疾病长期缓解的主要药物㊂应用于I B D的免疫抑制剂包括硫唑嘌呤(a z a t h i o p r i n e ,A Z A )㊁甲氨蝶呤(m e t h o t r e x a t e ,MT X )㊁环孢素等不同类型的药物,本文着重介绍上述药物的作用机制㊁适应证和应用进展㊂1 硫嘌呤类药物硫嘌呤类药物包括A Z A 和6-巯基嘌呤(6-m e r c a p t o pu r i n e ),是一种嘌呤类似物,属于嘌呤拮抗剂类抗代谢物㊂硫嘌呤类药物通过抑制酰胺转移酶,干扰嘌呤核苷酸合成,抑制D N A 合成,同时抑制T 细胞活性㊂6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-T G N )是A Z A代谢产物中发挥主要免疫抑制作用的产物㊂A Z A 作为前体药物通过非酶途径迅速转化为6-巯基嘌呤(6-M P )㊂6-M P 通过3种竞争性途径代谢,分别受黄嘌呤氧化酶(X O )㊁巯嘌呤甲基转移酶(T P MT )和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(H P R T )调节㊂由X O途径产生无活性代谢产物6-硫尿酸(6-T U ),经T P MT 途径代谢产生无活性代谢产物6-甲硫嘌呤(6-MM P ),H P R T 途径产生6-单磷酸硫肌苷(6-T I M P ),之后在肌苷-5-单磷酸脱氢酶(I M P D H )和鸟嘌呤磷酸合成酶(GM P S )作用下产生活性代谢产物6-硫鸟嘌呤核苷酸(6-T G N )㊂同时,通过T P MT 途径甲基化产生6-甲硫嘌呤核糖核苷酸(6-MM P R )或磷酸化生成6-硫代肌苷三磷酸(6-t h i o -I T P )㊂6-MM P R ㊁6-T G N 和6-t h i o -I T P 均为活性代谢产物㊂6-T G N 可通过2'-脱氧-6-T G T P 掺入D N A 和R N A ㊂近期的研究显示,A Z A 可抑制T 淋巴细胞的鸟苷三磷酸酶R a c 1㊂A Z A 的代谢途径及作用机制见图1㊂㊃428㊃‘临床荟萃“ 2016年8月5日第31卷第8期 C l i n i c a l F o c u s ,A u gu s t 5,2016,V o l 31,N o .8Copyright ©博看网. All Rights Reserved.图1A Z A的代谢途径A Z A是IB D治疗的一线免疫抑制药物,用于激素诱导缓解后的维持治疗㊂是C D维持缓解最常用的药物,也是激素依赖性U C患者的主要维持治疗药物㊂A Z A起效时间12~16周,故不用于诱导缓解治疗[1]㊂因起效慢,故需要观察足够的时间才能判断疗效㊂欧洲共识意见推荐目标剂量为1.5~2.5 m g/k g,我国目前尚无共识的推荐剂量㊂国内研究回顾性分析178例使用A Z A治疗的C D患者,平均剂量(1.24ʃ0.16)m g/k g A Z A可有效维持小肠CD 患者黏膜愈合[2]㊂别嘌呤醇可抑制黄嘌呤氧化酶,增加产生6-T G N的代谢途径㊂据报道小剂量A Z A 联合别嘌呤醇的治疗可降低药物相关不良反应,长期(中位随访19月)的临床缓解率C D为52%,U C 为54%,可作为药物不耐受患者的选择之一[3]㊂目前,国内探索不同剂量(2m g/k g v s1m g/k g)的前瞻性研究正在进行中,期待该研究长期疗效的结果㊂A Z A的不良反应并不少见,北京协和医院的资料显示1995~2009年接受A Z A治疗的85例I B D 患者,43.5%的患者出现不良反应,多发生在用药1月内㊂常见不良反应为:胃肠道反应㊁骨髓抑制㊁感染㊁肝功能损害等㊂15%患者因不良反应停药㊂女性患者更易出现白细胞降低㊂国外文献综述报道,胃肠道不适发生率9%~16%,感冒样症状(乏力㊁肌痛㊁关节痛)2%~5%,胰腺炎3%~4%,肝功能异常(升高超过正常2倍)3%~4%,骨髓毒性(白细胞计数<3ˑ109/L,或中性粒细胞计数<1.5ˑ109/L) 3%~6%,以及其他如皮疹㊁感染和非特异性不良反应如头痛等[4]㊂为避免药物相关不良反应特别是骨髓和肝毒性,通常从小剂量50m g开始,缓慢加量至目标剂量㊂A Z A相关骨髓抑制与高6-T G N浓度和低T P MT活性相关[5]㊂T P MT活性在不同个体间差异很大,与T P MT基因有一定关系,目前已知T P MT基因有31中不同的变异等位基因,其中T P MT*2,T P MT*3A,T P MT*3C占突变等位基因的60%~90%㊂但基因型与表型也并不完全相符,治疗前联合检测T P MT基因型和T P MT活性可以更好预测㊁避免严重的甚至危及生命的骨髓抑制㊂国内的研究显示T P MT基因型检查预测骨髓抑制的特异性高,但敏感性低,限制了其广泛应用[6]㊂因此,结合我国国情,服药3月内严密监测血常规和肝功能仍是主要的临床策略㊂A Z A治疗过程中判断药物无效或不耐受而考虑停药前,需要认真分析药物的疗程是否足够㊁剂量是否最大化㊁患者的不良反应是否确定为药物相关㊂有条件的单位可通过嘌呤代谢物的浓度监测来指导临床判断药物疗效并调整剂量或停药(见表1)㊂除需要卫生经济水平支撑药物浓度监测外,还需要建立基于国人资料的代谢物浓度范围㊂药物浓度监测可优化和提高A Z A的疗效达15%~30%,值得创造条件实现其广泛临床应用[7]㊂表1硫嘌呤类药物代谢产物浓度监测及其提示意义6-T G N6-MM P意义无无未服用药物低低依从性差/剂量低低高6-MM P为优势代谢途径高低达到治疗量,如无临床反应提示药物抵抗高高过量,如无临床反应提示药物难治A Z A可长期维持病情缓解,指南推荐疗程不少于4年㊂长期治疗对于青年男性(<35岁)需警惕有发生肝脾T细胞淋巴瘤风险,获益与风险依据患者个人情况综合判断[8]㊂总之,硫嘌呤类药物是目前治疗I B D的首选免疫抑制药物,通过临床密切监测实验室检查如血常规㊁肝功能可有效监测药物不良反应㊂治疗过程中代谢产物浓度的监测非常有助于判断患者的服药依从性和药物疗效,实现治疗剂量的优化㊂适合国人的药物剂量和有效代谢物浓度范围均有待进一步研究㊂2M T XMT X是叶酸拮抗剂,主要抑制二氢叶酸还原酶而使二氢叶酸不能还原成有生理活性的四氢叶酸,从而使嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成过程中一碳基团的转移作用受阻,导致D N A生物合成受抑制㊂MT X最初是抗肿瘤药物,大剂量MT X用于治疗肿瘤如白血病㊁卵巢癌㊁绒癌等㊂近20余年小剂量MT X广泛用于治疗自身免疫性疾病,特别是类风湿关节炎,在I B D的治疗中是仅次于A Z A的二线免疫抑制药物㊂2012年我国I B D诊治共识意见明确提出:对于激素依赖的C D患者㊁重度C D药物诱导缓解后㊁复㊃528㊃‘临床荟萃“2016年8月5日第31卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2016,V o l31,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.发频繁C D㊁临床上有被视为 病情难以控制 高危因素等需考虑免疫抑制剂维持治疗,当A Z A不耐受或无效可考虑换用MT X㊂推荐剂量是15~25m g肌肉注射,每周1次[1]㊂国外的研究显示,25m g MT X 肌肉注射,每周1次,12周可诱导难治性C D临床缓解并实现激素减停[9]㊂诱导缓解后MT X15m g,每周1次肌肉注射可维持C D缓解,肌肉注射效果优于口服用药[10]㊂我国的回顾性研究也显示MT X可诱导难治性C D缓解,用药12周有效率为80%,可实现激素减停,药物耐受性好,不良反应相对较小㊂MT X维持C D的疗程可维持1年,更长的疗程尚无共识[11]㊂MT X诱导和维持U C缓解的证据尚不充分, 2014~2015年C o c h r a n e系统评价显示MT X无论是诱导活动性U C缓解还是维持U C缓解均缺乏有力的研究证据支持[12-13]㊂近期一项多中心㊁前瞻㊁随机对照研究的结果显示,MT X胃肠道外给药(25 m g/w)诱导活动性U C无激素缓解的效果并不优于安慰剂[14]㊂这无疑为MT X诱导U C缓解的进一步研究画上了句号㊂MT X的常见不良反应包括:胃肠道反应㊁口腔黏膜溃疡㊁皮疹㊁头痛㊁以及轻度转氨酶升高,也可引起骨髓抑制造成白细胞㊁血小板减少,甚至全血细胞减少㊂在用药后口服叶酸(1m g/d)可减轻药物的胃肠道反应㊂长期用药的安全性值得关注,有研究显示长期低剂量MT X(4年)肝纤维化/肝硬化的发生率为2.7%,但同时也有研究显示,长期MT X治疗不增加肝纤维化风险㊂在治疗的过程中需定期监测肝功能,长期用药可监测肝纤维化标记物,但肝穿刺活检不作为常规监测手段[15]㊂MT X用药期间及停药后6个月内均应避免妊娠㊂3环孢素、他克莫司环孢素㊁他克莫司均是钙调神经磷酸酶抑制剂㊂环孢素静脉用药起效迅速,用于激素抵抗的重度U C,有效率达60%~80%,有助于减少急诊手术治疗[16]㊂无明确证据显示口服环孢素治疗C D有效㊂非对照研究提示静脉环孢素治疗瘘管型C D有效,但是缺乏进一步随机对照研究验证,且由于环孢素不良反应多,限制其应用[17]㊂环孢素的严重不良反应包括肾毒性㊁过敏㊁癫痫㊁肺孢子虫肺炎等,治疗过程中需严密监测肾功能㊁电解质㊁血药浓度等指标,血药浓度的治疗窗较窄,通过药物浓度监测避免严重不良反应㊂他克莫司治疗I B D的报道多来自日本,近期的观察性研究显示他克莫司口服治疗中重度活动U C,12周临床缓解率是40%,抗T N F治疗组是28%(P= 0.29),不良反应发生率是12%[18]㊂从该回顾性观察研究的结果判断他克莫司治疗U C是非常有前景的药物,下一步值得进行随机对照研究进一步验证㊂有报道,他克莫司治疗活动性瘘管型C D有效,虽是随机对照研究,但样本量小[19]㊂该药仅有口服制剂,治疗过程中也需要监测肾功能,警惕肾毒性㊂4沙利度胺沙利度胺(t h a l i d o m i d e),化学名称为α-酞胺哌啶酮(α-N-p h t h a l i d o g l u t a m i d e),是一种合成谷氨酸衍生物㊂于1953年在前西德首先合成,20世纪50年代后期以其镇静㊁催眠及镇吐作用被用于改善睡眠和妊娠早期的早孕反应㊂至20世纪60年代初,由于导致上万例的胎儿海豹样畸形(即著名的反应停事件)而退出市场㊂1965年以色列医生发现沙利度胺具有治疗麻风病患者的自身免疫症状的效果,随后逐渐发现沙利度胺具有抗炎㊁免疫调节㊁抗血管生成作用和选择性抑制肿瘤坏死因子(T N F)α的重要作用[20]㊂沙利度胺具有多靶点免疫调节作用:①抑制T N F,干扰素(I F N)-γ和白细胞介素(I L)-12;②刺激I L-4和I L-5生成,使淋巴细胞因子的模式由辅助性T细胞(T h)1(I F N-γ,I L-12)向T h2(I L-4, I L-5)转化;③沙利度胺还可阻止核因子k B(N F-k B)激活以及细胞因子诱发的N F-k B调节基因的表达[21]㊂目前,沙利度胺已被用于治疗皮肤结节性麻风㊁类风湿关节炎㊁贝赫切特病和血液系统肿瘤等疾病㊂自1997年以来,沙利度胺逐渐成为治疗I B D的热点药物之一㊂与其他慢作用药物如A Z A㊁MT X相比,沙利度胺起效时间短,通常于用药后2~4周开始起效㊂基于沙利度胺治疗儿童难治性C D的对照研究结果[22],欧洲克罗恩病和结肠炎组织(E C C O)2014年发布的儿童C D治疗指南提出,沙利度胺可用于抗T N F制剂有效但继发失效患者的替代维持治疗[23]㊂国内外报道的成人沙利度胺治疗的相关研究多为小宗病例系列报道,尚无随机对照研究证据㊂北京协和医院的研究显示,100~200m g/d沙利度胺可诱导顽固性C D临床缓解和黏膜愈合,但不良反应发生率高,31%患者因不良反应停药[24]㊂不良反应发生率高,是限制沙利度胺广泛应用的重要因素之一,目前仅用于治疗免疫抑制剂(A Z A㊁MT X)㊁抗T N F制剂无效或不耐受的难治性I B D患者㊂沙利度胺的治疗起始剂量为50m g,每晚服用,此后根据耐受情况逐渐加量㊂由于其明确的致畸作用,用药期间需严格避孕,若计划妊娠,需至少停药3㊃628㊃‘临床荟萃“2016年8月5日第31卷第8期 C l i n i c a l F o c u s,A u g u s t5,2016,V o l31,N o.8Copyright©博看网. All Rights Reserved.个月以上㊂妊娠期㊁哺乳期禁止使用㊂外周神经炎是沙利度胺最常见的不良反应,与药物的累积量有关,多出现在沙利度胺使用的3~10个月,治疗过程中一旦出现,需及时停药,大多患者停药后可好转㊂此外,沙利度胺其他常见的不良反应还包括:嗜睡㊁水肿㊁皮疹㊁乏力㊁血栓栓塞等,较少见的不良反应包括高血压㊁眩晕㊁便秘㊁白细胞较少等㊂多较轻微,停药后即可好转㊂当用药过程中出现心律失常㊁机会性感染等,需及时停药[24]㊂5结语免疫抑制剂在I B D的长期治疗中意义重大,应用广泛㊂加深对免疫抑制剂的认识和了解,有助于消除临床医生对药物疗效和不良反应的顾虑,逐步积累更多的经验㊂免疫抑制剂的治疗中仍然存在很多挑战和有待进一步解决的问题,如药物的剂量㊁疗程㊁停药策略㊁药物浓度监测㊁联合免疫抑制治疗等,仍需进一步开展多中心㊁前瞻性的对照研究不断探索㊂参考文献:[1]中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组.炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年㊃广州)[J].中华内科杂志,2012,51(10):818-831.[2] Y uL F,Z h o n g J,C h e n g S D,e ta l.L o w-d o s ea z a t h i o p r i n ee f f e c t i v e l y i m p r o v e sm u c o s a lh e a l i n g i nC h i n e s e p a t i e n t sw i t hs m a l l b o w e l C r o h n's d i s e a s e[J].JD i g D i s,2014,15(4):180-187.[3] P a v i l i d i sP,S t a m o u l o sP,A b d u l r e h m a n A,e ta l.L o n g-t e r ms a f e t y a n d e f f i c a c y o fl o w-d o s ea z a t h i o p r i n ea n d a l l o p u r i n o lc o t h e r a p y i n i n f l a mm a t o r y b o w e ld i se a s e:A l a r g eo b s e r v a t i o n a l s t u d y[J].I n f l a mmB o w e l D i s,2016,22(7):1639-1646.[4]丁辉,钱家鸣,单科曙.硫唑嘌呤治疗炎症性肠病的不良反应[J].临床消化病杂志,2011,23(1):40-42.[5] M o o n W,L o f t u s E V.R e v i e w a r t i c l e:r e c e n ta d v a n c e si np h a r m a c o g e n e t i c sa n d p h a r m a c o k i n e t i c s f o rs a f ea n de f f e c t i v et h i o p u r i n e t h e r a p y i n i n f l a mm a t o r y b o w e l d i s e a s e[J].A l i m e n tP h a r m a c o lT h e r,2016,F e b14[E p u ba h e a do f p r i n t]. 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溃疡性结肠炎中白细胞移动抑制因子免疫荧光抗体染色技术的应用
目的：探索致敏源2，4-二硝基氯苯(DNCB)建立的具有迟发型超敏反应（delayed-type hypersensitivity，DTH）特征的实验性结肠炎模型肠神经元中LMIF 的表达。
方法：结肠石蜡切片LMIF的免疫荧光测定。
结果：溃疡性结肠炎肠神经系统和神经免疫介导物白细胞移动抑制因子(LMIF)在DNCB所致实验性结肠炎中有重要表达；抗体滴度1∶300的表达效果较好。
结论：LMIF是神经免疫的重要介导物。
标签：免疫荧光染色；溃疡性结肠炎；神经源性肠炎；大鼠
溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）使用多种治疗都不能取得根治的效果。
1999年Barbara提出，UC可能是神经源性炎症的表现形式之一，即肠的神经源性炎症，这种观点的出现给人们认识UC的病因提供了新的思路。
利用大鼠研究UC时，由致敏源2，4-二硝基氯苯(DNCB)建立的具有DTH(delayed-type hypersensitivity )反应特征的实验性结肠炎模型，其发病机制和病理学变化被认为与人的UC有许多相似之处，并且先在豚鼠和家兔，后来又在大鼠和小鼠被研究和报道[1]，我们在DNCB致小鼠结肠炎模型的基础上，用DNCB灌肠大鼠模型探头作为神经免疫介导物和DTH反应特异指标的白细胞移动抑制因子(LMIF)是否在炎性结肠神经组织中增加，故采用免疫荧光双染对肠神经和LMIF进行荧光染色，获得比较满意的阳性结果。
1 材料与方法
1.1 材料
用大鼠溃疡性结肠炎模制备型大鼠结肠石蜡切片标本。
兔抗大鼠LMIF多克隆抗体购于Santa Cruz公司，荧光素TRITC（罗丹明）标记的山羊抗兔IgG、山羊血清工作液和EDTA均购于北京中衫金桥生物有限公司，兔抗大鼠LMIF抗体和荧光素标记的二抗均以PBS缓冲液（pH7.4）稀释，PBS-H2O2缓冲液是以30 ml/L H2O2和PBS配制(比例1∶9)。
1.2 方法
经过石蜡包埋的大鼠肠组织切片（5 μm），进行LMIF免疫荧光染色。
步骤：标本做石蜡和水化处理，并经过抗原修复和封闭非特异结合等处理后，滴加兔抗大鼠LMIF一抗（1∶300），置于4℃过夜。
待标本恢复至室温并经PBS洗涤后，滴加荧光素（TRITC）标记的二抗（1∶300），避光室温孵育 1 h，在Nikon TE2000-u(日本)荧光显
微镜下观察LMIF的荧光强度并照相。
2 结果
2.1 抗体稀释度
兔抗大鼠LMIF多克隆抗体购于Santa Cruz公司，公司推荐的抗体稀释度为1∶50～200；二抗购于中衫金桥有限公司，公司推荐的抗体稀释度也为1∶50～200，但是我们发现1∶300的抗体稀释度能够得到比较满意的效果。
2.2 免疫荧光检测
免疫荧光方法检测结肠组织中LMIF蛋白在荧光显微镜下显示红色。
DNCB 灌肠组的LMIF荧光强度明显强于对照组。
3 讨论
3.1 DNCB灌肠液对白细胞移动抑制因子的影响
结肠炎组的肠壁组织可见LMIF荧光强度随DNCB灌肠液的浓度的增大而增大，与病理评分的改变是一致的。
LMIF是由致敏的T淋巴细胞当再次受同种抗原刺激时释放的致炎因子，是衡量DTH反应的主要指标之一。
在某些其他类细胞如胃肠上皮细胞和中枢神经元等，也有LMIF的表达。
从本实验看到，对照组大鼠的结肠也有一定程度的表达，主要分布于黏膜层的腺体之间；DNCB结肠炎时LMIF表达明显增多，并且在肠壁的各层组织中都有，其中很有可能包括肠壁神经元。
结合已有的报道，即LMIF可作为DTH反应如DNCB结肠炎、接触性皮炎的特异性免疫指标，且在人的UC中明显升高，我们有理由认为, 从DNCB 诱导的实验性结肠炎模型中取得的资料在一定程度上可以说明人类的UC。
LMIF 是神经免疫的重要介导物，所以我们认为UC是与神经和免疫因素都有密切关系的炎症。
3.2 优化免疫荧光染色技术
本实验采用高温修复石蜡切片，结果显示效果很稳定，并且在进行免疫荧光染色时，条件的优化会有益于好的实验结果。
3.2.1 选择最佳抗体稀释度在大鼠溃疡性结肠炎中，在肠神经组织中，LMIF 的表达升高。
我们在实际工作中摸索出了最佳滴度。
抗体浓缩液一般都有推荐浓度，但并不代表最合适的浓度。
最佳浓度是指在背景清晰的情况下，阳性显示达到最强的反应滴度。
在实际工作中往往会因某些抗体染色过强或过弱而无法达到预期的实验效果。
操作时应该注意冷冻的原液抗体应该置于室温中缓慢解冻，绝对避免高温快速解冻。
稀释后的抗体应该及时使用，切忌反复冻融导致抗体活性丢失，在4℃条件下保存即可。
3.2.2 洗涤要彻底每道程序都有用蒸馏水或缓冲液洗涤以清除残留在切片中的试剂，以达到特异着色的目的。
洗涤时不论是冲洗还是振荡洗涤，其基本原则是要达到洗涤干净的目的，或者说充分稀释上一道程序中的试剂，使其含量降至
最低。
一般只要有足够的时间，以静置延长每次洗涤时间为宜，这是防止脱片的较好办法。
洗涤液的pH值应在7.2～7.4之间，过高或过低均不利于染色过程，尤其是在偏碱的pH值条件下。
3.2.3 操作要迅速标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。
若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。
3.2.4 立即摄影荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要，由于荧光很容易褪色减弱，要及时摄影记录结果，方法与普通显微摄影技术基本相同。
因紫外光对荧光淬灭作用大，如FITC的标记物，在紫外光下照射30 s，荧光亮度降低50%。
因此，曝光速度太慢，就不能将荧光图像拍摄下来。
[参考文献]
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